Erwinia chrysanthemi est une entérobactérie phytopathogène responsable de la formation d'une pourriture molle sur un large spectre de plantes hôtes. Sa virulence dépend principalement de la sécrétion d'exoenzymes (dont les pectinases et cellulases) qui vont dégrader la paroi des cellules végétales. L'objectif de cette thèse est de participer à la compréhension du rôle du périplasme dans la perception de l'environnement par la bactérie. Nous avons caractérisé génétiquement et biochimiquement le locus gan codant 9 protéines impliquées dans le transport et la dégradation des ß-galactanes (un des composants de la pectine). Les OPG (glucanes périplasmiques osmorégulés) sont essentiels pour la virulence d'E. chrysanthemi puisqu'un mutant opgG incapable de les synthétiser présente un phénotype pléïotrope dont la perte de virulence. Une mutation suppressive de la mutation opgG localisée dans le gène rcsC a été obtenue au laboratoire. Nous avons voulu préciser le rôle du système à deux composants RcsCDB dans le pouvoir pathogène de la bactérie. La mutation rcsC2 conduit à une diminution de la phosphorylation du régulateur RcsB due à une augmentation de l'activité phosphatase de RcsC. Pourtant RcsB n'est pas essentielle pour la virulence. Nous avons également montré que l'expression des gènes régulés par le système RcsCDB est influencée par la quantité des OPG. Une faible surexpression d'une version soluble de RcsF engendre une activation du système Rcs et que la faible surexpression de DjlA et IgaA n'a pas d'effet significatif. Enfin, nous avons entrepris de caractériser la structure de RcsF par mutagenèse dirigée. / Erwinia chrysanthemi is a phytopathogenic enterobacterium causing soft rot disease in a wide range of plant species. The maceration of plant tissues is essentially caused by the secretion of a set of plant cell wall degrading enzymes (including pectinases and cellulases). The aim is to participate to the understanding of the role of the periplasm in environment perception by bacteria. We characterised genetically and biochemically the gan locus encoding 9 proteins involved in galactan transport and catabolism (galactan is a pectic component). Osmoregulated periplasmic glucans (OPGs) are essential for E. chrysanthemi pathogenicity. An opgG mutant lacks OPGs and shows a pleiotropic phenotype including nonvirulence. A rcsC point mutation (rcsC2) suppresses the phenotype induced by OPGs defect. We wanted to clarify the role of the Rcs system in pathogenicity. The rcsC2 mutation leads to the reduction of transcriptional activity of RcsB caused by an increase of phosphatase activity of RcsC. Mutations in RcsCDB proteins show that RcsB is not essential to virulence. We have shown that genes expression regulated by RcsCBD phosphorelay is influenced by the quantity of OPGs in the periplasm. An ectopic overexpression of a soluble version of RcsF leads to a RcsCDB phosphorelay activation, while an ectopic overexpression of DjlA and IgaA has no significatives effects. Finally, we have characterized RcsF structures by site-directed mutagenesis and deletion mutagenesis.

Les glucanes périplasmiques osmorégulés (OPG) sont des oligomères de glucose retrouvés chez la plupart des Proteobacteries. Le squelette glucosidique peut être substitué par différents types de molécules selon les espèces. Ces glucanes sont un des facteurs commun de virulence de nombreuses bactéries zoo- et phyto- pathogènes telles que Salmonella enterica, Pseudomonas aeruginosa ou Dickeya dadantii. D. dadantii est une entérobactérie phytopathogène à large spectre d’hôte. Cette bactérie provoque la maladie de la pourriture molle. Chez cette bactérie, un mutant dépourvu d’OPG montre un phénotype pléïotrope : perte totale de la virulence, diminution de la motilité, baisse de la sécrétion des exoenzymes indispensables à la virulence, induction générale d’une réponse au stress suggérant un sévère défaut de perception de l’environnement. Cette idée est renforcée par le lien unissant des systèmes à deux composants, systèmes clefs de la perception de l’environnement, et les OPG. Une approche exploratoire sur la place des OPG dans la virulence a permis de montrer que dans un mutant dépourvu d’OPG, l’inactivation de pecS, principal répresseur de la virulence, permet de restaurer la virulence sur feuille d’endive. La conservation de plusieurs phénotypes associés au défaut de synthèse d’OPG indique que les deux mutations n’affectent pas une seule et même voie de régulation. Enfin, l’identification du gène codant la succinyl-transférase, enzyme responsable de la substitution des OPG par des résidus succinyles, a permis de compléter le set de gènes impliqués dans la biosynthèse des OPG. Leur rôle reste cependant inconnu. / Osmoregulated perisplamic glucans (OPGs) are oligosaccharides accumulated in the envelope of many Gram-negative bacteria. Glucose is the sole constitutive sugar and this glucosidic backbone could be substituted by various kind of molecules depending on the species. Numerous studies indicate that these glucans belong to the common virulence factors for zoo- and phyto- pathogens Proteobacteria as Salmonella enterica or Dickeya dadantii. D. dadantii causes soft rot disease in a wide range of plant species. Strains of this species completely devoid of OPG show a pleiotropic phenotype including increased synthesis of exopolysaccharides, loss of motility, induction of a general stress response and complete loss of virulence. These phenotypes were confirmed by a proteomic analysis and suggest that strains devoid of OPGs are impaired in the perception of their environment. The link between OPGs and two component system, the main system used by bacteria to sense and respond to the environmental variation, strengthen this idea. The study of the place of OPGs in a virulence regulatory network showed that mutation in the major virulence repressor pecS restored virulence in a D. dadantii opg-negative strain. All the phenotypes were not restored indicating that the two mutations didn't affect a same pathway. Finally, the identification of opgC, was investigated, encoding a membrane-bound protein required for succinylation of OPG. However, the role of succinyl residues remains unknown.