Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2018-09-28T17:39:10Z No. of bitstreams: 1 Daniele Missio.pdf: 779272 bytes, checksum: 6b39f5d8e9f05222e1d9034c1daa6e30 (MD5) / Approved for entry into archive by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2018-09-28T17:39:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Daniele Missio.pdf: 779272 bytes, checksum: 6b39f5d8e9f05222e1d9034c1daa6e30 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-28T17:39:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daniele Missio.pdf: 779272 bytes, checksum: 6b39f5d8e9f05222e1d9034c1daa6e30 (MD5) Previous issue date: 2017 / Na produção in vitro de embriões (PIV) bovinos são utilizadas diferentes técnicas de seleção espermática, a fim de recuperar o maior número de espermatozoides com boa qualidade e remover componentes do sêmen e diluente. Dentre essas técnicas, a seleção por gradientes descontínuos de Percoll, é a mais utilizada atualmente em laboratórios de PIV de bovinos. Porém essa técnica vem sendo modificada principalmente com o aumento da utilização do sêmen sexado. O sêmen sexado possui características distintas do sêmen convencional, como baixo número de células por dose e baixa motilidade pós-descongelamento. Assim, o desenvolvimento de um método eficiente para a seleção espermática, que aumente a taxa de recuperação sem prejudicar a qualidade dos espermatozoides é essencial. O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos do volume de Percoll na recuperação espermática, qualidade dos espermatozoides, estresse oxidativo e cinética do desenvolvimento embrionário de embriões bovinos PIV. Palhetas de sêmen convencional ou sexado foram descongeladas a 35º C por 20 s e distribuídas em alíquotas iguais em três diferentes volumes de Percoll: 300 μL de cada gradiente de Percoll (90, 60 e 30%), Controle; 100 μL de cada gradiente de Percoll, P100; e 200 μL de cada gradiente de viii Percoll, P200. Qualidade espermática, taxa de fecundação e cinética do desenvolvimento embrionário até 48 horas pós-inseminação foram avaliadas. Para o sêmen convencional, a motilidade, o vigor e a taxa de recuperação foram maiores nos tratamentos P100 e P200 comparado ao Controle (P < 0,05), enquanto os níveis de espécies reativas de oxigênio (ROS), peroxidação lipídica e atividade da enzima superóxido dismutase (SOD) não foram influenciados pelos tratamentos. Para o sêmen sexado, P100 aumentou a velocidade curvilínea, velocidade média da trajetória e amplitude de deslocamento lateral da cabeça (P < 0,05). A taxa de recuperação foi maior em P100 do que no Controle e P200 (P < 0,05). A formação de ROS foi menor em P100 do que em P200 e Controle, e a atividade SOD foi menor em P100 do que no Controle. As taxas de fecundação e clivagem, momento da primeira clivagem e número de células foram similares entre P100 e Controle (P > 0,05). Portanto, o volume de Percoll de 100 μL aumentou a taxa de recuperação espermática sem prejudicar a qualidade dos espermatozoides e desenvolvimento embrionário, permitindo assim, aumentar o número de gotas inseminadas/ dose e diminuir custos. / For in vitro production (IVP) of bovine embryos, different sperm selection techniques are used to recover the highest number of sperm with good quality and to remove components of the semen and diluent. Among these techniques, the selection by discontinuous Percoll gradients is currently the most used in bovine IVP laboratories. However, this technique has been modified mainly with the increase of the use of sex-sorted semen. The sex-sorted semen has distinct characteristics of conventional semen, such as low number of cells per dose and low post-thaw motility. Thus, the development of an efficient method for sperm selection, which increases the rate of recovery without impairing the quality of sperm is essential. The aim of the present study was to evaluate the effects of Percoll volume on recovery rate, sperm quality, oxidative stress and embryo development kinetics in bovine embryos IVP. Conventional or sex-sorted semen straws were thawed at 35°C for 20 s and distributed in equal aliquots into three different Percoll volume: 300 μL of each Percoll gradient (90, 60, and 30%), Control; 100 μL of each Percoll gradient, P100; and 200 μL of each Percoll gradient, P200. Sperm quality, fertilization rate, and embryonic development kinetics up to 48 h post-insemination were evaluated. For conventional semen, motility, vigor, and recovery x rate improved in the P100 and P200 treatments compared to the Control (P < 0.05), whereas reactive oxygen species (ROS) levels, lipid peroxidation, and superoxide dismutase enzyme (SOD) activity were not influenced by treatments. For sex-sorted semen, P100 increased sperm curvilinear velocity, average path velocity, and amplitude of lateral head displacement (P < 0.05). Recovery rate was higher in P100 than in the Control and P200 (P < 0.05), formation of ROS was lower in P100 than in the Control and P200, and SOD activity was lower in P100 than in the Control. Fertilization and cleavage rates, moment of first cleavage, and cell number were similar between P100 and the Control (P > 0.05). Therefore, a Percoll volume of 100 μL increased sperm recovery rate without damage to sperm quality or early embryonic development, allowing to increase the number of inseminated drops / dose and to reduce costs.