Orientador: Eunice Oba / Resumo: Este estudo teve como objetivo investigar os efeitos de diferentes concentrações de Bis-carboxietil sesquióxido germânio (Ge132), adicionado ao meio de congelamento de sêmen bovino, mantido ou não sob prévia incubação, sobre as características espermáticas avaliadas, pós-descongelamento. Nove ejaculados de três touros foram misturados e divididos em grupo D (sêmen diluído e incubado a 33 °C por 30 minutos antes da refrigeração) e R (sêmen refrigerado a 4 °C imediatamente após a diluição). Ambos o grupos foram suplementados com 0, 500 e 1000 μg/mL de Ge132, resultando nos subgrupos experimentais D0, R0,D500, D1000, R500 e R1000. Após congelamento, as amostras de sêmen foram descongeladas e avaliadas aos 5 e 60 minutos, quanto a motilidade, velocidade e alterações morfofuncionais espermáticas. Os dados foram analisados, considerando-se a diferença entre os grupos e entre os momentos de avaliação. Maior valor para motilidade total (P<0,05) foi obtido no R0 em comparação com o R1000, D500 e D0. As análises realizadas aos 5 e 60 minutos revelaram diminuição dos valores da motilidade total no R500 e no R1000 e no D0, D500 e R500 para a ALH. Além disso, os valores da LIN aumentaram (P<0,05) no D1000, da mesma forma que a diferença para a STR entre os momentos foi maior no R500, R1000 e D1000. Maior porcentagem (P<0,05) de células com integridade de membrana foi observada no R500 do que no D0, D1000 e R1000, assim como para células sem desestabilização de membrana, a qual R500 aprese... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to investigate the effects of different concentrations of Bis-carboxietil sesquioxide germanium (Ge132) added to a bovine freezing medium, maintained or not under previous incubation, on frozen/thawed sperm characters. Nine bull ejaculates were pooled and divided into group D (ejaculate was diluted and kept at 33 °C for 30 min before cooling) and R (ejaculate was diluted and immediately cooled at 4 °C). Both of groups were added with 0, 500, and 1000 μg/mL of Ge132, forming the experimental groups D0, R0, D500, D1000, R500, and R1000. After freezing, the sperm samples were thawed and assessed at 5 and 60 minutes for motility, velocity and morphological/functional characteristics. The data were expressed taking into account a difference between the groups and between the moments of analysis. Higher (P<0.05) mean values were obtained in R0 for total motility in comparison to R1000, D500, and D0. The analyzes at 5 and 60 minutes revealed a significant decreased for total motility in R500 and R1000, as well as, in D0, D500 and R500 for ALH. However, mean values for LIN increased (P<0.05) in D1000, similarly that the difference for STR between moments was higher in R500, R1000 and D1000. Greater proportions (P<0.05) for acrossomal and plasmatic membrane integrity were observed in R500 than in D0, D1000 and R1000, as well as for without membrane destabilization than in D1000. Lower production of O2-. occurred in R0, with no significant differences among groups for ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2018-09-28T17:39:10Z No. of bitstreams: 1 Daniele Missio.pdf: 779272 bytes, checksum: 6b39f5d8e9f05222e1d9034c1daa6e30 (MD5) / Approved for entry into archive by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2018-09-28T17:39:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Daniele Missio.pdf: 779272 bytes, checksum: 6b39f5d8e9f05222e1d9034c1daa6e30 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-28T17:39:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daniele Missio.pdf: 779272 bytes, checksum: 6b39f5d8e9f05222e1d9034c1daa6e30 (MD5) Previous issue date: 2017 / Na produção in vitro de embriões (PIV) bovinos são utilizadas diferentes técnicas de seleção espermática, a fim de recuperar o maior número de espermatozoides com boa qualidade e remover componentes do sêmen e diluente. Dentre essas técnicas, a seleção por gradientes descontínuos de Percoll, é a mais utilizada atualmente em laboratórios de PIV de bovinos. Porém essa técnica vem sendo modificada principalmente com o aumento da utilização do sêmen sexado. O sêmen sexado possui características distintas do sêmen convencional, como baixo número de células por dose e baixa motilidade pós-descongelamento. Assim, o desenvolvimento de um método eficiente para a seleção espermática, que aumente a taxa de recuperação sem prejudicar a qualidade dos espermatozoides é essencial. O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos do volume de Percoll na recuperação espermática, qualidade dos espermatozoides, estresse oxidativo e cinética do desenvolvimento embrionário de embriões bovinos PIV. Palhetas de sêmen convencional ou sexado foram descongeladas a 35º C por 20 s e distribuídas em alíquotas iguais em três diferentes volumes de Percoll: 300 μL de cada gradiente de Percoll (90, 60 e 30%), Controle; 100 μL de cada gradiente de Percoll, P100; e 200 μL de cada gradiente de viii Percoll, P200. Qualidade espermática, taxa de fecundação e cinética do desenvolvimento embrionário até 48 horas pós-inseminação foram avaliadas. Para o sêmen convencional, a motilidade, o vigor e a taxa de recuperação foram maiores nos tratamentos P100 e P200 comparado ao Controle (P < 0,05), enquanto os níveis de espécies reativas de oxigênio (ROS), peroxidação lipídica e atividade da enzima superóxido dismutase (SOD) não foram influenciados pelos tratamentos. Para o sêmen sexado, P100 aumentou a velocidade curvilínea, velocidade média da trajetória e amplitude de deslocamento lateral da cabeça (P < 0,05). A taxa de recuperação foi maior em P100 do que no Controle e P200 (P < 0,05). A formação de ROS foi menor em P100 do que em P200 e Controle, e a atividade SOD foi menor em P100 do que no Controle. As taxas de fecundação e clivagem, momento da primeira clivagem e número de células foram similares entre P100 e Controle (P > 0,05). Portanto, o volume de Percoll de 100 μL aumentou a taxa de recuperação espermática sem prejudicar a qualidade dos espermatozoides e desenvolvimento embrionário, permitindo assim, aumentar o número de gotas inseminadas/ dose e diminuir custos. / For in vitro production (IVP) of bovine embryos, different sperm selection techniques are used to recover the highest number of sperm with good quality and to remove components of the semen and diluent. Among these techniques, the selection by discontinuous Percoll gradients is currently the most used in bovine IVP laboratories. However, this technique has been modified mainly with the increase of the use of sex-sorted semen. The sex-sorted semen has distinct characteristics of conventional semen, such as low number of cells per dose and low post-thaw motility. Thus, the development of an efficient method for sperm selection, which increases the rate of recovery without impairing the quality of sperm is essential. The aim of the present study was to evaluate the effects of Percoll volume on recovery rate, sperm quality, oxidative stress and embryo development kinetics in bovine embryos IVP. Conventional or sex-sorted semen straws were thawed at 35°C for 20 s and distributed in equal aliquots into three different Percoll volume: 300 μL of each Percoll gradient (90, 60, and 30%), Control; 100 μL of each Percoll gradient, P100; and 200 μL of each Percoll gradient, P200. Sperm quality, fertilization rate, and embryonic development kinetics up to 48 h post-insemination were evaluated. For conventional semen, motility, vigor, and recovery x rate improved in the P100 and P200 treatments compared to the Control (P < 0.05), whereas reactive oxygen species (ROS) levels, lipid peroxidation, and superoxide dismutase enzyme (SOD) activity were not influenced by treatments. For sex-sorted semen, P100 increased sperm curvilinear velocity, average path velocity, and amplitude of lateral head displacement (P < 0.05). Recovery rate was higher in P100 than in the Control and P200 (P < 0.05), formation of ROS was lower in P100 than in the Control and P200, and SOD activity was lower in P100 than in the Control. Fertilization and cleavage rates, moment of first cleavage, and cell number were similar between P100 and the Control (P > 0.05). Therefore, a Percoll volume of 100 μL increased sperm recovery rate without damage to sperm quality or early embryonic development, allowing to increase the number of inseminated drops / dose and to reduce costs.

Theory predicts that in species with a greater risk of sperm competition, males will invest more in ejaculate traits. In species with alternative mating tactics (AMTs), males of different phenotypes will be under different sperm competition risk. Because minors sneak inside other males\' territories to mate they should always face sperm competition. Major males, on the other hand, defend territories and have more chance of mating exclusively with females. For majors, the risk of sperm competition is theoretically lower. The main prediction from game theory models for species with AMTs is that majors invest less in ejaculate traits than minors. However, when the proportion of minors in the population increases, majors should invest more in ejaculate traits, reaching a similar level of ejaculate expenditure to minors. In this study, we tested these predictions with a meta-regression analysis of 29 fish species with AMTs. As a proxy for the risk of sperm competition, we ranked each species according to a sperm competition rank with five levels, from 1 (low risk of sperm competition) to 5 (high risk of sperm competition). Overall, we found that minors invest more in ejaculate traits than majors. We also categorized the ejaculate expenditure of males, according to the original variables quantified in the studies that were included in our analysis and found that minors invest more energy in the production of gonads than majors. Additionally, minors and majors have a similar investment in sperm number and sperm quality, but majors allocate more sperm to females. Overall, the sperm competition rank did not influence the magnitude of the difference in investment of majors and minors. The differential investment in gonad mass between majors and minors should represent an increase in sperm numbers, but our data showed that majors and minors are not producing different amount of sperm. Therefore, the higher investment in gonad mass can be related to minors mating more frequently than majors. minors are not able to produce sperm in greater quantities than majors, but they probably can replenish sperm faster than majors. Against theoretical predictions, sperm quality does not respond to differences of sperm competition, probably because sperm quality is not under such strong selection as gonad mass. Our findings suggest that, in fishes with alternative mating tactics, both majors and minors are under strong selection from sperm competition, even when the risk of polyandry is low / A teoria prevê que em espécies sob maior risco de competição espermática, os machos irão investir mais em características do ejaculado. Em espécies com táticas alternativas de acasalamento (AMTs), machos de fenótipos diferentes estão sob diferentes riscos de competição espermática. Uma vez que machos minors (i.e., machos furtivos) se esgueiram para dentro do território de outros machos para acasalar, eles provavelmente sempre enfrentam competição espermática. Machos major, por outro lado, defendem territórios e possuem uma chance maior de acasalar exclusivamente com fêmeas. Para os majors, o risco de competição espermática é teoricamente menor. A principal previsão de modelos de teoria dos jogos para espécies com AMTs é que majors investem menos em características de ejaculado do que minors. Entretanto, quando a proporção de minors em uma população aumenta, os majors devem investir mais em características do ejaculado, alcançando um nível similar de investimento em ejaculado que os minors. Neste estudo, nós testamos essas previsões com uma meta-regressão de 29 espécies de peixes com AMTs. Como proxy para o risco de competição espermática, nós classificamos cada espécie de acordo com um ranking de competição espermática. Esse ranking utiliza características de história de vida e demografia de cada espécie, e possui cinco níveis, de 1 (baixo risco de competição espermática) até 5 (alto risco de competição espermática). De maneira geral, nós encontramos que minors investem mais em características de ejaculado do que majors. Nós também categorizamos o investimento em ejaculado dos machos de acordo com as variáveis originais quantificadas nos estudos que foram incluídos na nossa análise e encontramos o resultado de que minors investem mais na produção de gônadas para seu próprio tamanho do que majors. Além disso, minors e majors apresentam investimento similar em número de espermatozoides e qualidade espermática, mas majors alocam mais esperma para as fêmeas. Em geral, o ranking de competição espermática não influenciou a magnitude da diferença de investimento entre majors e minors. O investimento diferencial em massa gonadal entre majors e minors deveria representar um aumento no número de espermatozoides, porém nossos dados mostraram que majors e minors não estão produzindo quantidades diferentes de esperma. Assim, um investimento maior em massa gonadal pode estar relacionado aos minors acasalarem mais frequentemente que os majors. minors não conseguem produzir esperma em maiores quantidades que os majors, mas eles provavelmente conseguem repor seu estoque de esperma mais rápido que os majors. Contrário às previsões teóricas, a qualidade espermática não responde às variações de competição espermática, provavelmente porque a qualidade espermática não está sob forte seleção como a massa gonadal. Nossos resultados sugerem que, em peixes com táticas alternativas de acasalamento, tanto os majors como os minors estão sob forte seleção da competição espermática, mesmo quando o risco de poliandria é baixo

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2018-09-24T15:40:23Z No. of bitstreams: 1 CAROLINE MARTINEZ.pdf: 15483260 bytes, checksum: 336be2ac82e6f35a3e3945f6a2b3b533 (MD5) / Approved for entry into archive by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2018-09-24T15:48:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 CAROLINE MARTINEZ.pdf: 15483260 bytes, checksum: 336be2ac82e6f35a3e3945f6a2b3b533 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-24T15:48:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CAROLINE MARTINEZ.pdf: 15483260 bytes, checksum: 336be2ac82e6f35a3e3945f6a2b3b533 (MD5) Previous issue date: 2017-12-13 / O Alumínio (Al) é o metal de maior exposição humana, no entanto os efeitos do metal em nível de exposição humana ainda são pouco conhecidos. Assim, o objetivo desse estudo foi investigar os efeitos da exposição ao Al por 60 dias em dose equivalente a exposição humana ao metal através da dieta sobre o Sistema Nervoso Central (SNC), Sistema Nervoso Periférico (SNP), sistema reprodutor masculino e sistema cardiovascular e, comparar com os efeitos de uma exposição alta ao metal com efeitos tóxicos conhecidos. Para isso, ratos Wistar com 3 meses de idade foram divididos em: 1) Grupo 1: baixas doses de Al, onde durante 60 dias os ratos receberam por água de beber: a) Controle – água ultrapura; b) Al na dose de 1,5 mg/kg de peso corporal e, c) Al na dose de 8,3 mg/kg de peso corporal e, 2) Grupo 2: alta dose de Al, onde durante 42 dias os ratos receberam por gavagem: a) Controle – água ultrapura; b) Al na dose de 100 mg/kg de peso corporal. O tratamento com Al mesmo em baixas doses prejudicou a memória de reconhecimento de objetos e promoveu o desenvolvimento de catalepsia nos ratos. Somado a isso, a exposição ao Al aumentou os níveis de espécies reativas de oxigênio (EROs) e de peroxidação lipídica, reduziu a capacidade antioxidante e inibiu a atividade da acetilcolinesterase no hipocampo dos animais. No SNP, o Al promoveu o desenvolvimento de alodínea mecânica, aumentou o estresse oxidativo sistêmico, induziu inflamação com recrutamento de macrófagos e, o metal foi capaz de depositar-se entre as fibras do nervo ciático. Já no sistema reprodutor masculino, a exposição ao Al reduziu a contagem espermática, a motilidade e a produção diária de espermatozides, aumentou a porcentagem de espermatozoides com anormalidades morfológicas, alterou a estrutura testicular, aumentou os níveis de estresse 14 oxidativo e a inflamação testicular, demonstrando que uma baixa concentração do metal nos testículos (3.35 μg/g) é o suficiente para comprometer a espermatogênese e a qualidade dos gametas masculinos. No sistema cardiovascular, o Al aumentou a pressão arterial sistólica, reduziu a resposta vasodilatadora a acetilcolina, aumentou a resposta vasoconstritora a fenilefrina, reduziu a modulação endotelial na resposta vasoconstritora, reduziu a biodisponibilidade de óxido nítrico, o envolvimento dos canais de potássio nas respostas vasculares e aumentou a produção de EROs principalmente via NAD(P)H oxidase e de prostanóides contráteis da via da COX-2. A exposição ao Al aumentou o estresse oxidativo em artérias aorta e mesentérica, reduziu a expressão de mRNA de eNOS e SOD1 e aumentou a expressão da isoforma da NAD(P)H oxidase 1, COX-2 e a expressão de TXA-2 R. Tomados em conjunto, nossos dados demonstram que a exposição subcrônica ao Al por 60 dias em baixa dose, que reflete a exposição humana ao metal através da dieta, alcança um limiar tóxico suficiente para promover efeitos adversos no SNC, SNP, sistema reprodutor masculino e sistema cardiovascular. Além disso, os efeitos de uma exposição em baixa dose são praticamente os mesmos de uma exposição alta ao metal. / Aluminum (Al) is the most important environmental and human contaminant. While a good deal of research has been conducted on the acute toxic effects of Al, little is known about the effects of longer-term exposure at human dietary Al levels. Therefore, the purpose of this study was to investigate the effects of 60-day Al exposure at low doses on Central Nervous System (CNS), Peripheral Nervous System (PNS), male reproductive system and cardiovascular system for comparison with a model of exposure known to produce toxicity in rats. Three-month-old male Wistar rats were divided into two major groups: 1) Grou 1, low aluminum levels - rats were treated orally by drinking water for 60 days as follows: a) Control – received ultrapure drinking water; b) Aluminum at 1.5 mg/kg b.w. and c) Aluminum at 8.3 mg/kg b.w. and 2) Group 2, high aluminum level - rats were treated through oral gavages for 42 days as follows: a) Control – received ultrapure water; b) Aluminum at 100 mg/kg b.w. Al treatment even at low doses promoted recognition memory impairment seen in object recognition memory testing and catalepsy behavior in rats. Moreover, Al increased hippocampal reactive oxygen species (ROS) and lipid peroxidation levels, reduced antioxidant capacity and decreased acetylcholinesterase activity. On PNS, Al promoted the development of mechanical allodynia, increased inflammation in the sciatic nerve, systemic oxidative stress and, is able to be retained in the sciatic nerve. Regarding the male reproductive system, Al decreased sperm count, daily sperm production, sperm motility, normal morphological sperm, impaired testis histology; increased oxidative stress in reproductive organs and inflammation in testis, showing that low concentrations of Al in testes (3.35 μg/g) are sufficient to impair 16 spermatogenesis and sperm quality. On cardiovascular system, Al increased systolic blood pressure, decreased acetylcholine-induced relaxation, increased response to phenylephrine, decreased endothelial modulation of vasoconstrictor responses, the bioavailability of nitric oxide, the involvement of potassium channels on vascular responses, as well as increased ROS production from NAD(P)H oxidase and contractile prostanoids mainly from COX-2 in both aorta and mesenteric resistance arteries (MRA). Al exposure increased vascular ROS production and lipid peroxidation as well as altered the antioxidant status in aorta and MRA. Al decreased vascular eNOS and SOD1 mRNA levels and increased the NAD(P)H oxidase 1, COX-2 and TXA-2 R mRNA levels. Taken together, our data demonstrate that 60-day subchronic exposure to low doses of Al from feed and added to the water, which reflect human dietary Al intake, reaches a threshold sufficient to promote adverse effects on SNC, PNS, male reproductive system and cardiovascular system. Moreover, these effects were almost the same as Al exposure at much higher levels.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:38:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_liziane_vianna.pdf: 321138 bytes, checksum: e8e76002b27c6cb6d710d3cd63a4c088 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / The objective of this study was to evaluate alternative methods to the gradient of Percoll® for sperm selection used in bovine in vitro production systems. We evaluated the following parameters: sperm quality, embryo development, the viability after cryopreservation and sex ratio of bovine embryos produced in vitro. Four treatments were performed: percoll group (90 and 45%) 4 mL, centrifuged at 700xg for 20 min; minipercoll group (90 and 45%) 800 &#956;L, centrifuged at 700xg for 5 min; miniisolate group (90 and 45%) 800 &#956;L, centrifuged at 700xg for 5 min; and minioptiprep group (30,28 and 26%) 1,2 mL, centrifuged at 900xg for 15 min. Different gradients did not affect the semen characteristics compared with the evaluation immediately after thawing (P>0,05). It was only observed a decrease in total motility in minioptiprep group (P<0,05). The cleavage rates were similar among the percoll and miniisolate groups (P>0,05). Minipercoll and minioptiprep groups were lower to percoll (P<0,05) and similar to isolate (P>0,05). At Day 7 the developmental rates were higher in miniisolate group than other groups (P<0,05). But at D8 the developmental rates of minigradients were similar to percoll (P>0,05). Among the minigradientes, the miniisolate was higher to minipercoll and minioptiprep (P<0,05). The treatments did not affect the sex ratio expected of 50:50% (P.0,05) and there was no difference among the four groups (P>0,05). Also, there was no difference in survival rates after vitrification (P>0,05). In conclusion, the miniisolate and the minioptiprep groups, in the concentration and volume used in our experiment, reached similar results to the percoll group. So, they are alternatives to the gradient of Percoll® in the routine of IVP bovine embryos. / O objetivo do presente estudo foi avaliar possíveis alternativas ao gradiente de Percoll®, para seleção espermática, no sistema de produção in vitro de embriões bovinos. Foram avaliados os seguintes parâmetros: qualidade espermática, desenvolvimento embrionário, viabilidade após a criopreservação e a proporção sexual dos embriões bovinos produzidos in vitro. Foram realizados quatro tratamentos: grupo percoll (90 e 45%) - 4 mL, centrifugado 700xg por 20 min; grupo minipercoll (90 e 45%) 800 &#956;L, centrifugado a 700xg por 5 min; gupo miniisolate (90 e 45%) 800 &#956;L, centrifugado a 700xg por 5 min; e grupo minioptiprep (30, 28 e 26%) - 1,2 mL, centrifugado a 900xg por 15 min. A passagem pelos gradientes não afetou as características do sêmen em comparação com a avaliação realizada logo após o descongelamento (P>0,05), sendo somente observada uma diminuição da motilidade total para o grupo minioptiprep (P<0,05). Quanto a produção in vitro de embriões, não foi observada diferença na taxa de clivagem entre os grupos percoll e miniisolate (P>0,05), sendo o minipercoll e o minioptiprep inferiores ao percoll (P<0,05) e semelhantes ao miniisolate (P>0,05). No desenvolvimento embrionário, o miniisolate foi superior aos demais grupos em D7 (P<0,05). Em D8, os três minigradientes foram semelhantes ao percoll (P>0,05). Entre os minigradientes, o miniisolate foi superior ao minipercoll e ao minioptiprep (P<0,05). A passagem pelos gradientes não afetou a proporção sexual esperada de 50:50%, além disso, não houve diferença entre os grupos (P>0,05). Não houve diferença quanto à taxa de sobrevivência a vitrificação nos quatro grupos em 48 h (P>0,05). Concluímos que o miniisolate e o minioptiprep, nas concentrações e volumes estudados neste trabalho, atingiram resultados semelhantes ao percoll. Portanto, são alternativas a utilização do gradiente de Percoll®, na rotina de produção de embriões bovinos in vitro.