Thesis (M.S.)--University of Michigan, 1970.

Thesis (M.S.)--University of Michigan, 1970.

O objetivo do presente estudo foi avaliar aspectos histológicos, imuno-histoquímicos e ultraestruturais da resposta inflamatória induzida experimentalmente, através da inoculação de BCG por via intramuscular em peixes filogeneticamente primitivos do gênero Arius sp e modernos do gênero Centropomus sp, com o intuito de estabelecer parâmetros comparativos da resposta inflamatória do ponto de vista filogenético entre peixes modernos e primitivos. Os resultados mostram haver diferenças na resposta inflamatória entre peixes modernos e primitivos; sendo que o primeiro tem capacidade de organização da lesão em granulomas típicos e células epitelióides secretoras de proteína S100 e citoqueratina, e que ao longo do experimento desenvolveu junções desmossômicas entre si; enquanto peixes primitivos não possuem capacidade de organização da lesão, não formando granulomas, apenas células gigantes secretoras de proteína S100. Não houve participação expressiva de células gigantes e pigmentares na resposta inflamatória no gênero Centropomus sp, sugerindo ser uma característica relacionada à espécie, contrariando alguns resultados verificados em peixes modernos no que diz respeito à participação de células pigmentares. / The aim of this study was the evaluation of the histological, imunohistochemical and ultra structural aspect of the inflammatory response experimentally induced by BCG intramuscular injection in phylogenetically primitive fishes of the genera Arius sp and modern of the genera Centropomus sp, with the purpose of establishing comparative parameters of the inflammatory response between modern and primitive fishes about phylogenetic aspect. The results show differences in the inflammatory response between modern and primitive fishes. Modern fishes have the ability of organization of the lesion, with development of tipical granulomas and epithelioid cells that produce S100 protein, cytokeratin and throughout the experiment they developed desmosomic junctions; instead of primitive fishes that don?t show the ability of organization of the lesion without forming an granuloma, just giant cells that produce S100 protein. It didn?t have an expressive participation of giant cells and pigmentcontaining cells in the inflammatory reaction in genera Centropomus sp, suggesting that It is a specie-specific characteristic, in opposition to some results found in modern fishes about pigment cells participation in the inflammatory reaction of modern fishes.

O objetivo do presente estudo foi avaliar aspectos histológicos, imuno-histoquímicos e ultraestruturais da resposta inflamatória induzida experimentalmente, através da inoculação de BCG por via intramuscular em peixes filogeneticamente primitivos do gênero Arius sp e modernos do gênero Centropomus sp, com o intuito de estabelecer parâmetros comparativos da resposta inflamatória do ponto de vista filogenético entre peixes modernos e primitivos. Os resultados mostram haver diferenças na resposta inflamatória entre peixes modernos e primitivos; sendo que o primeiro tem capacidade de organização da lesão em granulomas típicos e células epitelióides secretoras de proteína S100 e citoqueratina, e que ao longo do experimento desenvolveu junções desmossômicas entre si; enquanto peixes primitivos não possuem capacidade de organização da lesão, não formando granulomas, apenas células gigantes secretoras de proteína S100. Não houve participação expressiva de células gigantes e pigmentares na resposta inflamatória no gênero Centropomus sp, sugerindo ser uma característica relacionada à espécie, contrariando alguns resultados verificados em peixes modernos no que diz respeito à participação de células pigmentares. / The aim of this study was the evaluation of the histological, imunohistochemical and ultra structural aspect of the inflammatory response experimentally induced by BCG intramuscular injection in phylogenetically primitive fishes of the genera Arius sp and modern of the genera Centropomus sp, with the purpose of establishing comparative parameters of the inflammatory response between modern and primitive fishes about phylogenetic aspect. The results show differences in the inflammatory response between modern and primitive fishes. Modern fishes have the ability of organization of the lesion, with development of tipical granulomas and epithelioid cells that produce S100 protein, cytokeratin and throughout the experiment they developed desmosomic junctions; instead of primitive fishes that don?t show the ability of organization of the lesion without forming an granuloma, just giant cells that produce S100 protein. It didn?t have an expressive participation of giant cells and pigmentcontaining cells in the inflammatory reaction in genera Centropomus sp, suggesting that It is a specie-specific characteristic, in opposition to some results found in modern fishes about pigment cells participation in the inflammatory reaction of modern fishes.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / Introducción: Los linfocitos T helper 17 (Th17) participan en los mecanismos de reabsorción ósea característicos de patologías inflamatorias, incluida la periodontitis apical (PA). Otros estudios han asociado a esta célula con la presencia de dolor en PA. En otras patologías diferentes a PA, se ha detectado interleuquina 21 (IL-21), citoquina responsable de la inducción de células Th17. Actualmente, la presencia de IL-21 en lesiones periapicales (LPA) y su asociación con sintomatología dolorosa en PA se desconocen. Objetivo: Determinar los niveles y formas moleculares de IL-21 en LPA y examinar su relación con la presencia de sintomatología en PA. Métodos: Se seleccionaron pacientes con diagnóstico de PA sintomática (n=13) y asintomática (n=9) e indicación de endodoncia, y se obtuvieron muestras de exudado periapical. Adicionalmente, se seleccionaron pacientes con PA y LPA e indicación de exodoncia, y se recolectaron biopsias de las LPA (n=14) y muestras de ligamento sano (LS) (n=13) provenientes de dientes con indicación de exodoncia por ortodoncia. Se determinaron las formas moleculares de IL-21 por Western blot y los niveles de IL-21 fueron determinados por Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Los resultados se analizaron con el programa PRISMA 5.0. Resultados: Se observaron bandas de IL-21 de 20 kDa para todas las muestras estudiadas. Los niveles de IL-21 fueron más altos en LPA que en LS, y en PA sintomática que en asintomática (p<0.05). Conclusiones: IL-21 podría participar en la patogénesis de las LPA y podría tener un rol en la presencia de sintomatología en PA.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Objetivo: Los granulomas periapicales (GPs) son lesiones de naturaleza infecciosa de origen pulpar caracterizados por la destrucción de los tejidos perirradiculares, en particular del hueso alveolar periapical. El fenotipo linfocitario efector Th17 se ha asociado a los fenómenos osteodestructivos en diversas patologías infecciosas y se ha establecido que la citoquina interleuquina-21 (IL-21) cumple un rol central en la diferenciación selectiva de esta población celular. El objetivo del presente trabajo es analizar la expresión de IL-21 en los GPs y asociar su presencia a la patogenia de la enfermedad. Método: Se obtuvieron de 15 lesiones con el diagnóstico clínico y radiográfico de GP durante la extracción de dientes con indicación de exodoncia. En 10 lesiones se analizaron los niveles de expresión del ARN mensajero de IL-21 mediante la técnica de PCR y en 5 lesiones se analizó la expresión tisular de IL-21 mediante la técnica de inmunohistoquímica. Se utilizaron Linfocitos T de la línea celular Jurkat como control de la expresión de ARN mensajero de IL-21 y biopsias de ligamento periapical sano y de amígdala como control negativo y positivo, respectivamente, de la expresión tisular de IL-21. Resultados: Se detectaron niveles de expresión de IL-21 similares a los detectados en los linfocitos T Jurkat activos en los GPs y estos niveles se asociaron a la actividad de linfocitos, macrófagos y neutrófilos del infiltrado inflamatorio tisular. Conclusiones: En los GPs, IL-21 participaría en los eventos etiopatogénicos de la enfermedad al ser secretados por los linfocitos, macrófagos y neutrófilos infiltrantes titulares.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / “Niveles de Mieloperoxidasa (MPO) en Fluido Gingival Crevicular (FGC) de Dientes con Periodontitis Apical Asintomática (PAa)” Introducción: La mieloperoxidasa (MPO), es una peroxidasa con rol defensivo contra los agentes infecciosos y paralelamente provoca daño a los tejidos adyacentes. A la fecha, su presencia no se ha asociado a la periodontitis apical asintomática (PAa). Objetivo: Comparar los niveles de MPO presente en fluido gingival crevicular (FGC) de dientes con PAa antes del tratamiento endodóntico con dientes con PAa después del tratamiento endodóntico y dientes sin PAa. Materiales y Métodos: Se obtuvieron muestras de FGC de dientes con PAa antes del tratamiento endodóntico (n=13) y después de siete días finalizado éste (n=12) y de dientes sin PAa (n=13). Las muestras fueron eluidas y se les realizó cuantificación de proteínas totales. Para determinar los niveles de MPO se realizó test de ELISA y para el análisis estadístico el programa GraphPAD prism. 5.0. Resultados: La MPO se expresa en FGC en dientes sanos y con PAa. Si bien se observó que los niveles de MPO fueron ligeramente mayores en FGC de dientes con PAa que en dientes sanos, y que hubo una tendencia a la disminución después del tratamiento endodóntico, las diferencias no fueron estadísticamente significativas. Conclusiones: Los niveles de MPO en el FGC no reflejaron el estado de salud periapical, esto podría estar influenciado por estados inflamatorios gingivales subclínicos.

A degradação de proteínas da matriz extracelular pelas metaloproteases da matriz (MMPs) ocorre nos processos fisiológicos (turnover) bem como nos processos patológicos (inflamação, neoplasias, etc). A atividade das MMPs nos tecidos é regulada, naturalmente, por um grupo de inibidores teciduais de metaloproteases (TIMPs). Recentemente, um novo inibidor de MMPs, chamado RECK (proteína indutora de reversão rica em cisteína com domínios Kazal) foi identificado. Neste estudo, verificamos os níveis de transcritos para metaloproteases da matriz (MMP-2, -9 e -14), inibidores teciduais de metaloproteases (TIMP-1 e -2) e RECK, por meio da técnica de Real-Time RT-PCR, assim como as células envolvidas em granulomas periapicais para MMP-2 e -9, por meio de marcações de imuno-histoquímica. As amostras deste estudo foram coletadas de cirurgias paraendodônticas, sendo 15 submetidas ao Real-Time RT PCR (8 granulomas periapicais, 6 cistos periapicais e 1 cicatriz apical), e 10 para imuno-histoquímica (10 granulomas periapicais). Os resultados para o Real-Time PCR demonstraram que houve a expressão de MMP-2, -9, -14, TIMP-1, -2, e RECK em granulomas e cistos periapicais, não havendo diferença estatisticamente significante entre as duas patologias periapicais frente aos genes testados. Todavia, quando o grupo lesão periapical (granuloma e cisto periapical) foi confrontado frente aos genes pesquisados, houve uma correlação significativa entre os níveis de transcritos para MMP-2, -9 e -14, TIMP-1, -2 e RECK. Para as imunomarcações nos granulomas periapicais, a MMP-2 apresentou um padrão mais difuso, dispondo-se perifericamente às células e dispersas pela MEC, em comparação com a MMP-9 que apresentou um padrão mais localizado e restrito. Os macrófagos foram às células que mais expressaram estas metaloproteases da matriz. / Degradation of extracellular matrix (ECM) proteins by matrix metalloproteinases (MMPs) occurs during matrix turnover and pathologic processes (inflammation, cancers). MMP activity in the tissues is regulated in part by a group of tissue inhibitors (TIMPs). Recently, a new MMP inhibitor called RECK (reversion inducing cysteine-rich protein with a Kazal motif) has been identified. In this study, we verified the message (mRNA) for MMPs (MMP-2, -9 e -14), tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMP-1 e -2) and RECK, through a Real-Time RT-PCR technique, as well as the cells expressing MMP-2 and -9 in periapical granulomas using immunohistochemistry. Samples were collected during periapical surgery, of which 15 were used for Real-Time RT PCR (8 periapical granulomas, 6 periapical cysts and 1 apical scar), and 20 for immunehistochemistry (10 periapical granulomas). The results for Real-Time PCR showed MMP-2, -9, -14, TIMP-1, -2, and RECK expression in periapical granulomas and cysts, with no significant statistical differences between the twoperiapical pathologies regarding the genes tested. However, when the group periapical lesion (granuloma and cyst) was confronted with the genes tested,there was a significant correlation in some mRNA expression for MMP-2, -9, - 14, TIMP-1, -2 and RECK. Regarding immunostainings in the periapical granulomas, MMP-2 was more diffusely expressed, being located peripherally to the cells and dispersed through the ECM, when compared to MMP-9 which presented a more localized and restrained pattern. Macrophages were the most abundant cells expressing these MMPs.

Proefschrift Universiteit van Amsterdam. / Met lit. opg. - Met samenvatting in het Nederlands.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-12-01T03:15:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 336196.pdf: 14963139 bytes, checksum: 131e91e921afd609f67ff9ee7827cde7 (MD5) Previous issue date: 2015 / Após a infecção com o bacilo Mycobacterium tuberculosis (Mtb), causador da tuberculose (TB), observa-se a formação de uma estrutura celular característica denominada granuloma. Esse agregado celular é responsável por restringir a infecção e manter a doença em estado latente. Porém, quando a forma ativa da doença se desenvolve, o infiltrado de células apresenta necrose caseosa e as bactérias entram em intenso estado replicativo. Diante deste quadro, faz-se uso de antibióticos como a isoniazida (INH), um dos pilares da quimioterapia da TB. A INH é uma pró-droga que requer ativação por uma catalase peroxidase bacteriana codificada pelo gene katG, a fim de inibir a síntese de ácidos micólicos, importantes componentes estruturais da bactéria. Entretanto, dados recentes indicam que a INH pode também ser ativada por enzimas presentes em células do hospedeiro. É possível que este fármaco aja diretamente em células que abrigam o Mtb, contribuindo para o controle do seu crescimento intracelular. Entretanto, estudos que avaliam os efeitos da INH em sistemas biológicos complexos como o granuloma são escassos. Dessa forma, a partir de um modelo de granuloma humano in vitro investigamos os mecanismos iniciais do tratamento com INH que promovem a morte micobacteriana nesse sistema. Nossos resultados demonstram que o modelo utilizado mimetiza a fase ativa da infecção, com populações celulares semelhante às encontradas na infecção in vivo, como macrófagos, células dendriticas, linfócitos e granulócitos. Ainda mais, o granuloma apresenta intensa replicação bacteriana associada à necrose celular. Verificamos ainda que a INH possui capacidade bactericida nesse sistema celular, mas que, ao menos nas fases iniciais de tratamento in vitro, esse efeito não está relacionado com ativação de células T ou monócitos e independe de importantes citocinas, como IL-1ß ou TNF. Utilizando cepas clínicas resistentes à INH, bem como experimentos de coinfecção do granuloma com cepas sensível e resistente à INH, constatamos que o fármaco age diretamente sobre a bactéria, e sua forma ativa não age diretamente nas células do granuloma para promover a morte bacteriana. O desenvolvimento desta tese, em conjunto com outros dados presentes na literatura, confirmou a necessidade de ativação do fármaco pelo patógeno para a atividade inicial bactericida da INH localmente no granuloma.<br> / Abstract : Following infection with the bacilli Mycobacterium tuberculosis (Mtb), causative agent for tuberculosis (TB), there is formation of a characteristic cellular structure named granuloma. This cellular aggregate is responsible for restricting infection and keeping disease in its latent form. However, when the active disease manifests, the cellular infiltrate undergoes caseous necrosis and bacteria start intense replication. In this scenario, it is initiated the use of antibiotics such as isoniazid (INH), one of the pillars for TB chemotherapy. INH is a pro drug that needs activation by a bacterial catalase peroxidase encoded by katG gene, in order to inhibit mycolic acids synthesis, important bacteria structural components. Nevertheless, recent data indicate that INH can also be activated by cell host enzymes. It is possible that the drug acts directly on host cells infected with Mtb, contributing to the control of intracellular growth. However, studies that evaluate INH s effect in complex biologic systems such as the granuloma are scarce. Therefore, using an in vitro human granuloma model we investigated the early mechanisms by which treatment with INH promotes mycobacterial killing in this system. Our results show that the model mimics the active phase of infection, with the same cellular population seen in in vivo infection, such as macrophages, dendritic cells, lymphocytes and granulocytes. Moreover, the granuloma presents intense bacterial replication associated to cellular necrosis. We could also confirm INH s bactericidal activity in this cellular system, though at least during early in vitro treatment, this effect was not related to T cells or monocytes activation and does not depend on important cytokines, such as IL-1ß or TNF. By using INH resistant clinical strains, as well as performing coinfection experiments with sensible and resistant INH strains, we could confirm the drug s direct action over bacteria, and that its active form does not act directly upon granuloma cells to promote bacterial killing. These thesis conclusions, together with literature data, confirmed the need of pathogen drug activation for early bactericidal activity of INH locally in the granuloma.