Alguns compostos orgânicos como interferentes endócrinos e ativos farmacêuticos estão sendo encontrados em águas superficiais e vêm chamando a atenção de orgãos públicos e da comunidade científica. Dentre esses compostos, foram enfatizados nesse trabalho, o hormônio sintético 17α-etinilestradiol, o surfactante (4-nonilfenol), bisfenol A, o antibiótico β-lactâmico amoxicilina e a cafeína como traçador de atividade antrópica. Estes compostos são continuamente introduzidos em corpos d\'água pelo lançamento de esgoto in natura o que afeta a qualidade da água, a saúde dos ecossistemas e impacta o suprimento de água potável. Considerando a baixa taxa de remoção desses contaminantes pelo tratamento de água atualmente utilizado no Brasil e o estado de degradação dos mananciais de água para abastecimento público, esse trabalho apresenta o desenvolvimento de metodologia analítica para determinação dos compostos citados e a avaliação da eficiência de remoção quando o tratamento convencional de água é aplicado. A determinação foi baseada em métodos já estabelecidos e envolveram as etapas de limpeza e concentração de amostra usando extração em fase sólida (SPE) e análise por cromatografia a líquido de alta eficiência (HPLC) com detector de arranjo de diodos (DAD) e espectrometria de massas. As amostras do Reservatório do Guarapiranga foram utilizadas para ensaios em escala laboratorial que simulavam o tratamento convencional de água em planta real. Os resultados mostraram a adequação dos métodos utilizados para a separação e determinação desses compostos em amostras ambientais. Além disso, apontaram para a necessidade de se avaliar a utilização de metodologias não convencionais que otimizem a remoção pelo tratamento de água atualmente utilizado. / Some organic compounds, such as endocrine disruptors and pharmaceuticals, are being found in the surface water, and are concerning both the public organs and the scientific community. Among these compounds, the synthetic hormone 17α-ethinylestradiol, the surfactant (4-nonylphenol), bisphenol-A, the β-lactam antibiotic amoxicillin and the marker of human activity caffeine were highlighted in the present work. These compounds are continuously drained to the water bodies by sewers, affecting not only the water quality itself, but also the ecosystems, and impacting the drinking water availability. Currently in Brazil, the removal rate of these contaminants is low, whereas the water sources for public supply are highly degraded. In this context, the present work develops an analytical method to detect the aforementioned compounds, and to evaluate the efficiency of its removal by conventional water treatments. Detection was based on pre-established methods and steps involved clean up and samples concentration by solid phase extraction (SPE), high performance liquid chromatography with diode array detection (DAD), and mass spectrometry. Recovery tests were done using environmental samples from Guarapiranga Reservoir (São Paulo, SP). This samples were further used in laboratorial tests, simulating real scale water conventional treatments. Current results revealed the adequacy of the chosen methods in the separation and determination of the abovementioned compounds from natural samples. Also, they highlight the need for the evaluation of non-conventional methodologies that optimize removal by current water treatment.

Alguns compostos orgânicos como interferentes endócrinos e ativos farmacêuticos estão sendo encontrados em águas superficiais e vêm chamando a atenção de orgãos públicos e da comunidade científica. Dentre esses compostos, foram enfatizados nesse trabalho, o hormônio sintético 17α-etinilestradiol, o surfactante (4-nonilfenol), bisfenol A, o antibiótico β-lactâmico amoxicilina e a cafeína como traçador de atividade antrópica. Estes compostos são continuamente introduzidos em corpos d\'água pelo lançamento de esgoto in natura o que afeta a qualidade da água, a saúde dos ecossistemas e impacta o suprimento de água potável. Considerando a baixa taxa de remoção desses contaminantes pelo tratamento de água atualmente utilizado no Brasil e o estado de degradação dos mananciais de água para abastecimento público, esse trabalho apresenta o desenvolvimento de metodologia analítica para determinação dos compostos citados e a avaliação da eficiência de remoção quando o tratamento convencional de água é aplicado. A determinação foi baseada em métodos já estabelecidos e envolveram as etapas de limpeza e concentração de amostra usando extração em fase sólida (SPE) e análise por cromatografia a líquido de alta eficiência (HPLC) com detector de arranjo de diodos (DAD) e espectrometria de massas. As amostras do Reservatório do Guarapiranga foram utilizadas para ensaios em escala laboratorial que simulavam o tratamento convencional de água em planta real. Os resultados mostraram a adequação dos métodos utilizados para a separação e determinação desses compostos em amostras ambientais. Além disso, apontaram para a necessidade de se avaliar a utilização de metodologias não convencionais que otimizem a remoção pelo tratamento de água atualmente utilizado. / Some organic compounds, such as endocrine disruptors and pharmaceuticals, are being found in the surface water, and are concerning both the public organs and the scientific community. Among these compounds, the synthetic hormone 17α-ethinylestradiol, the surfactant (4-nonylphenol), bisphenol-A, the β-lactam antibiotic amoxicillin and the marker of human activity caffeine were highlighted in the present work. These compounds are continuously drained to the water bodies by sewers, affecting not only the water quality itself, but also the ecosystems, and impacting the drinking water availability. Currently in Brazil, the removal rate of these contaminants is low, whereas the water sources for public supply are highly degraded. In this context, the present work develops an analytical method to detect the aforementioned compounds, and to evaluate the efficiency of its removal by conventional water treatments. Detection was based on pre-established methods and steps involved clean up and samples concentration by solid phase extraction (SPE), high performance liquid chromatography with diode array detection (DAD), and mass spectrometry. Recovery tests were done using environmental samples from Guarapiranga Reservoir (São Paulo, SP). This samples were further used in laboratorial tests, simulating real scale water conventional treatments. Current results revealed the adequacy of the chosen methods in the separation and determination of the abovementioned compounds from natural samples. Also, they highlight the need for the evaluation of non-conventional methodologies that optimize removal by current water treatment.

Cerca de 10% da flora mundial é representada pela família Asteraceae, uma das maiores famílias de Angiospermae, caracterizada não só pela diversidade morfológica e taxonômica, como também pela riqueza de metabólitos secundários apresentada pelas espécies estudadas dessa família. Lychnophora salicifolia Mart. é a espécie de maior distribuição geográfica do gênero (ocorrendo na Serra do Espinhaço na Bahia, em Minas Gerais e no sudeste de Goiás) e a mais polimórfica também. Entre seus usos etnobotânicos, destaca-se a ação anti-inflamatória e analgésica. Neste trabalho, realizamos o estudo da variação dos metabólitos polares dessa espécie, sendo que para isso foi utilizada a desreplicação do extrato bruto (metanol/água obtido a partir da folhas) através da análise por CLAE-DAD-EM, a qual permitiu a caracterização dos constituintes dessa mistura através da análise dos espectros de UV e dados de EM. Assim foi possível identificar 20 substâncias: ácido protecatecuico; ácido 3-O-E-cafeoilquínico; ácido 3-O-p-cumaroilquínico; ácido 4-O-E-cafeoilquínico; ácido 5-O-E-cafeoilquínico; ácido 4-O-p-cumaroilquínico; ácido 5-O-p-cumaroilquinico; ácido 5-O-feruloilquínico; vicenina-2 (6,8-di-C--glcosilapigenina); ácido 3,4-di-O-E-cafeoilquínico; ácido 3,5-di-O-E-cafeoilquínico; ácido 3-O-cumaroil 5-O-p-cafeoilquínico; ácido 3-O-cafeoil, 5-O-p-cumaroilquínico; ácido 4,5-di-O-E-cafeoilquínico; ácido 4-feruloil-5-O-E-cafeoilquínico; ácido 3,4 di-O-p-cumaroilquínico; ácido 3,5 di-O-p-cumaroilquínico; ácido 4,5 di-O-p-cumaroilquínico; ácido lychnofólico e o ácido 2-O-acetil lychnofólico. Para a validação da metodologia analítica foi utilizada uma substância pertencente a cada classe de compostos: ácido 5-O-E-cafeoilquínico, vicenina-2 e o ácido 2-O-acetil lychnofólico. Quanto à validação da metodologia analítica, esta garantiu a confiabilidade dos resultados e a credibilidade do método para os propósitos deste estudo, abrangendo a faixa de concentração necessária para as análises de variação populacional, além apresentar valores de limites de detecção e limites de quantificação, precisão e recuperação adequados. Na análise intrapopulacional, verificou-se uma variabilidade quantitativa entre indivíduos da mesma população, porém, em média os indivíduos pertencentes à mesma população são parecidos quimicamente. Já em relação ao estudo da variação populacional, pudemos verificar diferenças tanto quanti como qualitativas entre populações coletadas em regiões distintas do Brasil, sendo que a partir da análise estatística, verificamos que há uma correlação entre isolamento geográfico e diminuição da semelhança do perfil de metabólitos polares entre as plantas de populações diferentes indicando que o padrão encontrado para concentração dos metabólitos é influenciado pela distribuição geográfica das amostras. Todavia, não é possível determinar a localização das amostras unicamente pelas variáveis metabólicas estudadas. Assim, a concentração e presença dos metabólitos são influenciadas pela distribuição geográfica das amostras. / About 10% of the world flora is represented by the Asteraceae family, which has been extensively studied since it is one of the largest families of Angiospermae, characterized not only by morphological and taxonomic diversity but also the wealth of secondary metabolites produced by the species studied of this family. Lychnophora salicifolia Mart. is the most widely distributed species of the genus (occurring in the Serra do Espinhaço in Bahia, Minas Gerais and in the southeast of Goiás) and also is the most polymorphic. Its popular use is due to the anti-inflammatory and analgesic activity. In this work, we studied the variation of polar metabolites of this species using the dereplication of the crude extract (methanol/water obtained from the leaves) by the HPLC-DAD-MS analysis, which led us to identify the constituents of this mixture by analyzing the UV spectra and MS data. Thus it was possible to identify 20 substances: protocatechuic acid; 3-O-E-caffeoylquinic acid; 3-O-p-coumaroylquinic acid; 4-O-E-caffeoylquinic acid; 5-O-E-caffeoylquinic acid; 4-O-p-coumaroylquinic acid; 5-O-p-coumaroylquinic acid; 5-O-feruloylquinic acid; vicenin-2 (6,8-di-C--glucosylapigenin); 3,4-di-O-E-caffeoylquinic acid, 3,5-di-O-E-caffeoylquinic acid; 3-O-coumaroyl-5-O-p-caffeoylquinic acid; 3-O-caffeoyl acid, 5-O-p-coumaroylquinic acid; 4,5-di-O-E-caffeoylquinic acid, 4-feruloyl-5-O-E-caffeoylquinic acid; 3,4-di-O-p-coumaroylquinic acid; 3,5-di-O-p-coumaroylquinic acid; 4,5-di-O-p-coumaroylquinic acid; lychnofolic acid and 2-O-acetyl lychnofolic acid. To the validation of analytical methodology were used one substance belonging to each class of compounds: 5-O-E-caffeoylquinic acid, vicenin-2 and 2-O-acetyl lychnofolic acid. So, the validation of analytical method ensured the reliability and credibility of the results of the method for purposes of this study, covering the concentration range required for analysis of population variation and presents appropriates values of detection and quantification limits, precision and recovery. For intrapopulation analysis, there was a quantitative variability between individuals of the same population, but on average the individuals of the same population are similar chemically. In relation to the study of interpopulation variation, we could see quantitative and qualitative differences between populations collected from different regions of Brazil, and from the statistical analysis, we found that there is a correlation between geographic isolation and decrease of the similarity of the polar metabolites profile between plants of different populations. This indicated that the pattern found for the concentration of metabolites is influenced by the geographical distribution of samples. However, it is not possible to determine the location of the samples only by the metabolic variables studied. Thus, the presence and concentration of metabolites are influenced by the geographical distribution of samples.

Cerca de 10% da flora mundial é representada pela família Asteraceae, uma das maiores famílias de Angiospermae, caracterizada não só pela diversidade morfológica e taxonômica, como também pela riqueza de metabólitos secundários apresentada pelas espécies estudadas dessa família. Lychnophora salicifolia Mart. é a espécie de maior distribuição geográfica do gênero (ocorrendo na Serra do Espinhaço na Bahia, em Minas Gerais e no sudeste de Goiás) e a mais polimórfica também. Entre seus usos etnobotânicos, destaca-se a ação anti-inflamatória e analgésica. Neste trabalho, realizamos o estudo da variação dos metabólitos polares dessa espécie, sendo que para isso foi utilizada a desreplicação do extrato bruto (metanol/água obtido a partir da folhas) através da análise por CLAE-DAD-EM, a qual permitiu a caracterização dos constituintes dessa mistura através da análise dos espectros de UV e dados de EM. Assim foi possível identificar 20 substâncias: ácido protecatecuico; ácido 3-O-E-cafeoilquínico; ácido 3-O-p-cumaroilquínico; ácido 4-O-E-cafeoilquínico; ácido 5-O-E-cafeoilquínico; ácido 4-O-p-cumaroilquínico; ácido 5-O-p-cumaroilquinico; ácido 5-O-feruloilquínico; vicenina-2 (6,8-di-C--glcosilapigenina); ácido 3,4-di-O-E-cafeoilquínico; ácido 3,5-di-O-E-cafeoilquínico; ácido 3-O-cumaroil 5-O-p-cafeoilquínico; ácido 3-O-cafeoil, 5-O-p-cumaroilquínico; ácido 4,5-di-O-E-cafeoilquínico; ácido 4-feruloil-5-O-E-cafeoilquínico; ácido 3,4 di-O-p-cumaroilquínico; ácido 3,5 di-O-p-cumaroilquínico; ácido 4,5 di-O-p-cumaroilquínico; ácido lychnofólico e o ácido 2-O-acetil lychnofólico. Para a validação da metodologia analítica foi utilizada uma substância pertencente a cada classe de compostos: ácido 5-O-E-cafeoilquínico, vicenina-2 e o ácido 2-O-acetil lychnofólico. Quanto à validação da metodologia analítica, esta garantiu a confiabilidade dos resultados e a credibilidade do método para os propósitos deste estudo, abrangendo a faixa de concentração necessária para as análises de variação populacional, além apresentar valores de limites de detecção e limites de quantificação, precisão e recuperação adequados. Na análise intrapopulacional, verificou-se uma variabilidade quantitativa entre indivíduos da mesma população, porém, em média os indivíduos pertencentes à mesma população são parecidos quimicamente. Já em relação ao estudo da variação populacional, pudemos verificar diferenças tanto quanti como qualitativas entre populações coletadas em regiões distintas do Brasil, sendo que a partir da análise estatística, verificamos que há uma correlação entre isolamento geográfico e diminuição da semelhança do perfil de metabólitos polares entre as plantas de populações diferentes indicando que o padrão encontrado para concentração dos metabólitos é influenciado pela distribuição geográfica das amostras. Todavia, não é possível determinar a localização das amostras unicamente pelas variáveis metabólicas estudadas. Assim, a concentração e presença dos metabólitos são influenciadas pela distribuição geográfica das amostras. / About 10% of the world flora is represented by the Asteraceae family, which has been extensively studied since it is one of the largest families of Angiospermae, characterized not only by morphological and taxonomic diversity but also the wealth of secondary metabolites produced by the species studied of this family. Lychnophora salicifolia Mart. is the most widely distributed species of the genus (occurring in the Serra do Espinhaço in Bahia, Minas Gerais and in the southeast of Goiás) and also is the most polymorphic. Its popular use is due to the anti-inflammatory and analgesic activity. In this work, we studied the variation of polar metabolites of this species using the dereplication of the crude extract (methanol/water obtained from the leaves) by the HPLC-DAD-MS analysis, which led us to identify the constituents of this mixture by analyzing the UV spectra and MS data. Thus it was possible to identify 20 substances: protocatechuic acid; 3-O-E-caffeoylquinic acid; 3-O-p-coumaroylquinic acid; 4-O-E-caffeoylquinic acid; 5-O-E-caffeoylquinic acid; 4-O-p-coumaroylquinic acid; 5-O-p-coumaroylquinic acid; 5-O-feruloylquinic acid; vicenin-2 (6,8-di-C--glucosylapigenin); 3,4-di-O-E-caffeoylquinic acid, 3,5-di-O-E-caffeoylquinic acid; 3-O-coumaroyl-5-O-p-caffeoylquinic acid; 3-O-caffeoyl acid, 5-O-p-coumaroylquinic acid; 4,5-di-O-E-caffeoylquinic acid, 4-feruloyl-5-O-E-caffeoylquinic acid; 3,4-di-O-p-coumaroylquinic acid; 3,5-di-O-p-coumaroylquinic acid; 4,5-di-O-p-coumaroylquinic acid; lychnofolic acid and 2-O-acetyl lychnofolic acid. To the validation of analytical methodology were used one substance belonging to each class of compounds: 5-O-E-caffeoylquinic acid, vicenin-2 and 2-O-acetyl lychnofolic acid. So, the validation of analytical method ensured the reliability and credibility of the results of the method for purposes of this study, covering the concentration range required for analysis of population variation and presents appropriates values of detection and quantification limits, precision and recovery. For intrapopulation analysis, there was a quantitative variability between individuals of the same population, but on average the individuals of the same population are similar chemically. In relation to the study of interpopulation variation, we could see quantitative and qualitative differences between populations collected from different regions of Brazil, and from the statistical analysis, we found that there is a correlation between geographic isolation and decrease of the similarity of the polar metabolites profile between plants of different populations. This indicated that the pattern found for the concentration of metabolites is influenced by the geographical distribution of samples. However, it is not possible to determine the location of the samples only by the metabolic variables studied. Thus, the presence and concentration of metabolites are influenced by the geographical distribution of samples.

Content: The restriction of certain dangerous substances according to REACH (Registration, Evaluation, Authorisation of Chemicals as well as the Restricted Substances Lists (RSL) requirements promoted by various renowned brands obliges tanneries to everyday more numerous analysis with undesired conflictual situations on false positive tests results. This situation is worsened by the voluntary reduction of requested detection limits far below the levels recommended by the accepted ISO methods. On this context, ISO 17070:2015 was extended in its current version from the determination of pentachlorophenol to tetrachlorophenol, trichlorophenol, dichlorophenol and monochlorophenol isomers. Some brands also included under this technique the ortho phenyl phenol (OPP) analysis, requesting a quantification limit below 1 mg/kg for all analytes. The present paper proposes a new HPLC-DAD-MS direct method for the verification of chlorophenols positive cases, and its extension to leather chemicals analysis, as well as the discrimination among false positive cases and real positive ones. The paper also illustrates case studies reporting differences in the quantification of the said analytes and the chlorophenol scission in different analytical conditions. Take-Away: False positives verification of the presence of chlorophenols. Quicker method respect to the current ISO 17070:2015 standard. Method reliable on Leather chemicls chlorophenos research. Generation of chlorophenols from certain AOX substances.

This diploma thesis deals with the natural antioxidants present in cereals, especially in barley (Hordeum vulgare). A close attention is paid to the study of carotenoids determination was conducted. In the experimental part, the method of beta-carotene determination was optimized using high-performance liquid chromatography, diode array detector and mass detector (HPLC/DAD/APCI-MS). The method was used for the beta-carotene and lutein determination in the samples of barleycorn, malt and green barley. This method involves the sample saponification, extraction by diethylether, followed by separation on ODS Hypersil 250x4,6 mm, 5m column, using MTBE/MeOH (20:80) as mobile phase and spectrophotometric detection (450 nm). Quantitative analysis was implemented in the HPLC/DAD system. The MS detector was used for identification of analytes. A number of still unpublished data about the content of beta-carotene and lutein in several varieties of malting barley, malt and green barley are stated in this thesis. The highest content of beta-carotene was found in the green barley sample of variety Malz, harvested in first grow phase (8,49 mg/kg of the dry matter). The content of beta-carotene in barleycorn is relatively low (0,07-0,14 mg/kg of the dry matter). The content of beta-carotene is several times higher in the malt produced from barleycorn (0,24-0,56 mg/kg of the dry matter). The diploma thesis was implemented in the Research Institute of Brewing and Malting, Plc. in Brno.

(EN) This work has been focused on the development and optimization of analytical methodology, using high performance liquid chromatography with diode array detection (HPLC-DAD) and high performance liquid chromatography with diode array and tandem mass spectrometric detection (HPLC-DAD-MS/MS) for the determination of amatoxins (α- and β-amanitin) and phalotoxins (phallacidin and phalloidin) in the crude extract from cap of Amanita phalloides with the option to later use for clinical purposes. In order to guarantee the reliability of the analytical results the influence of various parameters on the quality of the separation and the determination of toxins was studied. The developed HPLC-DAD method achieves good linearity in the concentrations range 1 - 100 µg/ml, with correlation coefficients higher than 0,997. Limits of detection (LOD) and quantitation (LOQ) were calculated for all the studied toxins with following values: for α-amanitin 0,90 µg/ml (LOD); 2,99 µg/ml (LOQ), β-amanitin 1,07 µg/ml (LOD); 3,56 µg/ml (LOQ), phallacidin 2,17 µg/ml (LOD); 7,26 µg/ml (LOQ) and phalloidin 0,79 µg/ml (LOD); 2,64 µg/ml (LOQ). Key words: Amanita phalloides,-amanitin,-amanitin, phallacidin, phalloidin, solid-liquid extraction, HPLC-DAD, HPLC-DAD-MS/MS .