We have used a functional in vitro assay to define several populations of B-cell and B-cell precursors normally present in the murine bone marrow. A multi-parameter analysis of cells (including size, polyclonal activation requirements and kinetics of recruitment to IgM secretion, membrane IgM expression, nylon-wool adherence properties and proliferative status) has permitted the resolution of up to 10 populations. Cells showing a delayed kinetics of development to plasma cells as compared to small B-lymphocytes were also found immature with respect to age-related markers. The appearance of characteristic markers (nylon wood adherence, membrane IgM) and functional properties (LPS-responsiveness) was traced within distinguishable populations of cells. On the basis of functional properties (AE-dependence, LPS-responsiveness and time of peak response) these 10 populations were grouped into 3 distinct subsets. From the major discontinuities in the kinetics of individual parameters and from changes in the quantitative expression of age-related markers, these subsets were sequentially related into the following scheme: / pre-B cells (--->) early B cells (--->) B-lymphocytes / Finally, a proliferative pathway was found within the early B cell compartment which parallels the post-mitotic maturation of the pre-B cell progeny.

The Toll pathway mediates innate immunity, the first line of defense against pathogens in vertebrates and invertebrates. In Drosophila the Toll pathway protects against Gram-positive bacteria and fungi by inducing antimicrobial peptides such as Drosomycin. Pellino is a highly conserved protein which biochemically interacts with Pelle/IRAK, a crucial kinase downstream of Toll. Here we report that the chemically induced Pellino 7T2 mutant does not affect Toll pathway function in early embryonic dorsoventral patterning, but it severely compromises induction of Drosomycin upon infection with Gram-positive Micrococcus luteus. In this study we identify Pellino as a novel component of Toll pathway-mediated innate immunity. / La transduction de signal initiée par Toll active l'immunité innée. Cet événement constitue la première ligne de défense contre des agents pathogènes chez les vertébrés et les invertébrés. Dans la Drosophile, la transduction de signal initiée par Toll protège contre les bactéries Gram-positives et les champignons en induisant la production de peptides antimicrobiens tels que Drosomycin. Pellino est une protéine hautement conservée qui interagit biochimiquement avec Pelle/IRAK, une kinase essentielle activée par Toll. Ici, nous reportons que Pellino 7T2, un mutant chimiquement induit, n'affecte pas la fonction de Toll durant l'établissement de la polarité dorsoventral dans les embryons précoces. Cependant, Pellino affecte l'induction de Drosomycin suite à une infection avec les bacteries Gram-positive Micrococcus luteus. Dans cette étude, nous reportons un nouveau rôle à Pellino, notamment, celui d'un élément de la voie de signal initiée par Toll qui impacte l'immunité innée.

T Cell Protein Tyrosine Phosphatase (TC-PTP) and Protein Tyrosine Phosphatase (PTP)-1B are two closely related enzymes involved in the regulation of cytokine signalling. While tcptp-/- mice display a wide range of hematopoietic defects and die within three to five weeks after birth, ptp1b-/- mice are healthy and show no apparent immune phenotype; nevertheless, in vitro results suggest that both enzymes negatively regulate interferon signalling. The goal of my thesis was to determine their role in macrophages whose activation and maturation is largely dependent on interferon-gamma. / In the first instance, we detected a progressive mononuclear cellular infiltrate in several organs of the TC-PTP deficient mice, which, together with active cytokine production, was likely to be the cause of tissue damage and ultimately their death. Moreover, the tcptp-/- mice showed increased sensitivity to exogenous lipopolysaccharide in vivo and developed symptoms of septic shock. tcptp-/- spleen-derived macrophages were also highly sensitive to lipopolysaccharide. These findings indicated that TC-PTP was necessary for the regulation of inflammatory disease. / In the second part, although ptp1b-/- bone marrow presented no abnormalities at the myeloid progenitor level, it contained more colony stimulating factor (CSF)-1 -responsive cells and the CSF-1 receptor was hyperphosphorylated in ptp1b-/- bone marrow-derived macrophages. ptp1b-/- splenic macrophages also displayed upregulated activation markers as well as increased sensitivity to LPS. Collectively, these results indicated that PTP-1B regulated myeloid differentiation and macrophage activation in vivo. / Lastly, we wished to delete one or both copies of PTP-1B in tcptp-/- and tcptp+/-mice by interbreeding to study the redundancy of the two enzymes. Our results indicated that the double mutant was lethal at a relatively early stage of embryonic development. Mice heterozygous for TC-PTP on the ptp1b-/- background developed symptoms similar to the tcptp-/- mice, and their macrophages were highly sensitive to interferon-gamma as shown by increased Stat1 phosphorylation, indicating a nonredundant role for PTP-1B and TC-PTP in the regulation of interferon signalling.

The importance of the adaptive immune response in cardiovascular disease has been increasingly appreciated. However, limited information is available on immune modulation in the context of hypertension and atherosclerosis. In order to fill this knowledge gap, the amount of T regulatory (Treg) cells was determined by flow cytometry on cells from the spleen and the aorta in two murine models, namely angiotensin (Ang) II-induced hypertension (HT) and endothelin-1 (ET-1)-exacerbated high fat diet (HFD)-induced atherosclerosis in apolipoprotein E knockout (apoE-/-). Two groups of mice were studied. In the first study, 12-week old male C57BL/6 mice were infused with Ang II (1 µg/kg/min, s.c.) for 14 days via an osmotic pump or implanted with a dummy pump. In the second study, 8-week old C57BL/6 male transgenic mice with endothelium-restricted preproendothelin-1 (eET-1) overexpression, apoE-/-, eET-1/apoE-/- crosses, and wild type (WT) mice were fed a HFD or a normal diet (ND) for 8 weeks. A trend towards an increase in several T lymphocyte subpopulations including natural (CD4+CD25+Foxp3+) Tregs was observed in the spleen of mice infused with Ang II whereas in aorta natural Tregs tended to decrease. In atherosclerosis, an increase in classical (CD4+CD25+) Tregs was observed in the spleen of eET-1. HFD reduced the Treg content in the spleen of both WT and eET-1. In addition, HFD tended to increase natural Tregs in eET-1/apoE-/- crosses. In aorta, HFD increased classical Tregs and tended to increase natural Tregs in eET-1 whereas it tended to decrease natural Tregs in eET-1/apoE-/- crosses. The lack of significant change in the above studies limits drawing conclusions. However, the results suggest that ET-1 and HFD have an impact on Treg populations in the spleen and aorta. Additional animals and/or refinement in the techniques could lead to more definitive conclusions. / Le rôle de la réponse immunitaire adaptative dans l'hypertension et l'athérosclérose commence à être apprécié. Cependant, il n'est pas clair que les lymphocytes T régulateurs (Tregs) jouent un rôle dans ces deux pathologies. Dans le but d'éclaircir le rôle de ces lymphocytes, le contenu en Tregs a été déterminé à l'aide de cytométrie de flux dans la rate et l'aorte de deux modèles murins, l'hypertension induite par l'angiotensine (Ang) II et l'athérosclérose induite par une diète riche en gras (DRG) dans des souris knockout pour l'apolipoprotéine E (apoE-/-) exagérée par la surexpression de l'endothéline (ET)-1. Deux groupes de souris ont été étudiés. Dans le premier groupe, des souris mâles C57BL/6 de 12 semaines ont été infusées ou pas avec de l'Ang II (1 µg/kg/min, s.c.) pendant 2 semaines. Dans le second groupe, des souris mâles C57BL/6 de 8 semaines transgéniques surexprimant l'ET-1 dans les cellules endothéliales (eET-1), apoE-/-, eET-1/apoE-/- et sauvages (WT) ont été nourries avec une DRG ou une diète normale (DN) pendant 8 semaines. Les souris infusées avec l'Ang II présentaient une tendance à l'augmentation de plusieurs sous-populations de lymphocytes T incluant les Tregs naturels (CD4+CD25+Foxp3+) dans la rate. Par contre, au niveau de l'aorte les Tregs naturels tendaient à diminuer. Dans l'étude de l'athérosclérose, une augmentation des Tregs (CD4+CD25+) a été observée dans la rate des souris eET-1. La DRG a réduit le contenu de Tregs dans la rate des souris WT et eET-1 et tendait à accroître les Tregs naturels dans la rate des eET-1/apoE-/-. Au niveau de l'aorte, la DRG a augmenté les Tregs et tendait à accroître les Tregs naturels dans les eET-1 et tendait à diminuer ces lymphocytes dans les eET-1/apoE-/-. Le manque de changements significatifs limite la possibilité de tirer des conclusions. Cependant, les résultats suggèrent que l'ET-1 et la DRG ont un impact sur la population de Tregs dans la rate et l'aorte. Des animaux additionnels et/ou un raffinement des techniques pourraient donner des résultats plus définitifs.

Mammalian target of rapamycin (mTOR) is a highly-conserved serine/threonine kinase that permits anabolic responses to mitogens and metabolic substrates (e.g., insulin, amino acids, ATP). When its activity is reduced, TOR can also initiate catabolic responses. In S. cerevisiae, nutrient or physical stress initiates a transcriptional stress response that requires the TOR-associated phosphatases and the nuclear translocation of stress transcription factors. In this thesis, I explore a novel physical and functional relationship between mammalian TOR, its associated phosphatases, and 'signal transducer and activator of transcription -1' (STAT1), a key transcription factor that controls the induction of apoptosis genes. I hypothesized that inactivation of mTOR favours the nuclear import of STAT1 in a mechanism that requires its associated phosphatases alpha4 and ‘protein phosphatase 2A catalytic subunit' (PP2Ac), as well as the STAT1 importin karyopherin alpha-1 (KPNA1). Here, I show that mTOR, alpha4, PP2Ac, KPNA1, and STAT1 are physically associated in a dynamic macromolecular protein complex. The mTOR inhibitor rapamycin promotes STAT1 nuclear import and the induction of STAT1-dependent apoptosis genes in a mechanism that requires alpha4, PP2Ac, and KPNA1. I further show that STAT1 is required for the enhancing effect of rapamycin on apoptosis per se in cultured cells exposed to pro-inflammatory STAT1 agonists (i.e., bacterial lipopolysaccharide, interferon-beta). Finally, I demonstrate that rapamycin enhances the levels of activated STAT1, STAT1-dependent apoptosis genes, cellular apoptosis, and tissue injury in the lungs of mice exposed to intratracheal lipopolysaccharide. Thus, in mammalian cells, reduction of mTOR activity favours cellular apoptosis and organ injury via a mechanism that involves a physical and functional interaction with STAT1. The molecular mechanisms that mediate the regulation of STAT1 by mTOR are targets for the modulation of mammalian apoptosis and tissue injury. / mTOR (mammalian target of rapamycin), la cible de la rapamycine chez les mammifères, est une kinase de type sérine-thréonine très bien conservée à travers les phyla, qui est responsable de la réponse aux mitogènes anabolisants et aux substrats métaboliques tel que l'insuline, les acides aminés et l'ATP. Une réduction de l'activité de TOR peut également permettre l'initiation de réponses cataboliques. Chez S. cerevisiae, le stress physique et la déficience en éléments nutritifs induisent une réponse transcriptionnelle qui nécessite des phosphatases associées à TOR ainsi que la translocation nucléaire de facteurs de transcriptions dépendant de la réaction aux éléments de stress. Dans cette thèse, j'explore une nouvelle interaction physique et fonctionnelle entre mTOR, ses phosphatases associées et le transducteur de signalisation et activateur de transcription-1 (STAT1), un facteur de transcription contrôlant l'induction des gènes de l'apoptose. J'émets l'hypothèse que l'inactivation de mTOR promeut l'importation de STAT1 au noyau en adoptant un mécanisme nécessitant l'interaction avec ses phosphatases associées; la phosphatase alpha4 et la phosphatase 2A sous-unité catalytique (PP2Ac), ainsi que STAT1 kariophérine importine-alpha1 (KPNA1). Ces résultats démontrent que mTOR, alpha4, PP2Ac, KPNA1 et STAT1 interagissent physiquement et forment un complexe protéique macromoléculaire dynamique. La rapamycine, l'inhibiteur de mTOR, promeut la translocation nucléaire de STAT1 et l'induction de la transcription des gènes de l'apoptose STAT1-dépendant selon un mécanisme nécessitant alpha4, PP2Ac et KPNA1. De plus je démontre que STAT1 est nécessaire pour renforcer l'effet de la rapamycine sur l'apoptose sur des cellules en culture exposées à des agonistes de STAT1 à caractère pro-inflammatoire (c.-à-d lipopolysaccharide bactérien et interféron-beta). Enfin, je démontre que la rapamycine augmente le niveau de STAT1 actif, l'expression des gènes de l'apoptose STAT1-dépendant, l'apoptose cellulaire et les lésions tissulaires dans les poumons de souris auxquelles du lipopolysaccharide a été administré par voie intratrachéale. Ainsi, dans les cellules mammifères, la réduction de l'activité de mTOR résulte en une augmentation de l'apoptose cellulaire et des lésions tissulaires par l'intermédiaire d'un mécanisme impliquant une interaction physique et fonctionnelle avec STAT1. Les mécanismes moléculaires contrôlant la régulation de STAT1 par mTOR sont des cibles importantes pour la modulation de l'apoptose et des lésions tissulaires chez les mammifères.

With the progression of the AIDS epidemic, understanding the host responseto the opportunistic fungal pathogen Cryptococcus neoformans, responsible forapproximately 650,000 deaths in Sub-Saharan Africa each year, has become animportant topic of research. Current knowledge suggests that susceptibility tocryptococcal pneumonia in both mice and humans proceeds via an allergic (TH2)pattern of lung inflammation, while resistance is attributable to a TH1 response in thelungs. The epithelial polarizing cytokines thymic stromal lymphopoietin (TSLP),interleukin-25 (IL-25) and IL-33 have been implicated in TH2 mucosal andrespiratory inflammation caused by allergens and helminths; however, their rolesduring C. neoformans infection are not known. We demonstrated that in vitrostimulation of the mouse lung epithelial cell line (MLE-12) with both the acapsularmutant C. neoformans CAP64 and the highly virulent C. neoformans H99, resulted indose- and time-dependent increases in both Il25 and Il33 mRNA expression.Correspondingly, intranasal infection of susceptible Balb/c mice with C. neoformansH99 showed time-dependent IL-33 mRNA and protein in the lungs. Furthermore,moderately virulent C. neoformans 52D induced differential Il33 mRNA expressionamong susceptible and resistant strains of mice, with susceptible C57BL/6 micedeveloping a significant increase in lung Il33 mRNA compared to resistant CBAmice. Finally, Balb/c mice lacking the IL-33 receptor T1/ST2 had significantlyreduced lung, spleen and brain fungal burdens following intratracheal instillation ofC. neoformans. These observations support a role for IL-33 in polarization of the hostinflammatory response that facilitates progressive pulmonary C. neoformansinfection. / Avec la prevalence de l'épidémie du SIDA, comprendre la reaction de l'hôte au champignon opportuniste pathogène Cryptococcus neoformans, responsable de 650,000 décès chaque année en Afrique sub-saharienne, est devenu un sujet de recherche profonde. Les connaissances actuelles suggèrent que la susceptibilité à la pneumonie de cryptocoque chez les souris et les humains se produit par l'intermédiaire des réponses allergiques de type TH2 d'inflammation pulmonaire, alors que la résistance est attribuableau développent d'une réponse TH1 dans les poumons. Les cytokines épithéliales polarisatrices comme thymic stromal lymphopoietin (TSLP), l'interleukine-25 (IL-25) et IL-33 sont impliqués dans l'inflammation allergique TH2 respiratoire, mais leur rôle pendant l'infection C. neoformans reste inconnu. Nous démontrons que la stimulation invitro des cellules épithéliales de poumons de souris (MLE-12) par la souche C. neoformans sans-capsule CAP64 ou la souche C. neoformans très virulente H99, révèleune augmentation sélective de doses de l'expression d'ARNm d'Il25 et d'Il33.Corrélativement, l'infection intranasale de souris susceptible Balb/c au H99 a montré l'induction en fonction du temps de l'ARNm et du protéine de l'IL-33 dans les poumons.Par ailleurs, l'utilisation de la souche de C. neoformans modérément virulente 52D, adémontré une expression de l'Il33 différente entre les souches de souris susceptibles et résistantes. La souche C57BL/6 a connu une augmentation significative de l'ARNm de l'Il33 dans les poumons comparée à la souche résistante CBA. Enfin, les souris Balb/cknockout qui manquaient le récepteur T1/ST2 pour l'IL-33, avaient une charge fongique réduite dans les poumons, les spleens et les cerveaux suite à l'infection par C. neoformans. Ces observations suggèrent un role désavantageux de l'IL-33 dans la polarisation de la réponse inflammatoire pendant l'infection C. neoformans pulmonaire.

ABSTRACTCD4+Foxp3+ regulatory T cells (TREG) are pivotal in the maintenance of immune tolerance to self-antigens and act as regulators of autoimmune reactions. There are two subsets of TREG: naturally occurring (nTREG) which develop in the thymus and inducible (iTREG) which are generated from conventional Foxp3- effector T cells (TCONV) in the periphery or in vitro. While both subsets require Foxp3 expression to function, iTREG cells gradually downregulate Foxp3 in vitro and lose their suppressive capabilities. In contrast, nTREG cells show constitutive Foxp3 expression and demonstrate stable suppressive function in vitro. Recent studies reveal a region of the Foxp3 locus that is differentially methylated between nTREG and iTREG. The methylation-sensitive region, known as the TREG-specific demethylated region (TSDR), is completely unmethylated in nTREG, partially methylated in iTREG, and heavily methylated in TCONV, suggesting that differential methylation patterns of the TSDR may account for unstable Foxp3 expression in iTREG. Methylation is mediated by DNA methyltransferase (DNMTs) enzymes, and several inhibitors are known to block their activity. In this study, we use 5'-Aza-2'-deoxycytidine (Aza), a nucleoside analog inhibitor, and RG108, a non-nucleoside inhibitor to determine whether inhibition of DNMTs and thus methylation, impacts Foxp3 expression and iTREG development in culture. Our results show that DNMT inhibition in the absence of TGF-β was unable to induce Foxp3 expression in TCONV cells. However, in TCONV cells that were pre-exposed to TGF-β, Aza and RG108 induced Foxp3 expression in a significant number of cells. Moreover, a higher proportion of Foxp3-expressing cells with stronger Foxp3 MFI were induced when Aza was used in conjunction with TGF-β suggesting an additive and non-redundant effect of DNMT-inhibition. Although iTREG cells typically downregulate Foxp3 in the absence of TGF-β, treatment with Aza alone prolongs the persistence of Foxp3 expression. Neither Aza nor RG108 was as effective as TGF-β in maintaining Foxp3 expression. Collectively, our data shows that DNMT inhibition without TGF-β is insufficient to induce Foxp3 expression but in conjunction, can increase induction and strengthen Foxp3 expression. DNMT inhibition can also prolong Foxp3 expression in the absence of TGF-β possibly by disrupting epigenetic silencing mechanisms. / ABRÉGÉLes lymphocytes T régulateurs CD4+Foxp3+ (TREG) sont des pivots dans le maintien de la tolérance immunitaire aux antigènes autologues et agissent en tant que régulateurs des réactions auto-immunes. Il y a deux sous-ensembles de TREG : les naturelles (nTREG) qui se développent dans le thymus et les inductibles (iTREG) qui sont générés à partir des lymphocytes T effecteurs Foxp3- conventionnels (TCONV) en périphérie ou in vitro. Bien que les deux sous-ensembles requièrent l'expression de Foxp3 pour fonctionner, les lymphocytes iTREG régulent graduellement de manière négative Foxp3 in vitro et perdent leur capacité suppressive. En revanche, les lymphocytes nTREG présentent une expression constitutive de Foxp3 et démontrent une fonction suppressive stable in vitro. Des études récentes révèlent une région du locus Foxp3 qui est différentiellement méthylée entre les nTREG et les iTREG. La région sensible à la méthylation, connue sous le nom de la région déméthylée spécifique à TREG (TREG-specific demethylated region, TSDR), est complètement non méthylée dans les nTREG, partiellement méthylée dans les iTREG, et fortement méthylée dans les TCONV. Cela suggère que les modèles de méthylation différentielle du TSDR pourraient expliquer l'expression instable de Foxp3 dans les iTREG. Les enzymes ADN méthyltransférases (DNA methyltransferases, DNMTs) servent de médiatrices dans la méthylation, et quelques inhibiteurs sont connus pour bloquer leur activité. Dans cette étude, nous utilisons le 5'-Aza-2'-déoxycytidine (Aza), un inhibiteur analogue nucléosidique, et RG108, un inhibiteur non-nucléosidique, pour déterminer si l'inhibition des DNMTs et ainsi la méthylation, aurait un impact sur l'expression de Foxp3 et le développement de iTREG en culture. Nos résultats montrent que l'inhibition de DNMT en l'absence de TGF-β n'a pas pu induire l'expression de Foxp3 dans les lymphocytes TCONV. Toutefois, dans les lymphocytes TCONV qui étaient pré-exposés au TGF-β, Aza et RG108 ont induit l'expression de Foxp3 dans un nombre important de lymphocytes. De plus, une proportion plus grande de lymphocytes exprimant le Foxp3 avec un Foxp3 MFI plus élevé étaient induits lorsque Aza était utilisé conjointement avec TGF-β, suggérant un effet additif et non redondant de l'inhibition de DNMT. Malgré que les lymphocytes iTREG régulent généralement de façon négative Foxp3 en l'absence de TGF-β, le traitement par Aza seul prolonge la persistance de l'expression de Foxp3. Ni Aza, ni RG108 n'est aussi efficace que TGF-β dans le maintien de l'expression de Foxp3. En somme, nos données montrent que l'inhibition de DNMT sans TGF-β est insuffisant pour induire l'expression de Foxp3, mais que conjointement, peut en augmenter l'induction et la renforcer. L'inhibition de DNMT peut également prolonger l'expression de Foxp3 en l'absence de TGF-β possiblement en perturbant les mécanismes d'inhibition épigénétique.

Leishmaniasis is a disease endemic to 88 countries that affects 12 million people worldwide. The causative agents are species of the genus Leishmania, with the clinical manifestation of this disease depending on the species. Once in the host, the parasite lives inside various cell types including macrophages, and must modulate the host cell functions to survive. Host macrophages are capable of detecting various foreign molecules and mounting cellular responses. Macrophages engulf their target pathogen and, through the maturation of the phagolysosome, will destroy it. To prevent aberrant activation of the cell, macrophages use protein tyrosine phosphatases (PTPs) to return activation signals (i.e. phosphorylation) in signalling pathways to their resting state. Leishmania employs multiple strategies to alter the host signalling and functions. One such mechanism is the ability of the parasite to activate host PTPs by proteolytic cleavage. In this study, we isolated the plasma membrane and the cytoplasm of macrophages to identify the localization of and alteration in host PTPs, PTP-1B and SHP-1 during infection with Leishmania mexicana. We observed that during an infection, cleaved SHP-1 is no longer found at the plasma membrane. Prior to an infection, we also noted that the proportion of PTP-1B and SHP-1 located in the plasma membrane is minute compared to the amount found in the cytoplasm. The second part of the study was to compare the interactomes of PTP-1B and SHP-1 in resting cells and during an infection. We noticed distinct groups of proteins interacted with these PTPs, including proteins involved in translation and RNA manipulation, cell metabolism, and subcellular localization. We also observed large variations in the level of interaction with the interactants and the PTPs. This study demonstrates Leishmania refined ability to control the host cell to prevent its destruction. / La leishmaniose est une maladie endémique dans 88 pays et qui affecte 12 millions de personnes à travers le monde. Les agents étiologiques de la maladie sont des espèces du genre Leishmania, toutefois la manifestation de cette maladie varie selon les espèces. Le parasite, une fois à l'intérieur de l'hôte, vit de façon intracellulaire dans différents types de cellules, dont les macrophages. Pour survivre à l'intérieur de son hôte, Leishmania doit moduler les fonctions cellulaires de ce dernier.Les macrophages sont des cellules capables de détecter différentes substances étrangères et, par le fait même, d'engager des réponses cellulaires contre ces substances. Les macrophages vont généralement engloutir les pathogènes et les détruiront grâce à la maturation du phagolysosome. Afin de prévenir l'activation aberrante de la cellule, les macrophages utilisent les protéines tyrosine phosphatase (PTP) pour envoyer des signaux activateurs (phosphorylation) aux voies de signalisation au repos. Pour ce faire, Leishmania utilise de multiples stratégies lui permettant d'altérer la signalisation et les fonctions de l'hôte. Un de ces mécanisme est sa capacité d'activer les PTP de son hôte par clivage protéolytique.Dans cette étude, nous avons isolé la membrane plasmique et le cytoplasme des macrophages dans le but d'identifier la localisation, de même que l'altération des PTP, plus précisément PTP-1B et SHP-1, et ce lors de l'infection par Leishmania mexicana. Nous avons observé que lors d'une infection, la forme clivée de SHP-1 ne se retrouve plus à la membrane plasmique. Avant l'infection, nous avons aussi noté que la proportion de PTP-1B et SHP-1 située dans la membrane plasmique est négligeable par rapport à celle trouvée dans le cytoplasme. La deuxième partie de l'étude était d'identifier l'interactome de PTP-1B et SHP-1 dans les cellules non infectées et de le comparer à l'interactome dans le contexte d'une infection. Nous avons remarqué que les protéines qui intéragissent avec ces PTP proviennent de groupes distincts. Ces groupes étant notamment impliqués dans de nombreuses fonctions cellulaires telles; la traduction et la manipulation d'ARN, le métabolisme cellulaire, de même que la localisation subcellulaire. Nous avons également observé de grandes variations dans le niveau d'interaction entre ces différents groupes de protéines et les PTP. Cette étude démontre donc l'habileté très sophistiquée qu'à le parasite Leishmania de contrôler la cellule hôte afin d'en empêcher la destruction.

Natural killer (NK) cells are among the earliest responders to viral infections and serve as a link between the innate and adaptive immune systems. Elevated NK cell activity has been observed in individuals who are classified as HIV-exposed seronegative (HESN). The functional response of these cells is determined by an integration of activating and inhibitory signals delivered to the NK cell through surface receptors. The killer immunoglobulin-like receptor (KIR) family comprises nine inhibitory receptors, six activating receptors and two pseudogenes. KIR bind to human leukocyte antigen (HLA)-class I molecules and are able to sense their down-regulation on transformed and virally infected cells. Epidemiological evidence has linked carriage of certain KIR-HLA genotypes with both delayed progression to AIDS and protection from HIV infection. We have screened a cohort of HIV-susceptible and HIV-resistant subjects (HESN) for both KIR and HLA genes. Here we report that KIR2DS4, a gene which codes for an activating receptor, is found at lower frequency in the HESN population compared to HIV-susceptible subjects. KIR2DS4 can be divided into alleles that are expressed on the cell surface and those that are not. We find that the expressed allele group alone and in combination with its ligands occurs less frequently in the HESN population compared to HIV-susceptible subjects, suggesting that carriage of this is not protective against HIV infection. We also report that homozygosity at the KIR3DS1 locus, another activating receptor and a genotype that has previously been associated with protection from HIV infection, associates with a decreased incidence of seroconversion over time in a longitudinal study of seroconvertors and HESN subjects. Additionally, the combination of KIR3DS1 with its putative ligand, shown previously to associate with delayed progression to AIDS, does not associate with protection from infection. These results suggest that through KIR, NK cells may protect against HIV infection in individuals carrying certain KIR-HLA genotypes. / Les cellules tueuses naturelles (Natural Killer [NK]) sont parmi les premières cellules qui répondent aux infections virales et servent de lien entre les systèmes immunitaires innés et acquis. Une activité plus accrue des cellules NK a été observée chez les individus classés comme séronégatifs exposés au VIH (HIV Exposed SeroNegative [HESN]). La réponse fonctionnelle de ces cellules est déterminée par l'intégration des signaux activateurs et inhibiteurs transmis à la cellule NK par les récepteurs de surface. La famille des récepteurs KIR (Killer Immunoglobulin-like Receptor) comprend neuf récepteurs inhibiteurs, six récepteurs activateurs et deux récepteurs non exprimés encodés par des pseudogènes. Les KIRs inhibiteurs interagissent avec des ligands encodés par des gènes du complexe majeur d'histocompatibilité classe I (HLA). Ces KIRs détectent la régulation des antigènes HLA à la baisse sur les cellules transformées ou infectées par des virus. Des données épidémiologiques ont démontré que certains génotypes HLA-KIR sont associés avec une progression retardée vers le SIDA et la protection contre l'infection par le VIH. Nous avons comparé la fréquence de génotypes KIR et KIR-HLA chez les sujets de cohortes HESN et VIH infectés (c'est-à-dire susceptibles au virus). Nous avons trouvé que KIR2DS4, un gène qui code pour un récepteur d'activation, est moins fréquent dans la population HESN comparativement aux sujets susceptibles au VIH. KIR2DS4 encode des allèles exprimées et non exprimées à la surface cellulaire. Le groupe d'allèles exprimées seules et en combinaison avec leurs ligands est moins fréquent dans la population HESN que dans celle susceptible au VIH. Ceci suggère que le fait de porter ce génotype ne protège pas contre l'infection par le VIH. Nous avons aussi trouvé dans une étude longitudinale avec des sujets en séroconversion et des sujets HESN que les personnes exposées au VIH qui portent le génotype homozygote KIR3DS1 ont une incidence plus faible à être infectées que celles portant d'autres génotypes du locus KIR3DL1/S1. KIR3DS1 encode aussi un récepteur activateur et ce génotype a déjà été identifié comme étant associé à une protection contre l'infection par le VIH. La combinaison de KIR3DS1 avec son ligand putatif, associé précédemment à une progression au SIDA retardée, n'est pas associé avec la protection contre l'infection. Ces résultats suggèrent que, grâce à KIR, les cellules NK peuvent protéger contre l'infection par le VIH chez les personnes portant certains génotypes KIR ou KIR-HLA.

Antiphospholipid syndrome (APS) is an autoimmune disorder characterized by the presence of autoantibodies to phospholipid (PL)-binding proteins, such as beta2-glycoprotein I (beta2GPI), and clinical manifestations including thrombosis and/or recurrent pregnancy loss. Beta2GPI-reactive T cells have been shown to be activated in patients with APS, but the mechanism responsible for this activation remains unclear. Recent studies have proposed that exposure of a cryptic epitope on beta2GPI, as a consequence of binding to PL, leads to the activation of beta2GPI-autoreactive T cells in APS patients. To test this hypothesis, we evaluated the development of beta2GPI-reactive T cells in a murine model of aPL production. C57BL/6 mice were immunized repeatedly with human beta2GPI in the presence of lipopolysaccharide (LPS) to induce aPL production. High levels of circulating aPL were observed as early as the second immunization, but splenic T cell reactivity to beta2GPI was not detectable in vitro until after the fourth immunization. Splenic T cells from mice producing high levels of aPL proliferated in response to native human beta2GPI, alone or bound to anionic PL, but PL-bound beta2GPI appeared to be a more potent antigen. Beta2GPI-reactive T cells produced IL-2 and IFN-gamma, but not IL-4 or IL-10, suggesting a TH1 bias of this T cell response. These results demonstrate that T cell reactivity to beta2GPI can develop in nonautoimmune individuals repeatedly exposed to this antigen in a proinflammatory context (e.g., LPS). Our data further suggest that the beta2GPI-reactive T cells induced in this model have a TH1 bias and may be more reactive to a PL-dependent epitope on beta2GPI than to native beta2GPI. / Le syndrome antiphospholipide (SAPL) est une maladie autoimmune caractérisée par la présence d'auto-anticorps antiphospholipides (aPL) dirigés contre des protéines liant les phospholipides anioniques dont la beta2-glycoproteine I (beta2GPI), ainsi que par des manifestations cliniques incluant la thrombose et la perte foetale récurrente. Il a été démontré que des lymphocytes T spécifiques à la beta2GPI étaient activés chez les patients atteints du SAPL. Cependant, le mécanisme responsable de cette activation lymphocytaire reste nébuleux. Des études récentes ont proposé que l'exposition d'épitopes cryptiques de la beta2GPI, suite à la liaison de cette glycoprotéine à des phospholipides anioniques, engendre l'activation de lymphocytes T autoréactifs spécifiques à la beta2GPI chez les patients atteints du SAPL. Afin de vérifier cette hypothèse, nous avons évalué le développement de lymphocytes T spécifiques à la beta2GPI dans un modèle murin de production d'aPL. Des souris C57BL/6 ont été immunisées à répétition avec de la beta2GPI humaine en présence de lipopolysaccharide (LPS) dans le but d'induire la production d'aPL. Des titres élevés d'aPL circulants ont été observés dès la deuxième immunization, tandis que les lymphocytes T spécifiques à la beta2GPI n'ont été détectés que suite à la quatrième immunisation. Ainsi, les lymphocytes T provenant de la rate des souris produisant des niveaux élevés d'aPL ont proliféré en réponse à la forme native de beta2GPI et encore plus fortement en réponse au complexe beta2GPI-PL. Ces lymphocytes T réactifs à la beta2GPI ont démontré une production d'interleukine 2 et d'interféron gamma. Cependant, aucune interleukine 4 ou 10 n'