The mechanisms whereby immune cells infiltrating the central nervous system in multiple sclerosis (MS) contribute to tissue injury remain to be defined. CD4 T cells are implicated as key mediators of the deleterious inflammation observed in MS. Myelin reactive CD4 T cells expressing CD56, an NK cell marker, were previously shown to be cytotoxic to human oligodendrocytes in vitro. We sought to determine whether myelin reactive CD4 T cells could also express and utilize other NK associated markers to mediate oligodendrocyte directed cytotoxicity. We observed that myelin reactive CD4 T cell lines, as well as short term PHA-activated CD4 T cells can express NKG2C, the activating receptor that interacts with HLA-E, a non-classical MHC class I molecule. These cells co-expressed CD56, had elevated levels of cytotoxic molecules FasL, granzyme B and perforin compared to their NKG2C-negative counterparts and mediated significant in vitro cytotoxicity towards human oligodendrocytes induced to express HLA-E with pro-inflammatory cytokines. A significantly elevated proportion of ex-vivo peripheral blood CD4 T cells from MS patients expressed NKG2C compared to controls. Our immunohistochemical analysis demonstrated that MS tissue sections displayed HLA-E+ oligodendrocytes and NKG2C+ CD4 T cells. Our results implicate a novel mechanism through which infiltrating CD4T cells could contribute to tissue injury in MS. / La sclérose en plaques (SEP) est caractérisée par l'infiltration de cellules immunes au sein du système nerveux central (SNC). Les mécanismes par lesquels ces cellules contribuent à la formation des lésions typiques de cette pathologie restent à élucider. Les cellules T CD4 jouent un rôle important dans l'inflammation observée en SEP. Des travaux antérieurs ont démontré que des cellules T CD4 spécifiques à la myéline et exprimant le CD56, un marqueur des cellules NK, ont une activité cytotoxique in vitro dirigée contre les oligodendrocytes humains. Nous avons déterminé si les cellules T CD4 réactives à la myéline expriment et utilisent d'autres marqueurs NK impliqué dans cette cytotoxicité contre les oligodendrocytes. Nous avons observé que des lignées de cellules T CD4 spécifiques pour la myéline, ainsi que des cellules T CD4 activées par la PHA peuvent exprimer le NKG2C, le récepteur activateur qui interagit avec le HLA-E, une molécule non-classique du CMH de classe I. Les cellules T CD4 positives pour le NKG2C co-expriment le CD56, des niveaux élevés de molécules cytotoxiques tels que le FasL, le granzyme B et la perforine par rapport à leurs homologues n'exprimant pas le NKG2C. Nous avons aussi montré que ces cellules sont cytotoxiques envers des oligodendrocytes humains, qui expriment le HLA-E suite à un traitement avec des cytokines des inflammatoires. La proportion des cellules T CD4 exprimant le NKG2C est significativement plus élevée dans les échantillons de sang ex-vivo provenant de patients atteints de la SEP par rapport à ceux des témoins. Nous avons observé par immunohistochimie sur des coupes de tissus de patients atteints de la SEP la présence d'oligodendrocytes exprimant le HLA-E ainsi que des cellules T CD4 arborant le NKG2C. Nos résultats révèlent un nouveau mécanisme par lequel les cellules T CD4 pourraient contribuer directement à la formation des lésions tissulaires observées dans le SNC des patients atteints de la SEP.

Cell death and inflammation are two central, tightly coupled, innate immune processes. The inflammasome triggers both in response to pathogens and tissue damage. This cytosolic signalling complex contributes to host-defence, tissue repair and inflammatory disease, but the factors governing inflammasome activity are poorly characterized. This thesis examines the function of inflammasome modulators in infection and immunity. Inflammasome activity is antagonized by caspase-12. In humans, caspase-12 expression is limited to populations in geographical locations that overlap with regions endemic for malaria. We found that caspase-12 dampens the inflammatory response to Plasmodium, the malaria-causing parasite, resulting in impaired parasite clearance, but protection from the lethal symptoms of cerebral malaria. The effects of caspase-12 were independent of the inflammasome and were due to its inhibition of NF-kappaB signalling. We also demonstrate that the cellular inhibitor of apoptosis proteins cIAP1 and cIAP2, known for their roles in preventing apoptosis and promoting inflammation, are required for efficient inflammasome activation. They bind to and mediate ubiquitination of the inflammasome effector enzyme, caspase-1, and in their absence, inflammasome-dependent cytokine production and inflammatory cell death are compromised. We subsequently show that cIAP2 is required for host-defence against influenza A virus (IAV). Although cIAP2-deficient mice were susceptible to IAV infection, this was not due to defects in immune signalling, but the result of abnormal death of the lung epithelial cells, which shifted from apoptosis to necrosis. In summary, this thesis describes novel functions for inflammasome modulators in the innate immune response, contributing to our understanding of infectious and inflammatory disease. / La mort cellulaire et l'inflammation sont des réponses immunitaires clefs et fortement liées. L'inflammasome induit ces deux processus en réponse aux pathogènes et aux stresses tissulaires. Cette voie contribue à la défense aux infections, à la réparation cellulaire et aux maladies inflammatoires. Cette thèse examine la fonction d'éléments modulateurs de l'inflammasome dans la réponse immunitaire. L'activité de l'inflammasome est inhibée par la caspase-12. Chez l'humain, l'expression de la caspase-12 est limitée à des populations de zones géographiques qui coïncident avec des régions où la malaria est endémique. Nous démontrons que la caspase-12 réduit la réponse inflammatoire au Plasmodium, le parasite causant la malaria, avec pour conséquence une augmentation du taux de parasitémie, mais une diminution des symptômes mortels de la malaria cérébrale. Les effets de la caspase-12 sont indépendants de l'inflammation et dus à son inhibition de la voie NF-kappaB. Nous démontrons aussi que les "cellular inhibitor of apoptosis proteins" cIAP1 et cIAP2, qui inhibent l'apoptose et promeuvent l'inflammation, sont requis pour l'activation de l'inflammasome. Les cIAPs se lient et ubiquitinent la protéine effectrice de l'inflammasome, la caspase-1. En leur absence, la production de cytokine et la mort cellulaire inflammasome-dépendantes sont compromises. Nous trouvons aussi que cIAP2 est nécessaire à la réponse contre le virus de l'influenza du type A (IAV). Les souris cIAP2 knock-outs sont susceptibles à la mort par IAV. Ceci n'est pas du à un défaut dans les voies de signalisation pro-inflammatoires, mais à un déréglage des voies de mort cellulaire dans l'épithélium pulmonaire qui passe de l'apoptose à la nécrose. En résumé, cette thèse décrit des nouvelles fonctions pour les modulateurs de l'inflammasome dans la réponse immunitaire innée, approfondissant ainsi notre compréhension des maladies infectieuses et inflammatoires.

Naturally occurring CD4+CD25High regulatory T cells (nTreg) have emerged as an essential component of self-tolerance. These cells arise in the thymus and represent 1-10% of CD4+ T cells in humans and mice. They constitutively express the FOXP3 transcription factor. The importance of FOXP3 for Treg cell differentiation and function is illustrated by the Immune-dysregulation, Polyendocrinopathy, Enteropathy, X-linked (IPEX) syndrome; a rare and severe systemic autoimmune disorder caused by mutations in the FOXP3 gene. Treg cell defects are suspected to underlie most other human autoimmune diseases. However the characterization of human nTreg cells has been hindered by the failure to discriminate them from other CD4+ T cells expressing similar markers in states of inflammation, as FOXP3 is expressed by non-suppressive T effector (Teff) cells upon activation. Thus the functional correlates of FOXP3 expression in human Treg cells are ill-defined. We hypothesize that human CD4+CD25HighFOXP3+ T cells represent a heterogeneous population comprised of several Treg and T cell subsets in which the expression of FOXP3 has different functional and phenotypic outcomes. Using a novel single-cell cloning approach, we show that indeed about 30% of memory FOXP3+ T cells are not suppressive, thus revealing a functional heterogeneity amongst CD4+CD25High T cells. These non-suppressive cells are phenotypically identical to their suppressive counterparts, but are found to down-regulate FOXP3 upon activation. By examining the transcriptome of these unstable FOXP3+ T cells, we show that they constitute a genuine, Treg-related, T cell subset, endowed with a specific gene expression signature. Moreover, we find evidence that the stability of the Treg lineage and FOXP3 expression are orchestrated by a higher-level of T-helper cell lineage regulation. Finally, we show that the IPEX-derived A384T mutation in FOXP3 abrogates the capacity of FOXP3 to elicit the suppressive function of Treg cells, while preserving its ability to control their phenotype. We thus provide the first demonstration of a functional dichotomy in the role of FOXP3 in human Treg cells. In conclusion, we demonstrate that FOXP3 is not an absolute marker of suppressive function in human T cells, precluding its sole use as a clinical marker for the monitoring of immunoregulation. Furthermore, we delineate subsets enclosed within FOXP3+ T cells which vary in function and stability, and characterize the hallmarks of these unstable FOXP3+ T cells. These findings will allow for the exploration of their contribution to immune homeostasis, and of their defects in autoimmune disorders. / Les cellules T CD4+CD25+++ régulatrices dites « naturelles » (nTreg) constituent une composante essentielle de la tolérance immune au soi. Ces cellules se développent dans le thymus, et représentent 1-10% des cellules T CD4+ périphériques chez l'humain et la souris. Elles expriment constitutivement le facteur de transcription FOXP3, dont l'importance dans la différenciation et la fonction des cellules Treg est illustrée par le syndrome d'IPEX (Immuno-dérégulation, Poly-endocrinopathie, Entéropathie, liée a l'X), une condition rare et sévère d'auto-immunité systémique, causée par une mutation du gène foxp3. Des défaillances des cellules Treg sont aussi soupçonnées d'être à l' origine de la plupart des autres maladies auto-immunes chez l'humain. Cependant, la caractérisation de ces cellules chez l'humain a été entravée par l'incapacité de les distinguer d'autres cellules T CD4+ exprimant des marqueurs similaires en état d'inflammation. En effet, FOXP3 est exprimé par les cellules T effectrices non-suppressives après activation. Ainsi, les corrélats fonctionnels de l'expression de FOXP3 dans les cellules Treg humaines sont mal définis. Nous émettons l'hypothèse que les cellules T CD4+CD25+++FOXP3+ humaines constituent une population hétérogène, composée de plusieurs sous-populations de cellules T et Treg, dans lesquels l'expression de FOXP3 a différentes conséquences fonctionnelles et phénotypiques.Grâce à une nouvelle approche de clonage cellulaire, nous démontrons que chez l'humain environ 30% des cellules T FOXP3+ ne sont pas suppressives, révélant ainsi une hétérogénéité fonctionnelle parmi les lymphocytes T CD4+CD25+++ humains. Ces cellules non-suppressives sont phénotypiquement identiques à leurs homologues suppressives, mais perdent l'expression de FOXP3 à l'activation. En examinant le transcriptome de ces cellules T FOXP3+ instables, nous montrons qu'elles constituent une population de lymphocytes T à part entière, apparentée aux cellules Treg, et dotée d'une signature d'expression génique spécifique. En outre, nous observons que la stabilité de la lignée Treg et de l'expression de FOXP3 sont orchestrés à un niveau supérieur de la régulation du lignage cellulaire. Enfin, nous montrons que la mutation A384T dans FOXP3, dérivée de l'IPEX, abroge la capacité de FOXP3 à générer la fonction suppressive des cellules Treg, tout en préservant sa capacité à contrôler leur phénotype. Nous offrons ainsi la première démonstration d'une dichotomie fonctionnelle dans le rôle de FOXP3 dans les cellules Treg humains. En conclusion, nous démontrons que FOXP3 n'est pas un marqueur absolu de la fonction suppressive dans les cellules T CD4+ chez l'homme, excluant la possibilité d'utiliser FOXP3 comme seul marqueur clinique pour le suivi de l'immuno-régulation. En outre, nous définissons des sous-populations parmi les cellules T FOXP3+ qui diffèrent en fonction et en stabilité, et déterminons les caractéristiques de ces cellules instables. Ces résultats permettront l'exploration de leur contribution à l'homéostasie immunitaire et de leurs défauts dans des maladies auto-immunes.

Chronic Rhinosinusitis (CRS), an inflammation of the paranasal sinus cavities, is a common disorder of uncertain etiology that affects the upper airways and paranasal sinuses. Biopsy specimens had taken from CRS patients document disruption of the normal epithelial architecture, in addition to an intense infiltration of inflammatory cells, consisting mainly of eosinophils. Current clinical classification of CRS is based on the presence or absence of nasal polyposis; however, no consistent difference in histological aspect characterizes these two groups. Recently, we have identified distinct gene expression patterns in cultured epithelial cells obtained from surgical CRS subjects. These molecular signatures, which differ from clinical phenotype, may help better differentiate this disorder than clinical phenotype. In our current study we investigated the histological pattern associated with these two different molecular signatures in surgical biopsies obtained from CRS patients and control subjects. Cellular infiltrates were identified using immunohistochemistry (IHC) staining using three markers: neutrophil elastase (NE), CD68, Major basic protein (MBP). Macrophage activation status into classical and alternatively activated macrophages was verified by double-staining for CD68 and CD 206 markers. Results were reported both according to standard clinical criteria (CRSwNP and CRSsNP) and also according to their expression signature into two groups (CRS1, CRS2) and control subjects. Expression signatures were validated using immunohistochemical staining for the highest differentially expressed marker, CCL2. Results showed differences in the number of eosinophils, macrophages and neutrophils cells in CRS patients compared to the control subjects. Using conventional criterion, eosinophilia was higher in the CRSwNP group, but not greatly different for neutrophils or macrophages between the two groups. Using the molecular signatures to assign groups, eosinophilia was similar between both groups, however, there was a significant increase in the number of neutrophils and macrophages in CRS1 comparing to CRS2. The CRS2 group had a higher incidence of alternatively activated macrophages, supporting the concept of a less inflammatory, immunotolerant CRS2 phenotype. Validity of the molecular signature was supported by demonstration of increased levels of protein product of CCL2 expression in CRS1 compared to CRS2. Taken together, these results identify a molecular phenotype of CRS that is characterized by a marked neutrophilic infiltration, and a second one that is markedly less inflammatory, accompanied by alternative macrophage activation. This suggests that these expression signatures may identify novel mechanism-based phenotypes, which differ from the clinical phenotype, and can help in providing a better understanding of pathophysiologic mechanism and phenotypes of CRS. / La rhinosinusite chronique (RSC), une inflammation des sinus paranasaux, est un trouble commun avec une étiologie incertaine, qui affecte les voies respiratoires supérieures et les sinus paranasaux. Les biopsies des échantillons prélevés sur des patients atteints de RSC documentent la perturbation de l'architecture normale épithéliale, en plus d'une infiltration de cellules inflammatoires intense constituée principalement par des éosinophiles. La classification clinique actuelle de la RSC est basée sur la présence (CRSwNP) ou l'absence (CRSsNP) de polypose nasale, mais aucune différence consistente de l'aspect histologique caractérise ces deux groupes. Récemment, nous avons identifié des profils d'expression génique distincts dans des cultures de cellules épithéliales provenant de sujets atteints de la RSC ayant subis une chirurgie des sinus. Ces signatures moléculaires, qui diffèrent du phénotype clinique, peuvent aider à mieux différencier ce trouble que le phénotype clinique. Dans notre étude, nous avons étudié l'aspect histologique associé à ces deux différentes signatures moléculaires à partir de biopsies chirurgicales obtenus chez des patients atteints de la RSC et les sujets témoins. Les infiltrats cellulaires ont été identifiés par immunohistochimie (IHC), une coloration à l'aide de trois marqueurs: l'élastase de neutrophile (NE), le CD68 et la protéine basique majeure (MBP). L'état d'activation des macrophages dans les formes classiques et alternativement activés a été vérifié par une double-coloration pour les marqueurs CD68 et CD206. Les résultats ont été rapportés à la fois selon les critères cliniques habituels (CRSwNP et CRSsNP) et aussi en fonction de leur signature d'expression en deux groupes (CRS1, CRS2) et les sujets témoins. Les signatures d'expression ont été validées à l'aide de coloration immunohistochimique pour le marqueur le plus différentiellement exprimé, le CCL2.Les résultats ont montré des différences dans le nombre d'éosinophiles, macrophages et les cellules de neutrophiles chez les patients atteints de la RSC par rapport aux sujets témoins. Selon le critère classique, l'éosinophilie était plus élevée dans le groupe CRSwNP, mais pas très différent entre les deux groupes pour les neutrophiles ou les macrophages. En utilisant les signatures moléculaires pour assigner des groupes, l'éosinophilie était similaire entre les deux groupes, cependant, il y avait une augmentation significative du nombre de neutrophiles et de macrophages dans CRS1 comparativement à CRS2. Le groupe CRS2 avait une incidence plus élevée des macrophages alternativement activés, supportant le concept d'une inflammatoire basse, phénotype CRS2 immunotolérant. La validité de la signature moléculaire a été supportée par la démonstration du niveau accru de la protéine produite par l'expression de CCL2 dans CRS1 par rapport à CRS2.En somme, ces résultats mettent en évidence un phénotype moléculaire de la RSC qui se caractérise par une infiltration neutrophilique marquée, et une seconde qui est nettement moins inflammatoire, accompagnée par l'activation alternative des macrophages. Ceci suggère que ces signatures d'expression peuvent identifier de nouveaux mécanismes basés sur des phénotypes, qui diffèrent du phénotype clinique, et peuvent aider à fournir une meilleure compréhension du mécanisme physiopathologique et les phénotypes de la RSC.

A vaccine against the human immunodeficiency virus (HIV) is urgently needed. Recent estimates predict that 34 million people are currently infected with HIV. Attempts to induce potentially protective cytotoxic T-lymphocytes or broadly neutralizing antibodies by vaccination have either proven unsuccessful or failed to elicit the desired immune responses. However, the recent RV144 vaccine trial that provided partial protection against HIV infection appears to have induced antibodies that can utilize cells of the innate immune system, such as natural killer (NK) cells, to mediate antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) against HIV-infected cells. This potential mechanism of protection corroborates recent epidemiological and functional studies demonstrating that HIV-exposed seronegative individuals (HESN) and HIV-infected slow progressors (SP) have higher functioning NK cells and carry certain allelic combinations of killer immunoglobulin-like receptors (KIR) and their major histocompatibility complex class I (MHC-I or HLA-I) ligands that confer NK cells with enhanced functionality. Cumulatively, these observations suggest that understanding the conferral of functional potential during NK cell ontogeny could be important for designing anti-HIV vaccine constructs. In particular, data from HESN and SP have demonstrated that allelic combinations of KIR3DL1 and its HLA-Bw4 ligand are associated with protective outcomes in the context of HIV. Although previous work has demonstrated thatinteractions between these receptor ligand combinations during NK cell development confers NK cells with functional potential, the exact mechanism of the protective outcomes in the context of HIV remain unknown. For example, KIR3DL1+ NK cells have been demonstrated to be hypofunctional in the presence of autologous HIV-infected T cells. This suggests that if KIR3DL1+ NK cells are providing protection through mediating function, they require additional activating signals. As previously published data has demonstrated that activation through CD16a by antibody constant regions can overcome KIR-mediated NK cell inhibition and lead to ADCC of allogeneic cells, we hypothesized that ADCC could overcome inhibitory signalling and allow KIR3DL1+ NK cells to respond to autologous anti-HIV ADCC target cells. The data presented in this thesis reaffirms that HIV protective KIR3DL1/HLA-Bw4 allelic combinations confer enhanced functional potential upon NK cells. The results presented demonstrate that KIR3DL1/HLA-Bw4 combinations educate NK cells for enhanced anti-HIV ADCC against autologous target cells, and that this educational advantage is maintained after stimulation with function-conferring cytokines, such as IL-15. Furthermore, allelic combinations of KIR3DL1/HLA-Bw4 that are protective in the context of HIV are shown to confer the highest ADCC functional potential. These data suggest that the education of NK cells by allelic combinations of KIR3DL1/HLA-Bw4 could explain some of the protection observed in individuals with these combined genotypes. However, as we also observed anabrogation of this education-conferred functional advantage in HIV-infected individuals, we propose that the mechanisms of NK cell-mediated protection differ between uninfected HESN and infected SP. / Not enough space

Asthma is a heterogeneous disease which affects 300 million people worldwide. Characterized by airway hyperresponsivness and inflammation, no curative therapy exists to date. Immune cell infiltration into the airways is a major characteristic of the disease. More specifically, T helper (Th) cells with a type 2 profile have been found in asthmatic airways. Moreover, the airway smooth muscle (ASM) cells have been widely studied in the past. These structural cells secrete a multitude of factors that are involved in the pathogenesis of the disease. An increase in the number and the size of ASM cells is also a major feature of airway remodeling which occurs in the airways of asthmatic patients. However, little is known of the role of T cells in the increase of ASM cells. An early study reported that T cells adhere to ASM cells via CD44 and integrins and that this direct contact was necessary for the increase in ASM cell proliferation. Moreover, it is known that CD4+ T cells are the main subset responsible in this phenomenon. We sought to determine the mechanisms by which T cells and ASM cells interact and drive ASM proliferation. We hypothesized that there is a bidirectional crosstalk between ASM cells and T cells affecting both the survival and proliferation of these cells. For the first time we have shown that antigen-stimulated CD4+ T cells induce ASM cell proliferation via the epidermal growth factor receptor (EGFR) and its ligands. In a rat co-culture model of these two types of cells, there was an increase in EGFR ligand expression, more noticeably, heparin-binding epidermal growth factor (HB-EGF) and transforming growth factor-α (TGF-α) following 48 hours of co-culture. Moreover, we demonstrated that CD44 was the main receptor involved in the adhesion of T cells to ASM cells and that it may act as a docking molecule for matrix metalloprotease (MMP)-9 which is involved in the cleavage and activation of EGFR ligands. Interestingly, we noted that co-culture of T cells and ASM cells enhanced the survival rate of T cells. We hypothesized that T cells and ASM cells were connected physically and that the anti-apoptotic effect was dependent on this physical structure. Our results show that these cells are physically connected via nanotubes. Immunofluorescence microscopy showed the transfer of fluorescent dyes from one cell to another and the presence of anti-apoptotic proteins, Mcl-1 (induced myeloid leukemia cell differentiation protein 1) and Bcl-2 (B cell lymphoma-2) within the nanotubes. However, down-regulation of Mcl-1, but not Bcl-2, in the ASM cells had a significant effect on T cell survival with an increased rate of apoptosis. Through plasmid transfection, we noted the transfer of Mcl-1-GFP along the nanotubes. Moreover, CD44 neutralization had an effect on nanotube formation and T cell apoptosis. We also found a role for fibroblast growth factor (FGF)-2 production by ASM and its receptor on T cells in the formation of nanotubes.Taken together, these results show a clear bidirectional crosstalk between ASM cells and CD4+ T cells. These results also reinforce the importance of the direct contact or proximity of ASM cells to CD4+ T cells in the pathogenesis of asthma and may provide interesting therapeutic targets. / L'asthme est une maladie hétérogène qui affecte 300 million de personnes. Caractérisée par l'inflammation et une réponse exagerée, jusqu'a aujourd'hui il n'existe toujours pas de thérapie curative. L'infiltration des cellules du systeme immunitaire aux voies aériennes est une caractéristique bien documentée de cette maladie. Plus spécifiquement, les cellules T de type 2 sont retrouvées dans les voies aériennes des personnes atteintes de la maladie. De plus, les muscles lisses des voies aériennes ont bien été étudiés dans le passé. Ces cellules secrètent une multitude de facteurs qui jouent un rôle primordial dans la maladie de l'asthme. Une augmentation dans le nombre et la taille de ces cellules est aussi une caractéristique majeure du remodelage des voies aériennes qui est retrouvée dans les voies aériennes des patients asthmatiques. Cependant, peu est connu sur le role des cellules T sur la prolifération des muscles lisses. La première grande étude est en 1994 ou les auteurs démontrent que les cellules T adhèrent aux cellules du muscle lisse via CD44 et des integrines. Ce contact direct est nécessaire pour la croissance des CML. De plus il est connu que plus spécifiquement, les cellules T CD4+ sont les cellules responsables de ce phénomène. L'objectif de cette étude est de déterminer le mécanisme par lequel les cellules T et les cellules du muscle lisse communiquent.Pour la première fois, nous démontrons que les cellules T CD4+ stimulées induisent la prolifération des CML via le récepteur epidermal et ces ligands. Dans un model de co-culture de ces deux types de cellules, il y avait une augmentation de l'expression des ligands surtout HB-EGF et TGF-α après 48 heures de co-culture. De plus, nous avons démontré que le récepteur principal impliqué dans l'adhésion des cellules T au CMLs est le CD44 CD44 est aussi impliqué dans le recrutement des MMP-9 qui joue un role dans l'activation des ligands du EGFR.Intéressement, nous avons noté que lors de la co-culture des cellules T et CML, il y avait un niveau de survie plus grande chez les cellules T. Notre hypothèse est que les cellules sont physiquement connectées et que les nanotubes permettent le transfert des protéines anti-apoptotiques des CML vers les cellules T. Nos résultats démontrent que les cellules T et les CML sont connectées via les nanotubes. L'immunofluoresence a démontré le transfert de marqueurs fluorescents d'une cellule à l'autre avec la présence des protéines anti-apoptotiques, Mcl-1 et Bcl-2, dans les nanotubes, Cependant, l'inhibition de l'expression de Mcl-1, et non de Bcl-2 induit une augmentation d'apoptose dans les cellules T. Nous avons noté le transfert de Mcl-1 des CMLs vers les cellules T. De plus, la neutralisation de CD44 avait un effet sur la formation des hommes et l'apoptose des cellules T. Nous avons trouvé un rôle pour le facteur de croissance de fibroblastes dans la formation de nanotubes. Ces résultats démontrent un transfert bidirectionnel entre les CML et et les cellules T. Ces résultats indiquent l'importance du contact direct et la proximité des CML et les cellules T CD4+ dans la pathogenèse de l'asthme et peuvent introduire le développent des agents thérapeutiques

The cytosolic antiviral pathway is stimulated during virus infection by interaction between the RIG-I like receptors and viral RNA structures that contain short hairpin dsRNA and 5' triphosphate (5'ppp) terminal. In the present study, RNA-based agonists of RIG-I, derived from the 5' and 3' untranslated regions of a negative-strand RNA viruses were synthesized in vitro and shown to stimulate RIG-I antiviral responses at concentrations in the picomolar range. In human lung epithelial A549 cells, 5'pppRNA specifically stimulated multiple parameters of the innate antiviral response, including IRF3 phosphorylation and dimerization, IRF7 induction, STAT1 activation and robust stimulation of inflammatory and interferon stimulated genes - hallmarks of a fully functional antiviral response. Evaluation of the magnitude and duration of gene expression by transcriptional profiling identified a robust, sustained and diversified antiviral and inflammatory response. Bioinformatics analysis further demonstrated a transcriptional signature uniquely induced by 5'pppRNA, including a constellation of IRF7, IRF1 and NF-kB target genes capable of mobilizing multiple arms of the innate and adaptive immune response. Treatment of primary PBMCs or lung epithelial A549 cells with 5'pppRNA completely or partially blocked replication of a spectrum of RNA and DNA viruses. In C57Bl/6 mice, intravenous administration of 5'pppRNA protected animals from a lethal challenge with H1N1 Influenza, reduced virus titers in mouse lungs and protected animals from virus-induced pneumonia. Post-infection therapeutic treatment with 5'pppRNA also protected against influenza virus replication in the lungs. This systems approach provides transcriptional, biochemical, and in vivo analysis of the antiviral efficacy of 5'pppRNA and highlights the therapeutic potential associated with the use of RIG-I agonists as broad-spectrum antiviral agents. / La voie cytosolique antiviral est stimulée lors de l'infection virale par l'interaction entre les RIG-I comme des récepteurs et des structures d'ARN viraux qui contiennent des ARN double brin en épingle à cheveux courts et 5 'triphosphate (5'ppp) terminal. Dans la présente étude, basés sur l'ARN agonistes de RIG-I, dérivé de la 5 'et 3' des régions non traduites d'un virus à ARN brin négatif ont été synthétisés in vitro et montré pour stimuler la RIG-I réponses antivirales à des concentrations de l'ordre picomolaire. Dans épithéliales pulmonaires humaines A549, 5'pppRNA spécifiquement stimulés par de multiples paramètres de la réponse innée antivirale, y compris IRF3 phosphorylation et la dimérisation, IRF7 induction, STAT1 activation et de stimulation inflammatoire et robuste de gènes stimulés par l'interféron - poinçons d'une réponse antivirale entièrement fonctionnel évaluation de l'ampleur et de la durée de l'expression génique par profilage transcriptionnel identifié une riposte vigoureuse et soutenue et diversifiée antivirale et inflammatoires. Bioinformatique analyse plus approfondie a démontré une signature transcriptionnelle induite par 5'pppRNA unique, y compris une constellation de IRF7, IRF1 et gènes cibles de NF-kB capable de mobiliser de multiples bras du système immunitaire innée et adaptative réponse. Traitement des PBMC primaires ou épithéliales pulmonaires A549 avec 5'pppRNA totalement ou partiellement bloqué la réplication d'un spectre de l'ARN et les virus à ADN. Chez les souris C57BL / 6, l'administration intraveineuse de 5'pppRNA protection des animaux d'une dose létale de la grippe H1N1, les titres viraux dans les poumons de souris réduits et les animaux protégés de la pneumonie induite par le virus. Post-infection avec un traitement thérapeutique 5'pppRNA également protégés contre la réplication du virus de la grippe dans les poumons. Cette approche fournit des systèmes de transcription, biochimique et analyse in vivo de l'antiviral l'efficacité de 5'pppRNA et met en évidence le potentiel thérapeutique lié à l'utilisation de RIG-I agonistes comme agents antiviraux à large spectre.

The purpose of this investigation was to study the ability of various anterior pituitary hormones to act as antigens, and if antisera to one or more of these hormones could be obtained, to carry out immunologie studies on such antisera. Since pituitary hormones are proteins there is reason to believe that they must have some antigenic ability under the proper circumstances.

Although much information has accumulated in recent years on the cellular origin and mechanism of antibody synthesis, very little is known about the way in which antigens exert their effect on the induction of antibody formation. A number of investigators (1, 2, 3, 4, 5, 6) feel that antigens probably must be split into fragments to initiate antibody production and that these subunits may correspond in size to the dimensions of the antibody-combining sites (3). Antibodies reacting with antigenic fragments prepared in vitro have been found in rabbit antisera against human and bovine serum albumin (4, 7, 8, 9) and some of these antibodies appeared to be directed against antigenic groups not present on the surface of the native protein (9).

Current influenza vaccine manufacturing processes using chicken-embryonated egg technology is a time-consuming and laborious process, and is currently the major drawback in counteracting pandemic influenza strain. One solution to that problem is the use of plants to generate vaccine antigen. Virus-like particles (VLP), produced from the tobacco plant Nicotiana benthamiana, represent a cost-effective, alternative platform for influenza vaccine production. Previous studies have shown that the immunization with VLP expressing the hemagglutinin (HA) protein from influenza virus H5N1 (H5-VLP) produced in N. benthamianainduce protective immunity against challenge of cross-clade virus in mice and ferrets. In this study, we used human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) to characterize the innate immune response to plant-derived influenza H5-VLP ex vivo. We successfully demonstrate the mitogenic property of H5-VLP on PBMC ex vivo. Furthermore, we detect up-regulation of activation marker in B cells and NK cells, and some T cells. Cytokine profile of the supernatant from VLP-stimulated sample suggests that inflammatory response dominates the innate immunity within first 48 hours and is produced by CD14+ monocytes. Our study demonstrates that tobacco plant-derived influenza VLP are capable of generating innate immune responses in naïve human PBMC, helping us to better understand the immunostimulatory nature of this potential vaccine candidate. / A l'heure actuelle, la plupart des vaccins contre les infections par le virus influenza sont produits à partir d'œufs de poule fécondés. Ce procédé long et fastidieux constitue l'un des principaux obstacles à la production rapide d'un vaccin lors d'une pandémie. Une solution à ce problème consiste en l'utilisation de plantes afin de générer les antigènes nécessaires à l'élaboration du vaccin. Les pseudovirus ou Virus-like particles (VLP) produites à partir de la plante de tabac Nicotiana benthamiana représentent une alternative moins couteuse et plus rapide pour la production de vaccins antigrippaux. Des études préalables ont démontré qu'une immunisation avec les VLP exprimant l'hémagglutinine (HA) du virus influenza H5N1 (H5-VLP) induisaient une immunité protective lors d'une infection par ce virus chez la souris et le furet. Dans notre étude, nous avons utilisé les cellules mononuclées du sang périphérique humain (PBMC) afin de préciser la réponse immunitaire innée suite à l'exposition ex vivo aux H5-VLP produites dans N. benthamiana. Nous avons démontré les propriétés mitogéniques des H5-VLP sur les PBMC ainsi qu'une activation des lymphocytes B, des cellules NK et de certaines sous populations de lymphocytes T. L'analyse des cytokines sécrétées dans le surnageant des PBMC exposés ex vivo aux VLP suggère qu'une réponse pro-inflammatoire prédomine 48h après exposition et semble résulter essentiellement d'une activation des monocytes CD14+. Notre étude démontre que les VLP produites à partir de la plante de tabac génèrent une réponse immunitaire innée dans les PBMC provenant de patients naïfs, nous permettant ainsi de mieux comprendre les propriétés immunostimulantes de ce nouveau type de vaccin.