Introdução: A hipotermia tópica (HT) e o pré-condicionamento isquêmico (PCI) são métodos utilizados para diminuir a lesão de isquemia/reperfusão (I/R). A eficácia do uso concomitante da HT e PCI (HT+PCI) no fígado em relação à inflamação e à citoproteção antioxidante não está elucidada. Objetivo: Avaliar o processo inflamatório e os mecanismos de segunda linha de defesa antioxidante na lesão de I/R hepática em ratos em relação à utilização das técnicas de HT e PCI de forma isolada ou associada. Métodos: Ratos Wistar (n=32) foram submetidos à isquemia hepática parcial (70%) durante 90 minutos seguida por 120 minutos de reperfusão. Os animais foram alocados nos grupos sham (n=4), isquemia normotérmica (IN, n=7), PCI (n=7), HT (n=7) e HT+PCI (n=7). O PCI consistiu na aplicação consecutiva de 10 minutos de isquemia e reperfusão antes do insulto isquêmico. A HT foi induzida pela superfusão de solução salina a 26°C sobre os lobos isquêmicos. A eutanásia foi realizada ao término do experimento e as amostras foram coletadas para a realização das análises moleculares utilizando as técnicas de ELISA e Western Blot, com o objetivo de comparar os perfis pró-inflamatório, anti-inflamatório e antioxidante. Resultados: O grupo HT comparado ao grupo IN apresentou diminuição da concentração do fator de necrose tumoral (TNF)-α, interleucina (IL)-1β, IL-6 e IL-12 e um aumento dos níveis de IL-10. O grupo HT apresentou menor expressão da óxido nítrico sintase induzível (iNOS) e um aumento da expressão da óxido nítrico sintase endotelial (eNOS). A expressão da NAD(P)H quinone oxidoreductase-1 (NQO1) foi menor no grupo HT. O PCI não demonstrou diferença significativa em relação a esses marcadores quando comparado ao grupo IN. O grupo HT+PCI apresentou menor concentração de IL-12 e menor expressão da iNOS e NQO1, mas em relação a estas moléculas a utilização de HT isolada demonstrou um comportamento semelhante. O grupo HT+PCI apresentou maior expressão da Kelch-like ECH-associated protein (Keap)-1 e menor expressão do nuclear erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) nuclear e citoplasmático em relação ao grupo IN. Conclusão: O método de HT foi eficaz na proteção contra a lesão inicial de I/R. O uso de PCI isolado desencadeou a ativação da segunda linha de defesa antioxidante. A aplicação combinada de HT+PCI não confere benefício adicional em relação ao processo inflamatório quando comparado ao grupo HT, mas apresenta a vantagem de evitar a ativação da segunda linha de defesa antioxidante. / Background: Topical hypothermia (TH) and ischemic preconditioning (IPC) are used to decrease ischemia/reperfusion (I/R) injury. The effectiveness of using concomitantly TH and IPC (TH+IPC) in liver, regarding inflammation and antioxidant cytoprotection, is lacking. Aim: To evaluate the process inflammatory and second-line antioxidant defense mechanisms in hepatic I/R injury in rats in relation to the use of techniques TH and IPC isolate or associated. Methods: Wistar rats (n=32) subjected to partial (70%) hepatic ischemia during 90 minutes followed by 120 minutes of reperfusion. Livers from the animals allocated in sham (n=4), normothermic ischemia (NI, n=7), IPC (n=7), TH (n=7) and TH+IPC (n=7) groups. IPC consisted of consecutive 10-minute periods of ischemia and reperfusion before the ischemic insult. TH was induced by the superfusion of cooled saline at 26oC onto the ischemic lobes. Euthanasia was undertaken exactly at the end of the experiment and samples were collected for molecular analyses by ELISA and Western Blot assays, aiming to compare pro-inflammatory, anti-inflammatory and antioxidant profiles. Results: Compared with NI, TH presented decreased tumor necrosis factor (TNF)-α, interleukin (IL)-1β, IL-6 and IL-12 concentrations and increased IL-10 levels. TH displayed lower inducible nitric oxide synthase (iNOS), higher endothelial nitric oxide synthase (eNOS) expressions. NAD(P)H-quinone oxidoreductase-1(NQO1) expression was also lower in TH. Isolate IPC showed no differences regarding all these markers compared to NI. TH+IPC showed decreased IL-12 concentration and reduced iNOS and NQO1 expressions, but regarding these molecules isolate TH behaved similarly. TH+IPC showed higher Kelch-like ECH-associated protein (Keap)-1 and diminished nuclear and cytosolic nuclear erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) expressions than NI. Conclusion: TH was the effective method of protection against early I/R injury. Isolated IPC entailed triggering of second-line antioxidant defense enzymes. Combined TH+IPC seemed to confer no additional advantage over isolated TH in relation to the inflammatory process, but had the advantage of avoid activation second-line antioxidant defense enzymes.

Introdução: A hipotermia tópica (HT) e o pré-condicionamento isquêmico (PCI) são métodos utilizados para diminuir a lesão de isquemia/reperfusão (I/R). A eficácia do uso concomitante da HT e PCI (HT+PCI) no fígado em relação à inflamação e à citoproteção antioxidante não está elucidada. Objetivo: Avaliar o processo inflamatório e os mecanismos de segunda linha de defesa antioxidante na lesão de I/R hepática em ratos em relação à utilização das técnicas de HT e PCI de forma isolada ou associada. Métodos: Ratos Wistar (n=32) foram submetidos à isquemia hepática parcial (70%) durante 90 minutos seguida por 120 minutos de reperfusão. Os animais foram alocados nos grupos sham (n=4), isquemia normotérmica (IN, n=7), PCI (n=7), HT (n=7) e HT+PCI (n=7). O PCI consistiu na aplicação consecutiva de 10 minutos de isquemia e reperfusão antes do insulto isquêmico. A HT foi induzida pela superfusão de solução salina a 26°C sobre os lobos isquêmicos. A eutanásia foi realizada ao término do experimento e as amostras foram coletadas para a realização das análises moleculares utilizando as técnicas de ELISA e Western Blot, com o objetivo de comparar os perfis pró-inflamatório, anti-inflamatório e antioxidante. Resultados: O grupo HT comparado ao grupo IN apresentou diminuição da concentração do fator de necrose tumoral (TNF)-α, interleucina (IL)-1β, IL-6 e IL-12 e um aumento dos níveis de IL-10. O grupo HT apresentou menor expressão da óxido nítrico sintase induzível (iNOS) e um aumento da expressão da óxido nítrico sintase endotelial (eNOS). A expressão da NAD(P)H quinone oxidoreductase-1 (NQO1) foi menor no grupo HT. O PCI não demonstrou diferença significativa em relação a esses marcadores quando comparado ao grupo IN. O grupo HT+PCI apresentou menor concentração de IL-12 e menor expressão da iNOS e NQO1, mas em relação a estas moléculas a utilização de HT isolada demonstrou um comportamento semelhante. O grupo HT+PCI apresentou maior expressão da Kelch-like ECH-associated protein (Keap)-1 e menor expressão do nuclear erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) nuclear e citoplasmático em relação ao grupo IN. Conclusão: O método de HT foi eficaz na proteção contra a lesão inicial de I/R. O uso de PCI isolado desencadeou a ativação da segunda linha de defesa antioxidante. A aplicação combinada de HT+PCI não confere benefício adicional em relação ao processo inflamatório quando comparado ao grupo HT, mas apresenta a vantagem de evitar a ativação da segunda linha de defesa antioxidante. / Background: Topical hypothermia (TH) and ischemic preconditioning (IPC) are used to decrease ischemia/reperfusion (I/R) injury. The effectiveness of using concomitantly TH and IPC (TH+IPC) in liver, regarding inflammation and antioxidant cytoprotection, is lacking. Aim: To evaluate the process inflammatory and second-line antioxidant defense mechanisms in hepatic I/R injury in rats in relation to the use of techniques TH and IPC isolate or associated. Methods: Wistar rats (n=32) subjected to partial (70%) hepatic ischemia during 90 minutes followed by 120 minutes of reperfusion. Livers from the animals allocated in sham (n=4), normothermic ischemia (NI, n=7), IPC (n=7), TH (n=7) and TH+IPC (n=7) groups. IPC consisted of consecutive 10-minute periods of ischemia and reperfusion before the ischemic insult. TH was induced by the superfusion of cooled saline at 26oC onto the ischemic lobes. Euthanasia was undertaken exactly at the end of the experiment and samples were collected for molecular analyses by ELISA and Western Blot assays, aiming to compare pro-inflammatory, anti-inflammatory and antioxidant profiles. Results: Compared with NI, TH presented decreased tumor necrosis factor (TNF)-α, interleukin (IL)-1β, IL-6 and IL-12 concentrations and increased IL-10 levels. TH displayed lower inducible nitric oxide synthase (iNOS), higher endothelial nitric oxide synthase (eNOS) expressions. NAD(P)H-quinone oxidoreductase-1(NQO1) expression was also lower in TH. Isolate IPC showed no differences regarding all these markers compared to NI. TH+IPC showed decreased IL-12 concentration and reduced iNOS and NQO1 expressions, but regarding these molecules isolate TH behaved similarly. TH+IPC showed higher Kelch-like ECH-associated protein (Keap)-1 and diminished nuclear and cytosolic nuclear erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) expressions than NI. Conclusion: TH was the effective method of protection against early I/R injury. Isolated IPC entailed triggering of second-line antioxidant defense enzymes. Combined TH+IPC seemed to confer no additional advantage over isolated TH in relation to the inflammatory process, but had the advantage of avoid activation second-line antioxidant defense enzymes.

Introdução: A hipotermia tópica (HT) e o pré-condicionamento isquêmico (PCI) são métodos utilizados para diminuir a lesão de isquemia/reperfusão (I/R). A eficácia do uso concomitante da HT e PCI (HT+PCI) no fígado em relação à inflamação e à citoproteção antioxidante não está elucidada. Objetivo: Avaliar o processo inflamatório e os mecanismos de segunda linha de defesa antioxidante na lesão de I/R hepática em ratos em relação à utilização das técnicas de HT e PCI de forma isolada ou associada. Métodos: Ratos Wistar (n=32) foram submetidos à isquemia hepática parcial (70%) durante 90 minutos seguida por 120 minutos de reperfusão. Os animais foram alocados nos grupos sham (n=4), isquemia normotérmica (IN, n=7), PCI (n=7), HT (n=7) e HT+PCI (n=7). O PCI consistiu na aplicação consecutiva de 10 minutos de isquemia e reperfusão antes do insulto isquêmico. A HT foi induzida pela superfusão de solução salina a 26°C sobre os lobos isquêmicos. A eutanásia foi realizada ao término do experimento e as amostras foram coletadas para a realização das análises moleculares utilizando as técnicas de ELISA e Western Blot, com o objetivo de comparar os perfis pró-inflamatório, anti-inflamatório e antioxidante. Resultados: O grupo HT comparado ao grupo IN apresentou diminuição da concentração do fator de necrose tumoral (TNF)-α, interleucina (IL)-1β, IL-6 e IL-12 e um aumento dos níveis de IL-10. O grupo HT apresentou menor expressão da óxido nítrico sintase induzível (iNOS) e um aumento da expressão da óxido nítrico sintase endotelial (eNOS). A expressão da NAD(P)H quinone oxidoreductase-1 (NQO1) foi menor no grupo HT. O PCI não demonstrou diferença significativa em relação a esses marcadores quando comparado ao grupo IN. O grupo HT+PCI apresentou menor concentração de IL-12 e menor expressão da iNOS e NQO1, mas em relação a estas moléculas a utilização de HT isolada demonstrou um comportamento semelhante. O grupo HT+PCI apresentou maior expressão da Kelch-like ECH-associated protein (Keap)-1 e menor expressão do nuclear erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) nuclear e citoplasmático em relação ao grupo IN. Conclusão: O método de HT foi eficaz na proteção contra a lesão inicial de I/R. O uso de PCI isolado desencadeou a ativação da segunda linha de defesa antioxidante. A aplicação combinada de HT+PCI não confere benefício adicional em relação ao processo inflamatório quando comparado ao grupo HT, mas apresenta a vantagem de evitar a ativação da segunda linha de defesa antioxidante. / Background: Topical hypothermia (TH) and ischemic preconditioning (IPC) are used to decrease ischemia/reperfusion (I/R) injury. The effectiveness of using concomitantly TH and IPC (TH+IPC) in liver, regarding inflammation and antioxidant cytoprotection, is lacking. Aim: To evaluate the process inflammatory and second-line antioxidant defense mechanisms in hepatic I/R injury in rats in relation to the use of techniques TH and IPC isolate or associated. Methods: Wistar rats (n=32) subjected to partial (70%) hepatic ischemia during 90 minutes followed by 120 minutes of reperfusion. Livers from the animals allocated in sham (n=4), normothermic ischemia (NI, n=7), IPC (n=7), TH (n=7) and TH+IPC (n=7) groups. IPC consisted of consecutive 10-minute periods of ischemia and reperfusion before the ischemic insult. TH was induced by the superfusion of cooled saline at 26oC onto the ischemic lobes. Euthanasia was undertaken exactly at the end of the experiment and samples were collected for molecular analyses by ELISA and Western Blot assays, aiming to compare pro-inflammatory, anti-inflammatory and antioxidant profiles. Results: Compared with NI, TH presented decreased tumor necrosis factor (TNF)-α, interleukin (IL)-1β, IL-6 and IL-12 concentrations and increased IL-10 levels. TH displayed lower inducible nitric oxide synthase (iNOS), higher endothelial nitric oxide synthase (eNOS) expressions. NAD(P)H-quinone oxidoreductase-1(NQO1) expression was also lower in TH. Isolate IPC showed no differences regarding all these markers compared to NI. TH+IPC showed decreased IL-12 concentration and reduced iNOS and NQO1 expressions, but regarding these molecules isolate TH behaved similarly. TH+IPC showed higher Kelch-like ECH-associated protein (Keap)-1 and diminished nuclear and cytosolic nuclear erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) expressions than NI. Conclusion: TH was the effective method of protection against early I/R injury. Isolated IPC entailed triggering of second-line antioxidant defense enzymes. Combined TH+IPC seemed to confer no additional advantage over isolated TH in relation to the inflammatory process, but had the advantage of avoid activation second-line antioxidant defense enzymes.

京都大学 / 0048 / 新制・課程博士 / 博士(医学) / 甲第22696号 / 医博第4640号 / 新制||医||1045(附属図書館) / 京都大学大学院医学研究科医学専攻 / (主査)教授 羽賀 博典, 教授 妹尾 浩, 教授 木村 剛 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Medical Science / Kyoto University / DGAM

京都大学 / 新制・論文博士 / 博士(医学) / 乙第13449号 / 論医博第2242号 / 新制||医||1054(附属図書館) / 京都大学大学院医学研究科医学専攻 / (主査)教授 川口 義弥, 教授 妹尾 浩, 教授 柳田 素子 / 学位規則第4条第2項該当 / Doctor of Medical Science / Kyoto University / DFAM

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-07T11:52:37Z No. of bitstreams: 1 Silvio Henrique de Freitas.pdf: 2034085 bytes, checksum: 9dab230ef672cfd4c52fed67b3c04de3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-07T11:52:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silvio Henrique de Freitas.pdf: 2034085 bytes, checksum: 9dab230ef672cfd4c52fed67b3c04de3 (MD5) Previous issue date: 2003-07-09 / Experimental models of hepatic ischemia have been very widespread. The Pringle maneuver, i.e. clamping by vascular tongs of the artery, vein and hepatic duct, and of the portal vein is used in many of these models. These models are used for studies in liver transplants. One of the complications in this maneuver is the splanchic congestion. This study has as objective the observation of the changes that occur in the spleen due to the ischemia produced by the clamping of the hepatic peduncle. For this 36 male mice were divided into four groups with 9 animals each. The Sham (S) group was not submitted to ischemia, and the groups E1, E2 and E3 were submitted to the Pringle maneuver for 10, 20 and 30 minutes, respectively. After these periods, fragments of the spleen were taken, fixed in formaldehyde and processed for inclusion in paraffin. The slits were dyed with Haematoxylin and Eosin and with Ferric-ferrocyanide. The results showed microscopic alterations in groups E2 and E3. There was intense vascular congestion, hemosiderin granules, decrease in the white pulp (lymphatic nodules and periarterial sheaths) and intense hemocateresis around the splenic sine curves, being these changes more intense at 30 minutes. In this group there was an accentuated digestion of red blood cells with the presence of hemosiderin granules. The data obtained permit us to conclude that at 20 minutes signs of spleen congestion begin and that at 30 minutes there is decrease in splenic parenchyma and increase in concentrations of ferric pigments. / Modelos experimentais de isquemia hepática têm sido muito difundidos. A manobra de Pringle, ou seja, o clampeamento por pinça vascular da artéria, veia e ducto hepático e da veia porta, é utilizado em muitos desses modelos. Esses modelos são utilizados para estudos em transplantes hepáticos. Uma das complicações dessa manobra é a congestão esplâncnica. Este trabalho tem como objetivo observar as alterações que ocorrem no baço frente a isquemia produzida pelo clampeamento do pedículo hepático. Para tanto foram utilizados 36 ratos machos, divididos em quatro grupos de 9 animais cada. O grupo Sham (S) não foi submetido a isquemia, já os grupos E1, E2 e E3 foram submetidos a manobra de Pringle por 10, 20 e 30 minutos respectivamente. Após esses períodos, fragmentos do baço foram retirados, fixados em formaldeído e processados para inclusão em parafina. Os cortes foram corados pela Hematoxilina e Eosina e pelo Ferrocianeto-Férrico. Nossos resultados mostraram alterações microscópicas nos grupos E2 e E3, onde notou-se intensa congestão vascular, grânulos de hemossiderina, diminuição da polpa branca (nódulos linfáticos e bainha periarteriais) e intensa hemocaterese ao redor dos sinusóides esplênicos, sendo essas alterações mais intensa aos 30 minutos. Neste grupo ocorreu uma acentuada digestão de hemácias com presença de grânulos de hemossiderina. Os dados obtidos permitiram concluir que aos 20 minutos já começa haver sinais de congestão esplênica, e que aos 30 minutos diminuição do seu parênquima esplênico e aumento da concentração de pigmentos de ferro.