Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-22Bitstream added on 2014-06-13T20:27:43Z : No. of bitstreams: 1 demoner_lc_me_botfmvz.pdf: 668999 bytes, checksum: f0837d7e0a185cd0a8385b4105355512 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Hepatozoon canis é um hemoparasita transmitido por carrapatos que afeta cães em diversas regiões do mundo. Rhipicephalus sanguineus é considerado seu vetor biológico, entretanto, é possível que existam outros vetores. No Brasil, H. canis é descrito principalmente em áreas rurais, onde cães podem ser infestados por outras espécies, incluindo Amblyomma spp. O objetivo do presente trabalho foi infectar experimentalmente diferentes espécies de carrapatos com H. canis, a partir de cães naturalmente infectados. Para isso, foram utilizadas ninfas de A. cajennense e R. sanguineus e adultos de A. cajennense e A. ovale. Após o ingurgitamento dos espécimes em animal infectado, foi realizada pesquisa de formas evolutivas do protozoário na hemolinfa, intestino e hemocele dos ixodídeos, por técnicas citológicas e histológicas. Alguns carrapatos foram submetidos ao diagnóstico molecular pela técnica de PCR. Somente em duas fêmeas de A. cajennense foram observadas estruturas morfologicamente semelhantes a Hepatozoon spp. e uma fêmea de A. ovale apresentou oocistos na hemocele. Além disso, duas fêmeas de A. ovale e uma de A. cajennense foram positivas na PCR. Entretanto, não é possível caracterizar essas espécies como vetores de H. canis, pois foram usados muitos exemplares nas infecções experimentais e poucos foram capazes de se infectar com o parasita. É provável que R. sanguineus tenha pouca importância epidemiológica na transmissão de H. canis no Brasil, pois este estudo, assim como pesquisas anteriores, demonstraram que a espécie foi incapaz de se infectar experimentalmente com o protozoário / Hepatozoon canis is a hemoparasite that afflicts dogs in several regions of the world. Rhipicephalus sanguineus is considered to be the biologic vector of this agent, although other species may act as possible vectors. In Brazil, H. canis is described mainly in rural areas, where dogs are infested by other species, such as Amblyomma spp. The aim of this study was to transmit experimentally H. canis to different species of ticks, using naturally infected dogs. For this purpose A. cajennense and R. sanguineus nymphs and A. cajennense and A. ovale adults were used. After the repletion of specimens fed on a naturally infected animal, we searched for development forms of the protozoa in hemolymph, gut and hemocoel of the ticks by cytological and histopathologic examinations. Some ticks were also examined by molecular detection (PCR). Only two female ticks of the species A. cajennense contained structures morphologically similar to Hepatozoon spp. and oocysts were recovered from the hemocoel of an A. ovale female. In addition, two females of A. ovale and one female of A. ovale were positive through PCR. However, our results are not enough to characterize these species as vectors of H. canis mainly because many ticks were used in experimental infections and few were infected with the parasite. It is likely that R. sanguineus has little epidemiological importance in the transmission of H. canis in Brazil, since this research and previous researchers demonstrated that R. sanguineus was unable to experimentally get infected with the protozoan

Orientador: Lucia Helena O'Dwyer / Banca: Elizabeth Moreira dos Santos Schmidt / Banca: Gervásio Henrique Bechara / Resumo: Hepatozoon canis é um hemoparasita transmitido por carrapatos que afeta cães em diversas regiões do mundo. Rhipicephalus sanguineus é considerado seu vetor biológico, entretanto, é possível que existam outros vetores. No Brasil, H. canis é descrito principalmente em áreas rurais, onde cães podem ser infestados por outras espécies, incluindo Amblyomma spp. O objetivo do presente trabalho foi infectar experimentalmente diferentes espécies de carrapatos com H. canis, a partir de cães naturalmente infectados. Para isso, foram utilizadas ninfas de A. cajennense e R. sanguineus e adultos de A. cajennense e A. ovale. Após o ingurgitamento dos espécimes em animal infectado, foi realizada pesquisa de formas evolutivas do protozoário na hemolinfa, intestino e hemocele dos ixodídeos, por técnicas citológicas e histológicas. Alguns carrapatos foram submetidos ao diagnóstico molecular pela técnica de PCR. Somente em duas fêmeas de A. cajennense foram observadas estruturas morfologicamente semelhantes a Hepatozoon spp. e uma fêmea de A. ovale apresentou oocistos na hemocele. Além disso, duas fêmeas de A. ovale e uma de A. cajennense foram positivas na PCR. Entretanto, não é possível caracterizar essas espécies como vetores de H. canis, pois foram usados muitos exemplares nas infecções experimentais e poucos foram capazes de se infectar com o parasita. É provável que R. sanguineus tenha pouca importância epidemiológica na transmissão de H. canis no Brasil, pois este estudo, assim como pesquisas anteriores, demonstraram que a espécie foi incapaz de se infectar experimentalmente com o protozoário / Abstract: Hepatozoon canis is a hemoparasite that afflicts dogs in several regions of the world. Rhipicephalus sanguineus is considered to be the biologic vector of this agent, although other species may act as possible vectors. In Brazil, H. canis is described mainly in rural areas, where dogs are infested by other species, such as Amblyomma spp. The aim of this study was to transmit experimentally H. canis to different species of ticks, using naturally infected dogs. For this purpose A. cajennense and R. sanguineus nymphs and A. cajennense and A. ovale adults were used. After the repletion of specimens fed on a naturally infected animal, we searched for development forms of the protozoa in hemolymph, gut and hemocoel of the ticks by cytological and histopathologic examinations. Some ticks were also examined by molecular detection (PCR). Only two female ticks of the species A. cajennense contained structures morphologically similar to Hepatozoon spp. and oocysts were recovered from the hemocoel of an A. ovale female. In addition, two females of A. ovale and one female of A. ovale were positive through PCR. However, our results are not enough to characterize these species as vectors of H. canis mainly because many ticks were used in experimental infections and few were infected with the parasite. It is likely that R. sanguineus has little epidemiological importance in the transmission of H. canis in Brazil, since this research and previous researchers demonstrated that R. sanguineus was unable to experimentally get infected with the protozoan / Mestre

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE SABRINA CASTILHO DUARTE.pdf: 306533 bytes, checksum: 4d48881b72114026737e6c40bb7b94fb (MD5) Previous issue date: 2010-03-31 / In the genera Babesia, Ehrlichia and are positioned Hepatozoon species of parasites responsible for babesiosis, ehrlichiosis and hepatozoonosis respectively. These organisms have in common the fact that they are transmitted by tick vectors in dogs infected and cause general symptoms such as fever, anemia and jaundice accompanied by intracellular infections. In the state of Goias had not work with phylogenetic approach for these blood parasites. The overall objective of this study was molecular analysis of isolates of Babesia, Hepatozoon and Ehrlichia obtained from symptomatic dogs in Goiânia, Goiás State, thus confirming that the species and subspecies involved in infections. For this, DNA extraction was carried out of samples, followed by carrying out PCR with generic primers. After the PCR was obtained fragments of the 18S rRNA region for samples of Babesia and Hepatozoon and 16S rRNA for the detection of species of the genus Ehrlichia. PCR products obtained were purified and used for sequencing. We sequenced 35 samples of Babesia spp. and of these 17 were used for phylogenetic studies. Two samples of Hepatozoon spp. 17 samples were sequenced and Ehrlichia spp which only five were used for analysis. Analyses performed with the identity of sequenced samples allowed the identification of B. vogeli canis, Hepatozoon canis and Ehrlichia canis. When confronted with the species and subspecies of reference from other regions of Brazil and the world showed close molecular similarity, which demonstrates the low variability between different samples from different geographic regions. For the analysis using the program MEGA4 and subsequent construction of a phylogenetic tree samples in this study formed their own groups always association with the reference samples for the respective species. Thus it was concluded that samples of B. c. vogeli H. canis and E. canis from dogs in the city of Goiania GO show close similarity with isolates from other regions of the world / Nos gêneros Babesia, Ehrlichia e Hepatozoon são posicionadas as espécies de parasitos responsáveis pela babesiose, ehrlichiose e hepatozoonose respectivamente. Estes microrganismos têm em comum o fato de serem transmitidos por carrapatos vetores e causarem nos cães infectados sinais gerais como febre, anemia e icterícia acompanhados de infecções intracelulares. No estado de Goiás não haviam trabalhos com abordagem filogenética relativos a estes hemoparasitos. O objetivo geral do presente trabalho foi realizar análise molecular de isolados de Babesia, Ehrlichia e Hepatozoon obtidos de cães sintomáticos na cidade de Goiânia, Estado de Goiás, verificando assim qual a espécie e subespécie envolvida nas infecções. Para isto, foi realizado extração de DNA das amostras, seguido da realização de PCR com oligonucleotídeos genéricos. Após a PCR obteve-se fragmentos da região do 18S rRNA para as amostras de Babesia e Hepatozoon e do 16S rRNA para a pesquisa de espécies do gênero Ehrlichia. Os produtos de PCR obtidos foram purificados e utilizados para o sequenciamento. Foram seqüenciadas 35 amostras de Babesia spp. e destas 17 foram utilizadas para os estudos filogenéticos. Duas amostras de Hepatozoon spp. foram seqüenciadas e 17 amostras de Ehrlichia spp sendo que apenas cinco foram utilizadas para as análises. As análises de identidade realizadas com as amostras seqüenciadas permitiram a identificação de B. canis vogeli, Hepatozoon canis e Ehrlichia canis. Quando confrontadas com as espécies e subespécies de referência de outras regiões do Brasil e do mundo apresentaram estreita similaridade molecular, o que demonstra a baixa variabilidade entre as diferentes amostras de diferentes regiões geográficas. Pela análise feita utilizando-se o programa MEGA4 e subsequente construção de árvores filogenéticas as amostras deste estudo formaram grupos próprios sempre em associação com as amostras de referência para as respectivas espécies. Dessa forma foi possível concluir que as amostras de B. c. vogeli, H. canis e E. canis provenientes de cães da cidade de Goiânia-GO apresentam estreita similaridade com isolados de outras regiões do mundo