O processo de carcinogênese na cavidade bucal ocorre em etapas, apresentando alterações sobre o genoma celular, sendo muitas vezes precedido por lesões denominadas potencialmente malignas. Os principais fatores de risco para o desenvolvimento do Câncer bucal são o fumo e o álcool. O desafio atual é identificar os pacientes com maior risco para o desenvolvimento do câncer bucal através da utilização de métodos não invasivos e eficazes. O objetivo deste trabalho foi avaliar a frequência de perda de heterozigosidade (LOH) no lócus 9p21, a atividade proliferativa celular, o padrão de descamação e relação núcleo/citoplasma na carcinogênese bucal. Para tal finalidade foi realizada a coleta citopatológica de indivíduos que foram divididos nos seguintes grupos: Controle (n=26), Álcool-Fumo (n=32), Leucoplasia (n=38) e grupo Carcinoma Espinocelular (CEC n=35). A partir do raspado citológico foi confeccionada uma lâmina para impregnação por prata e análise de AgNOR (velocidade de proliferação celular) e realização da técnica de Papanicolau para a análise do padrão de descamação e relação núcleo/citoplasma das células. O restante das células foi utilizado para extração do DNA para amplificação por PCR e sequenciamento. Observamos que a frequência de LOH foi maior no grupo Leucoplasia. A velocidade de proliferação celular foi maior no grupo Leucoplasia em relação ao grupo controle Na análise de padrão de descamação, observamos maior quantidade de escamas anucleadas no grupo Leucoplasia, de superficiais no grupo controle e de células parabasais no grupo CEC. A relação núcleo/citoplasma foi maior no grupo CEC em comparação aos outros. Concluímos que a LOH e o AgNOR são métodos promissores para o rastreamento e monitoramento dos pacientes com maior risco para o desenvolvimento do Câncer bucal. / The carcinogenesis process in the bucal cavity occurs in stages, appearing on the cellular genome, and is often preceded by potentially malignant lesions. The main risk factors for the development of bucal cancer are smoking and alcohol intake. The current challenge is to identify patients at greatest risk for the development of bucal cancer through the use of non-invasive and effective methods. The objective of this work is to evaluate the loss of heterozygosity (LOH) in the 9p21 locus, the cell proliferative activity, the pattern of epithelial desquamation and the nucleus/cytoplasm ratio of the epithelial cells. For this purpose a cytopathological sample was collected from individuals of 4 groups: control (n = 26), alcohol-smoking (n = 32), leukoplakia (n = 38) and the squamous cell carcinoma group (SCC n = 35). From the cytological scraping, a slide was silver impregnate for AgNOR analysis (cell proliferation velocity), another slide was stained by the Papanicolau technique for the analysis of the desquamation pattern and nucleus/cytoplasm ratio of the cells. The remaining cells were used for DNA extraction, followed by PCR amplification and fragments sequencing. We observed that the cell proliferation velocity rate was higher in the Leukoplakia group compared to the Control group. The LOH frequency was higher in the Alcohol-smoking and Leukoplakia groups. We observed increased anucleated cells in the leukoplakia group, while the nucleated superficial predominated in the control group and the parabasal cells in the SCC group. An increased nucleus/cytoplasm was detected only in the CEC group. We conclude that LOH and AgNOR methods are promising for the screening and monitoring of individuals at higher risk for the development of bucal cancer.

The objective of this study was to evaluate the breed additive genetic and heterozygotic effects, direct and maternal, on the weight and the average daily gain for a multibreed population Aberdeen Angus-Nellore. They were studied the characteristics adjusted weight to 205 days of age (P205) and to 550 days of age (P550) and average daily gain from birth to weaning (GMD_ND) and from weaning to 550 days of age (GMD_DS). The data was furnished by Gensys Consultores Associados S/C Ltda. and Natura Genética Sul Americana, and it contained records on 121,241 animals sired by 1,359 bulls and 84,465 cows, raised in 104 farms in differents brazilians states from 1986 to 2002. The data was analyzed by two different methodologies: Genetic Group Model (MGG) and Multiple Regression Method (MRM). In paper number one, pre-weaning period, it were used records on 96,502 animals, sired by 962 bulls and 67,231 cows, grouped in 2,542 contemporaneous groups (GC) and 45 genetic groups (GG). The model used for the analysis by MGG, included as fixed, the effects of contemporaneous group-GC (including the animals born at the same farm, year and season and belonging to the same sex and management group), genetic group-GG (genetic additive effect of the animal individual breed, paternal and maternal), and the covariables age of the animal at weaning (IDD) and age of the cow at parturition (IVP), as linear and quadratic effects. For the MRM analysis, the data was firstly adjusted for the effects of GC, and for the covariables IDD and IVP, linear and quadratic. After that, it was performed a MRM considering the direct and maternal additive genetic effect of the breed and the direct and maternal heterozigosity. In the paper number two, post-weaning period, it were evaluated performances of 40,310 animals, sired by 720 bulls and 31,136 cows, distributed in 650 contemporaneous groups and 33 genetic groups. The model adopted by MGG considered as fixed, the effects of contemporaneous group (including the animals born at the same farm, year and season and belonging to the same sex and management group at 550 days of age) and the covariables IVP, linear and quadratic effects and the age of the animal to the age standard of 550 days was done (ISA), as linear effect. The MRM analysis was performed at the same way that for paper one. For the pre-weaning period, the results of this work alloud us to conclude that the direct additive genetic effects from Aberdeen Angus breed in relation to Nellore breed give better performances; the direct and maternal heterozygosity effect were high and significant, suggesting that crossed calves and cows can perform better than the pure breeds. For the pre-weaning period the estimatives obtained by MRM were similar to those obtained by MGG. In relation to the post-weaning period it were observed differences in the performances of the animals, showing a better efficiency of Aberdeen Angus breed additive genes in relation to the Nellore breed. By the regression coefficient for direct and maternal effects it is possible to conclude that exist a bigger influence of the direct in relation to the maternal effect, suggesting that, in this phase, the animal performance depends most of its breed composition than of the influence of it mother. In spite of to exist similarities among the estimatives obtained by MGG and MRM, it is not recommended the use of MRM because of the inconsistencies observed in the results by this method. / O presente estudo teve por objetivo avaliar os efeitos genéticos aditivos raciais e heterozigóticos, diretos e maternos, sobre o desempenho ponderal de uma população multirracial Aberdeen Angus-Nelore. Foram estudadas as variáveis peso ajustado aos 205 dias de idade (P205), ganho médio diário do nascimento a desmama (GMD_ND), peso ajustado aos 550 dias de idade (P550) e ganho médio diário da desmama ao sobreano. O arquivo de dados foi fornecido pelas empresas Gensys Consultores Associados S/C Ltda. e Natura Genética Sul Americana, e continha informações de desempenho de 121.241 animais filhos de 1.359 touros e 84.465 vacas, criados em 104 fazendas, em diferentes estados brasileiros, coletadas no período entre 1986 e 2002. Os dados foram analisados através de dois modelos: Modelo de Grupo Genético (MGG) e Regressão Múltipla (MRM). No artigo 1, que abrangeu a fase prédesmama, foram utilizadas observações de 96.502 animais, filhos de 962 touros e de 67.231 vacas, agrupados em 2.542 grupos de contemporâneos e 45 grupos genéticos diferentes. O modelo utilizado para a análise através do MGG continha os efeitos fixos de grupo de contemporâneos (fazenda, ano de nascimento, sexo, estação de nascimento e grupo de manejo até a desmama) e grupo genético (efeito aditivo de raça individual, paterno e materno), além das covariáveis idade do bezerro a desmama e idade da vaca ao parto, incluídas como efeito linear e quadrático. Para o modelo de regressão múltipla, os dados foram inicialmente ajustados para o efeito GC, e das covariáveis idade do bezerro a desmama e idade da vaca ao parto, incluídas como efeito linear e quadrático, e então, foi conduzida a análise de regressão múltipla num modelo que considerou o efeito aditivo direto de raça, efeito aditivo materno de raça, heterozigose direta e heterozigose materna. No artigo 2, foi estudada a fase de pós-desmama, avaliando o desempenho de 40.310 animais, filhos de 720 touros e 31.136 vacas, distribuídos em 650 grupos de contemporâneos e 33 diferentes grupos genéticos, onde o modelo utilizado para o MGG continha os seguintes efeitos fixos de grupo de contemporâneos (fazenda, ano e estação de nascimento, sexo e grupo de manejo ao sobreano) e grupo genético, além das covariáveis a idade da vaca ao parto (efeito linear e quadrático) e idade do bezerro ao sobreano (efeito linear). A análise de regressão múltipla foi conduzida de forma similar ao artigo 1. Para a fase pré-desmama conclui-se que os efeitos aditivos diretos da raça Angus em relação à raça Nelore determinaram melhores desempenhos; os efeitos de heterozigose direta e materna foram altos e significativos, indicando um maior desempenho de vacas e bezerros cruzados. Para esta fase as estimativas geradas através de RM foram semelhantes àquelas encontradas através do MGG. Em relação a fase pós-desmama foi possível evidenciar que as diferenças observadas no desempenho dos animais, evidenciam a maior eficiência dos genes de efeito aditivo da raça Angus em contraste com os da raça Nelore e, através dos coeficientes de regressão para os efeitos diretos e maternos, é possível inferir que existe grande influência do efeito direto em relação ao materno, sugerindo que, nesta fase, o desempenho dos animais depende mais da sua própria composição genética racial do que da composição da mãe. Ainda que existam semelhanças entre os métodos de RM e MGG, para esta fase, não se aconselha a utilização da RM, visto da inconstância dos resultados obtidos através deste método.

O processo de carcinogênese na cavidade bucal ocorre em etapas, apresentando alterações sobre o genoma celular, sendo muitas vezes precedido por lesões denominadas potencialmente malignas. Os principais fatores de risco para o desenvolvimento do Câncer bucal são o fumo e o álcool. O desafio atual é identificar os pacientes com maior risco para o desenvolvimento do câncer bucal através da utilização de métodos não invasivos e eficazes. O objetivo deste trabalho foi avaliar a frequência de perda de heterozigosidade (LOH) no lócus 9p21, a atividade proliferativa celular, o padrão de descamação e relação núcleo/citoplasma na carcinogênese bucal. Para tal finalidade foi realizada a coleta citopatológica de indivíduos que foram divididos nos seguintes grupos: Controle (n=26), Álcool-Fumo (n=32), Leucoplasia (n=38) e grupo Carcinoma Espinocelular (CEC n=35). A partir do raspado citológico foi confeccionada uma lâmina para impregnação por prata e análise de AgNOR (velocidade de proliferação celular) e realização da técnica de Papanicolau para a análise do padrão de descamação e relação núcleo/citoplasma das células. O restante das células foi utilizado para extração do DNA para amplificação por PCR e sequenciamento. Observamos que a frequência de LOH foi maior no grupo Leucoplasia. A velocidade de proliferação celular foi maior no grupo Leucoplasia em relação ao grupo controle Na análise de padrão de descamação, observamos maior quantidade de escamas anucleadas no grupo Leucoplasia, de superficiais no grupo controle e de células parabasais no grupo CEC. A relação núcleo/citoplasma foi maior no grupo CEC em comparação aos outros. Concluímos que a LOH e o AgNOR são métodos promissores para o rastreamento e monitoramento dos pacientes com maior risco para o desenvolvimento do Câncer bucal. / The carcinogenesis process in the bucal cavity occurs in stages, appearing on the cellular genome, and is often preceded by potentially malignant lesions. The main risk factors for the development of bucal cancer are smoking and alcohol intake. The current challenge is to identify patients at greatest risk for the development of bucal cancer through the use of non-invasive and effective methods. The objective of this work is to evaluate the loss of heterozygosity (LOH) in the 9p21 locus, the cell proliferative activity, the pattern of epithelial desquamation and the nucleus/cytoplasm ratio of the epithelial cells. For this purpose a cytopathological sample was collected from individuals of 4 groups: control (n = 26), alcohol-smoking (n = 32), leukoplakia (n = 38) and the squamous cell carcinoma group (SCC n = 35). From the cytological scraping, a slide was silver impregnate for AgNOR analysis (cell proliferation velocity), another slide was stained by the Papanicolau technique for the analysis of the desquamation pattern and nucleus/cytoplasm ratio of the cells. The remaining cells were used for DNA extraction, followed by PCR amplification and fragments sequencing. We observed that the cell proliferation velocity rate was higher in the Leukoplakia group compared to the Control group. The LOH frequency was higher in the Alcohol-smoking and Leukoplakia groups. We observed increased anucleated cells in the leukoplakia group, while the nucleated superficial predominated in the control group and the parabasal cells in the SCC group. An increased nucleus/cytoplasm was detected only in the CEC group. We conclude that LOH and AgNOR methods are promising for the screening and monitoring of individuals at higher risk for the development of bucal cancer.

O processo de carcinogênese na cavidade bucal ocorre em etapas, apresentando alterações sobre o genoma celular, sendo muitas vezes precedido por lesões denominadas potencialmente malignas. Os principais fatores de risco para o desenvolvimento do Câncer bucal são o fumo e o álcool. O desafio atual é identificar os pacientes com maior risco para o desenvolvimento do câncer bucal através da utilização de métodos não invasivos e eficazes. O objetivo deste trabalho foi avaliar a frequência de perda de heterozigosidade (LOH) no lócus 9p21, a atividade proliferativa celular, o padrão de descamação e relação núcleo/citoplasma na carcinogênese bucal. Para tal finalidade foi realizada a coleta citopatológica de indivíduos que foram divididos nos seguintes grupos: Controle (n=26), Álcool-Fumo (n=32), Leucoplasia (n=38) e grupo Carcinoma Espinocelular (CEC n=35). A partir do raspado citológico foi confeccionada uma lâmina para impregnação por prata e análise de AgNOR (velocidade de proliferação celular) e realização da técnica de Papanicolau para a análise do padrão de descamação e relação núcleo/citoplasma das células. O restante das células foi utilizado para extração do DNA para amplificação por PCR e sequenciamento. Observamos que a frequência de LOH foi maior no grupo Leucoplasia. A velocidade de proliferação celular foi maior no grupo Leucoplasia em relação ao grupo controle Na análise de padrão de descamação, observamos maior quantidade de escamas anucleadas no grupo Leucoplasia, de superficiais no grupo controle e de células parabasais no grupo CEC. A relação núcleo/citoplasma foi maior no grupo CEC em comparação aos outros. Concluímos que a LOH e o AgNOR são métodos promissores para o rastreamento e monitoramento dos pacientes com maior risco para o desenvolvimento do Câncer bucal. / The carcinogenesis process in the bucal cavity occurs in stages, appearing on the cellular genome, and is often preceded by potentially malignant lesions. The main risk factors for the development of bucal cancer are smoking and alcohol intake. The current challenge is to identify patients at greatest risk for the development of bucal cancer through the use of non-invasive and effective methods. The objective of this work is to evaluate the loss of heterozygosity (LOH) in the 9p21 locus, the cell proliferative activity, the pattern of epithelial desquamation and the nucleus/cytoplasm ratio of the epithelial cells. For this purpose a cytopathological sample was collected from individuals of 4 groups: control (n = 26), alcohol-smoking (n = 32), leukoplakia (n = 38) and the squamous cell carcinoma group (SCC n = 35). From the cytological scraping, a slide was silver impregnate for AgNOR analysis (cell proliferation velocity), another slide was stained by the Papanicolau technique for the analysis of the desquamation pattern and nucleus/cytoplasm ratio of the cells. The remaining cells were used for DNA extraction, followed by PCR amplification and fragments sequencing. We observed that the cell proliferation velocity rate was higher in the Leukoplakia group compared to the Control group. The LOH frequency was higher in the Alcohol-smoking and Leukoplakia groups. We observed increased anucleated cells in the leukoplakia group, while the nucleated superficial predominated in the control group and the parabasal cells in the SCC group. An increased nucleus/cytoplasm was detected only in the CEC group. We conclude that LOH and AgNOR methods are promising for the screening and monitoring of individuals at higher risk for the development of bucal cancer.

A carcinogênese na cavidade bucal é um processo de múltiplas etapas, apresentando alterações progressivas sobre o genoma celular. Portanto, o desenvolvimento do câncer na mucosa bucal muitas vezes é precedido por uma lesão potencialmente maligna. Os principais fatores de risco para o câncer bucal são o consumo de álcool e tabaco. O desafio atual é a busca de biomarcadores que demonstrem essas alterações precocemente, para que possam ser identificados os indivíduos de maior risco para o desenvolvimento do câncer bucal. Uma das primeiras alterações no processo de carcinogênese é o aumento da atividade proliferativa celular, geralmente causado por mutações nos genes que controlam o ciclo celular. O gene CDKN2A, localizado no lócus 9p21, é um gene comumente mutado nos cânceres humanos e codifica a proteína p16, que desempenha um papel crítico na regulação do ciclo celular. O objetivo deste trabalho foi avaliar a frequência de perda de heterozigosidade no lócus 9p21 e a atividade proliferativa celular na carcinogênese bucal, assim como avaliar a possibilidade de utilização da citopatologia bucal como ferramenta para coleta e análise de DNA. Para tal finalidade foi realizada a coleta citopatológica de indivíduos que foram divididos nos seguintes grupos: controle (n=24), álcool-fumo (n=26), leucoplasia (n=13) e grupo carcinoma (n=14). A partir do raspado citológico foi confeccionada uma lâmina para impregnação por prata e análise de AgNOR. O restante das células foi utilizado para extração do DNA para amplificação por PCR e sequenciamento. Observamos que os parâmetros de AgNOR e a frequência de mutações no lócus 9p21 foram maiores nos grupos expostos aos carcinógenos e com lesões em relação ao controle, porém sem diferenças estatisticamente significativas. O DNA obtido mostrou-se satisfatório em relação à concentração e à pureza. Os pacientes que apresentavam mutação em 9p21 apresentaram também maior velocidade de proliferação em relação aos pacientes sem mutações, embora essa diferença não tenha sido estatisticamente significativa. Concluímos que a citopatologia é um método útil para avaliação da atividade proliferativa e de mutações genéticas em pacientes com risco para transformação maligna em relação ao câncer bucal. / The carcinogenesis in the oral cavity is a multistep process, with progressive changes on the cellular genome. Therefore, the development of cancer in the oral mucosa is often preceded by a potentially malignant lesion. The main risk factors for oral cancer are alcohol and tobacco intake. The current challenge is the search for biomarkers that demonstrate these early changes, so higher risk individuals to the development of oral cancer can be identified. One of the earliest changes in the carcinogenesis process is the enhancement of cell proliferative activity, usually caused by mutations in cell cycle control genes. The CDKN2A gene, located in the 9p21 locus, is a commonly mutated gene in human cancers and encodes the p16 protein, which plays a critical role in cell cycle regulation. The objective of this study was to evaluate the frequency of loss of heterozygosity in the 9p21 locus and the cell proliferative activity in oral carcinogenesis. Moreover, to assess the possibility of using oral cytology as a tool for collecting and analyzing DNA. For this purpose was held cytopathologic collection of patients who were divided into the following groups: control (n=24), alcohol-smoking (n=26), leukoplakia (n=13) and carcinoma group (n= 4). From the cytology brush was made a slide for silver impregnation and AgNOR analysis. The remaining cells were used for DNA extraction, followed by PCR amplification and sequencing. We observed that the AgNOR parameters and the frequency of 9p21 locus mutations were higher in the groups exposed to carcinogens and injuries in the control, however without statistically significant differences. The DNA obtained was satisfactory in respect of concentration and purity. The patients with mutation in 9p21 also showed increased speed proliferation compared to patients without mutations, although this difference was not statistically significant. We conclude that the cytopathology is a useful method to evaluate the proliferative activity and gene mutations in patients with risk for malignant transformation to oral cancer.

A carcinogênese na cavidade bucal é um processo de múltiplas etapas, apresentando alterações progressivas sobre o genoma celular. Portanto, o desenvolvimento do câncer na mucosa bucal muitas vezes é precedido por uma lesão potencialmente maligna. Os principais fatores de risco para o câncer bucal são o consumo de álcool e tabaco. O desafio atual é a busca de biomarcadores que demonstrem essas alterações precocemente, para que possam ser identificados os indivíduos de maior risco para o desenvolvimento do câncer bucal. Uma das primeiras alterações no processo de carcinogênese é o aumento da atividade proliferativa celular, geralmente causado por mutações nos genes que controlam o ciclo celular. O gene CDKN2A, localizado no lócus 9p21, é um gene comumente mutado nos cânceres humanos e codifica a proteína p16, que desempenha um papel crítico na regulação do ciclo celular. O objetivo deste trabalho foi avaliar a frequência de perda de heterozigosidade no lócus 9p21 e a atividade proliferativa celular na carcinogênese bucal, assim como avaliar a possibilidade de utilização da citopatologia bucal como ferramenta para coleta e análise de DNA. Para tal finalidade foi realizada a coleta citopatológica de indivíduos que foram divididos nos seguintes grupos: controle (n=24), álcool-fumo (n=26), leucoplasia (n=13) e grupo carcinoma (n=14). A partir do raspado citológico foi confeccionada uma lâmina para impregnação por prata e análise de AgNOR. O restante das células foi utilizado para extração do DNA para amplificação por PCR e sequenciamento. Observamos que os parâmetros de AgNOR e a frequência de mutações no lócus 9p21 foram maiores nos grupos expostos aos carcinógenos e com lesões em relação ao controle, porém sem diferenças estatisticamente significativas. O DNA obtido mostrou-se satisfatório em relação à concentração e à pureza. Os pacientes que apresentavam mutação em 9p21 apresentaram também maior velocidade de proliferação em relação aos pacientes sem mutações, embora essa diferença não tenha sido estatisticamente significativa. Concluímos que a citopatologia é um método útil para avaliação da atividade proliferativa e de mutações genéticas em pacientes com risco para transformação maligna em relação ao câncer bucal. / The carcinogenesis in the oral cavity is a multistep process, with progressive changes on the cellular genome. Therefore, the development of cancer in the oral mucosa is often preceded by a potentially malignant lesion. The main risk factors for oral cancer are alcohol and tobacco intake. The current challenge is the search for biomarkers that demonstrate these early changes, so higher risk individuals to the development of oral cancer can be identified. One of the earliest changes in the carcinogenesis process is the enhancement of cell proliferative activity, usually caused by mutations in cell cycle control genes. The CDKN2A gene, located in the 9p21 locus, is a commonly mutated gene in human cancers and encodes the p16 protein, which plays a critical role in cell cycle regulation. The objective of this study was to evaluate the frequency of loss of heterozygosity in the 9p21 locus and the cell proliferative activity in oral carcinogenesis. Moreover, to assess the possibility of using oral cytology as a tool for collecting and analyzing DNA. For this purpose was held cytopathologic collection of patients who were divided into the following groups: control (n=24), alcohol-smoking (n=26), leukoplakia (n=13) and carcinoma group (n= 4). From the cytology brush was made a slide for silver impregnation and AgNOR analysis. The remaining cells were used for DNA extraction, followed by PCR amplification and sequencing. We observed that the AgNOR parameters and the frequency of 9p21 locus mutations were higher in the groups exposed to carcinogens and injuries in the control, however without statistically significant differences. The DNA obtained was satisfactory in respect of concentration and purity. The patients with mutation in 9p21 also showed increased speed proliferation compared to patients without mutations, although this difference was not statistically significant. We conclude that the cytopathology is a useful method to evaluate the proliferative activity and gene mutations in patients with risk for malignant transformation to oral cancer.

A carcinogênese na cavidade bucal é um processo de múltiplas etapas, apresentando alterações progressivas sobre o genoma celular. Portanto, o desenvolvimento do câncer na mucosa bucal muitas vezes é precedido por uma lesão potencialmente maligna. Os principais fatores de risco para o câncer bucal são o consumo de álcool e tabaco. O desafio atual é a busca de biomarcadores que demonstrem essas alterações precocemente, para que possam ser identificados os indivíduos de maior risco para o desenvolvimento do câncer bucal. Uma das primeiras alterações no processo de carcinogênese é o aumento da atividade proliferativa celular, geralmente causado por mutações nos genes que controlam o ciclo celular. O gene CDKN2A, localizado no lócus 9p21, é um gene comumente mutado nos cânceres humanos e codifica a proteína p16, que desempenha um papel crítico na regulação do ciclo celular. O objetivo deste trabalho foi avaliar a frequência de perda de heterozigosidade no lócus 9p21 e a atividade proliferativa celular na carcinogênese bucal, assim como avaliar a possibilidade de utilização da citopatologia bucal como ferramenta para coleta e análise de DNA. Para tal finalidade foi realizada a coleta citopatológica de indivíduos que foram divididos nos seguintes grupos: controle (n=24), álcool-fumo (n=26), leucoplasia (n=13) e grupo carcinoma (n=14). A partir do raspado citológico foi confeccionada uma lâmina para impregnação por prata e análise de AgNOR. O restante das células foi utilizado para extração do DNA para amplificação por PCR e sequenciamento. Observamos que os parâmetros de AgNOR e a frequência de mutações no lócus 9p21 foram maiores nos grupos expostos aos carcinógenos e com lesões em relação ao controle, porém sem diferenças estatisticamente significativas. O DNA obtido mostrou-se satisfatório em relação à concentração e à pureza. Os pacientes que apresentavam mutação em 9p21 apresentaram também maior velocidade de proliferação em relação aos pacientes sem mutações, embora essa diferença não tenha sido estatisticamente significativa. Concluímos que a citopatologia é um método útil para avaliação da atividade proliferativa e de mutações genéticas em pacientes com risco para transformação maligna em relação ao câncer bucal. / The carcinogenesis in the oral cavity is a multistep process, with progressive changes on the cellular genome. Therefore, the development of cancer in the oral mucosa is often preceded by a potentially malignant lesion. The main risk factors for oral cancer are alcohol and tobacco intake. The current challenge is the search for biomarkers that demonstrate these early changes, so higher risk individuals to the development of oral cancer can be identified. One of the earliest changes in the carcinogenesis process is the enhancement of cell proliferative activity, usually caused by mutations in cell cycle control genes. The CDKN2A gene, located in the 9p21 locus, is a commonly mutated gene in human cancers and encodes the p16 protein, which plays a critical role in cell cycle regulation. The objective of this study was to evaluate the frequency of loss of heterozygosity in the 9p21 locus and the cell proliferative activity in oral carcinogenesis. Moreover, to assess the possibility of using oral cytology as a tool for collecting and analyzing DNA. For this purpose was held cytopathologic collection of patients who were divided into the following groups: control (n=24), alcohol-smoking (n=26), leukoplakia (n=13) and carcinoma group (n= 4). From the cytology brush was made a slide for silver impregnation and AgNOR analysis. The remaining cells were used for DNA extraction, followed by PCR amplification and sequencing. We observed that the AgNOR parameters and the frequency of 9p21 locus mutations were higher in the groups exposed to carcinogens and injuries in the control, however without statistically significant differences. The DNA obtained was satisfactory in respect of concentration and purity. The patients with mutation in 9p21 also showed increased speed proliferation compared to patients without mutations, although this difference was not statistically significant. We conclude that the cytopathology is a useful method to evaluate the proliferative activity and gene mutations in patients with risk for malignant transformation to oral cancer.

A incidência dos tumores adrenocorticais na região sul do Brasil é 10-15 vezes maior que a incidência mundial. Mutações no gene supressor tumoral p53, localizado na região 17p13.1 têm sido identificadas em diversos tumores humanos. Uma distinta mutação germinativa, Arg337His, localizada no domínio de tetramerização da proteína supressora tumoral P53 foi identificada em 35 de 36 crianças da região sul do Brasil. No presente trabalho, investigamos a presença da mutação Arg337His em 71 pacientes não relacionados, 41 adultos e 30 crianças, portadores de tumores adrenocorticais benignos e malignos. Adicionalmente, análise de perda de heterozigose do locus p53, mapa de deleção do cromossomo 17 e instabilidade cromossômica foram estudados em DNA genômico destes pacientes. Nenhum dos pacientes estudados apresentava histórico familial compatível com a síndrome de Li-Fraumeni. Sequenciamento automático permitiu a identificação da mutação Arg337His, em DNA extraído a partir de sangue periférico e/ou tecido tumoral, em 29 (24 crianças e 5 adultos) dos 71 pacientes. Nas 10 famílias em que foi possível analisar o DNA genômico de ambos os pais verificamos que a mutação Arg337His tem caráter hereditário. Por outro lado, esta mutação não foi encontrada em DNA de 160 indivíduos do grupo controle, não relacionados, analisados por sequenciamento automático e/ou digestão enzimática. A análise pareada de DNA gênomico de sangue periférico e de tecido tumoral revelou perda de heterozigose para o locus p53 em 18 de 21 (86%) pacientes portadores da mutação Arg337His. Não observamos correlação entre a presença desta mutação e o comportamento maligno dos tumores. O estudo de dois marcadores polimórficos intragênicos do p53, pelo programa de análise de tamanho de fragmento GeneScan, evidenciou um mesmo haplótipo associado à mutação Arg337His em 91% dos pacientes com tumores adrenocorticais, configurando uma origem comum para esta mutação. O estudo de 6 marcadores polimórficos ao longo do cromossomo 17 (D17S926, VNTRP53, D17S1856, D17S942, D17S1351 e D17S928) em DNA genômico pareado de 29 pacientes demonstrou uma freqüência elevada (81%) de perda do cromossomo 17 em associação à mutação Arg337His. Não observamos correlação entre a perda do cromossomo 17 e a agressividade tumoral nestes pacientes. Instabilidade cromossômica envolvendo os cromossomos 2, 9 e 11 nos 17 pacientes que perderam o cromossomo 17 foi identificada em 47%, 47% e 71%, respectivamente. Perda dos cromossomos 2 e 11 foi evidenciada em tumores benignos e malignos. A perda do cromossomo 9 foi evidenciada exclusivamente nos tumores malignos, assim como a perda concomitante de 3 ou mais cromossomos. Em conclusão, confirmamos uma freqüência elevada da mutação Arg337His em crianças brasileiras com tumores adrenocorticais benignos e malignos. Esta mutação também foi encontrada no grupo de adultos, embora em menor freqüência. Não houve correlação entre sua presença e o comportamento maligno dos tumores adrenocorticais. Efeito fundador para a mutação Arg337His e inativação bialélica do p53, caracterizada pela presença da mutação Arg337His e a perda do cromossomo 17 foram demonstradas na maioria dos casos analisados. Finalmente, a instabilidade cromossômica envolvendo três ou mais cromossomos contribuiu para o diagnóstico de carcinoma adrenocortical / The incidence of adrenocortical tumors in the South region of Brazil is 10 to 15 times higher than the worldwide one. Mutations in the tumor suppressor p53 gene, located in chromosome 17p13.1, have been described in different human tumors. A germline mutation, Arg337His, in the tetramerization domain of the tumor suppressor P53 was identified in 35 of 36 children from the South region of Brazil. In the present study we have searched for Arg337His mutation in genomic DNA of 71 non-related patients, 41 adults and 30 children, with benign or malignant adrenocortical tumors. Additionally, we also analyzed the loss of heterozigosity of p53 locus, deletion mapping of chromosome 17 and chromosome instability, in genomic DNA of these patients. None of the patients had a familial history of Li-Fraumeni syndrome. Automatic sequencing identified the Arg337His mutation in genomic DNA from peripheral leukocytes and/or tumor tissues in 29 (24 children and 5 adults) of these 71 patients. In 10 families in which the study of both parent\'s DNA was possible, the Arg337His mutation was inherited from one of the parents. Sequencing analysis and/or enzymatic restriction showed that this mutation was not present in DNA of 160 non-related control subjects. Paired analysis of genomic DNA of peripheral leukocytes and tumor tissue revealed loss of heterozigosity of p53 locus in 18/21 (86%) patients with Arg337His mutation. There was no correlation between the presence of this mutation and the malignant behavior of these tumors. The study of two intragenic polymorphic markers of p53 through GeneScan software showed the association of the same haplotype with the Arg337His mutation in 91% of patients with adrenocortical tumors, indicating a common origin of this mutation. The study of 6 polymorphic markers along chromosome 17 (D17S926, VNTRP53, D17S1856, D17S942, D17S1351, D17S928) in paired genomic DNA of 29 patients showed an increased frequency (81%) of chromosome 17 loss in association with the presence of the Arg337His mutation. We did not observe any correlation between the loss of chromosome 17 and aggressive tumor behavior in these patients. In the 17 patients who lost chromosome 17, chromosome instability of chromosomes 2, 9 and 11 was identified in 47%, 47% e 71%, respectively. Loss of chromosomes 2 and 11 was observed in benign and malignant tumors, whereas the loss of chromosome 9 was observed exclusively on malignant tumors. Similarly, the concomitant loss of 3 or more chromosomes was only observed in malignant tumors. In conclusion we confirmed an increased frequency of Arg337His mutation in Brazilian children with benign or malignant adrenocortical tumors. This mutation was also found in the adult group, although at a lower frequency. There was no correlation between the presence of the mutation and the malignant behavior of adrenocortical tumor. We demonstrated a founder effect for this mutation and also a biallelic inactivation of p53 characterized by the presence of the Arg337His mutation and the loss of chromosome 17 in most of the cases studied. Finally, chromosome instability involving 3 or more chromosomes contributed for the diagnosis of adrenocortical carcinoma in these

O câncer bucal é uma doença que afeta principalmente homens acima de 40 anos com hábito de fumar e beber. Em geral, esses pacientes têm o diagnóstico da enfermidade realizado tardiamente, acarretando tratamentos complexos, mutilantes e de alto custo tanto financeiro como social e de prognóstico sombrio a ponto do câncer bucal apresentar uma taxa de sobrevida em 5 anos inferior a 50%. O diagnóstico precoce representa uma alternativa importante para alterar esse panorama. Os recursos de que os profissionais da área da saúde, principalmente os cirurgiões-dentistas, dispõem são o diagnóstico clínico de lesões estabelecidas acompanhado da biópsia com exame histopatológico.Outra alternativa para o diagnóstico precoce dos carcinomas espinocelulares ocorre quando estes são precedidos de lesões cancerizáveis. Nas duas últimas décadas, a utilização da citopatologia como método de diagnóstico de danos celulares prévios ao aparecimento de lesões clínicas possibilitou sua utilização em mucosa bucal. Os estudos apresentados tratam especificamente desta aplicação clínica, abordando: a) os aspectos genéticos do câncer bucal; b) a correlação histocitopatológica de lesões cancerizáveis em câncer bucal e na mucosa normal exposta aos carcinógenos; c) a validação das amostras citopatológicas; d) a padronização da técnica de extração de DNA em células esfoliadas da mucosa bucal. / Oral cancer affects mainly men over 40 years who are exposed to tobacco and alcohol. These patients usually receive a late diagnosis, which results in complex, mutilating treatments with high financial and social costs, poor prognosis, and, therefore, a 5-year survival rate lower than 50%. Early diagnosis is critical to change this situation. The resources currently available to healthcare professionals, particularly dentists, are the clinical diagnosis of lesions and biopsies for histopathologic examination. Another alternative for the early diagnosis of squamous cell carcinomas is the identification of precursor lesions. In the last two decades, cytopathology has been used as a method to diagnose cell damage that precedes the appearance of clinical lesions, and this use can be extended to the oral mucosa. The studies reported here deal specifically with this clinical application, and discuss: A) the genetic factors in oral cancer; B) the cytohistologic correlation of cancer precursor lesions and the normal mucosa exposed to carcinogens; C) the validation of cytopathologic samples; D) the standardization of the technique to extract DNA of cells exfoliated from the oral mucosa.

O câncer bucal é uma doença que afeta principalmente homens acima de 40 anos com hábito de fumar e beber. Em geral, esses pacientes têm o diagnóstico da enfermidade realizado tardiamente, acarretando tratamentos complexos, mutilantes e de alto custo tanto financeiro como social e de prognóstico sombrio a ponto do câncer bucal apresentar uma taxa de sobrevida em 5 anos inferior a 50%. O diagnóstico precoce representa uma alternativa importante para alterar esse panorama. Os recursos de que os profissionais da área da saúde, principalmente os cirurgiões-dentistas, dispõem são o diagnóstico clínico de lesões estabelecidas acompanhado da biópsia com exame histopatológico.Outra alternativa para o diagnóstico precoce dos carcinomas espinocelulares ocorre quando estes são precedidos de lesões cancerizáveis. Nas duas últimas décadas, a utilização da citopatologia como método de diagnóstico de danos celulares prévios ao aparecimento de lesões clínicas possibilitou sua utilização em mucosa bucal. Os estudos apresentados tratam especificamente desta aplicação clínica, abordando: a) os aspectos genéticos do câncer bucal; b) a correlação histocitopatológica de lesões cancerizáveis em câncer bucal e na mucosa normal exposta aos carcinógenos; c) a validação das amostras citopatológicas; d) a padronização da técnica de extração de DNA em células esfoliadas da mucosa bucal. / Oral cancer affects mainly men over 40 years who are exposed to tobacco and alcohol. These patients usually receive a late diagnosis, which results in complex, mutilating treatments with high financial and social costs, poor prognosis, and, therefore, a 5-year survival rate lower than 50%. Early diagnosis is critical to change this situation. The resources currently available to healthcare professionals, particularly dentists, are the clinical diagnosis of lesions and biopsies for histopathologic examination. Another alternative for the early diagnosis of squamous cell carcinomas is the identification of precursor lesions. In the last two decades, cytopathology has been used as a method to diagnose cell damage that precedes the appearance of clinical lesions, and this use can be extended to the oral mucosa. The studies reported here deal specifically with this clinical application, and discuss: A) the genetic factors in oral cancer; B) the cytohistologic correlation of cancer precursor lesions and the normal mucosa exposed to carcinogens; C) the validation of cytopathologic samples; D) the standardization of the technique to extract DNA of cells exfoliated from the oral mucosa.