Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-26Bitstream added on 2014-06-13T20:38:46Z : No. of bitstreams: 1 martins_fsc_me_botfm.pdf: 203779 bytes, checksum: ffa2d7231e5b5a3d8f579954a343ca88 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Na prática clínica, muitas vezes observam-se situações de hemorragia aguda em pacientes submetidos a cirurgias que normalmente não apresentariam grandes perdas sangüíneas, fazendo com que a reposição dessa perda não seja imediata, tanto com solução cristalóide, como com colóide, ou mesmo com sangue. Quais as reais conseqüências para o rim trazidas por essa situação? O objetivo desta pesquisa foi avaliar a histologia do rim de rato normotérmico e anestesiado com sevoflurano, em situação de hemorragia aguda e reposição com solução de Ringer sem lactato e hidroxietilamido 130/0,4. Quatro grupos de ratos Wistar (n=10) anestesiados com sevoflurano, recebendo solução de Ringer sem lactato, 7 mL/kg/h, três dos quais foram submetidos à hemorragia de 30% da volemia (três etapas de retirada de 10% com 10 min de intervalo): G1 - ratos sem reposição do sangue retirado; G2 - reposição com solução de Ringer sem lactato, em proporção de reposição de 3:1 de sangue retirado; G3 - reposição com solução de hidroxietilamido (HEA) 130/0,4, em proporção de 1:1 de sangue retirado; G4 - (sham) - ratos que não foram submetidos à hemorragia. Estudaram-se a pressão arterial média, a temperatura retal e o hematócrito, nos seguintes momentos: M1 – momento que correspondeu ao tempo em que ocorreu a 1a sangria; M2 - 40 min após a 1a sangria e 20 min após a 3a sangria; M3 – 50 min após a 3a sangria, quando os ratos foram sacrificados e foi realizada nefrectomia bilateral para análise histológica dos rins. A temperatura manteve-se estável durante todo o experimento em todos os grupos. Quanto ao hematócrito, em M1 e M2 os grupos foram iguais e, em M3, (G1=G4)>G3>G2. Quanto à pressão arterial média, em M1os grupos foram iguais, em M2, G4 > (G1 = G2 = G3) e, em M3, (G3 = G4) > G2 > G1. Na análise histológica... / In clinical practice, situations of acute hemorrhage are many times observed in patients submitted to surgeries that would normally not present great blood loss, and the replacement for such loss is not immediate, even when using crystalloid solutions, such as colloid, or blood. What are the real consequences to the kidney resulting from this situation? This study aimed at evaluating the histology of the kidney in normothermic rats anesthetized with sevoflurane, in a situation of acute hemorrhage and replacement with Ringer solution without lactate and hydroxyethylamide 130/0.4. Four groups of Wistar rats (n=10) anesthetized with sevoflurane and receiving Ringer solution without lactate, 7 mL/kg/h, were used. Three of these were submitted to hemorrhage of 30% of volemia (three phases for removal of 10% with a 10-min interval): G1 – rats without replacement of the removed blood; G2 – replacement with Ringer solution without lactate, following a replacement proportion of 3:1 of removed blood; G3 – replacement with hydroxyethylamide (HEA) 130/0.4, in a proportion of 1:1 of the removed blood; G4 - (sham) – rats that were not submitted to hemorrhage. Mean arterial pressure, rectal temperature and hematocrits were studied at the following moments: M1 - moment that corresponded to the time when the 1st bleeding occurred; M2 - 40 min after the 1st bleeding and 20 min after the 3rd bleeding; M3 - 50 min after the 3rd bleeding, when the rats were euthanized and bilateral nephrectomy was performed for histological analysis of the kidneys. Temperature was kept stable during the whole experiment in all groups. Concerning hematocrits, in M1 and M2, the groups were similar, and in M3, (G1 = G4) > G3 > G2. As regards mean arterial pressure... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Yara Marcondes Machado Castiglia / Banca: Rosa Beatriz Amorim / Banca: Marco Aurélio Marangoni / Resumo: Na prática clínica, muitas vezes observam-se situações de hemorragia aguda em pacientes submetidos a cirurgias que normalmente não apresentariam grandes perdas sangüíneas, fazendo com que a reposição dessa perda não seja imediata, tanto com solução cristalóide, como com colóide, ou mesmo com sangue. Quais as reais conseqüências para o rim trazidas por essa situação? O objetivo desta pesquisa foi avaliar a histologia do rim de rato normotérmico e anestesiado com sevoflurano, em situação de hemorragia aguda e reposição com solução de Ringer sem lactato e hidroxietilamido 130/0,4. Quatro grupos de ratos Wistar (n=10) anestesiados com sevoflurano, recebendo solução de Ringer sem lactato, 7 mL/kg/h, três dos quais foram submetidos à hemorragia de 30% da volemia (três etapas de retirada de 10% com 10 min de intervalo): G1 - ratos sem reposição do sangue retirado; G2 - reposição com solução de Ringer sem lactato, em proporção de reposição de 3:1 de sangue retirado; G3 - reposição com solução de hidroxietilamido (HEA) 130/0,4, em proporção de 1:1 de sangue retirado; G4 - (sham) - ratos que não foram submetidos à hemorragia. Estudaram-se a pressão arterial média, a temperatura retal e o hematócrito, nos seguintes momentos: M1 - momento que correspondeu ao tempo em que ocorreu a 1a sangria; M2 - 40 min após a 1a sangria e 20 min após a 3a sangria; M3 - 50 min após a 3a sangria, quando os ratos foram sacrificados e foi realizada nefrectomia bilateral para análise histológica dos rins. A temperatura manteve-se estável durante todo o experimento em todos os grupos. Quanto ao hematócrito, em M1 e M2 os grupos foram iguais e, em M3, (G1=G4)>G3>G2. Quanto à pressão arterial média, em M1os grupos foram iguais, em M2, G4 > (G1 = G2 = G3) e, em M3, (G3 = G4) > G2 > G1. Na análise histológica... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In clinical practice, situations of acute hemorrhage are many times observed in patients submitted to surgeries that would normally not present great blood loss, and the replacement for such loss is not immediate, even when using crystalloid solutions, such as colloid, or blood. What are the real consequences to the kidney resulting from this situation? This study aimed at evaluating the histology of the kidney in normothermic rats anesthetized with sevoflurane, in a situation of acute hemorrhage and replacement with Ringer solution without lactate and hydroxyethylamide 130/0.4. Four groups of Wistar rats (n=10) anesthetized with sevoflurane and receiving Ringer solution without lactate, 7 mL/kg/h, were used. Three of these were submitted to hemorrhage of 30% of volemia (three phases for removal of 10% with a 10-min interval): G1 - rats without replacement of the removed blood; G2 - replacement with Ringer solution without lactate, following a replacement proportion of 3:1 of removed blood; G3 - replacement with hydroxyethylamide (HEA) 130/0.4, in a proportion of 1:1 of the removed blood; G4 - (sham) - rats that were not submitted to hemorrhage. Mean arterial pressure, rectal temperature and hematocrits were studied at the following moments: M1 - moment that corresponded to the time when the 1st bleeding occurred; M2 - 40 min after the 1st bleeding and 20 min after the 3rd bleeding; M3 - 50 min after the 3rd bleeding, when the rats were euthanized and bilateral nephrectomy was performed for histological analysis of the kidneys. Temperature was kept stable during the whole experiment in all groups. Concerning hematocrits, in M1 and M2, the groups were similar, and in M3, (G1 = G4) > G3 > G2. As regards mean arterial pressure... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A osteorradionecrose é uma séria e debilitante consequência da radioterapia da cabeça e pescoço, definida como uma área óssea que não sofre reparação após a irradiação. O objetivo deste trabalho foi analisar o efeito in vivo da presença de células mesenquimais da medula óssea carreadas em gel em defeitos provocados na calvária de ratos submetidos a um modelo experimental de osteorradionecrose. Foi realizada a obtenção de células osteoblásticas da medula óssea de ratos cultivadas in vitro e devidamente caracterizadas quanto ao seu fenótipo por meio de ensaios bioquímicos como proliferação celular, atividade de fosfatase alcalina e sua detecção in situ, além da detecção e quantificação de nódulos mineralizados. Posteriormente, ratos wistar foram submetidos ao protocolo de osteorradionecrose (irradiação com 20 Gy em dose única) e pareados com controles para em seguida serem realizados defeitos nas calvárias para inserção de células osteoblásticas da medula óssea previamente cultivadas in vitro juntamente com gel carreador e realizada a sutura. Os animais foram divididos em 4 grupos: controle (C), controle + células osteoblásticas (CC); osteorradionecrose (IR) osteorradionecrose + células osteoblásticas (IRc). Ao final de 4 semanas os animais foram sacrificados e realizados os seguintes ensaios: (1) análise histológica com base em cortes histológicos descalcificados (2) análise tomográfica por meio de micro-CT dos defeitos previamente criados. Os dados obtidos foram submetidos ao teste de normalidade e posteriormente à análise estatística para p<0,05. As células mesenquimais derivadas da medula óssea apresentaram fenótipo característico de células osteoblásticas após serem cultivadas em meio osteogênico, com aumento da proliferação, atividade de fosfatase alcalina e formação de nódulos mineralizados quando comparado com as células cultivadas em meio basal. A análise qualitativa dos cortes histológicos corados em hematoxilina-eosina e tricrômico de Masson demonstrou maior neoformação óssea no grupo IRc quando comparado ao grupo IR e similar ao grupos controles. A análise tomográfica revelou um aumento na espessura trabecular, densidade de conectividade, número trabecular e superfície óssea no grupo IRc em relação ao grupo IR. Os resultados sugerem que a inserção de células mesenquimais diferenciadas em osteoblastos favorece a neoformação de defeitos ósseos na presença de osteorradionecrose. / Osteoradionecrosis is a serious and debilitating consequence of head and neck radiotherapy, defined as a bone area that does not repair after irradiation. The purpose of this investigation was to analyze in vivo the presence of mesenchymal cells from bone marrow in calvariae defects of rats submitted to osteoradionecrosis. Cells were collected from rat femur bone marrow to perform characterization of osteoblastic phenotype by means of biochemical assays such as cell proliferation, alkaline phosphatase activity and its in situ detection and mineralization. Afterwards, male wistar rats were submitted to osteoradionecrosis protocol (20 Gy in a single dose) and paired with control animals. After 30 days, there were performed calvariae defects and placement of osteoblastic cells previously cultured with a gel vehicle inside the defects, which were sutured properly. The animals were divided in 4 groups: control (C), control + osteoblastic cells (CC), osteoradionecrosis (IR) osteoradionecrosis + osteoblastic cells (Irc). After 30 days, the animals were euthanized to perform the following analysis: (1) Histological evaluation by means of decalcified slide sections stained with hematoxilin-eosin and Masson trichrome; (2) Tomographic evaluation by means of adequate parameters. Data obtained were submitted to normality test and statistical analysis for p<0,05. The mesenchymal cells from bone marrow presented osteoblastic phenotype after being cultured in osteogenic medium, with higher ALP detection and activity, as well as an increase of mineralized nodules when compared to cells cultured in basal medium. Histological analysis showed that irradiation impaired bone neoformation and affected bone marrow composition, as well as the presence of osteoblasts and osteocytes. On the other hand, cell therapy in group IRc improved bone neoformation when compared to group IR, showing similarity to control groups. Tomographic analysis revealed an increase in trabecular thickness, density of connectivity, trabecular number and bone surface when compared to group IR. The results suggest that the placement of mesenchymal cells differentiated in osteoblasts may improve bone neoformation of defects created after the onset of osteoradionecrosis.

A reparação óssea é um fator crítico para o sucesso de procedimentos odontológicos e ortopédicos que necessitem do corte ósseo, sendo desejado que esta ocorra de forma rápida e eficaz. Uma maior compreensão da reparação óssea em um nível estrutural e molecular é o primeiro passo para o desenvolvimento de técnicas de corte e terapias regenerativas. Neste contexto, a técnica de FTIR possibilita obter informações sobre a estrutura e composição de tecido mineralizado. O principal objetivo deste projeto foi verificar a eficácia da espectroscopia FTIR na caracterização de diferentes estágios da reparação óssea após a realização de remoção óssea utilizando duas ferramentas de corte: o laser de Er,Cr:YSGG ou uma broca carbide multilaminada, em alta rotação. Foi realizada a remoção de dois fragmentos ósseos da mandíbula de 30 coelhos, e o processo de reparação óssea foi estudado imediatamente, 3, 7, 15, 21, e 28 dias após o procedimento cirúrgico. Utilizou-se a técnica de espectroscopia FTIR para a aquisição das imagens espectrais dos diferentes estágios de reparação, e foi analisada a proporção entre os compostos do tecido utilizando as bandas de amidas, colágeno, carbonato e fosfato dos espectros de absorção. Também foi realizada a análise histológica dos mesmos estágios de reparação estudados. A técnica de espectroscopia FTIR se mostrou eficaz na caracterização do processo de reparação óssea. Observou-se uma tendência de aumento na proporção de compostos orgânicos até o Grupo 15D, após o qual houve aumento na proporção de compostos inorgânicos indicando maior mineralização após este período. Os resultados da análise histológica mostraram diferenças nos primeiros estágios de reparação entre o corte ósseo com o laser de Er,Cr:YSGG e a broca em alta rotação. Essas diferenças não foram detectadas na espectroscopia FTIR com as técnicas de análise utilizadas. Ainda assim, os resultados obtidos mostraram que a técnica de espectroscopia FTIR foi sensível às alterações de conteúdo orgânico no processo de reparação do tecido ósseo, podendo auxiliar com o desenvolvimento de novas técnicas e ferramentas para melhorar a eficiência deste processo. / Bone repair is a critical factor for the success of surgical procedures that require bone cut, and it is desired that it takes place quickly and effectively. The first step for the development of cutting techniques and regenerative therapies is a better understanding of bone repair in structural and molecular level. In this context, the FTIR technique allows one to obtain different information about the structure and composition of mineralized tissue. The main purpose of this project was to verify the effectiveness of FTIR spectroscopy in the characterization of different stages of bone healing process after the removal of a bone piece using two cutting tools: the Er,Cr:YSGG laser or a multilayered carbide bur at high rpm. Two jaw bone fragments were removed from 30 rabbits, and the process of bone repair was studied immediately, 3, 7, 15, 21, and 28 days after the surgery. The FTIR spectroscopy technique was used to acquire the spectral images of different stages of bone healing process, and the ratio of the bone compounds was analyzed using the bands of amide, collagen, carbonate and phosphate of the absorption spectra. Histological analysis was also performed to study the stages of bone repair. The FTIR technique was effective in characterizing the healing process. There was a trend between the proportions of organic and inorganic compounds that were comparable to the one observed in the histological analysis, showing that the FTIR technique is sensitive to changes that occur during the formation of new bone tissue. The results of the histological analysis showed differences in the early stages of bone repair between the cut with the Er,Cr:YSGG laser and the drill. These differences were not detected in FTIR spectroscopy with the used technique. Still, the results show that the FTIR technique is sensitive to changes in the organic content of bone tissue repair process, and it could corroborate to the development of new techniques and tools that improves the efficiency of this process.

Visando avaliar a atuação dos biorreguladores beta-NOA, AIB e GA3 na morfogênese de microplantas de abacaxi Ananas comosus L. (Merrill) cultivar IAC Gomo-de-Mel estabeleceu-se um experimento com a presença isolada e/ou combinada dos respectivos biorreguladores ao meio de cultura MS. As microplantas foram mantidas em condições de cultura in vitro, com temperatura, luminosidade e fotoperíodo controlados (25 ± 2 C, irradiância de 42 µmol.m-2s-1 e 16 horas, respectivamente) durante 3 meses. Os resultados obtidos com a análise de variância evidenciaram que houve interação do biorregulador de crescimento e o tempo de cultivo para a altura, número de raiz e número de folhas. O beta-NOA induziu a rizogênese foliar nas microplantas a partir de células da bainha do feixe vascular e não apresentou toxicidade nas concentrações utilizadas, ao passo que o AIB mostrou-se mais eficaz para a indução da rizogênese adventícia caulinar. Em relação ao crescimento das microplantas, a ação tanto isolada, como combinada em ambas as concentrações avaliadas de GA3 foram mais eficientes. As análises histológicas evidenciaram alterações no número de estratos da epiderme, hipoderme e mesofilo das folhas cultivadas nos tratamentos com biorreguladores, porém não se verificou alterações citológicas em nenhum dos tratamentos. Acredita-se que a utilização de pulsing seja uma alternativa eficaz para a rizogênese e crescimento em altura das microplantas de abacaxizeiro Gomo-de-mel. / In order to evaluate the action of bioregulators beta-NOA, IBA and GA3 in the pineapple Ananas comosus L. (Merril) cultivar IAC gomo-de-mel microplants morphogenesis an experiment was stablished in order to the presence of the bioregulator alone and in combinations. The microplants were kept in culture in vitro conditions, during 3 months under controlled temperature, light and photoperiod (25 ± 2 C, irradiance de 42 µmol.m- 2s-1 e 16 hours). The analysis of variance showed the interaction interaction between the use of bioregulator and the period of cultivation on hight, number of roots and leaves. The beta-NOA induced leaf rhizogensis in the microplants from the bundle sheath and there was no sign of toxicity with the used concentrations. The IBA showed to be more effective in the adventicious steam rhizogenesis. The isolated and combinated actions of GA3 were the most effective treatment to microplants growing. The histological analysis showed alterations on the epidermis, hypodermis and mesophyll number of layers of the cultivated leaves with this bioregulator, but neither of the treatments showed citological alterations. It is believed that the use of pulsing would be an effective alternative for the rhizogenesis and growing of the gomo de mel pineapple microplants.

A reparação óssea é um fator crítico para o sucesso de procedimentos odontológicos e ortopédicos que necessitem do corte ósseo, sendo desejado que esta ocorra de forma rápida e eficaz. Uma maior compreensão da reparação óssea em um nível estrutural e molecular é o primeiro passo para o desenvolvimento de técnicas de corte e terapias regenerativas. Neste contexto, a técnica de FTIR possibilita obter informações sobre a estrutura e composição de tecido mineralizado. O principal objetivo deste projeto foi verificar a eficácia da espectroscopia FTIR na caracterização de diferentes estágios da reparação óssea após a realização de remoção óssea utilizando duas ferramentas de corte: o laser de Er,Cr:YSGG ou uma broca carbide multilaminada, em alta rotação. Foi realizada a remoção de dois fragmentos ósseos da mandíbula de 30 coelhos, e o processo de reparação óssea foi estudado imediatamente, 3, 7, 15, 21, e 28 dias após o procedimento cirúrgico. Utilizou-se a técnica de espectroscopia FTIR para a aquisição das imagens espectrais dos diferentes estágios de reparação, e foi analisada a proporção entre os compostos do tecido utilizando as bandas de amidas, colágeno, carbonato e fosfato dos espectros de absorção. Também foi realizada a análise histológica dos mesmos estágios de reparação estudados. A técnica de espectroscopia FTIR se mostrou eficaz na caracterização do processo de reparação óssea. Observou-se uma tendência de aumento na proporção de compostos orgânicos até o Grupo 15D, após o qual houve aumento na proporção de compostos inorgânicos indicando maior mineralização após este período. Os resultados da análise histológica mostraram diferenças nos primeiros estágios de reparação entre o corte ósseo com o laser de Er,Cr:YSGG e a broca em alta rotação. Essas diferenças não foram detectadas na espectroscopia FTIR com as técnicas de análise utilizadas. Ainda assim, os resultados obtidos mostraram que a técnica de espectroscopia FTIR foi sensível às alterações de conteúdo orgânico no processo de reparação do tecido ósseo, podendo auxiliar com o desenvolvimento de novas técnicas e ferramentas para melhorar a eficiência deste processo. / Bone repair is a critical factor for the success of surgical procedures that require bone cut, and it is desired that it takes place quickly and effectively. The first step for the development of cutting techniques and regenerative therapies is a better understanding of bone repair in structural and molecular level. In this context, the FTIR technique allows one to obtain different information about the structure and composition of mineralized tissue. The main purpose of this project was to verify the effectiveness of FTIR spectroscopy in the characterization of different stages of bone healing process after the removal of a bone piece using two cutting tools: the Er,Cr:YSGG laser or a multilayered carbide bur at high rpm. Two jaw bone fragments were removed from 30 rabbits, and the process of bone repair was studied immediately, 3, 7, 15, 21, and 28 days after the surgery. The FTIR spectroscopy technique was used to acquire the spectral images of different stages of bone healing process, and the ratio of the bone compounds was analyzed using the bands of amide, collagen, carbonate and phosphate of the absorption spectra. Histological analysis was also performed to study the stages of bone repair. The FTIR technique was effective in characterizing the healing process. There was a trend between the proportions of organic and inorganic compounds that were comparable to the one observed in the histological analysis, showing that the FTIR technique is sensitive to changes that occur during the formation of new bone tissue. The results of the histological analysis showed differences in the early stages of bone repair between the cut with the Er,Cr:YSGG laser and the drill. These differences were not detected in FTIR spectroscopy with the used technique. Still, the results show that the FTIR technique is sensitive to changes in the organic content of bone tissue repair process, and it could corroborate to the development of new techniques and tools that improves the efficiency of this process.

ABBREVIATION E – strength of electric field τ – pulse duration HV – high voltage, short pulses LV – low voltage, long pulses MEM - Minimum Essential Medium S – MEM - Spinner Minimum Essential medium LISPB – low ionic strength pulsing buffer ECT – electrochemotherapy LLC – Lewis Lung Carcinoma DC-3F – Chinese hamster lung fibroblastocites LPB – fibrosarkoma cell line BLM – bleomycin CPA – cyclophosphamide LY – Lucifer Yellow 1. INTRODUCTION The delivery of appropriate short and intense electric pulses to living cells, either in suspension or in tissue, results in a transient and reversible alteration of their cell membrane [Mir et al., 1995; Neumann et al., 1989]. The concept widely accepted is that under influence of strong external electric field the potential difference on the cell membrane occurs [Bernhardt and Pauly, 1973]. As a result of it the nanosize transient aqueous pores in the plasma membrane are created [Abidor et al, 1979, Leikin et al., 1986]. The process is called electroporation and initiated pores are named electropores [Neumann et al., 1989]. It is proposed that at higher field strength and pulse duration more and larger pores are initiated [Glaser et al., 1988]. At the tolerant pulse intensities the resealing of pores takes place and membrane came back to the previous state. The process is called reversible electroporation - REP [Weaver and Chizmadzhev, 1966]. Resealing of pores is in a range of milliseconds - minutes and often is... [to full text]

A osteorradionecrose é uma séria e debilitante consequência da radioterapia da cabeça e pescoço, definida como uma área óssea que não sofre reparação após a irradiação. O objetivo deste trabalho foi analisar o efeito in vivo da presença de células mesenquimais da medula óssea carreadas em gel em defeitos provocados na calvária de ratos submetidos a um modelo experimental de osteorradionecrose. Foi realizada a obtenção de células osteoblásticas da medula óssea de ratos cultivadas in vitro e devidamente caracterizadas quanto ao seu fenótipo por meio de ensaios bioquímicos como proliferação celular, atividade de fosfatase alcalina e sua detecção in situ, além da detecção e quantificação de nódulos mineralizados. Posteriormente, ratos wistar foram submetidos ao protocolo de osteorradionecrose (irradiação com 20 Gy em dose única) e pareados com controles para em seguida serem realizados defeitos nas calvárias para inserção de células osteoblásticas da medula óssea previamente cultivadas in vitro juntamente com gel carreador e realizada a sutura. Os animais foram divididos em 4 grupos: controle (C), controle + células osteoblásticas (CC); osteorradionecrose (IR) osteorradionecrose + células osteoblásticas (IRc). Ao final de 4 semanas os animais foram sacrificados e realizados os seguintes ensaios: (1) análise histológica com base em cortes histológicos descalcificados (2) análise tomográfica por meio de micro-CT dos defeitos previamente criados. Os dados obtidos foram submetidos ao teste de normalidade e posteriormente à análise estatística para p<0,05. As células mesenquimais derivadas da medula óssea apresentaram fenótipo característico de células osteoblásticas após serem cultivadas em meio osteogênico, com aumento da proliferação, atividade de fosfatase alcalina e formação de nódulos mineralizados quando comparado com as células cultivadas em meio basal. A análise qualitativa dos cortes histológicos corados em hematoxilina-eosina e tricrômico de Masson demonstrou maior neoformação óssea no grupo IRc quando comparado ao grupo IR e similar ao grupos controles. A análise tomográfica revelou um aumento na espessura trabecular, densidade de conectividade, número trabecular e superfície óssea no grupo IRc em relação ao grupo IR. Os resultados sugerem que a inserção de células mesenquimais diferenciadas em osteoblastos favorece a neoformação de defeitos ósseos na presença de osteorradionecrose. / Osteoradionecrosis is a serious and debilitating consequence of head and neck radiotherapy, defined as a bone area that does not repair after irradiation. The purpose of this investigation was to analyze in vivo the presence of mesenchymal cells from bone marrow in calvariae defects of rats submitted to osteoradionecrosis. Cells were collected from rat femur bone marrow to perform characterization of osteoblastic phenotype by means of biochemical assays such as cell proliferation, alkaline phosphatase activity and its in situ detection and mineralization. Afterwards, male wistar rats were submitted to osteoradionecrosis protocol (20 Gy in a single dose) and paired with control animals. After 30 days, there were performed calvariae defects and placement of osteoblastic cells previously cultured with a gel vehicle inside the defects, which were sutured properly. The animals were divided in 4 groups: control (C), control + osteoblastic cells (CC), osteoradionecrosis (IR) osteoradionecrosis + osteoblastic cells (Irc). After 30 days, the animals were euthanized to perform the following analysis: (1) Histological evaluation by means of decalcified slide sections stained with hematoxilin-eosin and Masson trichrome; (2) Tomographic evaluation by means of adequate parameters. Data obtained were submitted to normality test and statistical analysis for p<0,05. The mesenchymal cells from bone marrow presented osteoblastic phenotype after being cultured in osteogenic medium, with higher ALP detection and activity, as well as an increase of mineralized nodules when compared to cells cultured in basal medium. Histological analysis showed that irradiation impaired bone neoformation and affected bone marrow composition, as well as the presence of osteoblasts and osteocytes. On the other hand, cell therapy in group IRc improved bone neoformation when compared to group IR, showing similarity to control groups. Tomographic analysis revealed an increase in trabecular thickness, density of connectivity, trabecular number and bone surface when compared to group IR. The results suggest that the placement of mesenchymal cells differentiated in osteoblasts may improve bone neoformation of defects created after the onset of osteoradionecrosis.

O diagnóstico de cirrose em pacientes portadores de hepatopatia crônica é fundamental para o manejo dos pacientes. Estudos demonstraram que o uso de sinais clínicos, laboratoriais e/ou ultra-sonográficos subestimam a presença de cirrose. Através do diagnóstico histológico exclusivo também é possível subestimar a presença de cirrose em até 32% dos casos. Avaliar o valor da laparoscopia no diagnóstico da cirrose hepática e a segurança deste procedimento: a)medir a taxa de acréscimo no diagnóstico de cirrose proporcionada pela laparoscopia. b)determinar a concordância inter-observador no diagnóstico macroscópico de cirrose pela laparoscopia. c)determinar a influência do tamanho do fragmento obtido na biópsia hepática laparoscópica no diagnóstico de cirrose. d)descrever a prevalência das principais complicações da laparoscopia e biópsia hepática laparoscópica. Foram incluídos pacientes portadores de hepatite crônica submetidos à biópsia hepática laparoscópica. As laparoscopias foram realizadas com sedação consciente e a biópsia hepática feita com agulha 14G. Dois examinadores independentes, sem conhecimento dos dados dos pacientes, definiram a conclusão da laparoscopia em 4 classes: normal, aspecto inespecífico, hepatopatia crônica e cirrose hepática. O diagnóstico histológico de cirrose foi definido pela presença de fibrose &#8805; 5 pela classificação de Ishak, por um patologista, sem o conhecimento dos dados dos pacientes. Foram determinados valores de sensibilidade, especificidade, acurácia, valor preditivo positivo (VPP) e negativo (VPN) da laparoscopia e histologia no diagnóstico da cirrose hepática. Foram incluídos 84 pacientes, 55% do sexo masculino, 85% portadores de hepatite crônica C e média de idade de 47 11 anos. A média do tamanho do fragmento de biópsia foi de 2,9 1,0 cm e do número de espaços-porta foi de 12 5. Em comparação com o diagnóstico histológico, a análise do aspecto macroscópico por laparoscopia mostrou sensibilidade de 71% x 89%, valor preditivo negativo de 83% x 92%, e acurácia de 88% x 95%. O índice de concordância Kappa no diagnóstico de cirrose hepática na laparoscopia entre os dois examinadores foi de 0,80. Os pacientes cirróticos apresentaram amostras mais fragmentadas (p = 0,048) e maiores (p = 0,05). Já os portadores de fibrose leve na histologia (F0-F2) apresentaram menor quantidade de espaços-porta (8 4 x 13 4 p< 0,001) e fragmentos menores (p = 0,036) em comparação com os portadores de fibrose moderada e grave (F3-F6). Não houve complicações precoces da laparoscopia. O sangramento no sítio da biópsia hepática foi a única complicação observada em 6% dos pacientes. Tivemos 9,6% de complicações tardias, diretamente relacionadas à laparoscopia e ao surto de micobacteriose atípica que acometeu o estado do Rio de Janeiro durante o estudo. Houve acréscimo de 5% proporcionado pela visão laparoscópica ao diagnóstico de cirrose obtido pela histologia, porém o fragmento hepático tem grande influência no estadiamento da fibrose, com fragmentos maiores favorecendo a histologia. A concordância inter-observador no diagnóstico macroscópico de cirrose pela laparoscopia foi excelente. A biópsia hepática laparoscópica é um procedimento seguro. / The diagnosis of hepatic cirrhosis is very important in the management of patients with chronic liver diseases. Retrospective series reported percutaneous liver biopsy to miss cirrhosis in about 30%. The aim of this study was to compare the accuracy of liver descriptions made during laparoscopy with liver histology found by laparoscopic biopsy in patients with chronic hepatitis. We also described the complications rates of the laparoscopic liver biopsy, estimated the influence of the length of liver fragment and the Kappas índice in the diagnosis of cirrhosis. Consecutive patients were prospectively submitted to laparoscopic liver biopsy (14G needle) by two independent investigators blind to clinical, laboratorial and ultra-sonographic findings. Liver specimens were assessed blindly according to the modified Ishak score. The sensitivity, specificity, accuracy, positive and negative predictive values were evaluated for the laparoscopy and histology in the diagnosis of cirrhosis. A p-value of 0.05 was considered statistically significant. Eighty-four patients were included, 55% male sex, 85% with chronic HCV infection, median age 47 11 years. The median length of the biopsy sample and the numbers of portal tracts was 2.9 1,0 cm and 12 5, respectively. The histological sensitivity (89% x 71%), negative predictive value (92% x 83%) and accuracy (95% x 88%) were better in comparison with laparoscopy in cirrhosis diagnosis. The Kappas indices for cirrhosis diagnosis between the two investigators was 0.80. Cirrhotic patients had more fragmented (p= 0,048) and bigger samples (p=0.05) than non-cirrhotics. Patients with mild disease in microscopic analysis (F &#8804; 2) had less numbers of portal tracts (8 4 x 13 4 p<0.001) and smaller samples size (p=0.036) than those with moderate/severe disease. There were no earlier complications related to the laparoscopy and 9.6% of late complications, all of that associated with a endemic outbreak of atypical micobacteriosis that happened in Rio de Janeiro during this study. There were 6% of hepatic biopsys minor complications, all bleeding at the biopsy site controlled during the laparoscopy. There were no major complications. There was 5% of gain made by liver laparoscopic evaluation in the cirrhosis diagnosis. The length of the hepatic fragment, however, had great influence in the diagnosis of cirrhosis. Probably our big sample size (2,9 1,0 cm) surpass the problem of understaging of the liver biopsies. The Kappas indices between the investigators were excellent. The laparoscopic liver biopsy is a safe procedure.

O diagnóstico de cirrose em pacientes portadores de hepatopatia crônica é fundamental para o manejo dos pacientes. Estudos demonstraram que o uso de sinais clínicos, laboratoriais e/ou ultra-sonográficos subestimam a presença de cirrose. Através do diagnóstico histológico exclusivo também é possível subestimar a presença de cirrose em até 32% dos casos. Avaliar o valor da laparoscopia no diagnóstico da cirrose hepática e a segurança deste procedimento: a)medir a taxa de acréscimo no diagnóstico de cirrose proporcionada pela laparoscopia. b)determinar a concordância inter-observador no diagnóstico macroscópico de cirrose pela laparoscopia. c)determinar a influência do tamanho do fragmento obtido na biópsia hepática laparoscópica no diagnóstico de cirrose. d)descrever a prevalência das principais complicações da laparoscopia e biópsia hepática laparoscópica. Foram incluídos pacientes portadores de hepatite crônica submetidos à biópsia hepática laparoscópica. As laparoscopias foram realizadas com sedação consciente e a biópsia hepática feita com agulha 14G. Dois examinadores independentes, sem conhecimento dos dados dos pacientes, definiram a conclusão da laparoscopia em 4 classes: normal, aspecto inespecífico, hepatopatia crônica e cirrose hepática. O diagnóstico histológico de cirrose foi definido pela presença de fibrose &#8805; 5 pela classificação de Ishak, por um patologista, sem o conhecimento dos dados dos pacientes. Foram determinados valores de sensibilidade, especificidade, acurácia, valor preditivo positivo (VPP) e negativo (VPN) da laparoscopia e histologia no diagnóstico da cirrose hepática. Foram incluídos 84 pacientes, 55% do sexo masculino, 85% portadores de hepatite crônica C e média de idade de 47 11 anos. A média do tamanho do fragmento de biópsia foi de 2,9 1,0 cm e do número de espaços-porta foi de 12 5. Em comparação com o diagnóstico histológico, a análise do aspecto macroscópico por laparoscopia mostrou sensibilidade de 71% x 89%, valor preditivo negativo de 83% x 92%, e acurácia de 88% x 95%. O índice de concordância Kappa no diagnóstico de cirrose hepática na laparoscopia entre os dois examinadores foi de 0,80. Os pacientes cirróticos apresentaram amostras mais fragmentadas (p = 0,048) e maiores (p = 0,05). Já os portadores de fibrose leve na histologia (F0-F2) apresentaram menor quantidade de espaços-porta (8 4 x 13 4 p< 0,001) e fragmentos menores (p = 0,036) em comparação com os portadores de fibrose moderada e grave (F3-F6). Não houve complicações precoces da laparoscopia. O sangramento no sítio da biópsia hepática foi a única complicação observada em 6% dos pacientes. Tivemos 9,6% de complicações tardias, diretamente relacionadas à laparoscopia e ao surto de micobacteriose atípica que acometeu o estado do Rio de Janeiro durante o estudo. Houve acréscimo de 5% proporcionado pela visão laparoscópica ao diagnóstico de cirrose obtido pela histologia, porém o fragmento hepático tem grande influência no estadiamento da fibrose, com fragmentos maiores favorecendo a histologia. A concordância inter-observador no diagnóstico macroscópico de cirrose pela laparoscopia foi excelente. A biópsia hepática laparoscópica é um procedimento seguro. / The diagnosis of hepatic cirrhosis is very important in the management of patients with chronic liver diseases. Retrospective series reported percutaneous liver biopsy to miss cirrhosis in about 30%. The aim of this study was to compare the accuracy of liver descriptions made during laparoscopy with liver histology found by laparoscopic biopsy in patients with chronic hepatitis. We also described the complications rates of the laparoscopic liver biopsy, estimated the influence of the length of liver fragment and the Kappas índice in the diagnosis of cirrhosis. Consecutive patients were prospectively submitted to laparoscopic liver biopsy (14G needle) by two independent investigators blind to clinical, laboratorial and ultra-sonographic findings. Liver specimens were assessed blindly according to the modified Ishak score. The sensitivity, specificity, accuracy, positive and negative predictive values were evaluated for the laparoscopy and histology in the diagnosis of cirrhosis. A p-value of 0.05 was considered statistically significant. Eighty-four patients were included, 55% male sex, 85% with chronic HCV infection, median age 47 11 years. The median length of the biopsy sample and the numbers of portal tracts was 2.9 1,0 cm and 12 5, respectively. The histological sensitivity (89% x 71%), negative predictive value (92% x 83%) and accuracy (95% x 88%) were better in comparison with laparoscopy in cirrhosis diagnosis. The Kappas indices for cirrhosis diagnosis between the two investigators was 0.80. Cirrhotic patients had more fragmented (p= 0,048) and bigger samples (p=0.05) than non-cirrhotics. Patients with mild disease in microscopic analysis (F &#8804; 2) had less numbers of portal tracts (8 4 x 13 4 p<0.001) and smaller samples size (p=0.036) than those with moderate/severe disease. There were no earlier complications related to the laparoscopy and 9.6% of late complications, all of that associated with a endemic outbreak of atypical micobacteriosis that happened in Rio de Janeiro during this study. There were 6% of hepatic biopsys minor complications, all bleeding at the biopsy site controlled during the laparoscopy. There were no major complications. There was 5% of gain made by liver laparoscopic evaluation in the cirrhosis diagnosis. The length of the hepatic fragment, however, had great influence in the diagnosis of cirrhosis. Probably our big sample size (2,9 1,0 cm) surpass the problem of understaging of the liver biopsies. The Kappas indices between the investigators were excellent. The laparoscopic liver biopsy is a safe procedure.