Orientador: Maria Emilia Franco Oliveira / Banca: Erika da Silva Carvalho Morani / Banca: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Resumo: Um dos grandes entraves da MOTE é a ocorrência de falhas no tratamento superovulatório, sendo que uma das causas pode ser a alta dose de FSH, podendo promover regressão prematura dos corpos lúteos e consequentemente uma resposta ineficaz ao tratamento superovulatório. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da dose de FSH exógeno no tratamento superestimulatório sobre a dinâmica de desenvolvimento e funcionalidade de corpos lúteos em fêmeas ovinas doadoras de embrião. Foram utilizadas 29 ovelhas Santa Inês, as quais foram submetidas à sincronização do estro com um dispositivo intravaginal de progesterona (CIDR®), inserido no Dia 0, permanecendo até o Dia 8. Concomitantemente ao início do protocolo e retirada do dispositivo intravaginal foi administrado um análogo da PGF2α. O tratamento gonadotrófico teve início 48 horas antes da retirada da progesterona (D6), quando as fêmeas foram aleatoriamente divididas em três grupos experimentais de acordo com a dose total de FSH suíno exógeno: G200 (controle, n=8) - 200 mg de FSH; G133 (n=8) - 133 mg de FSH; e G100 (n=8) - 100 mg de FSH. No D6 (1ª aplicação de FSH), as fêmeas receberam também 300 UI de eCG. As avaliações ultrassonográficas Modo-B e Doppler foram realizadas durante o período de luteogênese (D11) até o dia correspondente a videolaparoscopia (D15), com o propósito de acompanhar o desenvolvimento das estruturas lúteas (dimensões), avaliar os índices do fluxo sanguíneo da artéria ovariana (VPS,VDF,IR e IP) e, de avalia... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: One of the major obstacles of MOTE is occurrence of failures in superovulation, and one reason may be the high dose of FSH, which can promote premature regression of the corpus luteum and therefore ineffective response to superovulation. The aim of the present study was to evaluate the effect of exogenous FSH dose in superstimulatory treatment on development dynamic and function of corpora lutea in embryo donor ewes. Twenty-nine Santa Inês ewes were submitted to estrus synchronization with an intravaginal progesterone device (CIDR®), which was inserted on Day 0 and was remain until the Day 8. At the same time the beginning of the protocol and intravaginal device withdrawal was administered an analog of PGF2α. The gonadotropin treatment was commenced 48 hours before the CIDR withdrawal (D6), when females are randomly divided into three groups according to the total dose of exogenous porcine FSH: G200 (control, n = 9) - 200 mg of FSH ; G133 (n = 10) - 133 mg FSH; and G100 (n = 10) - 100 mg of FSH. The total doses were administered in 8 to applications at 12 hour intervals (20, 20, 15, 15, 10, 10, 5 and 5% FSHp). In D6 (1st application FSH), females also received 300 IU of eCG. Evaluations ultrasound mode-B and Doppler were performed during the luteogênese period (D11) until the corresponding day of videolaparoscopy (D15), in order to follow the development of luteal structures (dimensions), evaluate the contents of the artery blood flow ovarian (VPS, EDV, RI and PI), and macros... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Laura Satiko Okada Nakaghi / Coorientador: Rafael Henrique Nóbrega / Banca: Elisabeth Criscuolo Urbinati / Banca: Matias Pandolfi / Resumo: O hormônio liberador de gonadotropina (GnRH) é um dos fatores chaves na regulação neuroendócrina da reprodução dos vertebrados. Alguns peixes apresentam três variantes do GnRH: o GnRH1 envolvido na secreção de gonadotropinas, o GnRH2 que regula o comportamento alimentar e sexual e o GnRH3 expresso no bulbo olfatório e o nervo terminal cujas fibras nervosas inervam a retina e o epitélio olfatório. O zebrafish possui duas variantes do GnRH (GnRH2 e GnRH3), sendo o GnRH3 a variante hipofisiotrófica. Estudos mostram possível envolvimento do GnRH no sistema olfato-retinal. No sistema olfatório o GnRH regula a sensibilidade na detecção de alimento, o reconhecimento intra e interespecífico, entre outros. Na retina, o GnRH3 pode estar envolvido na acuidade visual e do processamento de informação da retina. Existem estudos que reportam a presença de receptores de GnRH em diferentes camadas da retina, no entanto ainda não é clara a presença de receptores no epitélio olfatório. Neste contexto, no presente estudo analisamos a localização do gnrh2, gnrh3 e seus receptores (gnrhr1,2,3 e 4) e do gnih (hormônio inibidor de gonadotropinas) no epitélio olfatório, a retina e o bulbo olfatório de machos e fêmeas adultos e comparamos a expressão destes genes em fêmeas em diferentes estágios de maturação gonadal. Para tanto, o RNA total do epitélio olfatório, retina, bulbo olfatório, cérebro e gônadas foi extraído. Com base na sequência dos genes gnrh2, gnrh3, gnrhr1, gnrhr2, gnrhr3 e gnrhr4, primers forward e reverse foram desenhados para RT-PCR e qPCR. Sondas para a hibridização in situ também foram construídas para verificar os sítios de expressão destas moléculas no epitélio olfatório, retina e gônadas. Imunohistoquímica com os anticorpos anti-GnRH3 (BB8 e GF6) foram realizadas para localizar a proteína do GnRH3 nos tecidos analisados. O presente estudo apresenta um panorama da expressão do sistema... / Abstract: The gonadotropin releasing hormone (GnRH) is one of the key factors involved in the neuroendocrine regulation of vertebrate reproduction. Some fish species have three GnRH variants: GnRH1 involved in gonadotropin secretion, GnRH2 regulating food and sexual behaviors and the GnRH3 which is expressed in the olfactory bulb and terminal nerve whose fibers innervate the retina and the olfactory epithelium. Two GnRH variants (GnRH2 and GnRH3) are present in the zebrafish, in which GnRH3 acts as the hypophisiotrophic variant. Recent studies have been showing the role of GnRH in the olfactory-retinal system. In the olfactory system, GnRH regulates food detection, and intra and interspecific recognition. In retina, GnRH3 may be involved in visual acuity modulation and retinal processing information. Moreover, studies have reported the presence of GnRH receptors in the retina, but not yet in the zebrafish olfactory epithelium. Therefore, the current study analyzed the presence of GnRH2, GnRH3 and its receptors (GnRH-R1,2,3 and 4) and GnIH (gonadotropin inhibitory hormone) in the olfactory epithelium, olfactory bulb, retina and in gonads of adult zebrafish. We also compared the expression of these genes during the different stages of ovarian maturation in zebrafish. For that, total RNA of the olfactory epithelium, olfactory bulb, retina and gonads was extracted with the PureLink® RNA Mini Kit(Ambion®). RT-PCR and qPCR analysis were performed using forward and reverse primers for gnrh2, gnrh3, gnrhr1, gnrhr2, gnrhr3, gnrhr4 for . Probes for in situ hybridization were constructed to verify the expression sites of these molecules in the olfactory epithelium, retina, and gonads. Immunohistochemistry usinganti-GnRH3 antibodies (BB8 and GF6) were performed to identify the GnRH3 protein in these tissues. The current study presents a general expression view of GnRH/GnIH and their receptors in the olfactory epithelium-olfactory bulb-retinal axis during ... / Mestre

Orientador: Marco Antonio Alvarenga / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: José Antônio Dell'aqua Júnior / Banca: André Maciel Crespílho / Banca: Gustavo Mendes Gomes / Resumo: A manipulação farmacológica do ciclo estral é rotineiramente utilizada na égua, pelo fato desta apresentar grande variação na duração do estro e no intervalo entre o seu início e a ovulação. Como maiores taxas de concepção decorrem da deposição do sêmen no trato reprodutivo feminino próximo à ovulação, diversos agentes foram empregados objetivando sua indução e sincronização, em especial a gonadotrofina coriônica humana (hCG) e o acetato de deslorelina. O mecanismo de ação destes fármacos envolve o hormônio luteinizante (LH), sendo que o hCG mimetiza suas ações e o acetato de deslorelina estimula sua liberação pela adenohipófise. Incremento semelhante às concentrações circulantes de LH tem sido observado em vacas com o uso de cipionato de estradiol (ECP), o qual é usualmente empregado na indução e sincronização de ovulações na espécie pelo seu baixo custo. A fim de auxiliar na escolha do protocolo ideal para a indução de ovulação em éguas, o presente estudo objetivou avaliar o efeito do tratamento com o hCG e/ou com o acetato de deslorelina, nas doses preconizadas ou em subdoses, sobre as concentrações plasmáticas de LH, a indução e a sincronização de ovulação, o grau de edema endometrial, o diâmetro folicular e a sua taxa de desenvolvimento. Ainda, buscou-se verificar o resultado da aplicação de ECP sobre a indução e sincronização da ovulação e as concentrações plasmáticas de LH, bem como a existência de uma correlação entre a taxa de crescimento, o diâmetro folicular e o ed... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Pharmacological manipulation of the equine estrous cycle is routinely applied, due to the fact that mares show great disparity on estrous duration and in the interval between its onset and ovulation. Since higher pregnancy rates are obtained when semen is deposited in the female reproductive tract at a time close to ovulation, several ovulation inducting agents have been used, specially human chorionic gonadotropin (hCG) and deslorelin acetate (DES). The mechanism of action of these drugs involves the luteinizing hormone (LH), for hCG mimics its actions and DES stimulates endogenous adenohypophyseal secretion. Similar increment in circulating LH concentrations has been observed in cows treated with estradiol cypionate (ECP), which is usually administrated as an interesting and cheaper alternative to induce and synchronize ovulations in the bovine species. In order to aid recognition of the ideal ovulation induction and synchronization protocol in the mare, the present study evaluated the effect of treatment with hCG and/or DES, using the recommended or a subdose, on ovulation induction and synchronization, plasmatic LH concentrations, grade of endometrial edema, follicular growth and diameter. Thus, this experiment intended to verify the effect of ECP administration on ovulation induction, synchronization and plasmatic LH concentrations, as well as the existence of a correlation between follicular growth, pre-ovulatory diameter and endometrial edema with fertility of mares in... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria Emilia Franco Oliveira / Coorientador: Pedro Paulo Maia Teixeira / Coorientador: Fábio Morato Monteiro / Banca: Pietro Sampaio Baruselli / Banca: Lindsay Unno Gimenes / Resumo: Devido a comum ocorrência de regressão prematura (RP) do corpo lúteo (CL) em novilhas após primeira ovulação (OV), os objetivos do estudo foram: 1) acompanhar a dinâmica lútea após indução da OV em novilhas Nelore pré-púberes e 2) determinar diferenças relacionáveis a funcionalidade dessa estrutura. Cinquenta e sete fêmeas (289,61±32,28 kg, ECC de 5,66±0,65 e 17,47±0,81 meses de idade) foram divididas em dois grupos de tratamento para indução da OV. No grupo GP4+GnRH foi utilizado dispositivo intravaginal de progesterona (P4) de 3º uso por 10 dias e, 48 horas após remoção, aplicado 0,02mg de acetato de buserelina (GnRH), e no grupo GGnRH foi utilizado somente o GnRH. Os CLs formados foram acompanhados pela ultrassonografia a cada dois dias até a sua regressão funcional (diminuição do sinal vascular do Doppler colorido e concentrações de P4 abaixo de 1 ng/mL), sendo determinado para cada dia o diâmetro, área, valores numéricos (VPN) e heterogeneidade dos pixels e percentual (%) de vascularização. A velocidade do pico sistólico, velocidade diastólica final, índice de resistência e o índice de pulsatilidade (IP) da artéria ovariana também foram determinados para cada avaliação, além da concentração sérica de P4. Essas características foram comparadas entre os tratamentos, funções dos CLs (duração normal ou regredido prematuramente), dias das avaliações e suas interações, utilizando o procedimento MIXED do programa SAS (p≤0,05). Três animais de cada tratamento não responderam ao ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Due to the common occurrence of premature regression (PR) of the corpus luteum (CL) in heifers after the first ovulation (OV), the aims of this study were to: 1) monitor the luteal dynamics after OV induction in prepubertal Nellore heifers, and 2) determine differences related to the functionality of this structure. Fifty-seven females (BW 289.61±32.28 kg, BCS 5.66±0.65 and 17.47±0.81 months old) were divided into two treatment groups for OV induction. In the group GP4+GnRH, an intravaginal progesterone (P4) device of 3rd use was used for 10 days and, 48 hours after its removal 0.02 mg of buserelin acetate (GnRH) was applied, and in the GGnRH group only GnRH was used. Formed CLs were monitored via ultrasonography every two days until functional regression (decrease of the vascular signal of color Doppler and serum P4 concentrations below 1 ng/mL), being determined for each day the diameter, area, numerical values (NV) and heterogeneity of the pixels, and vascularization percentage (%). The systolic and diastolic peak velocity, resistance and pulsatility index (PI) of the ovarian artery were also determined for each day in addition to the serum P4 concentration. These characteristics were compared between treatments, CLs functions (normal duration or prematurely regressed), days of evaluations and their interactions, using the MIXED procedure of SAS program (p≤0.05). Three animals from each treatment did not respond to the OV inductor (6/57=11%), which determined an ovulation ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Mutações inativadoras do receptor de GnRH (GNRHR) são a causa genética mais frequente de hipogonadismo hipogonadotrófico isolado (HHI) normósmico. Os genes envolvidos da patogênese do HHI, incluindo o GNRHR, estão associados a um amplo espectro fenotípico, variando de HHI parcial a completo. O atraso constitucional do crescimento e desenvovimento (ACCD) poderia constituir uma variante fenotípica leve do HHI. Neste estudo avaliamos a frequência de mutações no gene GNRHR em pacientes com HHI normósmico e ACCD, bem como correlacionamos o genótipo/fenótipo nesses pacientes. Além disso, avaliamos o efeito fundador de uma mutação do GNRHR (p.R139H) frequente na população brasileira com HHI normósmico. Para esse estudo, selecionamos 116 pacientes com HHI normósmico e 51 com ACCD. Um grupo de 130 indivíduos com desenvolvimento puberal normal foi utilizado como controle. A região codificadora do gene GNRHR foi amplificada por PCR e sequenciada. Análises in silico e in vitro foram realizadas nas duas novas variantes (p.V134G e p.Y283H). Três marcadores de microssatélites (D4S409, D4S2387, D4S3018) foram amplificados e analisados nos pacientes portadores da mutação p.R139H, familiares e controles. No grupo de HHI normósmico, nove mutações (p.N10K,p.Q11K, p.Q106R, p.R139H, p.C200Y, p.R262Q, p.Y284C, p.Y283H, p.V134G) foram identificadas em onze pacientes (9,5%). Entre as mutações identificadas no GNRHR, duas foram descritas pela primeira vez no estudo atual: p.Y283H e p.V134G, cuja análise in vitro demonstrou inativação completa do receptor. Em geral, uma boa correlação genótipo-fenótipo foi observada. Pacientes portadores de mutações inativadoras apresentavam HHI completo e mutações com perda parcial de função causavam HHI parcial, incluindo dois pacientes que evoluíram com reversão do hipogonadismo após reposição androgênica. Por outro lado, não houve diferença fenotípica entre os casos com e sem mutação do GNRHR. Análise de ancestralidade genética da mutação p.R139H demonstrou que todos os casos brasileiros apresentaram o mesmo haplótipo, sugerindo que a mutação p.R139H possui um ancestral comum na população brasileira. Por outro lado o caso familial proveniente da Polônia apresentou apenas um marcador em comum com as famílias brasileiras e estudos mais abrangentes seriam necessários para determinar a origem da mutação p.R139H em indivíduos não Brasileiros. Na casuística de ACCD apenas a mutação p.Q106R foi identificada no gene GNRHR em heterozigose em um paciente. Em conclusão, o GNRHR foi o gene mais comumente afetado, apresentando uma boa correlação genótipo-fenótipo, e deve ser o primeiro candidato para análise genética em HHI normósmico. Os resultados sugerem que a mutação p.R139H possui um ancestral comum na população brasileira. Mutações no GNRHR parecem não estar envolvidas na patogênese do ACCD / GnRH receptor (GNRHR) inactivating mutations are the most common genetic cause of normosmic IHH. The genes involved in the IHH, including GNRHR, have been associated with a large phenotypic spectrum, varying from partial to complete IHH. Constitutional delay of growth and puberty (CDGP) might represent a mild phenotypic variant of IHH. In this study we investigated novel variants and characterized the frequency and phenotype-genotype correlation of GNRHR mutations in normosmic IHH and CDGP patients. Additionally, we determined de cause of the recurrence of GNRHR p.R139H mutation in patients with normosmic IHH. We studied 116 patients with normosmic IHH and 51 with CDGP. The control group was composed by 130 adults with normal pubertal development. The coding region of GNRHR was amplified and automatically sequenced. The two novel variants identified (p.Y283H, p.V134G) were submitted to in silico and in vitro analysis. Three microsatellite markers (D4S409, D4S2387, D4S3018) were amplified by PCR and analyzed in the patients with the p.R139H mutation. In the CDGP group, the previously described mutation p.Q106R was identified in the heterozygous state in one boy. The p.Q106R mutation has been identified in heterozygous state in individuals with normal pubertal development and does not appear be involved on the CDGP phenotype in this patient. In the normosmic IHH group, nine variants were identified (p.N10K, p.Q11K, p.Q106R, p.R139H, p.C200Y, p.R262Q, p.Y284C, p.Y283H, p.V134G) in eleven patients (9.5%). In vitro analysis of the novel variants p.Y283H and the p.V134G demonstrated that both of them cause complete loss of function of the receptor. The founder effect study revealed that all the p.R139H affected Brazilian patients presented the same haplotype, suggesting that the this mutation has a common ancestor in the Brazilian population. Nevertheless the affected Polish family presented a different haplotype, with only one marker in common with the Brazilian families and further studies would be necessary to determine the origin of the p.R139H mutation in the European population. In conclusion this study demonstrated that GNRHR was the most commonly affected gene in normosmic IHH, with a good genotype-phenotype correlation, and should be the first candidate gene for genetic screening in this condition. The results of the founder effect study suggested that the p.R139H mutation has a common ancestor in the Brazilian population. Finally, mutations in the GNRHR do not appear to be involved in the pathogenesis of CDGP

Orientador: Cezinande de Meira / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Banca: Fernanda Saules Ignácio / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: Claudia Barbosa Fernandes / Resumo: A indução da ovulação após o tratamento com hCG e análogos de GnRH, como a deslorelina, ocorrem por mecanismos distintos. Por sua vez, é possível que estes tratamentos acarretem alterações na perfusão vascular folicular durante o período pré-ovulatório. Desta forma, a ultrassonografia colorida Doppler apresenta potencial para ser utilizada como ferramenta na avaliação em tempo real do potencial ovulatório de folículos em éguas. Os objetivos principais deste trabalho foram avaliar as alterações na perfusão vascular folicular (PVF) após o uso de hormônios indutores da ovulação e sua relação temporal com o perfil plasmático de LH. Além de avaliar se a PVF pode ser utilizada para indicar a proximidade da ovulação. Ciclos estrais de éguas foram aleatoriamente divididos em três grupos experimentais: grupo GnRH, grupo hCG e grupo controle (n=10 éguas/grupo). Tratamentos foram realizados na presença de folículo com diâmetro ≥35mm associado à edema uterino. O momento imediatamente antes do tratamento foi considerado H0. Colheita de sangue e exame ultrassonográfico Doppler função power-flow do folículo dominante foram realizados para avaliar, respectivamente, a concentração plasmática de LH e a perfusão vascular folicular (PVF). Os parâmetros foram avaliados de hora em hora entre os intervalos H0-H12 e a cada seis horas da H12 até H30. Adicionalmente, os grupos GnRH e hCG foram acompanhados a cada hora a partir da H30 até a detecção da ovulação ou até H48. Já no grupo controle, foi realizada ultrassonografia modo-B a cada seis horas após H30 e ao se detectar características indicativas da proximidade de ovulação a US Doppler foi realizada de hora em hora até detecção da ovulação. O grupo controle apresentou um intervalo mais longo até à ovulação (P < 0,0001). Efeito de grupo (P < 0.05) foi detectado para PVF. Animais do grupo GnRH apresentaram maior PVF (P < 0.05) média quando ... / Abstract: Ovulation induction after treatment with hCG and GnRH analogs, such as deslorelin, occur through distinct mechanism. Meanwhile, it is possible that these treatments entail changes in follicular vascular perfusion during the pre-ovulatory period. Thus, color Doppler ultrasound presents a potential to be used as a tool for real-time assessment of follicles ovulatory potential in mares. The main purposes of this paper were to evaluate follicular vascular perfusion (FVP) after the use of ovulation induction hormones and the relationship with the plasmatic profile of LH. Additionally, evaluate if FVP can be used to indicate proximity to ovulation. Estrous cycles of mares were randomly divided in three experimental groups: GnRH group, hCG group and control group (n=10 mares/group). Treatments were done in the presence of a follicle with ≥35mm diameter associated with uterine edema. The moment immediately before treatment was considered H0. Blood collection and Doppler ultrasound exam with power-flow mode of the dominant follicle were done to evaluate, respectively, plasmatic concentration of LH and FVP. Parameters were evaluated every hour between H0-H12 and every six hours from H12 until H30. Additionally, GnRH and hCG groups were evaluated every hour from H30 until ovulation detection or until H48. In the control group, B-mode ultrasonography was completed every six hours after H30 and when detection of characteristics indicative of imminent ovulation Doppler ultrasonography was done every hour until ovulation detection. Control group presented a longer interval until ovulation (P < 0,0001). Group effect (P < 0.05) was detected for FVP. Animals from the GnRH group presented higher mean FVP (P < 0.05) when compared to the hCG and control groups since H0 until the moment of ovulation. No moment effect and interaction group:moment was found between experimental groups. Mean LH concentration between H1 and ... / Mestre

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-03Bitstream added on 2015-04-09T12:48:07Z : No. of bitstreams: 1 000815988.pdf: 670904 bytes, checksum: df849f5b7af31dd25a1aabd5ab80b4cd (MD5) / O Brasil é o país com a maior diversidade de psitacídeos do mundo, abrigando 72 espécies reconhecidas, com 16 espécies presentes no “Livro Vermelho da Fauna Brasileira Ameaçada de Extinção”. O papagaio-verdadeiro (Amazona aestiva) se destaca por sua popularidade como animal de estimação, sendo coletado na natureza em grande número para atender ao mercado ilegal de animais silvestres. Sua reprodução em cativeiro pode se tornar uma ferramenta para a conservação das populações na natureza, porém isso exige uma criação baseada em conhecimentos científicos e técnicas avançadas de reprodução. Esta tese teve como objetivos apresentar o perfil anual endócrino dos esteroides sexuais do Amazona aestiva e realizar um ensaio de estímulo hormonal através da aplicação de análogo de GnRH de liberação lenta na espécie. Utilizamos 10 casais e 4 machos adultos da espécie Amazona aestiva mantidos em viveiros suspensos, pertencentes ao Criadouro da Brisa, situado Jaboticabal/SP. As excretas foram coletadas ao menos uma vez por semana entre junho de 2011 e julho de 2012 para entendimento dos processos endócrinos que regem a reprodução da espécie e entre agosto de 2012 e dezembro de 2012 no ensaio de estímulo hormonal. O monitoramento da atividade gonadal foi feita de forma não invasiva por mensuração de metabólitos de andrógenos nas excretas dos machos e de progestágenos nas excretas de fêmeas. Foram coletadas amostras frescas de excretas, sempre no período entre 14h as 17h, e mantidas congeladas até o processamento. As amostras foram secas em estufa a 57oC, trituradas e os hormônios extraídos utilizando metanol a 80%. A dosagem hormonal foi realizada no Laboratório de Endocrinologia do NUPECCE (Núcleo de Pesquisa e Conservação de Cervídeos) utilizando ensaio imunoenzimático com o anticorpo para andrógenos e progestágenos. No ensaio de estimulo hormonal exógeno com analago de GnRH foi aplicado ... / Brazil is the country with the greatest diversity of parrots in the world , with to 72 recognized species , with 16 species in the Red List of Endangered Brazilian Wild Animals . The blue-fronted amazon parrot ( Amazona aestiva ) stands out for its popularity as a pet , being collected from the wild in large numbers to attend the illegal market for wildlife. His captive breeding can become a tool for the conservation of populations in nature , but this requires a creation based on scientific knowledge and advanced breeding techniques . This thesis aimed to present the annual endocrine profile of sex steroids of Amazona aestiva and a test of hormonal stimulation by applying GnRH analogue of the slow release. It was used 10 couples and 4 adult males of Amazona aestiva kept in suspended cages, properties of the commercial breeder “Criadouro da Brisa”, located in Jaboticabal / SP. The droppings were collected at least once a week between June 2011 and July 2012 for the understanding of endocrine processes of the reproduction in this specie and between August 2012 and December 2012 for testing hormonal stimulation . The monitoring of gonadal activity was noninvasively by measuring androgen metabolites in droppings of males and females of droppings progestogens. Fresh droppings samples were collected , always in between 14h to 17h , and kept frozen until processing . The samples were dried at 57oC, crushed and hormones were extracted using 80% methanol . The hormone dosage was performed at the Laboratory of Endocrinology, NUPECCE ( Center for Research and Conservation of Deer ) using enzyme immunoassay with antibody to androgens and progestins . In exogenous hormone stimulation test with GnRH was applied analago buserelin slow release in 5 couples and 5 couples were used to control the following excreta collection , processing and hormonal dosage previously described . The results of the annual listing of androgens in males ...

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:52:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-02Bitstream added on 2015-05-14T16:59:38Z : No. of bitstreams: 1 000829200.pdf: 325615 bytes, checksum: 4a9a2d1fb847b75b354083bd4e3c20af (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A indução da ovulação após o tratamento com hCG e análogos de GnRH, como a deslorelina, ocorrem por mecanismos distintos. Por sua vez, é possível que estes tratamentos acarretem alterações na perfusão vascular folicular durante o período pré-ovulatório. Desta forma, a ultrassonografia colorida Doppler apresenta potencial para ser utilizada como ferramenta na avaliação em tempo real do potencial ovulatório de folículos em éguas. Os objetivos principais deste trabalho foram avaliar as alterações na perfusão vascular folicular (PVF) após o uso de hormônios indutores da ovulação e sua relação temporal com o perfil plasmático de LH. Além de avaliar se a PVF pode ser utilizada para indicar a proximidade da ovulação. Ciclos estrais de éguas foram aleatoriamente divididos em três grupos experimentais: grupo GnRH, grupo hCG e grupo controle (n=10 éguas/grupo). Tratamentos foram realizados na presença de folículo com diâmetro ≥35mm associado à edema uterino. O momento imediatamente antes do tratamento foi considerado H0. Colheita de sangue e exame ultrassonográfico Doppler função power-flow do folículo dominante foram realizados para avaliar, respectivamente, a concentração plasmática de LH e a perfusão vascular folicular (PVF). Os parâmetros foram avaliados de hora em hora entre os intervalos H0-H12 e a cada seis horas da H12 até H30. Adicionalmente, os grupos GnRH e hCG foram acompanhados a cada hora a partir da H30 até a detecção da ovulação ou até H48. Já no grupo controle, foi realizada ultrassonografia modo-B a cada seis horas após H30 e ao se detectar características indicativas da proximidade de ovulação a US Doppler foi realizada de hora em hora até detecção da ovulação. O grupo controle apresentou um intervalo mais longo até à ovulação (P < 0,0001). Efeito de grupo (P < 0.05) foi detectado para PVF. Animais do grupo GnRH apresentaram maior PVF (P < 0.05) média quando ... / Ovulation induction after treatment with hCG and GnRH analogs, such as deslorelin, occur through distinct mechanism. Meanwhile, it is possible that these treatments entail changes in follicular vascular perfusion during the pre-ovulatory period. Thus, color Doppler ultrasound presents a potential to be used as a tool for real-time assessment of follicles ovulatory potential in mares. The main purposes of this paper were to evaluate follicular vascular perfusion (FVP) after the use of ovulation induction hormones and the relationship with the plasmatic profile of LH. Additionally, evaluate if FVP can be used to indicate proximity to ovulation. Estrous cycles of mares were randomly divided in three experimental groups: GnRH group, hCG group and control group (n=10 mares/group). Treatments were done in the presence of a follicle with ≥35mm diameter associated with uterine edema. The moment immediately before treatment was considered H0. Blood collection and Doppler ultrasound exam with power-flow mode of the dominant follicle were done to evaluate, respectively, plasmatic concentration of LH and FVP. Parameters were evaluated every hour between H0-H12 and every six hours from H12 until H30. Additionally, GnRH and hCG groups were evaluated every hour from H30 until ovulation detection or until H48. In the control group, B-mode ultrasonography was completed every six hours after H30 and when detection of characteristics indicative of imminent ovulation Doppler ultrasonography was done every hour until ovulation detection. Control group presented a longer interval until ovulation (P < 0,0001). Group effect (P < 0.05) was detected for FVP. Animals from the GnRH group presented higher mean FVP (P < 0.05) when compared to the hCG and control groups since H0 until the moment of ovulation. No moment effect and interaction group:moment was found between experimental groups. Mean LH concentration between H1 and ... / FAPESP: 2012/11117-3

Orientador: José Mauricio Barbanti Duarte / Banca: Lindsay Unno Gimenes / Banca: Eveline dos Santos Zanetti / Banca: Denise Calisto Bongalhardo / Banca: Ricardo José Garcia Pereira / Resumo: O Brasil é o país com a maior diversidade de psitacídeos do mundo, abrigando 72 espécies reconhecidas, com 16 espécies presentes no "Livro Vermelho da Fauna Brasileira Ameaçada de Extinção". O papagaio-verdadeiro (Amazona aestiva) se destaca por sua popularidade como animal de estimação, sendo coletado na natureza em grande número para atender ao mercado ilegal de animais silvestres. Sua reprodução em cativeiro pode se tornar uma ferramenta para a conservação das populações na natureza, porém isso exige uma criação baseada em conhecimentos científicos e técnicas avançadas de reprodução. Esta tese teve como objetivos apresentar o perfil anual endócrino dos esteroides sexuais do Amazona aestiva e realizar um ensaio de estímulo hormonal através da aplicação de análogo de GnRH de liberação lenta na espécie. Utilizamos 10 casais e 4 machos adultos da espécie Amazona aestiva mantidos em viveiros suspensos, pertencentes ao Criadouro da Brisa, situado Jaboticabal/SP. As excretas foram coletadas ao menos uma vez por semana entre junho de 2011 e julho de 2012 para entendimento dos processos endócrinos que regem a reprodução da espécie e entre agosto de 2012 e dezembro de 2012 no ensaio de estímulo hormonal. O monitoramento da atividade gonadal foi feita de forma não invasiva por mensuração de metabólitos de andrógenos nas excretas dos machos e de progestágenos nas excretas de fêmeas. Foram coletadas amostras frescas de excretas, sempre no período entre 14h as 17h, e mantidas congeladas até o processamento. As amostras foram secas em estufa a 57oC, trituradas e os hormônios extraídos utilizando metanol a 80%. A dosagem hormonal foi realizada no Laboratório de Endocrinologia do NUPECCE (Núcleo de Pesquisa e Conservação de Cervídeos) utilizando ensaio imunoenzimático com o anticorpo para andrógenos e progestágenos. No ensaio de estimulo hormonal exógeno com analago de GnRH foi aplicado ... / Abstract: Brazil is the country with the greatest diversity of parrots in the world , with to 72 recognized species , with 16 species in the " Red List of Endangered Brazilian Wild Animals " . The blue-fronted amazon parrot ( Amazona aestiva ) stands out for its popularity as a pet , being collected from the wild in large numbers to attend the illegal market for wildlife. His captive breeding can become a tool for the conservation of populations in nature , but this requires a creation based on scientific knowledge and advanced breeding techniques . This thesis aimed to present the annual endocrine profile of sex steroids of Amazona aestiva and a test of hormonal stimulation by applying GnRH analogue of the slow release. It was used 10 couples and 4 adult males of Amazona aestiva kept in suspended cages, properties of the commercial breeder "Criadouro da Brisa", located in Jaboticabal / SP. The droppings were collected at least once a week between June 2011 and July 2012 for the understanding of endocrine processes of the reproduction in this specie and between August 2012 and December 2012 for testing hormonal stimulation . The monitoring of gonadal activity was noninvasively by measuring androgen metabolites in droppings of males and females of droppings progestogens. Fresh droppings samples were collected , always in between 14h to 17h , and kept frozen until processing . The samples were dried at 57oC, crushed and hormones were extracted using 80% methanol . The hormone dosage was performed at the Laboratory of Endocrinology, NUPECCE ( Center for Research and Conservation of Deer ) using enzyme immunoassay with antibody to androgens and progestins . In exogenous hormone stimulation test with GnRH was applied analago buserelin slow release in 5 couples and 5 couples were used to control the following excreta collection , processing and hormonal dosage previously described . The results of the annual listing of androgens in males ... / Doutor

Mutações inativadoras do receptor de GnRH (GNRHR) são a causa genética mais frequente de hipogonadismo hipogonadotrófico isolado (HHI) normósmico. Os genes envolvidos da patogênese do HHI, incluindo o GNRHR, estão associados a um amplo espectro fenotípico, variando de HHI parcial a completo. O atraso constitucional do crescimento e desenvovimento (ACCD) poderia constituir uma variante fenotípica leve do HHI. Neste estudo avaliamos a frequência de mutações no gene GNRHR em pacientes com HHI normósmico e ACCD, bem como correlacionamos o genótipo/fenótipo nesses pacientes. Além disso, avaliamos o efeito fundador de uma mutação do GNRHR (p.R139H) frequente na população brasileira com HHI normósmico. Para esse estudo, selecionamos 116 pacientes com HHI normósmico e 51 com ACCD. Um grupo de 130 indivíduos com desenvolvimento puberal normal foi utilizado como controle. A região codificadora do gene GNRHR foi amplificada por PCR e sequenciada. Análises in silico e in vitro foram realizadas nas duas novas variantes (p.V134G e p.Y283H). Três marcadores de microssatélites (D4S409, D4S2387, D4S3018) foram amplificados e analisados nos pacientes portadores da mutação p.R139H, familiares e controles. No grupo de HHI normósmico, nove mutações (p.N10K,p.Q11K, p.Q106R, p.R139H, p.C200Y, p.R262Q, p.Y284C, p.Y283H, p.V134G) foram identificadas em onze pacientes (9,5%). Entre as mutações identificadas no GNRHR, duas foram descritas pela primeira vez no estudo atual: p.Y283H e p.V134G, cuja análise in vitro demonstrou inativação completa do receptor. Em geral, uma boa correlação genótipo-fenótipo foi observada. Pacientes portadores de mutações inativadoras apresentavam HHI completo e mutações com perda parcial de função causavam HHI parcial, incluindo dois pacientes que evoluíram com reversão do hipogonadismo após reposição androgênica. Por outro lado, não houve diferença fenotípica entre os casos com e sem mutação do GNRHR. Análise de ancestralidade genética da mutação p.R139H demonstrou que todos os casos brasileiros apresentaram o mesmo haplótipo, sugerindo que a mutação p.R139H possui um ancestral comum na população brasileira. Por outro lado o caso familial proveniente da Polônia apresentou apenas um marcador em comum com as famílias brasileiras e estudos mais abrangentes seriam necessários para determinar a origem da mutação p.R139H em indivíduos não Brasileiros. Na casuística de ACCD apenas a mutação p.Q106R foi identificada no gene GNRHR em heterozigose em um paciente. Em conclusão, o GNRHR foi o gene mais comumente afetado, apresentando uma boa correlação genótipo-fenótipo, e deve ser o primeiro candidato para análise genética em HHI normósmico. Os resultados sugerem que a mutação p.R139H possui um ancestral comum na população brasileira. Mutações no GNRHR parecem não estar envolvidas na patogênese do ACCD / GnRH receptor (GNRHR) inactivating mutations are the most common genetic cause of normosmic IHH. The genes involved in the IHH, including GNRHR, have been associated with a large phenotypic spectrum, varying from partial to complete IHH. Constitutional delay of growth and puberty (CDGP) might represent a mild phenotypic variant of IHH. In this study we investigated novel variants and characterized the frequency and phenotype-genotype correlation of GNRHR mutations in normosmic IHH and CDGP patients. Additionally, we determined de cause of the recurrence of GNRHR p.R139H mutation in patients with normosmic IHH. We studied 116 patients with normosmic IHH and 51 with CDGP. The control group was composed by 130 adults with normal pubertal development. The coding region of GNRHR was amplified and automatically sequenced. The two novel variants identified (p.Y283H, p.V134G) were submitted to in silico and in vitro analysis. Three microsatellite markers (D4S409, D4S2387, D4S3018) were amplified by PCR and analyzed in the patients with the p.R139H mutation. In the CDGP group, the previously described mutation p.Q106R was identified in the heterozygous state in one boy. The p.Q106R mutation has been identified in heterozygous state in individuals with normal pubertal development and does not appear be involved on the CDGP phenotype in this patient. In the normosmic IHH group, nine variants were identified (p.N10K, p.Q11K, p.Q106R, p.R139H, p.C200Y, p.R262Q, p.Y284C, p.Y283H, p.V134G) in eleven patients (9.5%). In vitro analysis of the novel variants p.Y283H and the p.V134G demonstrated that both of them cause complete loss of function of the receptor. The founder effect study revealed that all the p.R139H affected Brazilian patients presented the same haplotype, suggesting that the this mutation has a common ancestor in the Brazilian population. Nevertheless the affected Polish family presented a different haplotype, with only one marker in common with the Brazilian families and further studies would be necessary to determine the origin of the p.R139H mutation in the European population. In conclusion this study demonstrated that GNRHR was the most commonly affected gene in normosmic IHH, with a good genotype-phenotype correlation, and should be the first candidate gene for genetic screening in this condition. The results of the founder effect study suggested that the p.R139H mutation has a common ancestor in the Brazilian population. Finally, mutations in the GNRHR do not appear to be involved in the pathogenesis of CDGP