Embora a citricultura seja uma importante atividade econômica no Brasil, nos últimos anos houve uma redução significativa da produção nacional. A baixa rentabilidade que o setor citrícola vem enfrentando, devido ao alto custo de produção, é decorrente principalmente dos problemas fitossanitários, com destaque para as doenças, que afetam diretamente a produtividade dos pomares. Atualmente, o huanglongbing (HLB) é a doença mais grave que afeta a citricultura mundial, sendo que os danos são severos em todas as variedades de citros. Diante desse fato, a transformação genética de plantas é uma alternativa para a obtenção de plantas transgênicas, com genes que estimulem o sistema de defesa das plantas, tornando-as resistentes a doenças. Apesar da eficácia dos protocolos existentes para a transformação genética de citros, uma desvantagem característica de plantas perenes é o ciclo reprodutivo lento, tornando difícil e demorado a validação de novos genes de interesse. Por isso, uma importante estratégia é o uso de plantas modelos, como o tomateiro, que possui ciclo curto e boa eficiência de transformação genética. Assim, o objetivo deste trabalho foi obter plantas transgênicas de Solanum lycopersicum cv. \'Micro-Tom\' e Citrus sinensis, contendo a construção gênica com o gene Csd1 (superóxido dismutase do cobre e do zinco), isolado de Poncirus trifoliata. A proteína codificada pelo gene Csd1, também conhecido como Sod1 (superoxide dismutase 1), é o mais potente antioxidante na natureza e é um importante constituinte de defesa celular contra o estresse oxidativo causado pela infecção bacteriana. O tomateiro Micro-tom foi utilizado como modelo de patogenicidade para validação do gene. Porém, devido a sua baixa eficiência de transformação genética, os experimentos de inoculação com o patógeno não foram realizados. Posteriormente, a caracterização da função do gene Csd1 em relação ao HLB será realizada com as plantas transgênicas de citros. A identificação de plantas transgênicas, de tomate e de laranja doce, foi realizada por meio da análise de PCR, utilizando primers para a detecção do gene Csd1. As plantas PCR+ foram aclimatizadas e transferidas para casa-de-vegetação. A eficiência de transformação genética do tomateiro \'Micro-Tom\' e das cultivares de laranja doce, \'Hamlin\' e \'Pineapple\', foram respectivamente: 0,34%, 4,74% e 3,65%. A caracterização molecular pelas análises de Southern blot e RT-qPCR foi realizada apenas em plantas de citros. Foi possível confirmar a integração do transgene em 32 eventos obtidos. O número de eventos de inserção variou de 1 - 5, sendo a presença do gene endógeno Csd1, localizada em 3 locais distintos no genoma das plantas. O nível de mRNA do transgene foi verificada em 21 plantas que tiveram apenas uma única inserção do transgene no genoma. Os resultados obtidos mostram que houve transcrição do gene Csd1 nas plantas transgênicas, assim como, na testemunha não transgênica. A relação do nível de transcrição do transgene com a resistência das plantas ao patógeno será definida após a inoculação com Candidadus Liberibacter. / Although the citrus industry is an important economic activity in Brazil, in recent years there has been a significant reduction in the national citrus production. The low profitability of the citrus sector has faced due to the high production cost is mainly attributed to phytosanitary problems, particularly diseases that directly affect productivity of orchards. Currently, huanglongbing (HLB) is the most serious disease that affects the global citrus industry and the damage is severe in all citrus varieties. Genetic transformation of plants is an alternative to obtain transgenic plants with genes that stimulate the plant defense system, making it resistant to diseases. Despite the effectiveness of protocols for genetic transformation of citrus, a characteristic disadvantage of perennial plants is the slow reproductive cycle, hindering validation of new genes of interest. Therefore, an important strategy is the use of model plants, such as the tomato, which has a short cycle and good genetic transformation efficiency. The objective of this study was to obtain transgenic plants of Solanum lycopersicum cv. \"Micro-Tom \'and Citrus sinensis, containing the gene construct with Csd1 gene (copper/zinc superoxide dismutase), isolated of Poncirus trifoliata. The protein encoded by the gene Csd1, also known as SOD1 (superoxide dismutase 1), is the most powerful antioxidant in nature and is important constituent of cellular defense against oxidative stress caused by bacterial infection. \'Micro-tom\' tomato was used as a model for pathogenic gene validation. However, due to its low efficiency of genetic transformation, the inoculation experiments with the pathogen were not realized. Posteriorly, the characterization of gene function Csd1 in relation to the HLB disease will be realize with citrus transgenic plants. The objective of this study was to obtain transgenic plants of Solanum lycopersicum cv. \'Micro-Tom\' and of Citrus sinensis, containing the gene construction with Csd1 gene (copper/zinc superoxide dismutase), isolated of Poncirus trifoliata, for validation and for future study of this gene for resistance to HLB. Proteins encoded by the Csd1 gene, also known as SOD1 (superoxide dismutase 1), are the most powerful antioxidants in nature and are important constituents of cellular defense against oxidative stress caused by bacterial infection. The identification of transgenic plants of tomato and sweet orange was performed by the PCR analysis using primers for the detection of Csd1 gene. The PCR+ plants were acclimatized and transferred to a greenhouse. The genetic transformation efficiency of tomato \'Micro-Tom\' and sweet orange cultivars, \'Hamlin\' and \'Pineapple\', were 0.34%, 4.74% and 3.65%, respectively. The molecular characterization with the Southern blot and RT-qPCR analyses was performed only in citrus plants. The transgene integration was confirmed in 32 plants. The number of insertion events ranged from 1-5 and the presence of Csd1 endogenous gene is found in three distinct locations in the plants genome. The mRNA level of the transgene was verified in 21 plants that had only a single transgene insertion into the plant genome. The results show that there was transcription of Csd1 gene in transgenic plants as well as in non-transgenic plants. The relation between the transgene transcript level with the resistance of plants to pathogens is set after inoculation with Candidadus Liberibacter.

O Huanglongbing (HLB) é a doença dos citros mais importante em todo mundo, por afetar todas as variedades cítricas cultivadas e ser de difícil controle. No Brasil, onde afeta as principais regiões produtoras de citros, a doença vem se espalhando e causando enormes prejuízos à atividade. O manejo do HLB depende da utilização de ações integradas, dentre elas o controle do inseto vetor, o psilídeo-asiátco-dos-citros, Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). Para controlar de forma eficiente esse inseto vetor é necessário que se conheça, por meio de amostragens eficazes, suas características de dinâmica tanto temporal quanto espacial, identificando regiões mais propensas à infestações e épocas do ano em que o inseto se desenvolve melhor. Por isso, o presente estudo teve como objetivos: a) avaliar a dinâmica temporal do psilídeo D. citri em pomares do Estado de São Paulo, examinando o efeito de diferentes regiões, épocas do ano e idade dos plantios; b) verificar a existência de diferenças no número de insetos amostrados em diferentes alturas da planta cítrica, comparando diferentes métodos de amostragem; e c) investigar o padrão de distribuição espacial do inseto em pomares de diferentes idades. Para isso foram realizados levantamentos ao longo de dois anos em seis localidades, representativas de três regiões do parque citrícola paulista, com pomares de diferentes idades, sendo amostradas todas as fases de vida de D. citri e brotações cítricas. Para a avaliação da amostragem de psilídeos em diferentes alturas, foram estudados dois pomares com plantas de diferentes idades, com avaliação da densidade de psilídeos e brotos cítricos em vários estratos da planta, comparando-se dois tipos de amostragem de insetos adultos. Para o estudo da distribuição espacial de D. citri foram feitos levantamentos em pomares de dois municípios da região citrícola central, analisando-se os dados com geoestatística. Foram constatados efeitos de região, idade dos plantios e épocas do ano sobre a população de D. citri. As maiores populações do inseto estão presentes na região central, onde o inseto ocorre com maior frequência ao longo do ano, seguida da região noroeste e sul. Mais ninfas ocorreram em pomares mais jovens, mas a população de adultos não necessariamente ocorre em maiores números nestes locais. A primavera foi a estação do ano na qual ocorreram as maiores populações de insetos, mas elevações populacionais podem ocorrer em qualquer época desde que haja brotações presentes e que o clima seja favorável. A altura de amostragem influenciou o número de adultos de D. citri detectados no pomar mais velho e de todas as fases de vida do inseto no pomar mais novo, bem como o número de brotações cítricas. Amostras mais precisas foram geradas pela amostragem com armadilhas adesivas do que visualmente, sendo recomendada a amostragem de D. citri com armadilhas em pontos mais elevados da planta para melhor precisão. D. citri apresentou distribuição agregada e forte dependência espacial na maioria das datas de amostragem e em pomares de diferentes idades. Focos foram identificados nos pomares, com área de 1.257 m², em média. / Huanglongbing (HLB) is the most important citrus disease in the world, affecting all cultivated citrus varieties, and it is very difficult to control. In Brazil, HLB is spreading in the major citrus producing areas and causing huge losses to the citriculture. Disease management depends on integration of different methods, including control of the insect vector, the Asian citrus psyllid, Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). In order to effectively monitor and control this vector, it is necessary to understand his population dynamics in citrus orchards, identifying regions and seasons where the insect develops higher populations. This study was designed to investigate the temporal and spatial dynamics of D. citri in citrus orchards of Sao Paulo State, examining the effect of different regions, seasons and plant age. Surveys of psyllid populations and citrus shoots were carried out over two years in six locations, representing three growing regions of São Paulo State, in citrus orchards of different ages, where all life stages of D. citri and citrus shoots were sampled. The spatial distribution of D. citri was analyzed by geostatistics in orchards of two municipalities of the central region of São Paulo State. The efficacy of sampling methods (yellow sticky cards vs. visual inspections) and sampling height on the tree canopy for estimating psyllid populations and number of citrus shoots was investigated as well; this particular study was conducted in two orchards of different ages, in the central region. Significant effects of region, orchard age and seasons of the year on the population of D. citri were observed. The highest insect populations are present in the central region, where the insect occurs more frequently throughout the year, followed by the northwestern and southern regions of São Paulo State. More nymphs occurred in younger orchards, but the adult population does not necessarily occur in higher numbers in the younger orchards. Spring was the season of highest populations of D. citri, but population increases can occur at any time if there are shoots present and the weather is favorable. The sampling height influenced the number of D. citri adults trapped by yellow sticky cards in the older orchard, and the numbers of psyllid eggs, nymphs and adults, as well as of citrus shoots, visualized on the younger orchard. More accurate sampling data were generated by using yellow sticky traps compared with visual inspections. Yellow sticky traps should be placed closer to the top of the citrus tree for better accuracy. D. citri showed aggregated pattern and strong spatial dependence in most sampling dates and in orchards of different ages. Foci were identified in the orchards, with a mean area of aggregation of 1,257 m².

O principal problema fitossanitário da citricultura atualmente é a doença conhecida como greening ou Huanglongbing (HLB), transmitida pelo inseto vetor Diaphorina citri. O presente trabalho objetivou desenvolver estratégias para incorporação dos fungos Beauveria bassiana ESALQ-PL63, registrado para o controle de outras pragas e/ou I. fumosorosea ESALQ-1296 em desenvolvimento como biopesticida especialmente para o manejo de D. citri, determinando a melhor concentração de adjuvantes e de conídios dos fungos a serem utilizados, sua eficácia em laboratório, semi-campo e campo; assim como sua compatibilidade com os agroquímicos utilizados na cultura. Na comparação dos dois fungos aplicados com seis adjuvantes no controle de D. citri revelaram que exceto Tween 80 a 0,001%, todos os outros adjuvantes contribuíram para aumentar a eficácia dos fungos. Os níveis de controle obtidos nos bioensaios em laboratório com B. bassiana e I. fumosorosea foram confirmados nos bioensaios em semi-campo e em campo. Realizaram-se 12 pulverizações com os dois fungos durante o período de dezembro de 2011 a janeiro de 2013 em campo nas concentrações de 2,5x106 conídios/mL em 2000 L/ha e 5x106 conídios/mL em 1000 L/ha ambos com 0,075% do adjuvante KBRAdj. Na comparação mês a mês, somente em janeiro de 2012 o controle químico foi superior a todos os outros tratamentos. No restante dos meses, as mortalidades causadas pelos tratamentos com fungos foram semelhantes entre si e semelhantes ao controle químico. As mortalidades de adultos de D. citri pelos fungos variaram de 96,4±3,8% (dezembro/2011) a 57,8±3,5% (outubro/2012). Os efeitos de 27 agroquímicos sobre o crescimento vegetativo e esporulação das colônias e a viabilidade dos conídios in vitro e a virulência dos fungos in vivo após mistura com cada um dos produtos foram determinados e revelaram que exceto os fungicidas a maioria dos produtos são compatíveis com os fungos e podem ser misturados na calda de aplicação. Estes resultados indicam que Beauveria bassiana ESALQ-PL63 e Isaria fumosorosea ESALQ-1296 são promissores para utilização no controle de D. citri em programas de manejo integrado de pragas de citros. / The main cause of the crop loss in citrus is currently the disease known as greening or Huanglongbing (HLB), transmitted by the insect vector Diaphorina citri. This study aimed to develop strategies for incorporating the fungi Beauveria bassiana ESALQ-PL63, registered for the control of other pests and Isaria fumosorosea ESALQ-1296 in development as biopesticide especially for the management of D. citri by determining the optimal concentration of adjuvants and of conidia to be used, their effectiveness in laboratory, semifield and field; as well as its compatibility with agrochemicals used in the crop. The comparison of the two fungi applied with six adjuvants for the control of D. citri revealed that except Tween 80 (0.001%), all other adjuvants contributed to increase the effectiveness of the fungi. Control levels obtained in the laboratory bioassays with B. bassiana and I. fumosorosea were confirmed in bioassays in semi-field and field. Both fungi were sprayed 12 times from December 2011 to January 2013 in the field at concentrations of 2.5x106 conidia/mL in 2000 L/ha and 5x106 conidia/mL in 1000 L/ha both with 0.075% of KBRAdj adjuvant. Only in January 2012 the chemical control was superior to all other treatments. In the remaining months, the mortalities caused by all the fungi treatments were similar to each other and similar to chemical control. The mortalities of adult D. citri by fungi ranged from 96.4 ± 3.8% (December/2011) to 57.8 ± 3.5% (October/2012). The effects of 27 agrochemicals on the vegetative growth and sporulation of colonies and conidia viability in vitro and in vivo virulence of the fungus after mixing it with each of the products were determined and showed that except the fungicides, the majority of products are compatible with the fungi and may be tank mixed. These results indicate that B. bassiana ESALQ-PL63 and I. fumosorosea ESALQ-1296 are promising for use in the control of D. citri in integrated pest management programs of citrus.

Huanglongbing é considerado como o principal obstáculo da indústria produtora de sucos de laranja do mundo. No Brasil, a doença está associada predominantemente às bactérias \'Candidatus Liberibacter americanus\' (Lam) e \'Ca. L. asiaticus\' (Las), as quais são transmitidas pelo psilídeo Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). Levantamentos mostram um aumento expressivo na incidência de plantas doentes nos pomares brasileiros e esse incremento se deve, em grande parte, à disseminação pelo inseto vetor. Informações na literatura da influência de fatores ambientais e da condição da planta na mobilidade de D. citri são escassos ou inexistentes, assim como o efeito de Lam em parâmetros biológicos e comportamentais do inseto. O conhecimento desses fatores pode auxiliar no entendimento da epidemiologia da doença e no desenvolvimento de táticas de controle mais eficientes. Diante disso, os objetivos do presente estudo foram (1) determinar o efeito de fatores ambientais no processo de decolagem de D. citri; (2) verificar o efeito da condição da planta no processo de decolagem do inseto; e (3) estudar a possível influência de Lam e Las na biologia, voo e preferência ao pouso de D. citri. No estudo em que foi determinado o efeito de fatores ambientais, adultos sadios de D. citri foram avaliados quanto à periodicidade diária de voo e ao limiar de temperatura para decolagem. Além disso, verificou-se o efeito de diferentes regimes de fotoperíodo e temperatura e temperaturas constantes na fase inicial de voo a partir da coleta de indivíduos que decolavam de seedlings de laranjeira doce [Citrus sinensis (L.) Osbeck] e entravam em tubos de 50 mL acoplados na tampa de gaiolas de garrafa plástica. Usando a mesma metodologia, verificou-se o efeito da condição da planta como estresse hídrico, adubação, brotações e densidade de insetos. Para estudar o efeito das bactérias em parâmetros biológicos e comportamentais, avaliaram-se a duração, viabilidade, longevidade de adultos, razão sexual, período de pré-oviposição, fecundidade e decolagem de adultos que se desenvolveram em plantas infectadas por Lam, Las e plantas sadias. Com os dados de biologia calculou-se uma tabela de vida de fertilidade. Além disso, verificou-se a preferência ao pouso de adultos sadios de D. citri em plantas infectadas por Lam, Las e sadias (controle). Os resultados mostraram que uma pequena parcela da população tende a decolar de plantas cítricas e esse comportamento é mais frequente no período da tarde (14:00 e 16:00 h). Insetos que se desenvolveram em regime de temperatura baixa (18 °C) e curto período de luz (10h) apresentaram menor propensão ao voo. Em contraste, após o desenvolvimento em temperatura constante de 27° C, os insetos apresentaram uma maior tendência de decolagem das plantas. Coincidentemente, estimou-se a temperatura limiar de voo de D. citri em 27,1° C. Ao serem submetidos a plantas com estresse hídrico, adultos foram menos propensos ao voo quando comparados com insetos confinados em plantas com 70 e 100 % de capacidade de campo. Ninfas desenvolvidas em plantas com baixa qualidade nutricional geraram adultos mais propensos ao voo. O mesmo foi observado após o desenvolvimento em plantas com alta densidade populacional de ninfas. Após o desenvolvimento de imaturos de D. citri em plantas infectadas e sadias, observaram-se efeitos negativos induzidos por Lam e Las na viabilidade de ninfas, viabilidade do ciclo total, longevidade de fêmeas e parâmetros reprodutivos. Apesar de estatisticamente semelhante à Las, o efeito negativo de Lam na viabilidade do inseto aparentou ser mais pronunciado. Machos e fêmeas apresentam maior propensão ao voo após o desenvolvimento em plantas Lam. Não foram encontrados efeitos de plantas infectadas no pouso do inseto. Os resultados do presente estudo indicam que o comportamento em voo de D. citri pode ser modulado por fatores ambientais e da planta, os quais podem fornecer bases para o desenvolvimento de novas táticas de controle e ajudar a compreender a epidemiologia do HLB dos citros. Além disso, Lam parece afetar com mais intensidade parâmetros biológicos do inseto, o que poderia ser um fator determinando a baixa incidência de Las nos pomares brasileiros. / Huanglongbing (HLB) is considered the major obstacle to the orange juice industry worldwide. In Brazil, the disease is associated mainly to the bacteria \'Candidatus Liberibacter americanus\' (Lam) and \'Ca. L. asiaticus\' (Las), which are transmitted by the Asian citrus psyllid, Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). Surveys show a significant increase of diseased plants in Brazilian citrus orchards and this increase is mainly due to the movement of the insect vector by flight. Literature information about the influence of environmental and plant condition factors on D. citri take-off are incipient or absent, as well as the effect of Lam on biological and behavioral parameters of the insect. Knowledge of these factors could help to understand HLB epidemiology and to develop effective control tactics. Therefore, the objectives of the current study were (1) to determine the effect of environmental factors on D. citri take-off; (2) to verify the effect of plant condition on D. citri take-off; and (3) to study the possible influence of Lam and Las on the biology, flight propensity and alighting preferences of D. citri. In the study in which the effects of environmental factors were tested, healthy adults of D. citri were evaluated in relation to the diel flight periodicity and the temperature threshold for flight. Furthermore, the effect of different photoperiod and temperature regimes and constant temperatures on D. citri take-off were evaluated considering the number of insects which took off from sweet orange citrus seedlings [Citrus sinensis (L.) Osbeck] and entered inside 50 mL tubes located on the cap of plastic bottle cages. Using the same methodology, the effect of water stress, fertilization, shoots of citrus plants and density of insects were evaluated. To study the effect of bacteria on biological and behavioral parameters, we evaluated some life traits, including development time, survival, adult longevity, sex ratio, preoviposition time, female fecundity and take-off from adults that developed on Lam-infected, Las-infected and healthy plants. A fertility life table was calculated with life-trait data. In addition, the alighting and settling preference of healthy adults on infected and healthy plants was evaluated. The results showed that a small portion of tested population tends to take off from citrus plants and this behavior is more prevalent in the afternoon (14:00-16:00 h). Adults that were submitted to lower temperatures (18° C) and short light periods (10h) showed less propensity to flight. In contrast, at constant 27° C the insects were more prone to fly. Coincidently, the threshold of temperature for flight was 27.1º C. When subjected to water-stressed plants, adults were less prone to fly compared with insects confined on plants with 70 and 100% of field capacity. Nymphs developed on plants with poor nutritional quality generated adults more prone to fly. The same was observed after the development on plants with high population density of nymphs. Negative effects of Lam and Las infections were observed on nymph survival, egg to adult survival, adult longevity and reproductive parameters. Although statistically similar to Las, the negative effect of Lam on viability appeared to be more pronounced than that of Las on D. citri populations. Male and female of D. citri showed more propensity for flight after development on Lam-infected plants, with the Las treatment showing intermediate behavior between Lam and control plants. There was no effect of infected plants on alighting and settling preferences. Results from current study suggest that the flight behavior of D. citri is modulated by environmental and plant conditions factors, which could provide a basis for further development of efficient control tactics and understanding HLB epidemiology. Furthermore, Lam seems to have a more pronounced negative effect on biological parameters of D. citri, which could be a factor determining the low incidence of this bacterium in Brazilian orchards.

Submitted by Tatiany Aparecida Teixeira Soratto (tatiany_soratto@hotmail.com) on 2017-10-31T12:37:37Z No. of bitstreams: 2 DISSERTACAO_Tatiany_final.pdf: 3171924 bytes, checksum: 81e554e8e0137d88785acf8a80455d32 (MD5) Encaminhamento do orientador.pdf: 236358 bytes, checksum: 344f7f279720c6058970c50ae22f4a46 (MD5) / Approved for entry into archive by Alini Demarchi (alini@cca.ufscar.br) on 2017-11-30T14:04:32Z (GMT) No. of bitstreams: 2 DISSERTACAO_Tatiany_final.pdf: 3171924 bytes, checksum: 81e554e8e0137d88785acf8a80455d32 (MD5) Encaminhamento do orientador.pdf: 236358 bytes, checksum: 344f7f279720c6058970c50ae22f4a46 (MD5) / Approved for entry into archive by Alini Demarchi (ri.bar@ufscar.br) on 2018-01-15T17:25:13Z (GMT) No. of bitstreams: 2 DISSERTACAO_Tatiany_final.pdf: 3171924 bytes, checksum: 81e554e8e0137d88785acf8a80455d32 (MD5) Encaminhamento do orientador.pdf: 236358 bytes, checksum: 344f7f279720c6058970c50ae22f4a46 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-01T13:19:19Z (GMT). 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Thus, it is important to deepen the studies with this genus and hybrids to increase knowledge of which mechanisms could be involved in the tolerance to HLB, considered the most important disease of citrus currently. In this sense, the objective of this study was to establish sinteny between the linkage groups of the C. sunki and P. trifoliata maps with the genome of Citrus sinensis and to map genomic regions associated to tolerance CLas bacterium through phenotypic analysis (QTLs) and gene expression (eQTLs). With the comparative analysis between maps and genome, it was observed that all the linkage groups showed synteny with reference genome chromosomes used, with the exception of the linkage group 10 of the C. sunki map. For the phenotypic data, a population of 79 F1 hybrids between C. sunki and P. trifoliata was used. The quantification of the bacterium and accumulation of starch in the leaves were evaluated after two years of inoculation with the pathogen. Through the statistical analysis of the mixed model it was possible to group the hybrids into resistant, tolerant and susceptible, being important the validation of these data in the field. The expression of 14 candidate genes related to HLB was performed in 72 hybrids of the population and used as expression data for the mapping of eQTLs. It was possible to locate nine QTLs and 52 eQTLs on the C. sunki genitor map and 17 QTLs and 40 eQTLs were found on the P. trifoliata genitor map. The overlapping eQTLs of the majority genes of QTL (phenotypic data) indicates that the genes are related to the phenotype and are probably responsive to the pathogen infection. / O Centro APTA Citros Sylvio Moreira/IAC vem realizando um amplo programa de melhoramento genético de citros via cruzamentos dirigidos. Em um estudo prévio com o patossistema Citros-huanglongbing (HLB) realizado pelo nosso grupo, utilizando uma população obtida por hibridação controlada entre Citrus sunki e Poncirus trifoliata, foram verificadas diferenças na multiplicação da bactéria Candidatus Liberibacter asiaticus (CLas), agente causal do HLB, tanto nos genitores quanto na progênie. A taxa de infecção e a concentração de bactéria foi maior em Citrus sunki em relação ao P. trifoliata. Assim, é importante aprofundar os estudos com esses gêneros e seus híbridos para ampliar o conhecimento de quais mecanismos poderiam estar envolvidos na tolerância ao HLB, considerada a mais importante doença dos citros atualmente. O objetivo do trabalho foi estabelecer sintenia entre os grupos de ligação dos mapas de C. sunki e P. trifoliata com o genoma de Citrus sinensis e mapear regiões genômicas associadas à tolerância a CLas por meio de análise fenotípica (QTLs) e de expressão gênica (eQTLs). Com a análise comparativa entre mapas e genoma, foi observado que todos os grupos de ligação apresentaram sintenia com pseudocromossomos do genoma de referência utilizado, com exceção do grupo de ligação 10 do mapa da C. sunki. Para os dados fenotípicos foi utilizada uma população de 79 híbridos F1 entre C. sunki e P. trifoliata, sendo avaliada a quantificação da bactéria e acúmulo de amido nas folhas após dois anos da inoculação com o patógeno. Com a análise estatística utilizando modelo misto foi possível agrupar os híbridos em resistentes, tolerantes e suscetíveis, sendo importante a validação desses dados em campo. A análise de expressão de 14 genes candidatos relacionados ao HLB foi realizada em 72 híbridos da população e utilizados como dados de expressão para o mapeamento de eQTLs. Foram encontrados nove QTLs e 52 eQTLs no mapa do genitor C. sunki enquanto no mapa do genitor P. trifoliata foram encontrados 17 QTLs e 40 eQTLs. A sobreposição de eQTLs da grande maioria dos genes com QTLs dos dados fenotípicos, indicam que os genes têm relação com o fenótipo e que provavelmente são responsivos à infecção do patógeno.

O Huanglongbing (HLB) é a doença dos citros mais importante em todo mundo, por afetar todas as variedades cítricas cultivadas e ser de difícil controle. No Brasil, onde afeta as principais regiões produtoras de citros, a doença vem se espalhando e causando enormes prejuízos à atividade. O manejo do HLB depende da utilização de ações integradas, dentre elas o controle do inseto vetor, o psilídeo-asiátco-dos-citros, Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). Para controlar de forma eficiente esse inseto vetor é necessário que se conheça, por meio de amostragens eficazes, suas características de dinâmica tanto temporal quanto espacial, identificando regiões mais propensas à infestações e épocas do ano em que o inseto se desenvolve melhor. Por isso, o presente estudo teve como objetivos: a) avaliar a dinâmica temporal do psilídeo D. citri em pomares do Estado de São Paulo, examinando o efeito de diferentes regiões, épocas do ano e idade dos plantios; b) verificar a existência de diferenças no número de insetos amostrados em diferentes alturas da planta cítrica, comparando diferentes métodos de amostragem; e c) investigar o padrão de distribuição espacial do inseto em pomares de diferentes idades. Para isso foram realizados levantamentos ao longo de dois anos em seis localidades, representativas de três regiões do parque citrícola paulista, com pomares de diferentes idades, sendo amostradas todas as fases de vida de D. citri e brotações cítricas. Para a avaliação da amostragem de psilídeos em diferentes alturas, foram estudados dois pomares com plantas de diferentes idades, com avaliação da densidade de psilídeos e brotos cítricos em vários estratos da planta, comparando-se dois tipos de amostragem de insetos adultos. Para o estudo da distribuição espacial de D. citri foram feitos levantamentos em pomares de dois municípios da região citrícola central, analisando-se os dados com geoestatística. Foram constatados efeitos de região, idade dos plantios e épocas do ano sobre a população de D. citri. As maiores populações do inseto estão presentes na região central, onde o inseto ocorre com maior frequência ao longo do ano, seguida da região noroeste e sul. Mais ninfas ocorreram em pomares mais jovens, mas a população de adultos não necessariamente ocorre em maiores números nestes locais. A primavera foi a estação do ano na qual ocorreram as maiores populações de insetos, mas elevações populacionais podem ocorrer em qualquer época desde que haja brotações presentes e que o clima seja favorável. A altura de amostragem influenciou o número de adultos de D. citri detectados no pomar mais velho e de todas as fases de vida do inseto no pomar mais novo, bem como o número de brotações cítricas. Amostras mais precisas foram geradas pela amostragem com armadilhas adesivas do que visualmente, sendo recomendada a amostragem de D. citri com armadilhas em pontos mais elevados da planta para melhor precisão. D. citri apresentou distribuição agregada e forte dependência espacial na maioria das datas de amostragem e em pomares de diferentes idades. Focos foram identificados nos pomares, com área de 1.257 m², em média. / Huanglongbing (HLB) is the most important citrus disease in the world, affecting all cultivated citrus varieties, and it is very difficult to control. In Brazil, HLB is spreading in the major citrus producing areas and causing huge losses to the citriculture. Disease management depends on integration of different methods, including control of the insect vector, the Asian citrus psyllid, Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). In order to effectively monitor and control this vector, it is necessary to understand his population dynamics in citrus orchards, identifying regions and seasons where the insect develops higher populations. This study was designed to investigate the temporal and spatial dynamics of D. citri in citrus orchards of Sao Paulo State, examining the effect of different regions, seasons and plant age. Surveys of psyllid populations and citrus shoots were carried out over two years in six locations, representing three growing regions of São Paulo State, in citrus orchards of different ages, where all life stages of D. citri and citrus shoots were sampled. The spatial distribution of D. citri was analyzed by geostatistics in orchards of two municipalities of the central region of São Paulo State. The efficacy of sampling methods (yellow sticky cards vs. visual inspections) and sampling height on the tree canopy for estimating psyllid populations and number of citrus shoots was investigated as well; this particular study was conducted in two orchards of different ages, in the central region. Significant effects of region, orchard age and seasons of the year on the population of D. citri were observed. The highest insect populations are present in the central region, where the insect occurs more frequently throughout the year, followed by the northwestern and southern regions of São Paulo State. More nymphs occurred in younger orchards, but the adult population does not necessarily occur in higher numbers in the younger orchards. Spring was the season of highest populations of D. citri, but population increases can occur at any time if there are shoots present and the weather is favorable. The sampling height influenced the number of D. citri adults trapped by yellow sticky cards in the older orchard, and the numbers of psyllid eggs, nymphs and adults, as well as of citrus shoots, visualized on the younger orchard. More accurate sampling data were generated by using yellow sticky traps compared with visual inspections. Yellow sticky traps should be placed closer to the top of the citrus tree for better accuracy. D. citri showed aggregated pattern and strong spatial dependence in most sampling dates and in orchards of different ages. Foci were identified in the orchards, with a mean area of aggregation of 1,257 m².

Huanglongbing é considerado como o principal obstáculo da indústria produtora de sucos de laranja do mundo. No Brasil, a doença está associada predominantemente às bactérias \'Candidatus Liberibacter americanus\' (Lam) e \'Ca. L. asiaticus\' (Las), as quais são transmitidas pelo psilídeo Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). Levantamentos mostram um aumento expressivo na incidência de plantas doentes nos pomares brasileiros e esse incremento se deve, em grande parte, à disseminação pelo inseto vetor. Informações na literatura da influência de fatores ambientais e da condição da planta na mobilidade de D. citri são escassos ou inexistentes, assim como o efeito de Lam em parâmetros biológicos e comportamentais do inseto. O conhecimento desses fatores pode auxiliar no entendimento da epidemiologia da doença e no desenvolvimento de táticas de controle mais eficientes. Diante disso, os objetivos do presente estudo foram (1) determinar o efeito de fatores ambientais no processo de decolagem de D. citri; (2) verificar o efeito da condição da planta no processo de decolagem do inseto; e (3) estudar a possível influência de Lam e Las na biologia, voo e preferência ao pouso de D. citri. No estudo em que foi determinado o efeito de fatores ambientais, adultos sadios de D. citri foram avaliados quanto à periodicidade diária de voo e ao limiar de temperatura para decolagem. Além disso, verificou-se o efeito de diferentes regimes de fotoperíodo e temperatura e temperaturas constantes na fase inicial de voo a partir da coleta de indivíduos que decolavam de seedlings de laranjeira doce [Citrus sinensis (L.) Osbeck] e entravam em tubos de 50 mL acoplados na tampa de gaiolas de garrafa plástica. Usando a mesma metodologia, verificou-se o efeito da condição da planta como estresse hídrico, adubação, brotações e densidade de insetos. Para estudar o efeito das bactérias em parâmetros biológicos e comportamentais, avaliaram-se a duração, viabilidade, longevidade de adultos, razão sexual, período de pré-oviposição, fecundidade e decolagem de adultos que se desenvolveram em plantas infectadas por Lam, Las e plantas sadias. Com os dados de biologia calculou-se uma tabela de vida de fertilidade. Além disso, verificou-se a preferência ao pouso de adultos sadios de D. citri em plantas infectadas por Lam, Las e sadias (controle). Os resultados mostraram que uma pequena parcela da população tende a decolar de plantas cítricas e esse comportamento é mais frequente no período da tarde (14:00 e 16:00 h). Insetos que se desenvolveram em regime de temperatura baixa (18 °C) e curto período de luz (10h) apresentaram menor propensão ao voo. Em contraste, após o desenvolvimento em temperatura constante de 27° C, os insetos apresentaram uma maior tendência de decolagem das plantas. Coincidentemente, estimou-se a temperatura limiar de voo de D. citri em 27,1° C. Ao serem submetidos a plantas com estresse hídrico, adultos foram menos propensos ao voo quando comparados com insetos confinados em plantas com 70 e 100 % de capacidade de campo. Ninfas desenvolvidas em plantas com baixa qualidade nutricional geraram adultos mais propensos ao voo. O mesmo foi observado após o desenvolvimento em plantas com alta densidade populacional de ninfas. Após o desenvolvimento de imaturos de D. citri em plantas infectadas e sadias, observaram-se efeitos negativos induzidos por Lam e Las na viabilidade de ninfas, viabilidade do ciclo total, longevidade de fêmeas e parâmetros reprodutivos. Apesar de estatisticamente semelhante à Las, o efeito negativo de Lam na viabilidade do inseto aparentou ser mais pronunciado. Machos e fêmeas apresentam maior propensão ao voo após o desenvolvimento em plantas Lam. Não foram encontrados efeitos de plantas infectadas no pouso do inseto. Os resultados do presente estudo indicam que o comportamento em voo de D. citri pode ser modulado por fatores ambientais e da planta, os quais podem fornecer bases para o desenvolvimento de novas táticas de controle e ajudar a compreender a epidemiologia do HLB dos citros. Além disso, Lam parece afetar com mais intensidade parâmetros biológicos do inseto, o que poderia ser um fator determinando a baixa incidência de Las nos pomares brasileiros. / Huanglongbing (HLB) is considered the major obstacle to the orange juice industry worldwide. In Brazil, the disease is associated mainly to the bacteria \'Candidatus Liberibacter americanus\' (Lam) and \'Ca. L. asiaticus\' (Las), which are transmitted by the Asian citrus psyllid, Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). Surveys show a significant increase of diseased plants in Brazilian citrus orchards and this increase is mainly due to the movement of the insect vector by flight. Literature information about the influence of environmental and plant condition factors on D. citri take-off are incipient or absent, as well as the effect of Lam on biological and behavioral parameters of the insect. Knowledge of these factors could help to understand HLB epidemiology and to develop effective control tactics. Therefore, the objectives of the current study were (1) to determine the effect of environmental factors on D. citri take-off; (2) to verify the effect of plant condition on D. citri take-off; and (3) to study the possible influence of Lam and Las on the biology, flight propensity and alighting preferences of D. citri. In the study in which the effects of environmental factors were tested, healthy adults of D. citri were evaluated in relation to the diel flight periodicity and the temperature threshold for flight. Furthermore, the effect of different photoperiod and temperature regimes and constant temperatures on D. citri take-off were evaluated considering the number of insects which took off from sweet orange citrus seedlings [Citrus sinensis (L.) Osbeck] and entered inside 50 mL tubes located on the cap of plastic bottle cages. Using the same methodology, the effect of water stress, fertilization, shoots of citrus plants and density of insects were evaluated. To study the effect of bacteria on biological and behavioral parameters, we evaluated some life traits, including development time, survival, adult longevity, sex ratio, preoviposition time, female fecundity and take-off from adults that developed on Lam-infected, Las-infected and healthy plants. A fertility life table was calculated with life-trait data. In addition, the alighting and settling preference of healthy adults on infected and healthy plants was evaluated. The results showed that a small portion of tested population tends to take off from citrus plants and this behavior is more prevalent in the afternoon (14:00-16:00 h). Adults that were submitted to lower temperatures (18° C) and short light periods (10h) showed less propensity to flight. In contrast, at constant 27° C the insects were more prone to fly. Coincidently, the threshold of temperature for flight was 27.1º C. When subjected to water-stressed plants, adults were less prone to fly compared with insects confined on plants with 70 and 100% of field capacity. Nymphs developed on plants with poor nutritional quality generated adults more prone to fly. The same was observed after the development on plants with high population density of nymphs. Negative effects of Lam and Las infections were observed on nymph survival, egg to adult survival, adult longevity and reproductive parameters. Although statistically similar to Las, the negative effect of Lam on viability appeared to be more pronounced than that of Las on D. citri populations. Male and female of D. citri showed more propensity for flight after development on Lam-infected plants, with the Las treatment showing intermediate behavior between Lam and control plants. There was no effect of infected plants on alighting and settling preferences. Results from current study suggest that the flight behavior of D. citri is modulated by environmental and plant conditions factors, which could provide a basis for further development of efficient control tactics and understanding HLB epidemiology. Furthermore, Lam seems to have a more pronounced negative effect on biological parameters of D. citri, which could be a factor determining the low incidence of this bacterium in Brazilian orchards.

O principal problema fitossanitário da citricultura atualmente é a doença conhecida como greening ou Huanglongbing (HLB), transmitida pelo inseto vetor Diaphorina citri. O presente trabalho objetivou desenvolver estratégias para incorporação dos fungos Beauveria bassiana ESALQ-PL63, registrado para o controle de outras pragas e/ou I. fumosorosea ESALQ-1296 em desenvolvimento como biopesticida especialmente para o manejo de D. citri, determinando a melhor concentração de adjuvantes e de conídios dos fungos a serem utilizados, sua eficácia em laboratório, semi-campo e campo; assim como sua compatibilidade com os agroquímicos utilizados na cultura. Na comparação dos dois fungos aplicados com seis adjuvantes no controle de D. citri revelaram que exceto Tween 80 a 0,001%, todos os outros adjuvantes contribuíram para aumentar a eficácia dos fungos. Os níveis de controle obtidos nos bioensaios em laboratório com B. bassiana e I. fumosorosea foram confirmados nos bioensaios em semi-campo e em campo. Realizaram-se 12 pulverizações com os dois fungos durante o período de dezembro de 2011 a janeiro de 2013 em campo nas concentrações de 2,5x106 conídios/mL em 2000 L/ha e 5x106 conídios/mL em 1000 L/ha ambos com 0,075% do adjuvante KBRAdj. Na comparação mês a mês, somente em janeiro de 2012 o controle químico foi superior a todos os outros tratamentos. No restante dos meses, as mortalidades causadas pelos tratamentos com fungos foram semelhantes entre si e semelhantes ao controle químico. As mortalidades de adultos de D. citri pelos fungos variaram de 96,4±3,8% (dezembro/2011) a 57,8±3,5% (outubro/2012). Os efeitos de 27 agroquímicos sobre o crescimento vegetativo e esporulação das colônias e a viabilidade dos conídios in vitro e a virulência dos fungos in vivo após mistura com cada um dos produtos foram determinados e revelaram que exceto os fungicidas a maioria dos produtos são compatíveis com os fungos e podem ser misturados na calda de aplicação. Estes resultados indicam que Beauveria bassiana ESALQ-PL63 e Isaria fumosorosea ESALQ-1296 são promissores para utilização no controle de D. citri em programas de manejo integrado de pragas de citros. / The main cause of the crop loss in citrus is currently the disease known as greening or Huanglongbing (HLB), transmitted by the insect vector Diaphorina citri. This study aimed to develop strategies for incorporating the fungi Beauveria bassiana ESALQ-PL63, registered for the control of other pests and Isaria fumosorosea ESALQ-1296 in development as biopesticide especially for the management of D. citri by determining the optimal concentration of adjuvants and of conidia to be used, their effectiveness in laboratory, semifield and field; as well as its compatibility with agrochemicals used in the crop. The comparison of the two fungi applied with six adjuvants for the control of D. citri revealed that except Tween 80 (0.001%), all other adjuvants contributed to increase the effectiveness of the fungi. Control levels obtained in the laboratory bioassays with B. bassiana and I. fumosorosea were confirmed in bioassays in semi-field and field. Both fungi were sprayed 12 times from December 2011 to January 2013 in the field at concentrations of 2.5x106 conidia/mL in 2000 L/ha and 5x106 conidia/mL in 1000 L/ha both with 0.075% of KBRAdj adjuvant. Only in January 2012 the chemical control was superior to all other treatments. In the remaining months, the mortalities caused by all the fungi treatments were similar to each other and similar to chemical control. The mortalities of adult D. citri by fungi ranged from 96.4 ± 3.8% (December/2011) to 57.8 ± 3.5% (October/2012). The effects of 27 agrochemicals on the vegetative growth and sporulation of colonies and conidia viability in vitro and in vivo virulence of the fungus after mixing it with each of the products were determined and showed that except the fungicides, the majority of products are compatible with the fungi and may be tank mixed. These results indicate that B. bassiana ESALQ-PL63 and I. fumosorosea ESALQ-1296 are promising for use in the control of D. citri in integrated pest management programs of citrus.

Embora a citricultura seja uma importante atividade econômica no Brasil, nos últimos anos houve uma redução significativa da produção nacional. A baixa rentabilidade que o setor citrícola vem enfrentando, devido ao alto custo de produção, é decorrente principalmente dos problemas fitossanitários, com destaque para as doenças, que afetam diretamente a produtividade dos pomares. Atualmente, o huanglongbing (HLB) é a doença mais grave que afeta a citricultura mundial, sendo que os danos são severos em todas as variedades de citros. Diante desse fato, a transformação genética de plantas é uma alternativa para a obtenção de plantas transgênicas, com genes que estimulem o sistema de defesa das plantas, tornando-as resistentes a doenças. Apesar da eficácia dos protocolos existentes para a transformação genética de citros, uma desvantagem característica de plantas perenes é o ciclo reprodutivo lento, tornando difícil e demorado a validação de novos genes de interesse. Por isso, uma importante estratégia é o uso de plantas modelos, como o tomateiro, que possui ciclo curto e boa eficiência de transformação genética. Assim, o objetivo deste trabalho foi obter plantas transgênicas de Solanum lycopersicum cv. \'Micro-Tom\' e Citrus sinensis, contendo a construção gênica com o gene Csd1 (superóxido dismutase do cobre e do zinco), isolado de Poncirus trifoliata. A proteína codificada pelo gene Csd1, também conhecido como Sod1 (superoxide dismutase 1), é o mais potente antioxidante na natureza e é um importante constituinte de defesa celular contra o estresse oxidativo causado pela infecção bacteriana. O tomateiro Micro-tom foi utilizado como modelo de patogenicidade para validação do gene. Porém, devido a sua baixa eficiência de transformação genética, os experimentos de inoculação com o patógeno não foram realizados. Posteriormente, a caracterização da função do gene Csd1 em relação ao HLB será realizada com as plantas transgênicas de citros. A identificação de plantas transgênicas, de tomate e de laranja doce, foi realizada por meio da análise de PCR, utilizando primers para a detecção do gene Csd1. As plantas PCR+ foram aclimatizadas e transferidas para casa-de-vegetação. A eficiência de transformação genética do tomateiro \'Micro-Tom\' e das cultivares de laranja doce, \'Hamlin\' e \'Pineapple\', foram respectivamente: 0,34%, 4,74% e 3,65%. A caracterização molecular pelas análises de Southern blot e RT-qPCR foi realizada apenas em plantas de citros. Foi possível confirmar a integração do transgene em 32 eventos obtidos. O número de eventos de inserção variou de 1 - 5, sendo a presença do gene endógeno Csd1, localizada em 3 locais distintos no genoma das plantas. O nível de mRNA do transgene foi verificada em 21 plantas que tiveram apenas uma única inserção do transgene no genoma. Os resultados obtidos mostram que houve transcrição do gene Csd1 nas plantas transgênicas, assim como, na testemunha não transgênica. A relação do nível de transcrição do transgene com a resistência das plantas ao patógeno será definida após a inoculação com Candidadus Liberibacter. / Although the citrus industry is an important economic activity in Brazil, in recent years there has been a significant reduction in the national citrus production. The low profitability of the citrus sector has faced due to the high production cost is mainly attributed to phytosanitary problems, particularly diseases that directly affect productivity of orchards. Currently, huanglongbing (HLB) is the most serious disease that affects the global citrus industry and the damage is severe in all citrus varieties. Genetic transformation of plants is an alternative to obtain transgenic plants with genes that stimulate the plant defense system, making it resistant to diseases. Despite the effectiveness of protocols for genetic transformation of citrus, a characteristic disadvantage of perennial plants is the slow reproductive cycle, hindering validation of new genes of interest. Therefore, an important strategy is the use of model plants, such as the tomato, which has a short cycle and good genetic transformation efficiency. The objective of this study was to obtain transgenic plants of Solanum lycopersicum cv. \"Micro-Tom \'and Citrus sinensis, containing the gene construct with Csd1 gene (copper/zinc superoxide dismutase), isolated of Poncirus trifoliata. The protein encoded by the gene Csd1, also known as SOD1 (superoxide dismutase 1), is the most powerful antioxidant in nature and is important constituent of cellular defense against oxidative stress caused by bacterial infection. \'Micro-tom\' tomato was used as a model for pathogenic gene validation. However, due to its low efficiency of genetic transformation, the inoculation experiments with the pathogen were not realized. Posteriorly, the characterization of gene function Csd1 in relation to the HLB disease will be realize with citrus transgenic plants. The objective of this study was to obtain transgenic plants of Solanum lycopersicum cv. \'Micro-Tom\' and of Citrus sinensis, containing the gene construction with Csd1 gene (copper/zinc superoxide dismutase), isolated of Poncirus trifoliata, for validation and for future study of this gene for resistance to HLB. Proteins encoded by the Csd1 gene, also known as SOD1 (superoxide dismutase 1), are the most powerful antioxidants in nature and are important constituents of cellular defense against oxidative stress caused by bacterial infection. The identification of transgenic plants of tomato and sweet orange was performed by the PCR analysis using primers for the detection of Csd1 gene. The PCR+ plants were acclimatized and transferred to a greenhouse. The genetic transformation efficiency of tomato \'Micro-Tom\' and sweet orange cultivars, \'Hamlin\' and \'Pineapple\', were 0.34%, 4.74% and 3.65%, respectively. The molecular characterization with the Southern blot and RT-qPCR analyses was performed only in citrus plants. The transgene integration was confirmed in 32 plants. The number of insertion events ranged from 1-5 and the presence of Csd1 endogenous gene is found in three distinct locations in the plants genome. The mRNA level of the transgene was verified in 21 plants that had only a single transgene insertion into the plant genome. The results show that there was transcription of Csd1 gene in transgenic plants as well as in non-transgenic plants. The relation between the transgene transcript level with the resistance of plants to pathogens is set after inoculation with Candidadus Liberibacter.

Bacillus thuringiensis (Bt) é uma bactéria entomopatogênica encontrada em várias partes do mundo e tem a capacidade de produzir cristais durante a fase estacionária do crescimento. Esses cristais são toxinas compostas por proteínas ativas contra uma ampla variedade de fases imaturas de insetos. As toxinas do Bt têm sido usadas como bioinseticidas por décadas no controle de insetos das ordens Coleoptera, Lepidoptera e Diptera, e algumas toxinas já foram selecionadas como efetivas contra ácaros, nematoides e insetos sugadores de floema da ordem Hemiptera, como os afídeos. Recentemente, foi comprovada a patogenicidade de três isolados de Bt a outro inseto dessa ordem, o psilídeo Diaphorina citri. Esse psilídeo é vetor das bactérias Candidatus Liberibacter spp., agentes causais da principal doença dos citros: o Huanglongbing ou HLB. A descoberta da capacidade endofítica de Bt em plantas de diferentes espécies vegetais abriu perspectivas para novos estudos usando o Bt para controle de insetos sugadores, como a D. citri. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito patogênico de cada toxina Cry ou Cyt presente nestes três isolados através de isolados de Bt recombinantes expressando as toxinas individualmente. Foram montados bioensaios para confirmar a taxa de mortalidade causada por isolados de Bt contra ninfas de D. citri. Os bioensaios foram feitos usando cinco plantas de laranja doce (Citrus sinensis (L.) Osbeck) e dez ninfas de 3º ínstar de D. citri por planta, além dos controles (sem Bt). A mortalidade das ninfas foi avaliada diariamente durante cinco dias. Durante a avaliação, as ninfas mortas foram coletadas para o isolamento do Bt além da detecção do gene da toxina por PCR. No final do experimento, as folhas jovens onde as ninfas se alimentavam também foram avaliadas quanto à presença do Bt. Nossos resultados confirmaram que os isolados de Bt previamente identificados como patogênicos a D. citri causaram elevada mortalidade (em média 68-93%) em ninfas de 3º ínstar. Dentre os isolados recombinantes testados, um deles apresentou grande destaque, causando a mortalidade de 68-81% das ninfas em 48 horas e 83-93% em 120 horas. Esse isolado possui grande potencial de uso no controle biológico de D. citri através da produção de um bioinseticida ou produção de plantas de citros transgênicas. / Bacillus thuringiensis (Bt) is an entomopathogenic bacterium found in several locations around the world and has the ability to produce crystals during the stationary phase of growth. These crystals are composed of protein toxins that are active against a wide variety of insect larvae. The Bt toxins have been used for decades as biopesticides to control insects of the orders Coleoptera, Lepidoptera, and Diptera. Some toxins have been selected as effective for mites, nematodes and phloem-sucking insects of the order Hemipera, such as aphids. The pathogenicity of strains of Bt to Diaphorina citri, an hemipteran known as Asian citrus psyllid, has been recently demonstrated. This psyllid is the vector of the bacteria Candidatus Liberibacter spp., the causal agents of the main disease of citrus: Huanglongbing or HLB. The discovery of the ability of Bt strains to endophytically colonize plants of different species has opened new perspectives for studies. The aim of this work was to evaluate the pathogenic effect of each Cry or Cyt toxin present in these three isolates through the use of recombinant Bt isolates expressing each toxin individually. A series of bioassays were done in order to confirm the mortality caused by Bt strains against nymphs of D. citri. Bioassays were performed in five seedlings of Citrus sinensis (L.) Osbeck (five replicates/ bioassay) and using ten D. citri 3rd instar nymphs to each assay plant. A suspension containing Bt spores was inoculated via drench in each seedling, and five seedlings were maintained as negative control (without Bt). Mortality was assessed daily for five days. During the bioassays, dead nymphs were collected for further Bt isolation and detection by PCR. At the end of the experiment, young leaves where nymphs feed were also collected to Bt isolation and detection. Our results confirmed that the previously identified Bt isolates pathogenic to D. citri cause high mortality to 3rd instar nymphs. Among the ten recombinant isolates tested, one of them stood out, causing 68-81 % and 83-93% mortality after 48 and 120 hours of inoculation, respectively. The isolation of Bt from dead nymphs and young leaves, and PCR performed with specific primers confirmed the presence of the Bt isolates in psyllids and plants, and their involvement in psyllid mortality. This recombinant Bt with the higher mortality rate found in our results has the potential to be used as a bioinsecticide to control D. citri and the toxin gene can be used to genetic engineering of citrus.