Thesis (M.S.)--University of Michigan, 1986.

Thesis (M.S.)--University of Michigan, 1986.

Thesis (M.Sc. (Pathobiology))--Mahidol University, 1983.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-09-02Bitstream added on 2014-06-13T19:12:38Z : No. of bitstreams: 1 costa_tac_me_araca.pdf: 243307 bytes, checksum: 51ba4339b5f183921482d79e00370718 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho teve como objetivos estudar, em uma área endêmica para leishmaniose visceral, a soroprevalência anticorpos anti-Leishmania spp. em felinos, por meio duas técnicas de ensaio imunoenzimático (ELISA), ELISA-prot.A e ELISA-IgG, utilizando-se 200 gatos. Para avaliar a performance dos testes sorológicos utilizados no diagnóstico da leishmaniose felina, foram calculadas as especificidades e sensibilidades de cada teste, bem como o índice kappa (k) para cada um deles, com o intuito de avaliar a concordância dos métodos com o teste parasitológico direto (padrão ouro). Foram observadas formas amastigotas do patasito em 4% (8/200) gatos. Pelo ELISA-Prot.A, 4,5% (9/200) dos gatos apresentaram títulos acima do ponto de corte para a espécie e, pelo ELISA-IgG, 11,5% (23/200) dos animais foram considerados soropositivos. O ELISA-Prot.A apresentou sensibilidade de 12,5%, especificidade de 64,5% e concordância fraca com o teste parasitológico direto. O ELISA-IgG apresentou sensibilidade de 25% e especificidade de 19,2%, com índice kappa também indicando fraca concordância. / The present work aimed to study, in an endemic area for visceral leishmaniasis, the seroprevalence of Leishmania sp. infection in cats using two enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) techniques, ELISA-protein A and ELISAimmunoglobulin G. For this purpose, a total of 200 cats were employed. To evaluate the performance of the available sorological tests for the diagnosis of feline leishmaniasis it was determined and compared the sensitivity and specificity of ELISA-prot. A and ELISA-IgG, as well as the kappa index (k) for each one, to measure its concordance with the parasitilogical test (gold standard). Amastigote forms of the parasite were observed in eight (4.0%) cats. By ELISA-proteín A nine (4,5%) cats presented titer above the specie’s cut off point and by ELISA-IgG 23 (11,5%) were considered seropositive. The ELISA-proteín A was 12,5% sensitive and 65,4% specific, and showed a weak concordance with the parasitological test. The ELISA-IgG showed a sensitivity of 25% and specificity of 19,2% and when kappa index was analysed, a weak concordance was observed too.

Orientador: Mary Marcondes / Banca: Valéria Marçal Felix de Lima / Banca: Márcia Dalastra Laurenti / Resumo: O presente trabalho teve como objetivos estudar, em uma área endêmica para leishmaniose visceral, a soroprevalência anticorpos anti-Leishmania spp. em felinos, por meio duas técnicas de ensaio imunoenzimático (ELISA), ELISA-prot.A e ELISA-IgG, utilizando-se 200 gatos. Para avaliar a performance dos testes sorológicos utilizados no diagnóstico da leishmaniose felina, foram calculadas as especificidades e sensibilidades de cada teste, bem como o índice kappa (k) para cada um deles, com o intuito de avaliar a concordância dos métodos com o teste parasitológico direto (padrão ouro). Foram observadas formas amastigotas do patasito em 4% (8/200) gatos. Pelo ELISA-Prot.A, 4,5% (9/200) dos gatos apresentaram títulos acima do ponto de corte para a espécie e, pelo ELISA-IgG, 11,5% (23/200) dos animais foram considerados soropositivos. O ELISA-Prot.A apresentou sensibilidade de 12,5%, especificidade de 64,5% e concordância fraca com o teste parasitológico direto. O ELISA-IgG apresentou sensibilidade de 25% e especificidade de 19,2%, com índice kappa também indicando fraca concordância. / Abstract: The present work aimed to study, in an endemic area for visceral leishmaniasis, the seroprevalence of Leishmania sp. infection in cats using two enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) techniques, ELISA-protein A and ELISAimmunoglobulin G. For this purpose, a total of 200 cats were employed. To evaluate the performance of the available sorological tests for the diagnosis of feline leishmaniasis it was determined and compared the sensitivity and specificity of ELISA-prot. A and ELISA-IgG, as well as the kappa index (k) for each one, to measure its concordance with the parasitilogical test (gold standard). Amastigote forms of the parasite were observed in eight (4.0%) cats. By ELISA-proteín A nine (4,5%) cats presented titer above the specie's cut off point and by ELISA-IgG 23 (11,5%) were considered seropositive. The ELISA-proteín A was 12,5% sensitive and 65,4% specific, and showed a weak concordance with the parasitological test. The ELISA-IgG showed a sensitivity of 25% and specificity of 19,2% and when kappa index was analysed, a weak concordance was observed too. / Mestre

A toxoplasmose é uma protozoose altamente prevalente que atinge pelo menos um bilhão de indivíduos no mundo. A infecção causada pelo Toxoplasma gondii é benigna e assintomática, mas pode causar perdas visuais ou morte em fetos e pacientes imunossuprimidos. Isto pode ser controlado com diagnóstico e instituição de tratamento, mas depende da determinação de infecção ativa ou recente. O diagnóstico parasitológico é complexo, demorado e só executado em poucos centros, sendo a sorologia específica essencial no diagnóstico da doença. A avidez de anticorpos IgG tem sido utilizada para determinação da infecção recente, porém os testes convencionais de avidez só permitem uma estimativa indireta destes anticorpos a partir dos anticorpos totais e os de alta avidez. A quantificação destes anticorpos de baixa avidez seria interessante devido aos altos títulos na fase aguda da infecção ou como marcadores da atividade da doença. Padronizamos um ensaio imunoenzimático (ELISA), utilizando o pH como agente caotrópico, para permitir a determinação e quantificação dos anticorpos de baixa avidez. Na padronização utilizamos amostras de soro de coelhos experimentalmente infectados ou amostras do banco de material biológico do Laboratório de Protozoologia do IMTSP. Nossos resultados mostraram que pH 3,5 apresentou poder caotrópico semelhante a uréia 6M (r2= 0,9909), e que nos soros experimentais, os anticorpos de alta avidez foram resistentes aos dois caotrópicos associados. Os anticorpos recuperados na eluição com pH 3.5 ou Uréia eram semelhantes quanto a especificidade antigênica por imunomarcação ou Western Blot. A neutralização do anticorpo eluído por pH permitiu seu reensaio por ELISA após 1 hora de renaturação, com a quantificação direta dos anticorpos de baixa avidez.. A reprodutibilidade intra e inter teste foi superior a 95%, embora com resultados piores para o pH 3,5. Uma vez padronizada a reação, foram analisadas 150 amostras de soros humanos com sorologia e avidez conhecidas, composta por grande maioria de soros de alta avidez. As medidas de avidez por porcentagem mostraram um resultado errático, atribuído ao uso de grande maioria de anticorpos de alta avidez, embora a medida dos anticorpos recuperados mantivesse correlação com estimativa a partir da medida indireta (r2= 0.48). Esta abordagem permite a determinação direta dos anticorpos de baixa avidez, que são os anticorpos inicialmente produzidos em um desafio antigênico. Nosso ensaio é semelhante ao imunológico, já que a apresentação de antígenos por exossomos ácidos de células dendríticas foliculares no centro germinativo parece ser o sistema de seleção de clones produtores de anticorpos de alta avidez. As perspectivas futuras de uso da medida dos anticorpos de baixa avidez na toxoplasmose são imensas, desde a relação com a gravidade da doença, pela sua quantidade, ou da presença de infecção recente, principalmente em infecção congênita ou e em imunossuprimidos, ou a reatividade da doença crônica, como na toxoplasmose ocular. / Toxoplasmosis is a highly prevalent protozoosis, affecting at least one billion people worldwide. The infection caused by Toxoplasma gondii is asymptomatic and benign but it can cause visual losses in addition to death in fetuses and immunocompromised patients. The agent can be controlled by early diagnosis and treatment, but this therapy depends on the determination of active or recent infection. The parasitological diagnosis is complex, time consuming and only performed in few centers, so specific serology is essential for diagnosis. The IgG avidity tests has been used to determine recent infection, but avidity conventional tests only provide an indirect estimate of low avidity antibodies from the total and high avidity antibodies. The quantification of low avidity antibodies would be interesting due to high titers in the acute phase of infection or as markers of disease activity. Using reversible chaotrope such as pH, we standardized an enzyme immunoassay (ELISA) to allow the determination and quantification of low avidity antibodies. For standardization we used serum samples from experimentally infected rabbits or samples of biological material bank of the Laboratory of Protozoology, IMTSP. Our results showed that pH 3.5 is a chaotrope similar to 6M urea (r2 = 0.9909) in avidity ELISA, and high avidity antibodies had similar resistance to two associated chaotrope in experimental sera. The antibodies recovered on elution with pH 3.5 or urea had similar antigen specificity by immunostaining or Western blot. The neutralizing antibody eluted by pH allowed retest by ELISA after 1 hour of refolding, with direct quantification of antibodies of low avidity. The reproducibility inter and intra test were above 95%, but with worse results for pH 3.5. After standardization, we analyzed 150 samples of human sera with known serology and avidity, composed by a large majority of high avidity samples. Avidity as percent of high avidity antibodies showed erratic results in chaotrope comparison, attributed to the majority of high avidity samples, although the direct measure of low avidity IgG kept correlation with the indirect estimate (r2 = 0.48). This approach allows the direct determination of low avidity antibodies that are early produced in an antigen challenge. Our test is similar to the biology of antibody selection, since antigen presentation by acid exosomes of follicular dendritic cells in germinal center seems to be the system of selection of clones that produce high avidity antibodies. The prospective use of the quantification of low avidity antibodies in toxoplasmosis are attractive, either by the quantitative relationship with the severity of the disease; or the increased presence in recent infections, especially in congenital infection and in immunosuppressed patients, or their relative increase in reactivated chronic disease, such as ocular toxoplasmosis.

O aparelho ortodôntico promove alterações microbiológicas na cavidade bucal, em função da variedade de materiais sólidos e elásticos que possuem, os quais funcionam como áreas de retenção, levando a um acúmulo de biofilme e predispondo o hospedeiro à cárie dental e à doença periodontal. Os objetivos do presente estudo, in vivo, foram: 1) Avaliar, as alterações no índice de placa (PI), índice gengival (GI), índice de sangramento gengival (GBI) e no volume do fluido crevicular, em pacientes com 3 diferentes desenhos de bráquetes metálicos (autoligados e convencionais), a fim de verificar se o desenho dos bráquetes interfere no acúmulo de placa e na saúde gengival; 2) Estudar as alterações nos níveis de diferentes micro-organismos envolvidos direta ou indiretamente na cárie dental, na saliva e in situ, pré e pós-colagem de bráquetes convencionais e autoligados; 3) Avaliar os níveis salivares e in situ, de espécies de micro-organismos dos complexos roxo, verde, laranja e vermelho e de outras espécies, pré e pós-colagem de bráquetes convencionais e autoligados, por meio de sondas de DNA e 4) Quantificar citocinas pró-inflamatórias no fluido crevicular, antes e após a colagem dos diferentes bráquetes. A amostra foi constituída de 20 pacientes, com idade entre 11 e 15 anos (Média: 13,3 anos), que receberam bráquetes metálicos convencionais GeminiTM e dois diferentes tipos de bráquetes autoligados: In-Ovation®R e SmartClipTM em incisivos e caninos superiores. Os índices, o volume do fluido e as amostra de saliva (S0) foram obtidos antes da instalação dos aparelhos (T0) e após 30(T1) e 60(T2) dias. Um bráquete de cada tipo foi removido 30 e 60 dias após a colagem. Os dados foram submetidos à análise estatística utilizando-se os testes não-paramétricos de Friedman, Mann-Whitney e Wilcoxon e coeficiente de correlação não-paramétrico de Spearman. A análise da concentração de citocinas no fluido crevicular foi realizada segundo modelo de análise de variância misto, seguida pelo teste de Tukey, com nível de significância de 5%. Não houve correlação entre o grau de apinhamento, overjet e overbite com os escores do índice de placa (PI), índice gengival, índice de sangramento gengival e com o volume do fluido crevicular no tempo inicial T0 (p>0,05). Verificou-se a diferença significativa nos escores de PI e volume do fluido crevicular somente nos dentes que receberam bráquetes autoligados SmartClipTM, entre os tempos T0-T2(p<0,05). Identificou-se a presença de 21 das 22 espécies bacterianas e 4 das 5 espécies fúngicas, na saliva, antes da colagem dos aparelhos ortodônticos. In situ, no bráquete autoligado SmartClipTM observou-se maiores níveis de espécies do complexo vermelho 60 dias após a colagem. Para os bráquetes convencionais GeminiTM verificou-se diminuição nos níveis de espécies do complexo roxo. Para o bráquete autoligado In-Ovation®R identificou-se diferença significativa para C. rectus 30 dias após a colagem e para S. mutans 60 dias após a colagem. Quando comparou-se os níveis salivares e os in situ, verificou-se maiores níveis de espécies nos bráquetes, in situ, sendo que os autoligados apresentaram os maiores valores. Aumento significante foi verificado para os bráquetes autoligados In-Ovation®R, para S. mutans e L. casei. Após 60 dias da colagem do aparelho ortodôntico observou-se um aumento nos níveis de TNF-&alpha; (p<0.005), em todos os tipos de bráquetes. Considerando-se as condições específicas desse estudo, pode-se concluir que o desenho do bráquete modulou o índice de placa, o volume do fluido crevicular, e os níveis bacterianos do complexo vermelho, sendo o bráquete autoligado SmartClipTM o que apresentou o pior desempenho, nesse aspecto. O bráquete autoligado In-Ovation®R apresentou maiores níveis bacterianos relacionados à cárie dental e espécies do complexo laranja. A concentração de citocinas no fluido crevicular não foi modulada pelo desenho do bráquete, ocorrendo um aumento na concentração de TNF-&alpha; nos três tipos de bráquetes (convencional e autoligados) 60 dias após a colagem. A análise global dos resultados obtidos nos diferentes parâmetros analisados no presente estudo permitiu evidenciar, em geral, melhores resultados clínicos com o bráquete metálico convencional GeminiTM. / The orthodontic appliance promoting several changes in oral cavity according to the variety of solid and elastic materials used in the treatment, leading to the biofilm development. The aim of this study, in vivo, was: 1) Evaluate the periodontal index: Plaque Index (PI), Gingival Index (GI), Gingival Bleeding Index (GBI)and gingival crevicular fluid volume. 2) The levels of cariogenic and periodontopatogenical bacteria in saliva and in two different metallic brackets: self-ligating and conventional, quantify the levels before and 30 and 60 days after bonding orthodontic appliance. 3) The levels of red, orange green and purple complex and others species, in situ and in the saliva. 4) The pro-inflammatory cytokines levels in the gingival crevicular fluid. The sample consisted of 20 patients, aged between 11 and 15 years (mean 13.3 years) who received conventional metal bracket GeminiTM and two different types of self-ligating brackets: In-Ovation®R and SmartClipTM in maxillary incisors and canines. The rates, the volume of the fluid and saliva sample (S0) were obtained before the device (T0), 30 (T1) and 60 (T2) after bonding. A type of each bracket was removed 30 to 60 days after bonding. Data were analyzed statistically using the nonparametric Friedman test, Mann-Whitney and Wilcoxon coefficient and nonparametric Spearman correlation with a significance level of 5 %. The cytokine levels was analyzed by the mixed models, follow to the Tukey test. There was no correlation among the scores of crowding, overjet and overbite with the scores of plaque index (PI), gingival index (GI), gingival bleeding index (GBI) and volume of crevicular fluid at the initial time T0 (p>0.05). There was a significantly difference in PI and crevicular fluid volume, when compared each bracket separately, only the teeth that received self-ligating bracket SmartClipTM, between times T0-T2 (p<0.05). We identified, in the saliva, the presence of 21, bacterial species, of the 22 analyzed; 4 of the 5 fungal species, before bonding the orthodontic appliance. In situ, to the SmartClipTM the highest levels were observed to the red complex 60 days after bonding. To the GeminiTM a decreased to the purple complex was observed when compared 30 and 60 days after bonding. The In-Ovation®R showed a significantly difference to C. rectus, 30 days after bonding. S. mutans, 60 days after bonding. 30 days after bonding the microbial levels is highest in the saliva than in situ, the self-ligating brackets present the highest levels than conventional brackets. 60 days after bonding the TNF-&alpha; levels was increased (p<0,05). The microbial levels was highest in the self-ligating brackets than the conventional brackets. The bracket design seems influenced the plaque index, the volume of the crevicular fluid, the microbial adhesion. The levels in situ are highest than in saliva. The TNF-&alpha; levels were increased 60 days after bonding. The bracket design change the PI, gingival crevicular volume and the red complex species, the SmartClipTM showed the worst results in this point. The In-Ovation®R presented the highest levels of the species to the orange complex and cariogenic species. The design didn\'t modulated the cytokine levels, th TNF&alpha;, increased for all brackets. The global analyses of the results allows us to conclude that the GeminiTM conventional bracket showed the best results when compared to the others self-ligating.

O aparelho ortodôntico promove alterações microbiológicas na cavidade bucal, em função da variedade de materiais sólidos e elásticos que possuem, os quais funcionam como áreas de retenção, levando a um acúmulo de biofilme e predispondo o hospedeiro à cárie dental e à doença periodontal. Os objetivos do presente estudo, in vivo, foram: 1) Avaliar, as alterações no índice de placa (PI), índice gengival (GI), índice de sangramento gengival (GBI) e no volume do fluido crevicular, em pacientes com 3 diferentes desenhos de bráquetes metálicos (autoligados e convencionais), a fim de verificar se o desenho dos bráquetes interfere no acúmulo de placa e na saúde gengival; 2) Estudar as alterações nos níveis de diferentes micro-organismos envolvidos direta ou indiretamente na cárie dental, na saliva e in situ, pré e pós-colagem de bráquetes convencionais e autoligados; 3) Avaliar os níveis salivares e in situ, de espécies de micro-organismos dos complexos roxo, verde, laranja e vermelho e de outras espécies, pré e pós-colagem de bráquetes convencionais e autoligados, por meio de sondas de DNA e 4) Quantificar citocinas pró-inflamatórias no fluido crevicular, antes e após a colagem dos diferentes bráquetes. A amostra foi constituída de 20 pacientes, com idade entre 11 e 15 anos (Média: 13,3 anos), que receberam bráquetes metálicos convencionais GeminiTM e dois diferentes tipos de bráquetes autoligados: In-Ovation®R e SmartClipTM em incisivos e caninos superiores. Os índices, o volume do fluido e as amostra de saliva (S0) foram obtidos antes da instalação dos aparelhos (T0) e após 30(T1) e 60(T2) dias. Um bráquete de cada tipo foi removido 30 e 60 dias após a colagem. Os dados foram submetidos à análise estatística utilizando-se os testes não-paramétricos de Friedman, Mann-Whitney e Wilcoxon e coeficiente de correlação não-paramétrico de Spearman. A análise da concentração de citocinas no fluido crevicular foi realizada segundo modelo de análise de variância misto, seguida pelo teste de Tukey, com nível de significância de 5%. Não houve correlação entre o grau de apinhamento, overjet e overbite com os escores do índice de placa (PI), índice gengival, índice de sangramento gengival e com o volume do fluido crevicular no tempo inicial T0 (p>0,05). Verificou-se a diferença significativa nos escores de PI e volume do fluido crevicular somente nos dentes que receberam bráquetes autoligados SmartClipTM, entre os tempos T0-T2(p<0,05). Identificou-se a presença de 21 das 22 espécies bacterianas e 4 das 5 espécies fúngicas, na saliva, antes da colagem dos aparelhos ortodônticos. In situ, no bráquete autoligado SmartClipTM observou-se maiores níveis de espécies do complexo vermelho 60 dias após a colagem. Para os bráquetes convencionais GeminiTM verificou-se diminuição nos níveis de espécies do complexo roxo. Para o bráquete autoligado In-Ovation®R identificou-se diferença significativa para C. rectus 30 dias após a colagem e para S. mutans 60 dias após a colagem. Quando comparou-se os níveis salivares e os in situ, verificou-se maiores níveis de espécies nos bráquetes, in situ, sendo que os autoligados apresentaram os maiores valores. Aumento significante foi verificado para os bráquetes autoligados In-Ovation®R, para S. mutans e L. casei. Após 60 dias da colagem do aparelho ortodôntico observou-se um aumento nos níveis de TNF-&alpha; (p<0.005), em todos os tipos de bráquetes. Considerando-se as condições específicas desse estudo, pode-se concluir que o desenho do bráquete modulou o índice de placa, o volume do fluido crevicular, e os níveis bacterianos do complexo vermelho, sendo o bráquete autoligado SmartClipTM o que apresentou o pior desempenho, nesse aspecto. O bráquete autoligado In-Ovation®R apresentou maiores níveis bacterianos relacionados à cárie dental e espécies do complexo laranja. A concentração de citocinas no fluido crevicular não foi modulada pelo desenho do bráquete, ocorrendo um aumento na concentração de TNF-&alpha; nos três tipos de bráquetes (convencional e autoligados) 60 dias após a colagem. A análise global dos resultados obtidos nos diferentes parâmetros analisados no presente estudo permitiu evidenciar, em geral, melhores resultados clínicos com o bráquete metálico convencional GeminiTM. / The orthodontic appliance promoting several changes in oral cavity according to the variety of solid and elastic materials used in the treatment, leading to the biofilm development. The aim of this study, in vivo, was: 1) Evaluate the periodontal index: Plaque Index (PI), Gingival Index (GI), Gingival Bleeding Index (GBI)and gingival crevicular fluid volume. 2) The levels of cariogenic and periodontopatogenical bacteria in saliva and in two different metallic brackets: self-ligating and conventional, quantify the levels before and 30 and 60 days after bonding orthodontic appliance. 3) The levels of red, orange green and purple complex and others species, in situ and in the saliva. 4) The pro-inflammatory cytokines levels in the gingival crevicular fluid. The sample consisted of 20 patients, aged between 11 and 15 years (mean 13.3 years) who received conventional metal bracket GeminiTM and two different types of self-ligating brackets: In-Ovation®R and SmartClipTM in maxillary incisors and canines. The rates, the volume of the fluid and saliva sample (S0) were obtained before the device (T0), 30 (T1) and 60 (T2) after bonding. A type of each bracket was removed 30 to 60 days after bonding. Data were analyzed statistically using the nonparametric Friedman test, Mann-Whitney and Wilcoxon coefficient and nonparametric Spearman correlation with a significance level of 5 %. The cytokine levels was analyzed by the mixed models, follow to the Tukey test. There was no correlation among the scores of crowding, overjet and overbite with the scores of plaque index (PI), gingival index (GI), gingival bleeding index (GBI) and volume of crevicular fluid at the initial time T0 (p>0.05). There was a significantly difference in PI and crevicular fluid volume, when compared each bracket separately, only the teeth that received self-ligating bracket SmartClipTM, between times T0-T2 (p<0.05). We identified, in the saliva, the presence of 21, bacterial species, of the 22 analyzed; 4 of the 5 fungal species, before bonding the orthodontic appliance. In situ, to the SmartClipTM the highest levels were observed to the red complex 60 days after bonding. To the GeminiTM a decreased to the purple complex was observed when compared 30 and 60 days after bonding. The In-Ovation®R showed a significantly difference to C. rectus, 30 days after bonding. S. mutans, 60 days after bonding. 30 days after bonding the microbial levels is highest in the saliva than in situ, the self-ligating brackets present the highest levels than conventional brackets. 60 days after bonding the TNF-&alpha; levels was increased (p<0,05). The microbial levels was highest in the self-ligating brackets than the conventional brackets. The bracket design seems influenced the plaque index, the volume of the crevicular fluid, the microbial adhesion. The levels in situ are highest than in saliva. The TNF-&alpha; levels were increased 60 days after bonding. The bracket design change the PI, gingival crevicular volume and the red complex species, the SmartClipTM showed the worst results in this point. The In-Ovation®R presented the highest levels of the species to the orange complex and cariogenic species. The design didn\'t modulated the cytokine levels, th TNF&alpha;, increased for all brackets. The global analyses of the results allows us to conclude that the GeminiTM conventional bracket showed the best results when compared to the others self-ligating.

A toxoplasmose é uma protozoose altamente prevalente que atinge pelo menos um bilhão de indivíduos no mundo. A infecção causada pelo Toxoplasma gondii é benigna e assintomática, mas pode causar perdas visuais ou morte em fetos e pacientes imunossuprimidos. Isto pode ser controlado com diagnóstico e instituição de tratamento, mas depende da determinação de infecção ativa ou recente. O diagnóstico parasitológico é complexo, demorado e só executado em poucos centros, sendo a sorologia específica essencial no diagnóstico da doença. A avidez de anticorpos IgG tem sido utilizada para determinação da infecção recente, porém os testes convencionais de avidez só permitem uma estimativa indireta destes anticorpos a partir dos anticorpos totais e os de alta avidez. A quantificação destes anticorpos de baixa avidez seria interessante devido aos altos títulos na fase aguda da infecção ou como marcadores da atividade da doença. Padronizamos um ensaio imunoenzimático (ELISA), utilizando o pH como agente caotrópico, para permitir a determinação e quantificação dos anticorpos de baixa avidez. Na padronização utilizamos amostras de soro de coelhos experimentalmente infectados ou amostras do banco de material biológico do Laboratório de Protozoologia do IMTSP. Nossos resultados mostraram que pH 3,5 apresentou poder caotrópico semelhante a uréia 6M (r2= 0,9909), e que nos soros experimentais, os anticorpos de alta avidez foram resistentes aos dois caotrópicos associados. Os anticorpos recuperados na eluição com pH 3.5 ou Uréia eram semelhantes quanto a especificidade antigênica por imunomarcação ou Western Blot. A neutralização do anticorpo eluído por pH permitiu seu reensaio por ELISA após 1 hora de renaturação, com a quantificação direta dos anticorpos de baixa avidez.. A reprodutibilidade intra e inter teste foi superior a 95%, embora com resultados piores para o pH 3,5. Uma vez padronizada a reação, foram analisadas 150 amostras de soros humanos com sorologia e avidez conhecidas, composta por grande maioria de soros de alta avidez. As medidas de avidez por porcentagem mostraram um resultado errático, atribuído ao uso de grande maioria de anticorpos de alta avidez, embora a medida dos anticorpos recuperados mantivesse correlação com estimativa a partir da medida indireta (r2= 0.48). Esta abordagem permite a determinação direta dos anticorpos de baixa avidez, que são os anticorpos inicialmente produzidos em um desafio antigênico. Nosso ensaio é semelhante ao imunológico, já que a apresentação de antígenos por exossomos ácidos de células dendríticas foliculares no centro germinativo parece ser o sistema de seleção de clones produtores de anticorpos de alta avidez. As perspectivas futuras de uso da medida dos anticorpos de baixa avidez na toxoplasmose são imensas, desde a relação com a gravidade da doença, pela sua quantidade, ou da presença de infecção recente, principalmente em infecção congênita ou e em imunossuprimidos, ou a reatividade da doença crônica, como na toxoplasmose ocular. / Toxoplasmosis is a highly prevalent protozoosis, affecting at least one billion people worldwide. The infection caused by Toxoplasma gondii is asymptomatic and benign but it can cause visual losses in addition to death in fetuses and immunocompromised patients. The agent can be controlled by early diagnosis and treatment, but this therapy depends on the determination of active or recent infection. The parasitological diagnosis is complex, time consuming and only performed in few centers, so specific serology is essential for diagnosis. The IgG avidity tests has been used to determine recent infection, but avidity conventional tests only provide an indirect estimate of low avidity antibodies from the total and high avidity antibodies. The quantification of low avidity antibodies would be interesting due to high titers in the acute phase of infection or as markers of disease activity. Using reversible chaotrope such as pH, we standardized an enzyme immunoassay (ELISA) to allow the determination and quantification of low avidity antibodies. For standardization we used serum samples from experimentally infected rabbits or samples of biological material bank of the Laboratory of Protozoology, IMTSP. Our results showed that pH 3.5 is a chaotrope similar to 6M urea (r2 = 0.9909) in avidity ELISA, and high avidity antibodies had similar resistance to two associated chaotrope in experimental sera. The antibodies recovered on elution with pH 3.5 or urea had similar antigen specificity by immunostaining or Western blot. The neutralizing antibody eluted by pH allowed retest by ELISA after 1 hour of refolding, with direct quantification of antibodies of low avidity. The reproducibility inter and intra test were above 95%, but with worse results for pH 3.5. After standardization, we analyzed 150 samples of human sera with known serology and avidity, composed by a large majority of high avidity samples. Avidity as percent of high avidity antibodies showed erratic results in chaotrope comparison, attributed to the majority of high avidity samples, although the direct measure of low avidity IgG kept correlation with the indirect estimate (r2 = 0.48). This approach allows the direct determination of low avidity antibodies that are early produced in an antigen challenge. Our test is similar to the biology of antibody selection, since antigen presentation by acid exosomes of follicular dendritic cells in germinal center seems to be the system of selection of clones that produce high avidity antibodies. The prospective use of the quantification of low avidity antibodies in toxoplasmosis are attractive, either by the quantitative relationship with the severity of the disease; or the increased presence in recent infections, especially in congenital infection and in immunosuppressed patients, or their relative increase in reactivated chronic disease, such as ocular toxoplasmosis.

Thesis (doctoral)--Utrecht, 1983.