Orientador: José Gonçalves Franco Júnior / Banca: Anice Maria Vieira Camargo Martins / Banca: Edson Borges / Banca: Jorge Nahas Filho / Banca: Ana Lúcia Kalinin / Resumo: Nas últimas décadas, alguns parâmetros laboratoriais têm sido propostos para identificar o potencial de saúde oocitária em Reprodução Assistida: 1. Maturidade nuclear e citoplasmática (pesquisa); 2. Dismorfismo (anomalias intracitoplasmáticas); 3. Fertilizaçao. Habitualmente, esses parâmetros (exceto a maturação citoplasmática) são avaliados pelo simples emprego de sistemas de microscopia de luz convencional. Nos últimos oito anos, foram relatados diversos estudos em oócitos humanos sobre a birrefringência da zona pelúcida (BF-ZP), a espessura da ZP, e a visualização do fuso meiótico (FM). Entretanto, ainda é discutível o poder desses novos parâmetros na seleção de óvulos com o pontecial de originar embriões com taxas de implantação elevadas, além disso, seu sistema de visualização e quantificação é complexo e dispendioso. O objetivo deste estudo foi investigar uma possível correlação entre esses parâmetros tradicionais com a BF-ZP, espessura da ZP e o FM. Dessa forma, um total de 73 pacientes que participaram do programa de injeção intracitoplasmática de espermatozóide (ICSI) no Centro de Reprodução Humana "Prof Franco Júnior" tiveram seus óvulos avaliados quanto a maturação nuclear (n=83), maturação citoplasmática (n=29), dismorfismo (n=280) e fertilização (n=216) sendo os resultados correlacionados com a imagem do FM (presença ou ausência), a intensidade da BF-ZP (positiva ou negativa) e a espessura da ZP. Os dados finais revelaram uma fraca correlação entre a maturação, o dismorfismo e a fertilização oocitária com a imagem do FM, a intensidade da BF-ZP, e a espessura da ZP. Entretanto, esses parâmetros poderiam ser responsáveis por identificar pontos biológicos diferentes do potencial de qualidade oocitária. Assim sendo, seria uma medida coerente, a utilização desses parâmetros, em forma conjunta, através de um escore de qualidade oocitária. / Abstract: During the last decades, three laboratorial parameters have been proposed to identify the potential of the oocyte quality in ART: 1- Nuclear and cytoplasmic maturation; 2-Dysmorphims (intracytoplasmic abnormalities); 3 - Fertilization. These parameters (except the cytoplasmic maturation) are assessed by a simple system of conventional light microscopy. In the last eight years, numerous studies about zona pellucida birefringence (BF-ZP), zona pellucida thickness and meiotic spindle visualization have been reported. However, it is still controversial the power of these parameters in selecting oocyte with potential to develop into implantation-competent embryos. Furthermore, the microscopy system is complex and expensive. The present study aims to evaluate whether there is any correlation between the classical parameters with BF-ZP, ZP thickness and spindle image. A total of 73 patients who participated in an ICSI program had their oocytes evaluated such nuclear maturation (n=83), cytoplasmic maturation (n=29), dysmorphism (n=280) and fertilization (n=216) being its results correlated to the spindle image (presence or absence), BF-ZP intensity (positive or negative) and ZP thickness. The final results showed a low correlation between maturation, dysmorphism and fertilization compared to spindle image and ZP characteristics (BF-ZP, ZP thickness). However, these factors can be responsible to identify specific biological differ from the oocyte potential. Concluding, the use of these factors in association, as a score (oocyte quality score), could be the correct evaluation. / Doutor

Orientador: Marco Antonio Alvarenga / Coorientador: João Pessoa Araújo Junior / Banca: Frederico Ozanam Papa / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Banca: Rubens Paes de Arruda / Banca: Eduardo Malschitzky / Resumo: A expressão das interleucinas no útero e das catelicidinas no plasma seminal podem ser responsáveis pela magnitude e persistência da resposta inflamatória uterina. Os objetivos desse estudo foram verificar a presença das catelicidinas no plasma seminal e caracterizar a resposta imune uterina pela expressão de interleucinas inflamatórias. O plasma seminal foi obtido por coleta de sêmen de 15 garanhões e submetido ao SDSPAGE e DOT-blotting. As éguas foram submetidas a um ciclo estral sem desafio uterino (T1), com infusão de plasma seminal (T2) e inseminação artificial (T3). Exame ultrassonográfico, citologia exfoliativa uterina e colheita de células para a expressão do RNAm das interleucinas por qPCR foram realizados durante 3 ciclos consecutivos aleatoriamente, 24 (M1), 48 (M2) e 72 horas (M3) após a indução da ovulação. A expressão do RNAm no endométrio das éguas resistentes e susceptíveis foi verificada para as interleucinas IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-α. A concentração total de proteínas no plasma seminal dos garanhões variou de 6,3 a 25,6 mg/mL. O SDS-PAGE revelou a existência de 3 bandas protéicas dentro do intervalo de peso molecular previamente citado na literatura para as catelicidinas equinas. Os garanhões avaliados mostraram quantidades de eCATH1 < 339,6ng, eCATH2 < 141,3ng e eCATH3 < 283,4ng. No momento M2 não foi possível diferenciar as éguas resistentes das susceptíveis pela citologia ou ultrassonografia independente da infusão com plasma seminal, inseminação artificial ou da ovulação, mas quando há presença de espermatozoides no útero a resposta inflamatória é mais intensa. Durante o momento M3, as éguas susceptíveis apresentaram maior volume de fluido uterino acumulado em todos os tratamentos com menor capacidade de limpeza uterina. Foi verificada maior expressão do RNAm das interleucinas pró-inflamatórias nas éguas susceptíveis e a expressão do RNAm da interleucina-10 é... / Abstract: In the equine species, uterine interleukin expression and seminal plasma cathelicidins can modulate the magnitude and persistence of the post-breeding inflammatory reaction. The objectives were to verify the presence of cathelicidins in the stallion seminal plasma and characterize the uterine immune response by pro and anti-inflammatory interleukins. Seminal plasma was obtained by semen collection of 15 stallions and submitted to SDS-PAGE and DOT-blotting tests. Three experiments were designed to study interleukin expression during baseline (T1), after seminal plasma infusion (T2) and artificial insemination (T3). Endometrial cytology and cell collection as well as ultrassonographic evaluations were performed to access interleukin mRNA through qPCR during three randomly assigned consecutive estrous cycles, 24 (M1), 48 (M2) and 72 hours (M3) after an ovulation was induced. Endometrial mRNA expression in mares resistant and susceptible to persistent post-breeding endometritis was identified for the following pro-inflammatory cytokines: IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-α. Total seminal plasma protein concentrations ranged from 6.3 to 25.6 mg/mL. SDS-PAGE analysis identified the existence of three proteic bands with molecular weight similar to what was previously reported for equine cathelicidins. Evaluated stallions showed values < 339.6 ng for eCATH1, < 141.3 ng for eCATH2 and < 283.4 for eCATH3. At M2, resistant and susceptible mares could not be separated through cytology or ultrassonography, even though the presence of sperm strongly stimulates uterine inflammatory reaction. At M3, susceptible mares showed higher uterine fluid accumulation and lower uterine clearance. Pró-inflammatory mRNA expression was higher in susceptible mares and interleukin-10 mRNA expression was similar between resistant and susceptible mares / Doutor

Orientador: Cezinande de Meira / Banca: Luciano Andrade Silva / Banca: Cássia Maria Barroso Orlandi / Banca: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Sony Dimas Bicudo / Resumo: Um grande fator limitante dos programas de transferência de embrião é o número de receptoras disponíveis durante a estação de monta. A aspiração de folículos ≥25mm promove a formação de uma estrutura lútea capaz de produzir progesterona em concentrações semelhantes ao diestro (>2ng/ml). O objetivo do presente trabalho foi avaliar a formação lútea de folículos ≥25mm aspirados, o útero e a taxa de prenhez destes animais após a inovulação. As éguas foram distribuídas aleatoriamente em três grupos: grupo controle (indução da ovulação com 2500 UI de hCG), grupo aspiração (aspiração do folículo ≥25mm) e hCG+aspiração (aplicação de 2500 UI de hCG 24h antes da aspiração de folículo ≥25mm). Cada égua foi acompanhada ultrassonograficamente para detecção da ovulação, aplicação de 7,5mg de PGF2α cinco dias após a ovulação para indução da luteólise e para determinação do momento da aspiração. O experimento foi dividido em: fase 1 - dosagens de progesterona intrafoliculares e plasmáticas e avaliação ultrassonográfica por modo B e Power Doppler das estruturas lúteas e útero; fase 2 - teste de fertilidade. As concentrações de P4 intrafoliculares foram maiores para os folículos aspirados com diâmetros maiores e a aplicação prévia do hCG aumentou estas nos folículos entre 25-29mm, bem como, a resposta ao tratamento. A aspiração folicular promoveu aumento nas concentrações de P4 plasmáticas a concentrações semelhantes ao diestro (≥2ng/mL), no entanto, as estruturas formadas a partir da aspiração apresentam luteinização mais lenta. O aumento da P4 plasmática foi capaz de promover alterações uterinas semelhantes ao diestro espontâneo e taxa de 43% de prenhez foi atingida com as éguas aspiradas. Conclui-se que a aspiração de folículos ≥25mm pode ser uma opção para... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The major limiting factor of embryo transfer programs is the number of available recipient mares during the breeding season. The aspiration of follicles ≥25 mm leads to the formation of a structure capable of producing progesterone at concentrations similar to diestrus (> 2ng/ml). The present work aims to evaluate the luteal structure from ablation of follicles ≥25mm, uterine conditions and pregnancy rates after embryo transfer. Mares were randomly assigned into three groups: control group (ovulation induction with 2500 IU hCG), ablation group (follicle ≥25mm ablation) and hCG + ablation (2500 IU of hCG injection 24h before ablation of follicle ≥25mm ). Each mare was monitored by ultrasound for detection of ovulation and the determination of the time of ablation. A 7.5 mg dose of PGF2α was administered five days post ovulation to induce luteolysis. The experiment was divided into: phase 1 - intrafollicular plasma progesterone measurement and ultrasound evaluation by B-mode and power Doppler of luteal structures and uterus; phase 2 - fertility test. Concentrations of intrafollicular P4 were greater for larger follicles and hCG was efficient on increasing these levels on follicles 25-29mm, as well as increasing its response to treatment. Follicular ablation induced an increase in P4 plasma concentrations to values similar to diestrus (≥ 2ng/ml), however, the formed structures showed a delay on the luteinisation process. The increase in plasma P4 was able also to promote changes in the uterus that were similar to diestrous and these mares showed a 43% pregnancy rate. In conclusion, ablation of follicles ≥25mm can be an option for programs with limited number of recipients, however, more studies are still needed to explain ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Flavia Thomaz Verechia Pereira / Banca: Cristiana Andrighetto / Banca: Vanessa Gomes Ueno / Resumo: A utilização da transgenia com a proteína fluorescente verde (GFP) como marcador de células de origem fetal nas placentas de clones bovinos servirá de modelo inédito para estudo morfofisiológico e imunológico da interação materno-fetal, visto que possibilitará o seu mapeamento, diferenciando as células fetais das maternas. Tal modelo terá aplicação direta, principalmente porque estes são animais que apresentam problemas em relação ao seu desenvolvimento. Com o auxílio deste modelo, pretende- se verificar o transporte de substâncias entre a mãe e o feto via endocitose, pela imunolocalização das proteínas chamadas de caveolinas. Para tanto foram utilizados 06 bovinos clonados e 30 bovinos de inseminação artificial (IA) com idade até 90 dias de gestação, os quais tiveram seu desenvolvimento interrompido mediante abate humanitário das receptoras e ovariosalpingohisterectomia, com posterior recuperação do útero gestante. Foram coletados os placentônios e o cório. Uma parte das amostras foi recortada e fixada, por imersão, em solução de parafolmaldeído a 4% ou formoldeído a 10% em tampão fosfato de sódio (PBS) a 0,1M pH 7.4, solução de Zamboni (4% de paraformoldeído, 15% de ácido pícrico, em tampão fosfato de sódio a 0,1M pH 7.4), metacarn (60% de metanol, 30% de clorofórmio, e 10% de ácido acético glacial), para verificação da morfologia e realização de imuno-histoquímica para as proteínas caveolinas -1 e -2 (CAV -1 e CAV-2). As caveolinas -1 foram localizadas nos vilos fetais e maternos, mas sua marcação mais forte foi observada no estroma endometrial. As caveolinas -2 tiveram marcação positiva no trofoblasto e membrana corioalantoide, e, especificamente em célula trofoblástica gigante binucleada. Sendo assim, os resultados mostram que a proteína CAV-1 teve uma maior expressão em relação a proteína CAV-2 e que as proteínas CAV-1 e -2 são parte da composição das cavéolas, sendo . / Abstract: The transgenic application of green fluorecent protein (GFP) as fetal cell marker on cattle cloned placenta could provide an exclusive model for studying the morphologic and immunologic maternal-fetal interactions, providing information about its mapping, distinguishing the fetal from maternal cells. This model will have direct application, mainly because these are animals that present problems during its development. With this model's support, we intend to verify the substances transport between mother and fetus during endocytocis, through the immunolocalization of protein named caveolae. For these, we used 06 cloned bovine and 30 cattle samples of artificial insemination (AI) with 90 days of pregnancy, which had been their development interrupted by humanitarian slaughter of the recipient and recovery of the pregnant uterus. We collected the placentome and the chorion. A part of the samples will be cutted and fixed, by immersion, on a solution containing 4% of parafomaldehyde or 10% of formaldehyde on a sodium phosphate buffer (PBS) at 0,1M pH 7.4, Zamboni solution (4% of paraformaldehyde, 15% of picric acid, on sodium phosphate buffer 0,1M pH 7.4), metacarn (60% of metanol, 30% of chloroform, and 10% glacial acetic acid), for morphologic and immunohistochemistry verification for caveolinas proteins -1 and -2 ( -1 CAV and CAV- 2). The caveolinas -1 were found in fetal and maternal villi , but its strongest staining was observed in the endometrial stroma . The caveolinas -2 had positive staining in trophoblast and chorioallantoic membrane , and specifically in giant trophoblastic binucleated cell . therefore the results were compared between cloned cattle and from AI or natural mating, for assisting on detection of the reason of many placental alterations, embryonic losses, spontaneous abortion, post-natal mortality and large offspring syndrome on laboratory-manipulated animals. The result suggests that the proteins caveolins -1 and ... / Mestre

Orientador: José Luiz Moraes Vasconcelos / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: Mario Binelli / Resumo: O presente estudo avaliou se a concentração de P4 durante o desenvolvimento do folículo ovulatório em protocolo a base de P4/BE e com uma aplicação de GnRH em seu início interfere na prenhez à IATF em vacas Holandesas em lactação. A hipótese é que vacas com maior P4 no dia da aplicação da 1ª dose de PGF2α terão maior fertilidade. Para alterar a P4 os animais (n=594) foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos para receberem um ou dois dispositivos intravaginais de P4 (CIDR®, Zoetis, SP, Brasil). O protocolo utilizado foi: no d-11 inserção de 1 CIDR (novo ou previamente usado por 9 dias) + aplicação de 2mg i.m. de BE (Gonadiol®, Zoetis, SP, Brasil) + 100mcg i.m. de GnRH (Cystorelin®, Merial, SP, Brasil); d-4, aplicação de 25mg i.m. de Dinoprost (Lutalyse®, Zoetis, SP, Brasil); d-2, aplicação de 25mg i.m. de Dinoprost + 1mg i.m. de ECP (ECP®, Zoetis, SP, Brasil) + retirada do dispositivo de P4; d0, IATF. Os animais do grupo 2CIDR receberam um CIDR adicional no d-11, o qual foi retirado no d-4. Nos d-11 (n= 117), d-4 (n= 351), d0 (n= 214) e d10 (n= 72) foram colhidas amostras de sangue para determinação da concentração de P4. A P/IA foi determinada através de US nos d32 (DG1) e d60 (DG2). Dados binários foram analisados pelo PROC GLIMMIX, e os dados contínuos pelo PROC MIXED do SAS (foi considerada diferença significativa se P<0,05 e tendência se P<0,1). A P4 não diferiu entre os tratamentos no d-11 (1CIDR= 4,2±0,4 ng/ml; 2CIDR= 4,5± 0,4ng/ml; P>0,1), e no d-4 (1CIDR= 3,5±0,2ng/ml; 2CIDR= 3,8±0,2 ng/ml; P>0,1), porém foi detectada interação entre tratamento e presença de CL no início do protocolo na P4 no d-4 (sem presença de CL e 1CIDR= 2,7±0,3ng/ml; 2CIDR= 3,6±0,3ng/ml, com presença de CL e 1CIDR= 4,3±0,3ng/ml; 2CIDR= 4,0±0,3ng/ml; P<0,05). Não houve diferença na prenhez a IATF e nas perdas gestacionais entre os tratamentos [DG1: 1CIDR= 20,0 ... / Abstract: The present study evaluated if P4 concentration during ovulatory follicle development in a timed artificial insemination (TAI) protocol based on P4/E2 affects pregnancy per AI in lactating Holstein cows. Our hypothesis is that cows that present higher P4 concentration at PGF2α administration have also higher fertility. To alter P4, animals (n=594) were randomly assigned to receive one or two intravaginals devices of P4 (CIDR®, Zoetis, SP, Brazil). TAI protocol utilized was: d-11 intravaginal device of P4 (new or previously used by 9 days) + 2mg im EB (Gonadiol®, Zoetis, SP, Brazil) + 100mcg im GnRH (Cystorelin®, Merial, SP, Brazil); d-4, 25mg im Dinoprost (Lutalyse®, Zoetis, SP, Brazil); d-2, 25mg im Dinoprost + 1mg im ECP (ECP®, Zoetis, SP, Brazil) + CIDR removal; d0, TAI. Animals in the group 2CIDR received an adicional CIDR at d-11, which was removed at d-4. At d-11 (n=117), d-4 (n=351), d0 (n=214) and d10 (n=72), blood samples were taken from cows for P4 concentration measurements. Pregnancy per AI was determined by ultrasound at d32 (DG1) and d60 (DG2). The binomial data were analyzed using PROC GLIMMIX and continuous data using PROC MIXED of SAS. An effect was considered significant when P<0.05 and tendency when P<0.1. P4 did not differ among treatments at d-11 (1CIDR=4.2±0.4ng/ml; 2CIDR=4.5±0.4ng/ml; P>0.1), and at d-4 (1CIDR=3.5±0.2ng/ml; 2CIDR=3.8±0.2 ng/ml; P>0.1). An interaction was detected between treatment and CL presence at the beginning of TAI protocol in P4 at d-4 (without CL and 1CIDR=2.7±0.3ng/ml; 2CIDR= 3.6±0.3ng/ml, with CL and 1CIDR=4.3±0.3ng/ml; 2CIDR= 4.0±0.3ng/ml; P<0.05). There was no difference among treatments in pregnancy per AI and pregnancy loss between DG1 and DG2 [DG1: 1CIDR= 20,0% (81/310) vs. 2CIDR= 15,7% (65/284); DG2: 1CIDR= 18,2% (74/310) vs. 2CIDR= 13,8% (57/283); Pregnancy loss: 1CIDR= 14,1% (7/81) vs. 2CIDR= 11,5% (7/64); P>0,1]. 37,0% (28/63)... / Mestre

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: Rubens Paes de Arruda / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Resumo: Dentre as biotecnologias de reprodução que visam acelerar os ganhos genéticos e econômicos dos rebanhos, a congelação de sêmen desponta como uma das principais. O sêmen congelado bovino é utilizado em larga escala há anos e não houve grandes evoluções nas técnicas de congelação visando minimizar os efeitos deletérios do processo nos espermatozóides, colaborando ativamente para o incremento da fertilidade dos rebanhos. Neste trabalho propôs inovações nas técnicas de congelação utilizando uma nova formulação de meio diluente, a introdução da centrifugação para a remoção do plasma seminal pré-congelação e a determinação do tempo ideal de estabilização do sêmen. Foram realizados três experimentos; o primeiro testou o efeito de três diferentes meios diluentes, com ou sem a remoção do plasma seminal, no ejaculado de 40 touros diferentes. Nos resultados exibidos o diluente M20 foi superior (p<0,01) aos demais diluentes na maioria das variáveis pesquisadas a remoção do plasma seminal melhorou (p<0,01) os índices de congelabilidade do sêmen. Outro experimento foi a verificação dos tempos de 60, 120, 180 e 240 min. de refrigeração do sêmen a 5ºC. O tempo de 180 minutos foi o considerado o melhor para a congelabilidade após a verificação dos resultados. No teste de fertilidade foram inseminados 418 vacas e o grupo que foi inseminado com sêmen congelado com M20 sem plasma seminal obteve uma tendência de superioridade (0,05<p<0,10) aos demais grupos. Com os resultados dos experimentos concluiu-se que as inovações propostas por este estudo incrementam os índices de congelabilidade do sêmen bovino / Abstract: Semen freezing is considered as one of the main reproduction biotechnologies that aim to accelerate genetic and economical gains of herds. Frozen bovine semen has been used in large scale for years and there were not great evolutions in freezing techniques to minimize the deleterious effects of the process in spermatozoa, actively contributing for the increase in herds fertility. Innovations in freezing techniques were proposed in this work by using a new formulation of the extenders, introducing centrifugation for the removal of prefreezing seminal plasma and determining the appropriate time for semen cooled. Three experiments were carried out: 1) the effect of three different extenders was tested, with or without the removal of seminal plasma, in the ejaculate of 40 different bulls; results showed that the extender M20 was superior (p<0,01) in relation to the other extenders in most of variables studied. The removal of the seminal plasma improved (P<0,01) semen freezability indexes. 2) verification of 60, 120, 180 and 240 min. times for semen cooling at 5ºC; after results, the time of 180 minutes was considered the most appropriate for freezability. 3) fertility test: 418 cows were inseminated and the group with frozen semen with M20 without seminal plasma obtained a superiority tendency (0,05<p<0,10) in relation to the other groups. The results of the experiments concluded that the innovations proposed in this work increase freezability indexes of bovine semen / Mestre

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: José Antonio Dell'Aqua Júnior / Banca: Rubens Paes de Arruda / Resumo: A utilização de sêmen criopreservado na reprodução de eqüinos depara-se com obstáculos como: variabilidade entre garanhões e ejaculados ao processo de criopreservação, taxas de prenhez inferiores ao sêmen fresco e refrigerado, manejo mais trabalhoso e oneroso das éguas e ausência de padrões de qualidade na distribuição e comercialização do sêmen. Neste trabalho foram realizados dois experimentos, no qual primeiramente, avaliou-se o efeito de diferentes concentrações espermáticas em palhetas de 0,5 mL (100, 200 e 400 x 106 de espermatozóides totais/mL) sobre algumas variáveis de qualidade seminal pós-descongelação como: parâmetros de cinética espermática através de análise computadorizada, integridade de membrana plasmática e resistência à peroxidação lipídica. Posteriormente, realizou-se um estudo comparativo entre a inseminação pós-ovulação e a inseminação em tempo pré-determinado, avaliando-se os resultados de concepção e acúmulo de fluido intra-uterino pós-inseminação. Ao empregar a metodologia de inseminação pós-ovulação, realizou-se uma única inseminação dentro do intervalo de até 6 horas pós-ovulação com 800x106 de espermatozóides totais e para o método programado, realizaram-se duas inseminações após 24 e 40 horas pós-indução da ovulação, com 400x106 de espermatozóides totais cada. Foi observado efeito significativo da concentração espermática (p<0,05) sobre algumas variáveis de cinética espermática como: motilidade total, motilidade progressiva, velocidade ao longo de uma trajetória média, velocidade progressiva, velocidade curvilinear, freqüência de batimento flagelar e espermatozóides rápidos, com superioridade para a criopreservação em concentrações mais baixas. No entanto, para as variáveis de integridade de membrana plasmática e resistência à peroxidação lipídica não foram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The cryopreserved semen application in equine reproduction appears with obstacles as variability between stallions and ejaculates at the cryopreservation process, lower pregnancy rates compared to the fresh and cooled semen, harder and onerous mares' management and absence of quality pattern in distribution and semen commercialization. In this study were realized two experiments which one, firstly, was evaluated the effect of different sperm concentrations in straws of 0.5 mL (100, 200 and 400x106 total sperm/mL) over some variables of seminal quality after thaw as: parameters from sperm kinetics by computer analysis, plasmatic membrane integrity and resistance to lipid peroxidation. Subsequently, it was realized a comparative study between the insemination after ovulation and the insemination in fixed-time, evaluating the results of conception and intrauterine fluid collection after insemination. When the methodology of insemination after ovulation was employed, it was realized a single insemination during the interval of 6 hours after ovulation with 800x106 total spermatozoa and for the programmed method, two inseminations with 400x106 doses of total spermatozoa each one, were done after 24 and 40 hours after induction of ovulation. It was observed significant effect from sperm concentration (p<0,05) over some variables of sperm kinetics like: total motility, progressive motility, velocity in the average path velocity, straight line velocity, curvilinear velocity, beat cross frequency and rapid spermatozoa, with superiority for cryopreservation in lower concentrations. However, for the variables of plasmatic membrane integrity and resistance to lipid peroxidation were not observed significant effects. In respect to the insemination methods, it was not observed significative effect (p<0.05) over the pregnancy rates between one insemination after ovulation and two inseminations... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: José Luiz Moraes Vasconcelos / Resumo: Este estudo avaliou o efeito de injeções de GnRH (hormônio liberador de gonadotrofina) ou hCG (gonadotrofina coriônica humana) no dia 5 após inseminação artificial (IA) nas taxas de concepção em vacas lactantes durante o verão. Vacas holandesas, n=158, produzindo 26±9 kg de leite/dia e 213±112 dias pós-parto (DPP), foram aleatoriamente distribuídas em 3 grupos: Controle (GC; n=52); GnRH (GG; n=55), 100 mcg IM. de gonadorelina (Cystorelinâ); e hCG (GH; n=51), 2500 UI IM de hCG (Vetecorâ). A temperatura retal foi verificada no momento da IA, e as amostras de sangue coletadas nos dias 5; 7 e 12 após IA para avaliar as concentrações séricas de progesterona (P4). A prenhez foi determinada entre os dias 42 e 49 após IA. Os dados foram analisados pelo procedimento MIXED do SAS, e foram incluídos no modelo efeitos do tratamento, ordem de lactação, produção de leite, temperatura retal no momento da IA e suas interações. O tratamento com GnRH ou hCG aumentou a P4 sérica (P<0,01). As concentrações séricas de P4 (ng/ml; média ± EPM) para GC, GG, e GH foram, respectivamente, no dia 5: 2,71±0,43; 2,45±0,44 e 3,23±0,45, no dia 7: 4,79±0,43; 4,15±0,44 e 5,75±0,45, e no dia 12 após IA: 5,21±0,43; 6,91±0,44 e 8,50±0,45. Devido ao aumento proporcional na concentração sérica de P4 entre os dias 5 e 7 após IA (GC: 77, GG: 69, GH: 77%; P<0,01) é provável que os tratamentos não tenham induzido o efeito luteotrópico no CL existente, porém devido ao grande aumento na P4 sérica no dia 12 nos animais tratados (GG: 112, GH: 87%; P<0,01) em relação aos animais controle (GC: 16%; P=0,31), provavelmente houve a indução de um novo CL. A temperatura retal média das vacas no momento da IA foi de 39,7°C e o tratamento com GnRH ou hCG aumentou as taxas de concepção (média ± EPM) nas vacas com temperatura retal abaixo de 39,7°C... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study evaluated the effect of GnRH (gonadotropin releazing hormone) or hCG (human chorionic gonadotropin) injection on day 5 after artificial insemination (AI) on conception rates in lactating dairy cows during the summer. Holstein cows, 158, producing 26 ± 9 kg milk/d and 213 ± 112 days in milk, were randomly assigned to one of 3 treatments groups: control (CG: n=52); GnRH (GG: n=55), injection of 100 mcg i.m. of gonadorelin (Cystorelin®) and hCG (HG: n=51), injection of 2500 UI hCG i.m. (Vetecor®). Rectal temperature was checked at the moment of AI and blood samples collected on days 5, 7 and 12 after AI to evaluate serum progesterone (P4) concentrations. Pregnancy was determined between 42 and 49 d after AI. Data were analyzed by the MIXED procedure of SAS and were included in the model the effects of treatment, parity, milk production, rectal temperature at the moment of AI and interactions. Treatment with GnRH or hCG increased serum P4 (P<0,01). Serum P4 concentrations (ng/ml, mean±SEM) for CG, GG and HG were, respectively, on day 5 2.71±0.43, 2.45±0.44 and 3.23±0.45, on day 7, 4.79±0.43, 4.15±0.44 and 5.75±0.45 and on day 12 after AI, 5.21±0.43, 6.91±0.44, 8.50±0.45. Due to the proportional increase in serum P4 concentration from d 5 to 7 after AI (CG: 77, GG: 69, HG: 77%, P<0,01), it is likely that treatments did not have luteotropic effect on the existing CL, but due the higher increase in serum P4 on day 12 in the treated animals (GG: 112, HG: 87%; P<0,01) in relation to the control group animals (GC: 16%; P=0,31), probably induced the formation of a new CL. The average rectal temperature of cows at time of AI was 39,7°C. Treatment with GnRH and hCG increased conception rates (mean±SEM) in cows with rectal temperature below 39,7°C (CG: 10.1±0.075, n= 26, GG: 36.8±0.073, n=27, HG: 32.8±0.088%, n=21; p<.01)... (Complete abstract click electronic address below) / Mestre

Orientador: Cezinande de Meira / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: Lucianao Andrade de Silva / Banca: Rubens Paes de Almeida / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar a relação entre a intensidade de alterações degenerativas endometriais e da idade com a hemodinâmica uterina durante o período posterior à infusão de sêmen (Experimento 1) e durante a fase inicial da gestação (Experimento 2). Vascularidade, contratilidade e índices Doppler do útero foram mensurados durante as 12 primeiras horas pós-inseminação artificial (IA) no experimento1. Não foi observado (P>0,1) efeito da posição do folículo pré-ovularório sobre a hemodinâmica e contratilidade uterina. Um aumento na vascularidade foi detectado (P<0,001) em éguas velhas e com degeneração endometrial moderada (GII) e intensa (GIII) nas duas primeiras horas pós-IA. Índices de pulsatilidade (PI) e resistência (RI) uterina mantiveram-se constante durante as 12 horas pós-IA em éguas dos grupos GII, jovens e velhas (P>0,05). Um aumento na atividade contrátil do útero foi detectado (P<0,0001) nas horas 1 e 2, independente do grupo experimental (P>0,05). No experimento 2, os parâmetros citados acima, além de características luteais (área e vascularidade) e diâmetro da vesícula embrionária foram avaliados diariamente em éguas gestantes e não gestantes. Aumento e diminuição, respectivamente, na vascularidade e índices Doppler uterinos foram detectados (P<0,05) em D4 (D0=dia da ovulação) em éguas gestantes e não gestantes. Um aumento progressivo na perfusão sanguínea com pronunciada vascularidade no corno ipsi-lateral ao embrião foi observado em éguas gestantes a partir de D12 (P<0,001). Efeito da idade e da intensidade das alterações degenerativas endometriais sobre a vascularidade e índices Doppler do útero gravídico foram detectados (P<0,01). A contratilidade uterina foi máxima (P<0,001) entre D10 e D17 da gestação independente da classificação histológica do... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The overall purpose of the present study was to evaluate the relationship between endometrial degenerative changes and age on the uterine hemodynamics of mares during the post-breeding (Experiment 1) and early gestation phases (Experiment 2). Vascularity, contractility and Doppler indices from the uterus were measured hourly during the first 12 hours post-artificial insemination (AI) in experiment 1. Hemodynamics and contractility of the uterus did not change (P>0.1) by pre-ovulatory follicle position. Increased uterine vascularity was observed (P<0,001) on hours 1 and 2 in older and moderate (GII) and intense (GIII) endometrial degeneration mares. Pulsatility and resistance indices (PI and RI, respectively) did not change (P>0.05) through the experiment 1 age groups (younger and older mares) mares with moderate endometrial degeneration. Independently of the age and endometrial degenerative changes, increased uterine contractility was observed (P<0,0001) in the first two hours post-AI. In experiment 2, the same end points were measured every day. Additionally, luteal vascularity and embryonic vesicle diameter were evaluated. On D4 (D0 = day of ovulation), increased vascularity and decreased Doppler indices were detected (P <0.05) in pregnant and nonpregnant mares. A progressive increase on the uterine vascular perfusion and greater vascularity in the horn with embryo were observed in pregnant mares from D12 (P <0.001). Effect of age and intensity of endometrial degenerative changes on the vascularity and Doppler indices of the gravidic uterus were detected (P<0.01). Uterine contractility was greater (P<0.001) between days 10 and 17 of pregnancy regardless of the uterine histological classification and age of mares (P> 0.05). Mean luteal vascularity and plasmatic... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Ana Paula Coelho Ribeiro / Banca: Maria Isabel de Mello Martins / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a taxa de concepção em cadelas após inseminação artificial intrauterina por videolaparoscopia. Um total de 20 cadelas foram inseminadas, sendo 10 com sêmen fresco e 10 com sêmen congelado. Os animais se encontravam em estro natural e sob acompanhamento da citologia vaginal. Quando aproximadamente 90% das células se apresentaram cornificadas, foram realizadas dosagens séricas de progesterona afim de se determinar o momento exato da inseminação. Três machos foram utilizados como doadores de sêmen e as coletas foram realizadas por manipulação digital. Após coleta o ejaculados foram analisados quanto ao volume, motilidade, vigor e concentração espermática. Para a inseminações utilizando sêmen fresco, a coleta foi realizada momentos antes do procedimento, e o sêmen acondicionados em banho-maria a 37°C até o momento da inseminação. Amostras destinadas a inseminação com sêmen descongelado, obtiveram mesmo processo de análises após coleta, seguindo para o processo de congelação, permanecendo congeladas por no mínimo uma semana, e então descongeladas momentos antes do procedimento. De acordo com os concentrações séricas de progesterona, as inseminações intrauterinas por videolaparoscopia foram realizadas, sendo cada corno uterino inseminado com 1mL de sêmen, em concentração de 250x106 espermatozóides/mL nas cadelas inseminadas com sêmen fresco e 80x106 espermatozóides/mL naquelas inseminadas com sêmen congelado. Após 7 dias as cadelas foram ováriosalpingohisterectomizadas, sendo o lúmen das tubas e cornos uterinos lavados com solução de PBS. Embriões foram encontrados nos lavados de 7 cadelas inseminadas com sêmen fresco, e em 5 inseminadas com sêmen descongelado. Concluiu-se que o procedimento de inseminação artificial intrauterina... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to evaluate the fertility in bitches after intrauterine artificial insemination by videolaparoscopy. A total of 20 bitches were inseminated, being 10 with fresh semen and 10 with frozen. The animals were in natural oestrus, and their vaginal cytology was followed. When approximately 90% of the cells were cornificated, evaluation of serum levels of progesterone was performed, with the objective to determinate the exact moment of the artificial insemination. Three males were used as donors, and the samples collection was performed by digital manipulation. After collection the ejaculates were analysed considering volume, motility, vigor and sperm concentration. For the inseminations using fresh semen the collection was performed minutes before the process, and the semen sample was maintained at 37°C. Samples destined to inseminations using frozen semen were submitted to the same analysis process after collection, followed by the freezing process, being frozen during a minimum period of one week, and thawing moments before the procedure. According to the serum levels of progesterone, the intrauterine inseminations by videolaparoscopy were performed, being each uterine corn inseminated with 1 mL of semen, with 250x106 espermatozoa/mL in bitches with fresh semen and 80x106 espermatozoa/mL in bitches with frozen semen. After 7 days the bitches were ovariohysterectomized, and the lumen of the uterine tube and corns were flushed with PBS solution. Embryos were found in 7 bitches inseminated with fresh semen, and in 5 inseminated with frozen semen. It was concluded that the intrauterine artificial insemination by videolaparoscopy seems to be an interesting reproductive biotechnology method, especially in what refers to the use of frozen semen. / Doutor