Orientador: Luis Guillermo Bahamondes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T01:28:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kotecki_JoseAldair_M.pdf: 4385648 bytes, checksum: 2484c1bf5a69ea1cd3499f9c41e93a26 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: o objetivo deste estudo foi avaliar cinco protocolos de estimulação ovariana utilizadosem 638 ciclos para inseminação intra-uterina.Os casais inférteis foram alocados para receberum dos protocolos de estimulaçãoovariana em cada ciclo: 1 - Citrato de Clomifeno + hMG; 2 - hMG; 3 - FSH - HP; 4 - Acetato de Leuprolide (Flare-up) + hMG; 5 - Acetato de Leuprolide (Flare-up) + FSH-HP. A inseminação foi realizada 36 horas após a administração de 5000UI de hCG para a maturação oocitária. Foram avaliadas as taxas de gravidez por ciclo, o número de ciclos cancelados, controlando pela idade das pacientes em cada protocolo e características do sêmen. A análise dos dados mostrou não haver diferenças significativas entre as taxas de gravidez para cada protocolo.A taxa média de gravidez associando os cinco protocolos foi de 10,5 %. A taxa de gravidez para cada protocolo foi: 1 - 10,8%; 2 - 10,2%; 3 -11,6%; 4 - 9,2%; 5 - 9,1%. O protocolo 1 obteve menor taxa de cancelamento analisandoos ciclos cancelados por falta de resposta.As mulheres abaixo de 30 anos obtiveram taxa de gravidez significativamente maior. A regressão logística identificoucomo variáveis associadas com as taxas de gravidez a maior concentração de espermatozóides móveis, a menor idade da mulher, a maior espessura do endométrio, a esterilidade primária e o fator hormonal de esterilidade. Em conclusão, os protocolos de estimulação ovariana não influenciaram significativamente as taxas de gravidez / Abstract: The objective of this study was evaluating five protocols of ovarian stimulation used in 638 cycles for intrauterine insemination. Infertile couples were allocated to receive one of 5 ovarian stimulation protocols in each cycle: 1 - Clomiphene Citrate + hMG; 2 - hMG; 3 - FSH - HP; 4 - Leuprolide Acetate (Fiare up) + hMG; 5 - Leuprolide Acetate (Fiare up) + FSH-HP. Oocyte maturation was gotten administering hCG 5000 lU and the insemination were perfomed 36 hours later. They were appraised the gestation rates per cycle and the number of canceled cycles, controlling by characteristics of the semen and the patient's age in relation to each protocol.Data analysisfound no significantdifferencesamong the pregnancyrates for each protoco!. The median rate of pregnancyassociating the 5 protocols was of 10,5%.Pregnancy rates for each protocol was: 1 - 10,8%; 2 - 10,2%; 3 - 11,6%; 4 - 9,2%; 5 - 9,1%. Protocol 1 obtained the smallest cancellation rate for answer lack. The logistic regression identified that the largest concentration of motile sperm, woman's low age, endometrium thickness, type of infertility and factor of infertility as variables associated with pregnancy. In conclusion the protocols of ovarian stimulation didn't have influence in the pregnancy rate and the variables associated with the pregnancy rates were the identified ones with logistic regression / Mestrado / Tocoginecologia / Mestre em Tocoginecologia

Orientador: José Luiz Moraes Vasconcelos / Resumo: Os objetivos foram avaliar o efeito da remoção de bezerros (RB) no desenvolvimento folicular e na indução de ciclicidade e a eficácia do MGA precedendo protocolos de IATF, que utilizam GnRH ou BE, nas taxas de concepção a IATF e gestação. Foram utilizadas 163 vacas paridas em anestro da raça Nelore com 80 ± 29 dias pós-parto e ECC de 3,0 ± 0,29, divididas em 4 grupos: G1: (n=40, controle); G2: (n=42, RB): RB (60 h) 11 dias antes da estação de monta (EM); G3: (n=43, MGA + GnRH): MGA (MGA PREMIX®, 0,5 mg/dia, v.o.) por 10 dias, seguido por RB (60 h), após este período receberam GnRH (CYSTORELIN®, 50 mcg, i.m). Após 6,5 dias, PGF2α (LUTALYSE®, 25 mg, i.m.) que foi seguida por outra RB (54h). Após a RB, todos os animais receberam GnRH e foram inseminados; G4: (n=38, MGA + BE): MGA por 10 dias, seguido por RB (60h), após este período receberam BE (Estrogin , 1,0 mg, i.m.). Após 7 dias, PGF2α que foi seguida por outra RB (54h). Após 24 horas da PGF2α, os animais receberam BE e foram inseminados 30 horas depois. Após a IATF, nos 4 grupos, foi realizado observação de cio e IA (30 d) e por monta natural por mais 32 dias. A ciclicidade, o efeito do MGA e RB no desenvolvimento folicular, as taxas de sincronização, concepção e gestação foram determinados por exames ultra-sonográficos. A variável dias para ficar gestante foi analisada pela curva de sobrevivência, enquanto que as variáveis binomiais e contínuas foram analisadas por regressão logística e pelo GLM do SAS, respectivamente. Foram incluídos no modelo efeito de tratamento, ordem, sexo da cria e suas interações e ECC como co-variável. O MGA foi fornecido, ao G3 e G4, diariamente e os animais ingeriram, em média, 0,99 mg/dia de MGA. O MGA aumentou (P<0,05) o diâmetro do maior folículo (11,2 ± 0,28 vs. 10,3 ± 0,29 mm, respectivamente), que também foi maior (P<0,05) na associação MGA + RB... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objectives of this trial were to evaluate the effects of calf removal (CR) on follicular development and its ability to induce cyclicity and the effects of melengestrol acetate (MGA) preceding TAI protocols, with GnRH or EB on conception and pregnancy rates. Suckled anestrous Nellore cows (n=163) with 80 ± 29 days postpartum and BCS of 3.0 ± 0.29 were assigned into one of four groups: G1: (n=40, control); G2: (n=42, CR): calf removal (60 h) 11 days before the breeding season (BS). G3: (n=43, MGA + GnRH): MGA (MGA PREMIX®, 0.5 mg/day, v.o.) per 10 days, followed by CR (60 h), and GnRH (CYSTORELIN®, 50 mcg, i.m) after CR. Cows received by PGF2α (LUTALYSE®, 25 mg, i.m.) 6.5 days later, and another CR (54h) followed by GnRH and TAI; G4: (n=38, MGA + EB): MGA per 10 days, followed by CR (60h) and injection of EB (Estrogin , 1.0 mg, i.m.) after CR. Cows received PGF2α 7 days later and 24 hours after that, all animals received another EB and were TAI 30 hours later. Calf removal was performed between PGF2α and EB (54 h). After TAI, in all groups, was performed heat detection and AI (30 d) and natural service per more 32 days. Cyclicity status, effect of MGA supplementation and CR on follicular development, synchronization, conception and pregnancy rates were determined by ultrasound. The variable days to pregnancy was analyzed by survival analyses and the binomial and continuous variables were analyzed by logistic regression and GLM of SAS, respectively. The effects of treatment, parity, calf gender and interactions were included in the model, BCS was included as covariable. The MGA was offered to G3 and 4 daily (mixed into the mineral) and the average consumption was 0.99 mg/day. MGA supplementation increased (P<0.05) follicular diameter (11.2 ± 0.28 vs. 10.3 ± 0.29 mm, respectively) Follicular diameter was also increased (P<0.05) when MGA was associated with CR (11.3 ± 0.26 mm)... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador : Flávio Abranches Pinheiro / Banca: Izabel Cristina Takitane / Banca: Ciro Moraes Barros / Banca: Geraldo Sant'Ana C. de Barros / Banca: Evaristo Marzabal Neves / Resumo: A bovinocultura de corte é de reconhecida importância no agronegócio brasileiro (mercado interno e externo), sendo que o país tem o segundo rebanho bovino mundial, com cerca de 80% destinados a produção de carne (maioria de zebuínos). Um dos limitantes desta atividade é a reprodução dos animais, que permite que o rebanho cresça em número e qualidade. Atuando-se sobre a reprodução, pode-se melhorar a conversão alimentar, diminuindo o custo. A inseminação artificial (IA) tem grande importância na obtenção de ganhos quantitativos e qualitativos (e.g. ganho genético), além de permitir um melhor controle do rebanho. Novas tecnologias de inseminação estão sendo aperfeiçoadas, inclusive tratamentos hormonais que possibilitam a IA com tempo fixo (IATF). Considerando a questão energética, é importante o desenvolvimento de tecnologias que otimizem os gastos energéticos na bovinocultura. Este trabalho tem por objetivo avaliar os custos econômicos (valores em reais, julho de 2003) nos manejos reprodutivos: IA convencional (IAC), IATF (GnRH-PGF2 -GnRH, GnRH-PGF2 -BE), GP (controle, GnRH-PGF2 e IA) e Monta; em vacas Nelore (zebuínos), além de fazer considerações sobre o gasto energético biológico destes manejos. A partir de dados obtidos em uma fazenda comercial da região de Botucatu, SP, foram realizadas análises de custos de reprodução de bezerros, nas tecnologias de IAC, IATF (grupos GPG-9, GPG-12, GPE-15 e GPE-18) e GP (GP-21 e GP-24) associados à Monta; e Monta-Simulado. O melhor Custo Total Unitário de reprodução por bezerro (CTU) foi observado na IAC (R$ 127,00) com taxa de prenhez (TxPr) de 84%. Na IATF, o melhor resultado foi do grupo GPE-15 (R$ 130,00, TxPr 74%)...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Beef cattle is a very important sector in Brazilian agribusiness, both in domestic and international market. Brazil has the second largest bovine herd in the world, with 80% of beef cattle (mostly Bos indicus). A limiting factor of this activity is the animal reproduction, which allows herd improvement and growth. Acting on reproduction may allow improvements on feed conversion, diminishing costs. Artificial insemination (AI) is a way of obtaining quantitative and qualitative gains (genetic improvement), in addition to a better herd management. New technologies on AI are been developed, including hormonal treatments which allow timed fixed AI (TAI). Besides, on the energetic approach, the development of new technologies optimizing energy expenses is also very important. The aim of this study was to evaluate the economic costs (in Reais, July 2003) on several reproductive handlings: Conventional AI (IAC), Timed AI (TAI; GnRH-PGF2 -GnRH; GnRH-PGF2 -BE), Synchronized estrus GP (control, GnRH-PGF2 and AI) and Natural Service; in Nelore cows (Bos indicus), in addition to making short considerations regarding energetic expenses on those handlings. Reproduction costs analysis were performed on data obtained on a commercial farm in Botucatu, SP, on IAC and TAI (groups GPG-9, GPG-12, GPE-15 and GPE-18) and GP (GP-21 e GP-24) associated to Natural Service; and simulated Natural Service group. The best total reproduction cost per calf (CTU, R$ 127,00) was observed in IAC with the pregnancy rate (TxPr) of 84%; otherwise, in TAI, the best result was from GPE-15 (R$ 130,00, TxPr 74%). The simulated Natural Service group had a CTU of R$ 116,00, with TxPr of 87%. The other groups obtained CTUs of R$163,00 (GPG-12, TxPr 69%), R$174,00 (GPE-18, TxPr 68%), R$181,00 (GP-21, TxPr 59%), R$ 189,00 (GPG-9, TxPr 67%) e R$ 338,00 (GP-24 TxPr 31%)...(Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O objetivo do presente estudo foi avaliar a viabilidade da refrigeração do sêmen bovino comparada com a criopreservação. Este estudo foi realizado em dois experimentos. No primeiro experimento foram comparados os efeitos in vitro do sêmen refrigerado em três meios diluidores comerciais a 5&deg; C por até 48 horas, e criopreservado em dois meios. Para este experimento foram utilizados ejaculados de 10 touros da raça Nelore. Cada ejaculado foi dividido em três alíquotas, sendo diluídas nos meios Botubov&reg;, Steridyl&reg; e Bovidyl&reg;. Após a diluição o sêmen foi envasado em palhetas e refrigerado nos três diluidores e criopreservado utilizando somente os meios Botubov&reg; e Steridyl&reg;. A refrigeração do sêmen foi realizada a 5&deg; C por até 48 horas em sistema passivo de refrigeração BotuFlex&reg; e a criopreservação realizada em sistema automatizado TK 4.000&reg;. O sêmen foi avaliado nos tempos 0, 24, 36 e 48 horas após a refrigeração e após a descongelação, para cada diluidor. Foram realizadas análises dos padrões de cinética espermática pelo sistema computadorizado de análise espermática (CASA, programa SCA - Sperm Class Analyser), integridade das membranas plasmática e acrossomal, potencial de membrana mitocondrial e estresse oxidativo por sondas fluorescentes, sob microscopia de epifluorescência e morfologia espermática por microspcopia de contraste de interferência diferencial (DIC). Notou-se efeito de tempo de refrigeração para os três diluidores para de 0 para 24h, se mantendo semelhante até 48 h. Os diluiores Botubov&reg; e Steridyl&reg; preservaram as características espermáticas de forma semelhante até 48 horas de refrigeração diferindo apenas na variável de velocidade curvilianear; no entanto, ambos foram superiores ao diluidor Bovidyl&reg;, para as variáveis, motilidade total, motilidade progressiva, células rápidas, velocidade curvilinear, velocidade progressiva, velocidade do trajeto, retilinearidade, integridade da membrana plasmática, alto potencial de mitocondrial e espermatozoides com membranas plasmática e acrossomal íntegras e alto potencial mitocondrial. O segundo experimento foi realizado, baseado nos resultados do primeiro experimento, para avaliar os efeitos da refrigeração e da criopreservação do sêmen sobre a fertilidade in vivo. Foram utilizados ejaculados de três touros das raças Brangus, Braford e Angus, com idade entre 5 e 7 anos. O sêmen foi colhido por meio de vagina artificial, o ejaculado foi dividido em três alíquotas, sendo duas alíquotas para refrigeração e uma para criopreservação. Para a refrigeração o sêmen foi diluído nas concentrações de 15x106 (R15) e 30x106 (R30) espermatozoides/palheta e para a criopreservação diluído na concentração de 30x106 espermatozoides/palheta (CRIO). Para todas as diluições foi utilizado o meio Botubov&reg; e o sêmen armazenado em palhetas de 0,5 mL. A refrigeração foi realizada a temperatura de 5&deg; C por 48 horas em sistema passivo de refrigeração BotuFlex&reg; e a criopreservação em sistema automatizado TK&reg;. Foram sincronizadas 552 vacas da raça Brangus em programas de inseminação artificial em tempo fixo. Os resultados da taxa de prenhez para os grupos de vacas inseminadas foram de 49,4% para R15, 43,38% para R30 e 47,59% para o sêmen criopreservado. Pode-se concluir que a refrigeração do sêmen a 5&deg; C por 48 horas resulta em taxa de prenhez semelhante às obtidas com o sêmen criopreservado, sendo que esses resultados indicam que a refrigeração por até 48 horas pode ser uma opção de uso para IATF. / The objective of the present study was to evaluate the viability of cooling bovine semen compared to cryopreservation. This study was carried out in two experiments. In the first experiment, the in vitro effects of cooled semen were compared in three commercial extenders at 5&deg; C for up to 48 hours, and cryopreserved in two extender. For this experiment were used ejaculates of 10 Nellore bulls. Each ejaculate was divided into three aliquots, being diluted in the Botubov&reg;, Steridyl&reg; and Bovidyl&reg; extenders. After dilution, the semen was cooled into three extenders and cryopreserved using the Botubov&reg; and Steridyl&reg;. Semen refrigeration was performed at 5&deg; C for up to 48 hours in BotuFlex&reg; passive refrigeration system and cryopreservation performed in TK 3.000&reg; automated system. Semen was evaluated at 0, 24, 36 and 48 hours after refrigeration and after thawing, for each diluent. The sperm kinetics of the spermatic kinetics (CASA, SCA - Sperm Class Analyzer), plasma and acrosomal membrane integrity, mitochondrial membrane potential and oxidative stress by fluorescent probes were analyzed under epifluorescence microscopy and sperm morphology By Differential Interference Contrast Microscopy (DIC). The Botubov&reg; and Steridyl&reg; diluents were very similar after 48 hours of cooling differing significantly only in the Curvilianear Velocity (VCL) 106.04 m/s and 124.56 m/s. The Bovidyl&reg; diluent yielded results significantly lower than the 48 hours of refrigeration for the variables: total motility (MT), progressive motility (MPRO), fast cells (RAP), curvilinear velocity (VCL), progressive velocity (AP), plasma membrane integrity (PI), high mitochondrial potential (AP), and spermatozoa with intact plasma and acrosomal membranes and high mitochondrial potential (PIAIA). The second experiment was carried out, based on the results of the first experiment I, to evaluate the effects of cooled and cryopreservation of semen on in vivo fertility. We used ejaculates of three bulls of the Brangus, Braford and Angus breeds of a IA center, aged between 5 and 7 years. The semen was collected by artificial vagina, the ejaculate was divided into three aliquots, two aliquots for refrigeration and one for cryopreservation. For cooling, the semen was diluted in the concentrations of 15x106 (R15) and 30x106 (R30) spermatozoa/straw, for cryopreservation diluted in the concentration of 30x106 spermatozoa / vane (CRIO). For all dilutions, the Botubov&reg; medium and the semen stored in 0.5 mL vial were used. Refrigeration was carried out at a temperature of 5&deg; C for 48 hours in BotuFlex&reg; passive refrigeration system and cryopreservation in an automated TK&reg; system. 552 Brangus cows were synchronized in fixed-time artificial insemination programs. The results of the pregnancy rate for the groups of inseminated cows were 49.4% for R15, 43.38% for R30 and 47.59% for cryopreserved semen. It can be concluded that the cooling of the semen at 5&deg; C for 48 hours results in pregnancy rate similar to those obtained with cryopreserved semen, and these results indicate that refrigeration for up to 48 hours may be an option of use for FTAI.

In recent years, in dairy cattle, while it was observed a gradual increase in productivity, a decrease occurred in the reproductive efficiency. Several factors, such as increased incidence of diseases, higher susceptibility to heat stress and increase of dry matter intake, have been awarded as possible causes for the decrease in fertility. Increased dry matter intake is associated with increased liver blood flow, which is associated with an increase in liver metabolism of steroid hormones. Given the high metabolism of steroid hormones in high producing dairy cows, six studies were carried out, which in this thesis are divided in three chapters, involving hormone supplementation in lactating dairy cows. The first study aimed to increase the synchronization rate of dairy cows submitted to a fixed time artificial insemination (FTAI) estradiol (E2)/progesterone (P4)-based protocol. For this purpose, two experiments were performed, the first (n = 44 cows) compared a 2.0 vs 3.0 mg of estradiol benzoate (EB) associated to a P4 implant at the beginning of the protocol. The second experiment (n = 82 cows) performed presynchronization with GnRH prior to the onset of a FTAI protocol to produced different follicular development stages at the time of E2/P4: emergence vs. dominance. Daily ultrasound and hormone evaluations were performed. Other four experiments are described in the second (n = 1070 cows) and third (n = 1498 cows) chapter, which have been developed to evaluate the effect of P4 supplementation after ovulation in lactating dairy cows. In general, these studies evaluated the effect of supplementation on the corpus luteum (CL) development and function, mRNA abundance for interferon stimulated genes (ISG), on fertility of cows subjected to AI after estrus detection or FTAI protocol, or to embryo transfer. Increasing the EB dose from 2.0 for 3.0 mg did not improve emergence wave synchronization. In fact, it induced luteolysis in a larger number of cows. Altering the stage of the estrous cycle of the cows at the beginning of the E2/P4-based FTAI protocol did not improve synchronization of wave emergence. Post ovulation P4 supplementation did not affect CL development and function, and did not increase the mRNA abundance for ISG. Cows subjected to AI after estrus detection or after an E2/P4-based FTAI protocol did not have increased fertility. However when P4-supplemented cows were subjected to a GnRH-based FTAI protocol there was an improvement in the fertility of about 8%. Thus, we can concluded that regardless of the EB dose or stage of the estrous cycle at beginning of the E2/P4-based FTAI protocol, still there are cows that fail to have a synchronized emergence of a new wave and/or to ovulate at the end protocol. Additionally, depending on the protocol used, P4 supplementation may increase the fertility of dairy cows, but compromises the fertility when embryos are transferred. / Nos últimos anos, em rebanhos leiteiros, foi observado um aumento acentuado da produtividade acompanhado de uma diminuição da eficiência reprodutiva das vacas lactantes. Diversos fatores, como o aumento da incidência de doenças, da suscetibilidade ao estresse térmico e da ingestão de matéria seca, têm sido atribuídos como possíveis causas para esse decréscimo na fertilidade. Aumento da ingestão de matéria seca está associado maior fluxo sanguíneo hepático, que por sua vez está relacionado com aumento da metabolização hepática de diversas moléculas, entre elas os hormônios esteroides. Tendo em vista o alto metabolismo destes hormônios nas vacas leiteiras, foram realizados seis estudos, que na presente tese estão divididos em três capítulos, envolvendo suplementação hormonal em vacas leiteiras lactantes. O primeiro capítulo teve como objetivo aumentar a taxa de sincronização de vacas leiteiras ao protocolo de inseminação artificial em tempo fixo (IATF) à base de estradiol (E2)/progesterona (P4). Para isso foram realizados dois experimentos, sendo o primeiro (n = 44 vacas) utilizando dose de 2.0 ou 3.0 mg de benzoato de estradiol (BE) associado a um dispositivo de P4, no início do protocolo. No segundo (n = 82 vacas), foi realizada uma pré-sincronização com GnRH para iniciar o protocolo de IATF em diferentes estágios foliculares: recrutamento vs. dominância. Avaliações ultrassonográficas e dosagens hormonais foram feitas. Outros 4 experimentos, descritos no segundo (n = 1070 vacas) e no terceiro (n = 1498 vacas) capítulo, foram desenvolvidos para avaliar o efeito da suplementação de P4 após a ovulação em vacas leiteiras. Nesses estudos, foram avaliados os efeitos desta suplementação na formação e função do corpo lúteo (CL), na expressão de genes estimulados por interferon (ISG), na fertilidade de vacas submetidas a IA, através da observação de estro ou de protocolo de IATF, e em receptoras de embrião. A dose de 3.0 mg de BE, além de não aumentar a taxa de sincronização da emergência de uma nova onda folicular, induziu luteólise em um maior número de vacas que a dose de 2.0 mg. Independente da fase do ciclo estral, no início do protocolo a base de E2/P4, houve falhas na indução na sincronização da emergência e de ovulação. A suplementação com P4 após a ovulação não alterou a formação e função do CL, mas também não aumentou a expressão de ISG. Vacas submetidas a IA após detecção de estro ou submetidas à IATF em protocolos a base de E2/P4 não apresentaram aumento na fertilidade, no entanto quando submetidas ao protocolo de IATF à base de GnRH foi observado em torno de 8% de incremento de fertilidade. Contudo, receptoras de embrião suplementadas com P4 tiveram menor fertilidade. Assim, concluiu-se que independente da dose de EB ou do momento do ciclo estral em que se inicia o protocolo de IATF à base de E2/P4 há falhas de emergência de uma nova onda e/ou de ovulação ao final do protocolo. Além disso, dependendo do protocolo utilizado, a suplementação com P4 pósovulação pode aumentar a fertilidade de vacas submetidas à IATF, contudo compromete a fertilidade de receptoras de embrião.

O presente experimento teve por objetivos comparar a adição de diferentes concentrações de glutationa reduzida (GSH) no diluidor para criopreservação do sêmen de cães, considerando-se as características morfofuncionais pós-descongelação; e verificar os índices de gestação e número de filhotes por ninhada obtidos a partir da inseminação artificial intra-uterina, por cateterização cervical endoscópica, com sêmen criopreservado contendo diferentes concentrações de glutationa. Na primeira fase do experimento, foram realizadas duas colheitas seminais de 11 reprodutores com intervalo mínimo de uma semana entre os procedimentos. Foram empregadas três concentrações diferentes de glutationa reduzida (0, 10 e 20 mM) ao meio de congelação tris-gema-citrato. O sêmen fresco, refrigerado, glicerolizado e descongelado foram avaliados por citometria de fluxo com uso de sondas específicas para determinar a integridade das membranas plasmática e acrossomal, potencial de membrana mitocondrial e fragmentação de DNA. Também foi realizada dosagem de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) para avaliar os níveis de estresse oxidativo. Na segunda fase do experimento, foram inseminadas 6 fêmeas, alocadas em dois grupos: inseminação intra-uterina com sêmen congelado em diluidor contendo 10 mM (IA-GSH10, n=3) e sem a adição de glutationa (IA-GSH0, n=3). O acompanhamento do ciclo estral foi realizado por citologia vaginal, vaginoscopia, dosagem de progesterona e LH. Foram realizadas duas inseminações no 5o e 6o dias após pico de LH e a gestação diagnosticada aos 30 dias. A adição de 10 e 20 mM de GSH ao diluidor para criopreservação promoveu queda na motilidade espermática nas amostras descongeladas, sendo o maior prejuízo observado na concentração de 20 mM. Foi detectada maior porcentagem de acrossomos íntegros nos grupos tratados. A glicerolização e, principalmente, a exposição do espermatozóide ao nitrogênio líquido e posterior descongelação foram responsáveis pela diminuição da motilidade espermática, em consequência ao prejuízo da função mitocondrial promovida pela produção de radicais livres durante o processamento seminal. A gestação foi diagnosticada em duas fêmeas do grupo IA-GSH10 e duas do grupo IA-GSH0. Em conclusão, a adição de 10 e 20 mM de GSH ao diluidor para criopreservação seminal não promoveu os efeitos protetores esperados na espécie canina, sendo a concentração de 20 mM responsável por maiores prejuízos à amostra seminal. A adição de 10 mM de GSH ao diluidor para criopreservação seminal na espécie canina manteve o índice de fertilidade semelhante ao obtido com sêmen criopreservado sem a suplementação antioxidante. / The present experiment aimed to compare the addition of different concentrations of reduced glutathione (GSH) on frozen-thawed canine semen, considering the morphofunctional characteristics; and to verify the pregnancy rate and number of puppies per litter obtained from intrauterine insemination by endoscopic catheterization of the cervix, with frozen-thawed semen containing different concentrations of glutathione. During the first phase of the experiment, two seminal samples collected weekly from 11 mature dogs were used. Three different concentrations of reduced glutathione (0, 10 and 20 mM) were supplemented in a tris-citrate egg yolk extender. The fresh, chilled, glycerolized and post-thawed semen were assessed by flow cytometry using specific probes to determine plasma membrane and acrosomal integrity, mitochondrial membrane potential and DNA fragmentation. Thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) assay was also performed to assess the occurrence of oxidative stress. In the second phase of the experiment, six canine females were allocated into two groups: intrauterine insemination with frozen-thawed semen containing 10 mM GSH (IA-GSH10, n = 3) and without the addition of glutathione (IA-GSH0, n = 3). Bitches were monitored by vaginal cytology, vaginoscopy, progesterone and LH assays. Two inseminations were performed on days 5 and 6 post LH peak. We verified that the addition of 10 and 20 mM of GSH to semen extender promoted a decrease in post-thaw sperm motility, as well as a higher damage degree at the 20 mM concentration. We also detected a higher percentage of acrossomal integrity in treated groups. At glycerolization and moreover, the sperm exposure to liquid nitrogen and further thawing, were responsible for the decrease in sperm motility, due to the loss of mitochondrial function through the free radicals production. Gestation was diagnosed in two female from IA-GSH10 group and two bitches of the IA-GSH0 group. In conclusion, we did not observe the expected protective effects of the addition of 10 and 20 mM GSH to semen extender. Furthermore, the concentration of 20 mM was responsible for the more extreme damage to semen sample. The supplementation of 10 mM GSH to semen extender for cryopreservation maintained the fertility rates similar to the ones observed for cryopreservation without antioxidant supplementation in dogs.

Foram comparadas diferentes doses de eCG e hCG associadas a dispositivos intravaginais de progesterona (DIV), para avaliar o crescimento folicular e a ovulação, bem como a taxa de prenhez após a IATF e a funcionalidade do CL 12 dias após a sincronização em búfalas, durante a estação reprodutiva desfavorável. Para tanto, foram realizados cinco experimentos. Nos experimentos 1, 2 e 4, os grupos foram estabelecidos em função da ciclicidade dos animais, avaliada pelas concentrações plasmáticas de progesterona mediante colheita de sangue por punção da veia jugular no D-10 e no D0. Nos experimentos 3 e 5, os grupos foram estabelecidos em função da condição corporal e da ordem de parto. Em todos os experimentos as búfalas receberam um DIV associado a 2mg de Benzoato de Estradiol (BE) no D0. No D9 o DIV foi retirado, e procedeu-se à administração de 0,150mg de prostaglandina (PGF). No experimento 1, as búfalas do G1 (Controle, n=9) e do G2 (eCG, n=10) receberam 1500UI de hCG no D11; o G2 recebeu também 500UI de eCG no D-9; a IATF foi realizada no D12. Nesse experimento, o diâmetro máximo do folículo dominante (DMFD) foi de 12,6 ± 3,0 e 13,4 ± 1,7mm para o G1 e o G2, respectivamente (P>0,05); o diâmetro do folículo ovulatório (DFO) foi de 14,9 ± 2,9 (G1) e de 14,0 ± 1,6mm (G2; P>0,05); o intervalo entre a retirada do DIV e a ovulação (IROV) foi de 78,0 ± 12 (G1) e 68,0 ± 9,0h (G2; P>0,05); a taxa de ovulação (TO) foi de 44,4 (G1) e 70,0% (G2; P> 0,05). A área do CL (ACL) foi de 31,6 ± 19,9 (G1) e de 29,9 ± 9,7mm2 (G2; P>0,05); a concentração plasmática de P4 (P4) foi de 1,3 ± 1,4 (G1) e 2,0 ± 1,6ng/ml (G2; P>0,05); a taxa de prenhez (TP) foi de 22,2 (G1) e 60% (G2; P=0,11). No experimento 2, as búfalas do G1 (1500 UI de hCG; n=21) e do G2 (1000UI de hCG; n=21) receberam 500UI de eCG no D9; no D11, o G1 recebeu 1500UI de hCG e o G2 1000UI de hCG. Os resultados desse experimento são relatados a seguir: DMFD de 12,4 ± 2,3 (G1) e 12,2 ± 2,5mm (G2; P>0,05); DFO de 12,6 ± 2,3 (G1) e 12,5 ± 2,7mm (G2; P>0,05); IROV de 67,7 ± 18,1 (G1) e 72,8 ± 16,7h (G2; P>0,05); TO de 67,7 (G1) e 67,7% (G2; P>0,05); ACL de 24,8 ± 9,2 (G1) e 28,3 ± 17,2mm2 (G2; P>0,05); P4 de 2,3 ± 1,4 (G1) e 2,4 ± 1,3ng/ml (G2; P>0,05). No experimento 3, os animais foram tratados de forma idêntica àqueles do experimento 2, porém as búfalas do G1 (n=83) e do G2 (n=91) receberam a IATF no D12. Nesse experimento, foi obtida TP de 53 (G1) e de 53,8% (G2; P>0,05). No Experimento 4, as búfalas do G1 (n=10) receberam 500UI e as do G2 (n=11) 400UI de eCG; os dois grupos receberam 1000UI de hCG no D11. Esse experimento teve como resultados: DMFD de 13,2 ± 1,4 (G1) e 13,8 ± 1,8mm (G2; P>0,05); DFO de 13,7 ± 1,1 (G1) e 14,2 ± 1,5mm (G2; P>0,05); IROV de 71,1 ± 11,7 (G1) e 75,0 ± 5,5h (G2; P>0,05); TO de 70,0 (G1) e 72,7% (G2; P>0,05); ACL de 28,4 ± 8,6 (G1) e 31,6 ± 10,3mm2 (G2; P>0,05); P4 de 2,7 ± 1,2 (G1) e 3,3 ± 2,9ng/ml (G2; P>0,05). No experimento 5 (G1/n=54; G2/n=51) foi adotado o mesmo protocolo do experimento 4, porém as búfalas receberam a IATF no D12. Esse experimento resultou em TP de 42,6 (G1) e 43,1% (G2; P>0,05). Assim, foi possível concluir que as concentrações de 400UI de eCG e de 1000UI de hCG, associadas ao DIV, foram suficientes para induzir o crescimento folicular, a ovulação e a prenhez em búfalas durante o período reprodutivo desfavorável. / Different dosage of eCG and hCG were compared in association to progesterone intravaginal device (IVD) in female buffalo during the off breeding season with the purpose of evaluating the follicular growing and ovulation as well as the pregnancy rate after FTAI and functionality of the CL, twelve days after the synchronization. For this, 5 experiments were done. For the establishments of the groups in the experiments 1,2 and 4 blood samples were collected for the analysis of plasmatic concentrations of P4 on D -10 and D0 to verify the cyclicity. In the experiments 3 and 5 the groups were established due body condition score and number of calving. In all the experiments the buffaloes received a IVD associated with 2mg of estradiol benzoate (EB) on D0. On D9 the IVD was extracted and it was followed by the administration of 0,150mg of prostaglandin (PGF). In the exp. 1 the buffaloes of G1 (control, n=9) and G2 (eCG, n=10) received 1500IU of hCG on D11. On G2 was administrated 500IU of eCG on D9. The FTAI was done on D12. The maximun diameter of dominant follicle (MDDF) was 12.6 ± 3.0 and 13.4 ± 1.7mm to the G1 and G2, respectively (P>0,05). The diameter of the ovulatory follicle (DOF) was 14.9 ± 2.9 (G1) and 14.0 ± 1.6mm (G2; P>0,05). The interval between the device withdrawn and ovulation (DWO) was 78.0 ± 12.0 (G1) and 68.0 ± 9.0h (G2; P>0,05). The ovulation rate (OR) was 44.4 (G1) and 70.0% (G2; P>0,05). The CL area (CLA) was 31.6 ± 19.9 (G1) and 29.9 ± 9.7mm2 (G2; P>0,05). The plasmatic concentration of P4 (P4) was 1.3 ± 1.4 (G1) and 2.0 ± 1.6ng/ml (G2; P>0,05). The pregnancy rate (PR) was 22.2 (G1) and 60% (G2; P=0,11). In the exp. 2 the buffalo females of G1 (1500IU of hCG; n=21) and G2 (1000IU of hCG; n=21) received 500IU of eCG on D9. On D11, G1 received 1500IU of hCG and G2 1000IU of hCG. The MDDF was 12.4 ± 2.3 (G1) and 12.2 ± 2.5mm (G2; P>0,05), the DOF was 12.6 ± 2.3 (G1) and 12.5 ± 2.7mm (G2; P>0,05), DWO was 67.7 ± 18.1 (G1) and 72.8 ± 16.7h (G2; P>0,05), the OR was 67.7 (G1) and 67.7% (G2; P>0,05), the CLA was 24.8 ± 9.2 (G1) and 28.3 ± 17.2mm2 (G2; P>0,05) and the P4 was 2.3 ± 1.4 (G1) and 2.4 ± 1.3ng/ml (G2; P>0,05). The exp. 3 was identical to exp.2, although the animals of G1 (n=83) and G2 (n=91) received the FTAI on D12. The PR was 53.0 (G1) and 53,8% (G2; P>0,05). In exp. 4, the animals of G1 (n=10) received 500IU and G2 (n=11) 400IU of eCG. Both groups received 1000IU of hCG on D11. The MDDF was 13.2 ± 1.4 (G1) and 13.8 ± 1.8mm (G2; P>0,05), the DOF was 13.7 ± 1.1 (G1) and 14.2 ± 1.5mm (G2; P>0,05), the DWO was 71.1 ± 11.7 (G1) and 75.0 ± 5.5h (G2; P>0,05), the OR was 70.0 (G1) and 72.7% (G2; P>0,05), the CLA was 28.4 ± 8.6 (G1) and 31.6 ± 10.3mm2 (G2; P>0,05) and the P4 was 2.7 ± 1.2 (G1) and 3.3 ± 2.9ng/ml (G2; P>0,05). In exp. 5 (G1/n=54; G2/n=51) was done the same protocol in the exp. 4, although the animals received the FTAI on D12. The PR was 42.6 (G1) and 43.1% (G2; P>0,05). Dosage of 400IU of eCG and 1000IU of hCG, associated to IVD for FTAI were enough to induce follicular growing, ovulation and pregnancy in buffalo females during the off breeding season.

Orientador: Jose Luiz Moraes Vasconcelos / Banca: Ciro Moraes Barros / Banca: Alexandre Vaz Pires / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do mês de parição na condição corporal (CC) no início de estação de monta e na resposta a dois protocolos de inseminação artificial em tempo fixo (IATF) em vacas primíparas de corte. No experimento I (exp. I) foi avaliado a alteração da CC pré e pós-parto em 87 novilhas Nelore e 68 u sangue Red Angus, inseminadas para parir de Setembro a Dezembro. A CC foi avaliada mensalmente no pré e pós-parto de Junho a Fevereiro. No exp. II as 155 vacas do exp. I foram sincronizadas entre 29 e 129 dias pós-parto (DPP), com o protocolo: remoção dos bezerros (RB) por 48 h antes do primeiro GnRH (100 mcg, Fertagyl®, INTERVET) e foi inserido dispositivo intravaginal de progesterona (CIDR®, Pfizer, 1,9 g). Após 6,5 dias, foi feita nova RB por 46h; o CIDR® foi removido; e foi aplicado prostaglandina 2 (PGF2 ) (25 mg, Lutalyse®, Pfizer). Entre 42 e 46h após a PGF2 as vacas receberam nova aplicação de GnRH e foram inseminadas. No exp. III, 538 primíparas de duas fazendas (60 Nelore e 123 u sangue Red Angus na fazenda 1 e 355 Nelore na fazenda 2), entre 33 e 104 DPP foram sincronizadas com o protocolo: inserção do CIDR® junto à de Benzoato de Estradiol (2,0 mg, Estrogin®, Farmavet), No dia 7 foi aplicado PGF2 (12,5 mg, Lutalyse®, Pfizer). No dia 9 foi retirado o CIDR®, foi feita RB e aplicado 0,5 mg de Cipionato de Estradiol (E.C.P.®, Pfizer). A IATF foi realizada 46 a 52 h após a retirada do CIDR®. A taxa de sincronização foi avaliada (exceto na fazenda 2 do exp. III) por dois exames de ultra-som (Aloka SSD-500, 5,0 MHz) e determinada pela presença e ausência de folículo dominante na IATF e 48 h após. O diagnóstico de gestação foi feito por ultra-som 28 dias após a IATF. A análise estatística do exp. I foi feita no PROC MIXED e dos exp. II e III no PROC LOGISTIC do SAS... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the calving date effect on body condition score (BCS) at the beginning of breeding season and on the response to a two timed artificial insemination (TAI) protocols in first-calf beef heifers. In experiment I (exp. I) was evaluated the BCS change pre and post-partum. Eighty seven Nelore heifers and 68 u blood Red Angus were inseminated to calve from September to December. The BCS were monthly measured from June to February, during the pre and post-partum of these animals. In exp. II, the cows from exp. I were TAI when they were between 29 and 129 days post-partum (DPP) with the protocol: calf removal (CR) for 48 h before the first GnRH (100 mcg, Fertagyl®, INTERVET) and an insertion of an intravaginal progesterone device (1.9 g, CIDR®, Pfizer). After 6,5 days a new CR was performed, the CIDR® was removed and was injected prostaglandin F2? (PGF2?) (25 mg, Lutalyse®, Pfizer). Between 42 and 46 h after PGF2? was injected a new GnRH and cows were TAI. In exp. III, 538 primiparous cows from two herds (60 Nelore and 123 u blood Red Angus from farm 1 and 355 Nelore from farm 2), between 33 and 104 DPP were synchronized with the protocol: day 0, insertion of a CIDR® and a injection of 2.0 mg of estradiol benzoate (Estrogin®, Farmavet), on day 7 was injected PgF2? (12.5 mg, Lutalyse®, Pfizer), in the CIDR® withdraw (Day 9) was injected estradiol cipionate (0.5 mg, E.C.P.®, Pfizer) and a CR was done, the TAI was preformed 46 to 52 hours after the device withdraw. In the TAI moment and 48 hours later a ultrasound scan (Aloka SSD-500, 5.0 MHz) was performed to determine the ovulation rate (except in the farm 2 of exp. 3). The pregnancy diagnosis was made by ultrasound 28 days after the TAI. The statistic analysis in exp. I was performed with PROC MIXED and in exp.II and III with PROC LOGISTIC from SAS... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Cesar Roberto Esper / Banca: Marcos Brandão Dias Ferreira / Resumo: As biotecnologias da reprodução são utilizadas como uma alternativa para melhorar a eficiência reprodutiva e acelerar a produção de animais de alto valor zootécnico. Este estudo teve por objetivo avaliar a taxa de concepção de novilhas e vacas mestiças inseminadas com sêmen sexado e convencional (Experimento 1) e a taxa de concepção de novilhas e vacas mestiças submetidas a transferência de embriões produzidos in vivo (TE) e in vitro (PIVE) com sêmen sexado (Experimento 2). No experimento 1, sêmen sexado e convencional foram utilizados na inseminação de vacas (n=50) e novilhas (n=50) após 18-24 horas de observação de cio; no experimento 2 embriões produzidos in vitro (n=50) e in vivo (n=40) foram transferidos para vacas (n=45) e novilhas (n=45). Animais inseminados com sêmen sexado apresentaram taxa de concepção de 44% (11/25) para vacas e 52% (13/25) para novilhas e com sêmen convencional, a taxa de concepção foi de 72% (18/25) para vacas e 68% (17/25) para novilhas. A taxa de concepção obtida pela técnica de produção in vitro de embriões foi de 24% (6/25) para vacas e 28% (7/25) para novilhas e para os embriões produzidos in vivo foi de 45% (9/20) tanto para vacas como para novilhas. A técnica de IA com sêmen sexado apresentou diferença estatística (p<0,05) quando comparada com sêmen convencional, porém a categoria animal não teve diferença estatística (p>0,05) (Experimento 1). Não foi observada diferença estatística (p>0,05) entre a as técnicas de produção in vivo e in vitro de embriões nem entre a categoria animal. Os resultados indicam que o intervalo entre a observação de cio e inseminação de 18-24 horas mostrou-se eficaz na concepção tanto de vacas como de novilhas utilizando sêmen sexado ou convencional, no entanto para se aproximar aos resultados obtidos pelo sêmen convencional há necessidade de mais pesquisas para melhorar a taxa de concepção com sêmen sexado ... / Abstract: The reproduction biotechnologies are used as an alternative to improve reproductive efficiency and accelerate the production of animals of high performance zootechnical. This study aimed to evaluate the conception rate of heifers and cows crossbred inseminated with sexed semen and conventional (Experiment 1) and conception rate of heifers and cows crossbred receiving the transfer of embryos produced in vivo (TE) and in vitro (PIVE) with sexed semen (Experiment 2). In experiment 1, sexed and conventional semen were used for the insemination of cows (n = 50) and heifers (n = 50) after 18-24 hours of estrous observation; in experiment 2 embryos produced in vivo (n = 40) and in vitro (n = 50) were transferred to cows (n = 45) and heifers (n = 45). Animals inseminated with sexed semen showed conception rate from 44% (11/25) for cows and 52% (13/25) for heifers and with conventional semen, the conception rate was 72% (18/25) for cows and 68% (17/25) for heifers. The conception rate obtained by the technique of in vitro production of embryos was 24% (6/25) for cows and 28% (7/25) for heifers and for embryos produced in vivo was 45% (9/20) both for cows as for heifers. The technique of AI with sexed semen presented statistical difference (p <0.05) when compared with conventional semen, but animal category was not statistically different (p> 0.05) (Experiment 1). No statistical difference (p> 0.05) between the production techniques in vivo and in vitro embryo or between animal category was observed. The results indicate that the interval between estrous observation and insemination 18-24 hours was effective on conception of both cows and heifers using conventional and sexed sêmen, however to approximate of the results obtained by the conventional semen is no need to most research to improve conception rates with sexed semen (Experiment 1). Conception rates with embryos PIVE in heifers and cows recipients were lower than those produced in ... / Mestre

Resumo:O processo de desenvolvimento embrionário e placentário está sob controle epigenético intenso, com os diversos processos epigenéticos regulando a diferenciação de células pluripotentes em células especializadas. Um desenvolvimento placentário anormal é observado com frequência em gestações de clones, e está associado a uma alteração na reprogramação epigenética da célula doadora e do embrião formado. O objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão dos genes "imprinted" TSSC4 e PHLDA2 em tecido cotiledonário e intercotiledonário, aos 60 dias de gestação, de placentas produzidas por Transferência Embrionária (TE), Fecundação In Vitro (FIV) e Transferência Nuclear (TN) em bovinos, e também investigar o controle epigenético desses genes na placenta bovina, avaliando o perfil epigenético dos mesmos em tecidos cotiledonários dos grupos experimentais (TE, FIV e TN). A expressão do gene TSSC4 foi reduzida em 30% na região cotiledonária do grupo produzido por TN, no entanto a expressão do gene PHLDA2 aumentou em aproximadamente onze vezes nos grupos TN e FIV, quando comparados ao grupo TE. Análises de ChIP para a histona H3 na região promotora proximal dos genes TSSC4 e PHLDA2 mostraram um aumento para a marcação permissiva H3K4me2 e uma redução para a inibitória H3K9me2 em cotilédones de placentas clonadas em relação às placentas produzidas por TE. Interessantemente, ambas as marcações de histonas para o gene TSSC4 também estavam significativamente alteradas também em placentas produzidas por FIV, quando comparadas ao grupo TE. Esses resultados mostram que a expressão dos genes "imprinted" TSSC4 e PHLDA2 está alterada em placentas de gestações produzidas por transferência nuclear. Ainda, alterações na expressão do gene PHLDA2 e das modificações de histona no gene TSSC4, nos cotilédones produzidos por FIV, indicam que o cultivoo...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract:The process of embryonic and placental development is under high epigenetic control, with different epigenetic processes regulating the differentiation of pluripotent cells into specialized cells. An abnormal placental development is observed frequently in pregnancies produced by nuclear transfer, and is associated with incomplete epigenetic reprogramming of the donor cell and formed embryo. The objective of this study was to evaluate the expression of the imprinted genes TSSC4 e PHLDA2 in cotiledonary and intercotiledonary tissues, after 60 days of pregnancy, in placentas produced by Embryo Transfer (ET) In Vitro Fertilization (IVF) and Nuclear Transfer (NT) in cattle, and also to investigate the epigenetic control of this gene in the bovine placenta evaluating the epigenetic profile of cotiledonary tissues of the experimental groups (ET, IVF and NT). The TSSC4 gene expression was reduced by 30% in the cotyledons in the NT group, however PHLDA2 expression of the gene was elevated by 11-fold in NT compared to ET. ChIP analysis for histone H3 at the proximal promoter region of TSSC4 and PHLDA2 genes showed an increase to the permissive mark H3K4me2 and a reduction for the inhibitory mark H3K9me2 in the cotyledons of cloned placentae, in relation to placentae produced by ET, for both genes. Interestingly, the inhibitory mark H3K9me2 for TSSC4 gene was also significantly reduced in placentae produced by IVF, compared to ET control group. These results show that expression of the "imprinted" genes TSSC4 and PHLDA2 is affected in placenta of pregnancies produced by nuclear transfer. Further, changes in expression of gene PHLDA2 and histone modifications in TSSC4 gene cotyledons produced by IVF indicate that the in vitro culture can contribute to the observed changes in NT group. / Orientador:Flavia Lombardi Lopes / Banca:Calie Castilho / Banca:Gisele Zoccal Mingoti / Mestre