Orientador : Prof. Dr. Paulo Rossi junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Zootecnia. Defesa: Curitiba, 10/05/2016 / Inclui referências : f. 48-59;76-80 / Área de concentração : Nutrição e produção animal / Resumo: A pecuária de corte é uma atividade representativa no Brasil e contribui expressivamente para a economia. No entanto, os índices de produtividade estão abaixo do desejado e do potencial do país, de modo que a baixa eficiência reprodutiva do rebanho tem colaborado para isto. A dificuldade de se obter um bezerro/vaca/ano, atrelada à alta incidência de anestro pós-parto atua fortemente nesta eficiência reprodutiva insatisfatória. Assim, protocolos que buscam sincronizar o estro dos animais e aumentar a taxa de serviço, os chamados protocolos de Inseminação Artificial em Tempo Fixo (IATF), vêm sendo empregados, oferecendo inúmeras vantagens. Paralelo ao uso dos protocolos de sincronização, que buscam melhorar a eficiência reprodutiva, um fator que comprovadamente diminui a fertilidade e acontece rotineiramente na pecuária é o estresse. Os fatores liberados nesse mecanismo agem diretamente sobre o eixo hipotálamo-hipófise-gonadal, inibindo a reprodução. Os objetivos deste trabalho foram verificar se os agentes estressores que ocorrem no manejo da IATF (Inseminação Artificial em Tempo Fixo) e os níveis séricos de cortisol têm efeito sobre as taxas de prenhez em fêmeas Bos indicus. Foram utilizadas 261 vacas Bos indicus, multíparas, saudáveis, lactantes paridas (30 a 45 dias pós-parto), com idade média de 6,6 (± 1,45) anos e escore de condição corporal (ECC) entre 2,5 e 3 (na escala de 1 a 5, em que 1= muito magra e 5= muito gorda). O mesmo protocolo de IATF foi aplicado a todos os animais. Foram utilizados três inseminadores e sêmen de um único touro. O diagnóstico de gestação foi realizado de 28 a 32 dias após a inseminação, com uso de ultrassom transretal. Foram considerados agentes estressores: Tempo no Brete, Tempo no Tronco, Tempo Total, Distância Invernada Curral, Distância Curral Invernada, Distância Total Percorrida, Tempo sem Bezerro e Tempo no Curral. Para verificar se houve correlação entre o horário de coleta e os níveis de cortisol foi realizada a correlação de Spearman. O efeito dos agentes estressores sobre a probabilidade de gestação foi aferido por meio da análise de regressão logística, enquanto que o efeito dos níveis de cortisol sobre a gestação foi determinado pelo teste Mann- Whitney. Houve efeito do meio (inseminador, fazenda e mês) e do Tempo no Tronco sobre as chances de prenhez (p<0,05), de maneira que, quanto maior o Tempo no Tronco, menor a chance da prenhez. Isto mostra que esse agente estressor foi eficaz em inibir a reprodução, afetando a eficiência reprodutiva em vacas Bos indicus submetidas a um protocolo de IATF. A taxa de prenhez não foi afetada pelos níveis séricos de cortisol (p>0,05). Palavras-chave: eficiência reprodutiva; estresse; IATF; manejo no curral; reprodução; tempo no tronco. / Abstract: The beef cattle livestock is a representative activity in Brazil and contributes significantly to the economy. However, productivity rates are below desired and below the potential of the country, so that the herd's low reproductive efficiency has contributed to this. The difficulty of obtaining a calf / cow / year, linked to the high incidence of postpartum anestrus acts strongly on this poor reproductive efficiency. Therefore, the protocols that seek synchronize the animals estrus and increase the service charge, the so called protocols of Fixed-Time Artificial Insemination (FTAI), have been employed, offering numerous advantages. Parallel to the use of synchronization protocols which seek the improvement of the reproductive efficiency, a proven factor that decreases the fertility and happens routinely in livestock is stress. The factors released in this mechanism act directly on the hypothalamic-pituitary-gonadal axis by inhibiting the reproduction. The objectives of this work were to verify if the stressing agents occurring during the handling of the Fixed-Time Artificial Insemination (FTAI) and the serum cortisol levels have an effect on the pregnancy rate of female Bos indicus. There were used 261 suckling cows Bos indicus (30 to 45 days postpartum), multiparous, healthy, with ages averaging 6.6 (± 1.45) years and with body condition score between 2.5 and 3 (in the scale of 1 to 5, in which 1=very thin and 5=very fat). The same FTAI protocol was applied to all animals. Three inseminators and the semen of one only bull were used. The pregnancy diagnosis was made by transrectal ultrasonography 28 to 32 days after the insemination. The following stressing agents were considered: time in the pen, time in the chute, total time, distance between pasture and corral, distance between corral and pasture, time without calf, time in the corral. The Spearman correlation was used to verify if there was a relation between the collection time and the cortisol levels. The effect of the stressing agents on the pregnancy probability was measured by logistic regression analysis, while the effect of the cortisol levels on pregnancy was determined by the Mann-Whitney test. There was an effect of the means (inseminator, farm and month) and the time in the chute on the pregnancy rates (p<0.05), in a way that the longer the time in the chute, the smaller the pregnancy rate. This shows that the time in the chute was able to inhibit the reproduction, affecting the reproductive efficiency of Bos indicus cows subjected to a FTAI protocol. The pregnancy rate was not affected by the serum cortisol levels (p>0.05). Keywords: FTAI; handling in the corral; reproduction; reproductive efficiency; stress; time in the squeeze chute.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T20:38:46Z : No. of bitstreams: 1 beltran_mp_me_botfmvz.pdf: 148138 bytes, checksum: 1776ee2d4797eee98e40fdd19aa6dc82 (MD5) / Este estudo avaliou o efeito de injeções de GnRH (hormônio liberador de gonadotrofina) ou hCG (gonadotrofina coriônica humana) no dia 5 após inseminação artificial (IA) nas taxas de concepção em vacas lactantes durante o verão. Vacas holandesas, n=158, produzindo 26±9 kg de leite/dia e 213±112 dias pós-parto (DPP), foram aleatoriamente distribuídas em 3 grupos: Controle (GC; n=52); GnRH (GG; n=55), 100 mcg IM. de gonadorelina (Cystorelinâ); e hCG (GH; n=51), 2500 UI IM de hCG (Vetecorâ). A temperatura retal foi verificada no momento da IA, e as amostras de sangue coletadas nos dias 5; 7 e 12 após IA para avaliar as concentrações séricas de progesterona (P4). A prenhez foi determinada entre os dias 42 e 49 após IA. Os dados foram analisados pelo procedimento MIXED do SAS, e foram incluídos no modelo efeitos do tratamento, ordem de lactação, produção de leite, temperatura retal no momento da IA e suas interações. O tratamento com GnRH ou hCG aumentou a P4 sérica (P<0,01). As concentrações séricas de P4 (ng/ml; média ± EPM) para GC, GG, e GH foram, respectivamente, no dia 5: 2,71±0,43; 2,45±0,44 e 3,23±0,45, no dia 7: 4,79±0,43; 4,15±0,44 e 5,75±0,45, e no dia 12 após IA: 5,21±0,43; 6,91±0,44 e 8,50±0,45. Devido ao aumento proporcional na concentração sérica de P4 entre os dias 5 e 7 após IA (GC: 77, GG: 69, GH: 77%; P<0,01) é provável que os tratamentos não tenham induzido o efeito luteotrópico no CL existente, porém devido ao grande aumento na P4 sérica no dia 12 nos animais tratados (GG: 112, GH: 87%; P<0,01) em relação aos animais controle (GC: 16%; P=0,31), provavelmente houve a indução de um novo CL. A temperatura retal média das vacas no momento da IA foi de 39,7°C e o tratamento com GnRH ou hCG aumentou as taxas de concepção (média ± EPM) nas vacas com temperatura retal abaixo de 39,7°C... / This study evaluated the effect of GnRH (gonadotropin releazing hormone) or hCG (human chorionic gonadotropin) injection on day 5 after artificial insemination (AI) on conception rates in lactating dairy cows during the summer. Holstein cows, 158, producing 26 ± 9 kg milk/d and 213 ± 112 days in milk, were randomly assigned to one of 3 treatments groups: control (CG: n=52); GnRH (GG: n=55), injection of 100 mcg i.m. of gonadorelin (Cystorelin®) and hCG (HG: n=51), injection of 2500 UI hCG i.m. (Vetecor®). Rectal temperature was checked at the moment of AI and blood samples collected on days 5, 7 and 12 after AI to evaluate serum progesterone (P4) concentrations. Pregnancy was determined between 42 and 49 d after AI. Data were analyzed by the MIXED procedure of SAS and were included in the model the effects of treatment, parity, milk production, rectal temperature at the moment of AI and interactions. Treatment with GnRH or hCG increased serum P4 (P<0,01). Serum P4 concentrations (ng/ml, mean±SEM) for CG, GG and HG were, respectively, on day 5 2.71±0.43, 2.45±0.44 and 3.23±0.45, on day 7, 4.79±0.43, 4.15±0.44 and 5.75±0.45 and on day 12 after AI, 5.21±0.43, 6.91±0.44, 8.50±0.45. Due to the proportional increase in serum P4 concentration from d 5 to 7 after AI (CG: 77, GG: 69, HG: 77%, P<0,01), it is likely that treatments did not have luteotropic effect on the existing CL, but due the higher increase in serum P4 on day 12 in the treated animals (GG: 112, HG: 87%; P<0,01) in relation to the control group animals (GC: 16%; P=0,31), probably induced the formation of a new CL. The average rectal temperature of cows at time of AI was 39,7°C. Treatment with GnRH and hCG increased conception rates (mean±SEM) in cows with rectal temperature below 39,7°C (CG: 10.1±0.075, n= 26, GG: 36.8±0.073, n=27, HG: 32.8±0.088%, n=21; p<.01)... (Complete abstract click electronic address below)

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-26Bitstream added on 2015-03-03T12:06:08Z : No. of bitstreams: 1 000809964.pdf: 1108463 bytes, checksum: 43fa89dc624ca99b382ecaa200b42518 (MD5) / A utilização da transgenia com a proteína fluorescente verde (GFP) como marcador de células de origem fetal nas placentas de clones bovinos servirá de modelo inédito para estudo morfofisiológico e imunológico da interação materno-fetal, visto que possibilitará o seu mapeamento, diferenciando as células fetais das maternas. Tal modelo terá aplicação direta, principalmente porque estes são animais que apresentam problemas em relação ao seu desenvolvimento. Com o auxílio deste modelo, pretende- se verificar o transporte de substâncias entre a mãe e o feto via endocitose, pela imunolocalização das proteínas chamadas de caveolinas. Para tanto foram utilizados 06 bovinos clonados e 30 bovinos de inseminação artificial (IA) com idade até 90 dias de gestação, os quais tiveram seu desenvolvimento interrompido mediante abate humanitário das receptoras e ovariosalpingohisterectomia, com posterior recuperação do útero gestante. Foram coletados os placentônios e o cório. Uma parte das amostras foi recortada e fixada, por imersão, em solução de parafolmaldeído a 4% ou formoldeído a 10% em tampão fosfato de sódio (PBS) a 0,1M pH 7.4, solução de Zamboni (4% de paraformoldeído, 15% de ácido pícrico, em tampão fosfato de sódio a 0,1M pH 7.4), metacarn (60% de metanol, 30% de clorofórmio, e 10% de ácido acético glacial), para verificação da morfologia e realização de imuno-histoquímica para as proteínas caveolinas -1 e -2 (CAV -1 e CAV-2). As caveolinas -1 foram localizadas nos vilos fetais e maternos, mas sua marcação mais forte foi observada no estroma endometrial. As caveolinas -2 tiveram marcação positiva no trofoblasto e membrana corioalantoide, e, especificamente em célula trofoblástica gigante binucleada. Sendo assim, os resultados mostram que a proteína CAV-1 teve uma maior expressão em relação a proteína CAV-2 e que as proteínas CAV-1 e -2 são parte da composição das cavéolas, sendo . / The transgenic application of green fluorecent protein (GFP) as fetal cell marker on cattle cloned placenta could provide an exclusive model for studying the morphologic and immunologic maternal-fetal interactions, providing information about its mapping, distinguishing the fetal from maternal cells. This model will have direct application, mainly because these are animals that present problems during its development. With this model's support, we intend to verify the substances transport between mother and fetus during endocytocis, through the immunolocalization of protein named caveolae. For these, we used 06 cloned bovine and 30 cattle samples of artificial insemination (AI) with 90 days of pregnancy, which had been their development interrupted by humanitarian slaughter of the recipient and recovery of the pregnant uterus. We collected the placentome and the chorion. A part of the samples will be cutted and fixed, by immersion, on a solution containing 4% of parafomaldehyde or 10% of formaldehyde on a sodium phosphate buffer (PBS) at 0,1M pH 7.4, Zamboni solution (4% of paraformaldehyde, 15% of picric acid, on sodium phosphate buffer 0,1M pH 7.4), metacarn (60% of metanol, 30% of chloroform, and 10% glacial acetic acid), for morphologic and immunohistochemistry verification for caveolinas proteins -1 and -2 ( -1 CAV and CAV- 2). The caveolinas -1 were found in fetal and maternal villi , but its strongest staining was observed in the endometrial stroma . The caveolinas -2 had positive staining in trophoblast and chorioallantoic membrane , and specifically in giant trophoblastic binucleated cell . therefore the results were compared between cloned cattle and from AI or natural mating, for assisting on detection of the reason of many placental alterations, embryonic losses, spontaneous abortion, post-natal mortality and large offspring syndrome on laboratory-manipulated animals. The result suggests that the proteins caveolins -1 and ...

Titulo retirado da capa / Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, São José dos Pinhais, 2012 / Bibliografia: f. 62-64 / O presente estudo objetivou verificar a influência do protocolo hormonal com três manejos, utilizando a progesterona intravaginal de uso único, em novilhas pré-púberes e púberes, visando a inseminação artificial em tempo fixo (IATF). Foram utilizadas 447 / The present study aim to verify the influence of using hormone in tree handle protocol which use progesterone intra vaginal inserts in pre pubertal and pubertal beef heifers, in purpose to achieve a pre timed A.I. 447 cross breed heifers ( Nelore X Red An

Titulo retirado da capa / Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, São José dos Pinhais, 2012 / Bibliografia: f. 62-64 / O presente estudo objetivou verificar a influência do protocolo hormonal com três manejos, utilizando a progesterona intravaginal de uso único, em novilhas pré-púberes e púberes, visando a inseminação artificial em tempo fixo (IATF). Foram utilizadas 447 / The present study aim to verify the influence of using hormone in tree handle protocol which use progesterone intra vaginal inserts in pre pubertal and pubertal beef heifers, in purpose to achieve a pre timed A.I. 447 cross breed heifers ( Nelore X Red An

Made available in DSpace on 2016-03-07T19:21:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-12-11. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:25:30Z : No. of bitstreams: 1 000858937.pdf: 237984 bytes, checksum: 61c941e361051e9de4cce1254082d23f (MD5) / O presente estudo avaliou se a concentração de P4 durante o desenvolvimento do folículo ovulatório em protocolo a base de P4/BE e com uma aplicação de GnRH em seu início interfere na prenhez à IATF em vacas Holandesas em lactação. A hipótese é que vacas com maior P4 no dia da aplicação da 1ª dose de PGF2α terão maior fertilidade. Para alterar a P4 os animais (n=594) foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos para receberem um ou dois dispositivos intravaginais de P4 (CIDR®, Zoetis, SP, Brasil). O protocolo utilizado foi: no d-11 inserção de 1 CIDR (novo ou previamente usado por 9 dias) + aplicação de 2mg i.m. de BE (Gonadiol®, Zoetis, SP, Brasil) + 100mcg i.m. de GnRH (Cystorelin®, Merial, SP, Brasil); d-4, aplicação de 25mg i.m. de Dinoprost (Lutalyse®, Zoetis, SP, Brasil); d-2, aplicação de 25mg i.m. de Dinoprost + 1mg i.m. de ECP (ECP®, Zoetis, SP, Brasil) + retirada do dispositivo de P4; d0, IATF. Os animais do grupo 2CIDR receberam um CIDR adicional no d-11, o qual foi retirado no d-4. Nos d-11 (n= 117), d-4 (n= 351), d0 (n= 214) e d10 (n= 72) foram colhidas amostras de sangue para determinação da concentração de P4. A P/IA foi determinada através de US nos d32 (DG1) e d60 (DG2). Dados binários foram analisados pelo PROC GLIMMIX, e os dados contínuos pelo PROC MIXED do SAS (foi considerada diferença significativa se P<0,05 e tendência se P<0,1). A P4 não diferiu entre os tratamentos no d-11 (1CIDR= 4,2±0,4 ng/ml; 2CIDR= 4,5± 0,4ng/ml; P>0,1), e no d-4 (1CIDR= 3,5±0,2ng/ml; 2CIDR= 3,8±0,2 ng/ml; P>0,1), porém foi detectada interação entre tratamento e presença de CL no início do protocolo na P4 no d-4 (sem presença de CL e 1CIDR= 2,7±0,3ng/ml; 2CIDR= 3,6±0,3ng/ml, com presença de CL e 1CIDR= 4,3±0,3ng/ml; 2CIDR= 4,0±0,3ng/ml; P<0,05). Não houve diferença na prenhez a IATF e nas perdas gestacionais entre os tratamentos [DG1: 1CIDR= 20,0 ... / The present study evaluated if P4 concentration during ovulatory follicle development in a timed artificial insemination (TAI) protocol based on P4/E2 affects pregnancy per AI in lactating Holstein cows. Our hypothesis is that cows that present higher P4 concentration at PGF2α administration have also higher fertility. To alter P4, animals (n=594) were randomly assigned to receive one or two intravaginals devices of P4 (CIDR®, Zoetis, SP, Brazil). TAI protocol utilized was: d-11 intravaginal device of P4 (new or previously used by 9 days) + 2mg im EB (Gonadiol®, Zoetis, SP, Brazil) + 100mcg im GnRH (Cystorelin®, Merial, SP, Brazil); d-4, 25mg im Dinoprost (Lutalyse®, Zoetis, SP, Brazil); d-2, 25mg im Dinoprost + 1mg im ECP (ECP®, Zoetis, SP, Brazil) + CIDR removal; d0, TAI. Animals in the group 2CIDR received an adicional CIDR at d-11, which was removed at d-4. At d-11 (n=117), d-4 (n=351), d0 (n=214) and d10 (n=72), blood samples were taken from cows for P4 concentration measurements. Pregnancy per AI was determined by ultrasound at d32 (DG1) and d60 (DG2). The binomial data were analyzed using PROC GLIMMIX and continuous data using PROC MIXED of SAS. An effect was considered significant when P<0.05 and tendency when P<0.1. P4 did not differ among treatments at d-11 (1CIDR=4.2±0.4ng/ml; 2CIDR=4.5±0.4ng/ml; P>0.1), and at d-4 (1CIDR=3.5±0.2ng/ml; 2CIDR=3.8±0.2 ng/ml; P>0.1). An interaction was detected between treatment and CL presence at the beginning of TAI protocol in P4 at d-4 (without CL and 1CIDR=2.7±0.3ng/ml; 2CIDR= 3.6±0.3ng/ml, with CL and 1CIDR=4.3±0.3ng/ml; 2CIDR= 4.0±0.3ng/ml; P<0.05). There was no difference among treatments in pregnancy per AI and pregnancy loss between DG1 and DG2 [DG1: 1CIDR= 20,0% (81/310) vs. 2CIDR= 15,7% (65/284); DG2: 1CIDR= 18,2% (74/310) vs. 2CIDR= 13,8% (57/283); Pregnancy loss: 1CIDR= 14,1% (7/81) vs. 2CIDR= 11,5% (7/64); P>0,1]. 37,0% (28/63)...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-26Bitstream added on 2014-06-13T20:46:11Z : No. of bitstreams: 1 crespilho_am_dr_botffmvz.pdf: 1224891 bytes, checksum: 5f6cd3bb0ea028b0690772b9a9bf8493 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do estudo foi comparar a efetividade de três diluidores empregados para criopreservação e refrigeração do sêmen bovino em relação aos padrões de motilidade, integridade de membrana plasmática e acrossomal, índice de peroxidação lipídica e fertilidade nos programas de inseminação artificial em tempo-fixo (IATF). No Trabalho científico número 1 foi comparado a viabilidade e fertilidade pós-descongelação proporcionada pelos diluidores Tris-frutose (TRIS, Controle) e Botu-Bov® (BB), ambos contendo 20% de gema de ovo como fonte de lipoproteínas, frente à diluição em Botu- Bov®-Lecitina de Soja (meio BB-L) apresentando 1% de lecitina em substituição ao produto de origem animal. No Trabalho 2 foram avaliados os mesmos diluentes quando utilizados para a refrigeração do sêmen bovino por 48 horas a 5°C. Já no Trabalho número 3 foi avaliada a taxa de concepção na inseminação artificial (C/IA) proporcionada pelo sêmen bovino refrigerado por 24 horas em meio Botu-Bov® em comparação ao sêmen convencionalmente criopreservado no mesmo diluidor. Os meios TRIS e BB a base de gema de ovo foram mais efetivos na manutenção da viabilidade espermática pósdescongelação, conferindo melhores resultados de C/IA (P<0,05) em relação ao meio BBL. No entanto, quando utilizado o sêmen na forma líquida e refrigerado (Trabalho número 2) foi observada uma maior proteção contra o estresse oxidativo proporcionado pelo diluidor a base de lecitina de soja, resultando em maior probabilidade de prenhez quando comparado às amostras refrigeradas em TRIS ou BB, alcançando índice de concepção similar ao obtido com o sêmen congelado. A utilização do sêmen bovino refrigerado por 24 horas levou ao aumento da C/IA de vacas submetidas a IATF quando comparado ao sêmen congelado em meio Botu-Bov®. Conclui-se que embora a lecitina de soja represente... / The aim of this study was to compare three different extenders used for cryopreservation of bovine semen, based on the results obtained during the cooling storage and post-thaw evaluation for motility patterns, integrity of plasmatic and acrossomal membranes, lipid peroxidation rate, as well as conception rate after fixed-time artificial insemination (FTAI). In Paper.1, the efficiency of Tris-Fructose extender (TRIS, control group), Botu-Bov® extender (BB), both containing 20% of egg yolk, and Botu-Bov®-Lecithin extender (BBL), which has 1% of soy lecithin instead of egg yolk, were compared in cryopreservation of bovine semen. In Paper.2, ejaculates from different bulls were cooled to 5°C for 48 hours using the same extenders of Paper.1. In Paper.3 the fertility trial was conducted either with frozen-thawed semen or cooled semen for 24 hours in the BB extender. The egg yolk extenders, TRIS and BB, demonstrated significant differences on the viability and the fertility of frozen-thawed bovine semen when compared to BB-L (P<0.05). However, the use of lecithin instead of egg yolk on semen extender resulted in a greater protection against oxidative stress; moreover, this extender improved the conception rates, reaching the results obtained in FTAI programs with frozen-thawed semen. The use of cooled bovine semen at 5°C for 24 hours improves the conception rate of Nelore cows submitted to FTAI. Although soy lecithin is an interesting alternative source of phospholipids in the elaboration of chemically defined extenders and decrease the risk of microbiological contamination, the egg yolk semen extenders are more effective in preserving the viability and fertility of frozen-thawed bovine semen. However, there was a higher production of free radicals in cooled semen with the use of egg yolk based extenders, resulting in lower conception rates when compared to frozen-thawed... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Flavia Thomaz Verechia Pereira / Banca: Cristiana Andrighetto / Banca: Vanessa Gomes Ueno / Resumo: A utilização da transgenia com a proteína fluorescente verde (GFP) como marcador de células de origem fetal nas placentas de clones bovinos servirá de modelo inédito para estudo morfofisiológico e imunológico da interação materno-fetal, visto que possibilitará o seu mapeamento, diferenciando as células fetais das maternas. Tal modelo terá aplicação direta, principalmente porque estes são animais que apresentam problemas em relação ao seu desenvolvimento. Com o auxílio deste modelo, pretende- se verificar o transporte de substâncias entre a mãe e o feto via endocitose, pela imunolocalização das proteínas chamadas de caveolinas. Para tanto foram utilizados 06 bovinos clonados e 30 bovinos de inseminação artificial (IA) com idade até 90 dias de gestação, os quais tiveram seu desenvolvimento interrompido mediante abate humanitário das receptoras e ovariosalpingohisterectomia, com posterior recuperação do útero gestante. Foram coletados os placentônios e o cório. Uma parte das amostras foi recortada e fixada, por imersão, em solução de parafolmaldeído a 4% ou formoldeído a 10% em tampão fosfato de sódio (PBS) a 0,1M pH 7.4, solução de Zamboni (4% de paraformoldeído, 15% de ácido pícrico, em tampão fosfato de sódio a 0,1M pH 7.4), metacarn (60% de metanol, 30% de clorofórmio, e 10% de ácido acético glacial), para verificação da morfologia e realização de imuno-histoquímica para as proteínas caveolinas -1 e -2 (CAV -1 e CAV-2). As caveolinas -1 foram localizadas nos vilos fetais e maternos, mas sua marcação mais forte foi observada no estroma endometrial. As caveolinas -2 tiveram marcação positiva no trofoblasto e membrana corioalantoide, e, especificamente em célula trofoblástica gigante binucleada. Sendo assim, os resultados mostram que a proteína CAV-1 teve uma maior expressão em relação a proteína CAV-2 e que as proteínas CAV-1 e -2 são parte da composição das cavéolas, sendo . / Abstract: The transgenic application of green fluorecent protein (GFP) as fetal cell marker on cattle cloned placenta could provide an exclusive model for studying the morphologic and immunologic maternal-fetal interactions, providing information about its mapping, distinguishing the fetal from maternal cells. This model will have direct application, mainly because these are animals that present problems during its development. With this model's support, we intend to verify the substances transport between mother and fetus during endocytocis, through the immunolocalization of protein named caveolae. For these, we used 06 cloned bovine and 30 cattle samples of artificial insemination (AI) with 90 days of pregnancy, which had been their development interrupted by humanitarian slaughter of the recipient and recovery of the pregnant uterus. We collected the placentome and the chorion. A part of the samples will be cutted and fixed, by immersion, on a solution containing 4% of parafomaldehyde or 10% of formaldehyde on a sodium phosphate buffer (PBS) at 0,1M pH 7.4, Zamboni solution (4% of paraformaldehyde, 15% of picric acid, on sodium phosphate buffer 0,1M pH 7.4), metacarn (60% of metanol, 30% of chloroform, and 10% glacial acetic acid), for morphologic and immunohistochemistry verification for caveolinas proteins -1 and -2 ( -1 CAV and CAV- 2). The caveolinas -1 were found in fetal and maternal villi , but its strongest staining was observed in the endometrial stroma . The caveolinas -2 had positive staining in trophoblast and chorioallantoic membrane , and specifically in giant trophoblastic binucleated cell . therefore the results were compared between cloned cattle and from AI or natural mating, for assisting on detection of the reason of many placental alterations, embryonic losses, spontaneous abortion, post-natal mortality and large offspring syndrome on laboratory-manipulated animals. The result suggests that the proteins caveolins -1 and ... / Mestre

Orientador: José Luiz Moraes Vasconcelos / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: Mario Binelli / Resumo: O presente estudo avaliou se a concentração de P4 durante o desenvolvimento do folículo ovulatório em protocolo a base de P4/BE e com uma aplicação de GnRH em seu início interfere na prenhez à IATF em vacas Holandesas em lactação. A hipótese é que vacas com maior P4 no dia da aplicação da 1ª dose de PGF2α terão maior fertilidade. Para alterar a P4 os animais (n=594) foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos para receberem um ou dois dispositivos intravaginais de P4 (CIDR®, Zoetis, SP, Brasil). O protocolo utilizado foi: no d-11 inserção de 1 CIDR (novo ou previamente usado por 9 dias) + aplicação de 2mg i.m. de BE (Gonadiol®, Zoetis, SP, Brasil) + 100mcg i.m. de GnRH (Cystorelin®, Merial, SP, Brasil); d-4, aplicação de 25mg i.m. de Dinoprost (Lutalyse®, Zoetis, SP, Brasil); d-2, aplicação de 25mg i.m. de Dinoprost + 1mg i.m. de ECP (ECP®, Zoetis, SP, Brasil) + retirada do dispositivo de P4; d0, IATF. Os animais do grupo 2CIDR receberam um CIDR adicional no d-11, o qual foi retirado no d-4. Nos d-11 (n= 117), d-4 (n= 351), d0 (n= 214) e d10 (n= 72) foram colhidas amostras de sangue para determinação da concentração de P4. A P/IA foi determinada através de US nos d32 (DG1) e d60 (DG2). Dados binários foram analisados pelo PROC GLIMMIX, e os dados contínuos pelo PROC MIXED do SAS (foi considerada diferença significativa se P<0,05 e tendência se P<0,1). A P4 não diferiu entre os tratamentos no d-11 (1CIDR= 4,2±0,4 ng/ml; 2CIDR= 4,5± 0,4ng/ml; P>0,1), e no d-4 (1CIDR= 3,5±0,2ng/ml; 2CIDR= 3,8±0,2 ng/ml; P>0,1), porém foi detectada interação entre tratamento e presença de CL no início do protocolo na P4 no d-4 (sem presença de CL e 1CIDR= 2,7±0,3ng/ml; 2CIDR= 3,6±0,3ng/ml, com presença de CL e 1CIDR= 4,3±0,3ng/ml; 2CIDR= 4,0±0,3ng/ml; P<0,05). Não houve diferença na prenhez a IATF e nas perdas gestacionais entre os tratamentos [DG1: 1CIDR= 20,0 ... / Abstract: The present study evaluated if P4 concentration during ovulatory follicle development in a timed artificial insemination (TAI) protocol based on P4/E2 affects pregnancy per AI in lactating Holstein cows. Our hypothesis is that cows that present higher P4 concentration at PGF2α administration have also higher fertility. To alter P4, animals (n=594) were randomly assigned to receive one or two intravaginals devices of P4 (CIDR®, Zoetis, SP, Brazil). TAI protocol utilized was: d-11 intravaginal device of P4 (new or previously used by 9 days) + 2mg im EB (Gonadiol®, Zoetis, SP, Brazil) + 100mcg im GnRH (Cystorelin®, Merial, SP, Brazil); d-4, 25mg im Dinoprost (Lutalyse®, Zoetis, SP, Brazil); d-2, 25mg im Dinoprost + 1mg im ECP (ECP®, Zoetis, SP, Brazil) + CIDR removal; d0, TAI. Animals in the group 2CIDR received an adicional CIDR at d-11, which was removed at d-4. At d-11 (n=117), d-4 (n=351), d0 (n=214) and d10 (n=72), blood samples were taken from cows for P4 concentration measurements. Pregnancy per AI was determined by ultrasound at d32 (DG1) and d60 (DG2). The binomial data were analyzed using PROC GLIMMIX and continuous data using PROC MIXED of SAS. An effect was considered significant when P<0.05 and tendency when P<0.1. P4 did not differ among treatments at d-11 (1CIDR=4.2±0.4ng/ml; 2CIDR=4.5±0.4ng/ml; P>0.1), and at d-4 (1CIDR=3.5±0.2ng/ml; 2CIDR=3.8±0.2 ng/ml; P>0.1). An interaction was detected between treatment and CL presence at the beginning of TAI protocol in P4 at d-4 (without CL and 1CIDR=2.7±0.3ng/ml; 2CIDR= 3.6±0.3ng/ml, with CL and 1CIDR=4.3±0.3ng/ml; 2CIDR= 4.0±0.3ng/ml; P<0.05). There was no difference among treatments in pregnancy per AI and pregnancy loss between DG1 and DG2 [DG1: 1CIDR= 20,0% (81/310) vs. 2CIDR= 15,7% (65/284); DG2: 1CIDR= 18,2% (74/310) vs. 2CIDR= 13,8% (57/283); Pregnancy loss: 1CIDR= 14,1% (7/81) vs. 2CIDR= 11,5% (7/64); P>0,1]. 37,0% (28/63)... / Mestre

Orientador: José Luiz Moraes Vasconcelos / Resumo: Este estudo avaliou o efeito de injeções de GnRH (hormônio liberador de gonadotrofina) ou hCG (gonadotrofina coriônica humana) no dia 5 após inseminação artificial (IA) nas taxas de concepção em vacas lactantes durante o verão. Vacas holandesas, n=158, produzindo 26±9 kg de leite/dia e 213±112 dias pós-parto (DPP), foram aleatoriamente distribuídas em 3 grupos: Controle (GC; n=52); GnRH (GG; n=55), 100 mcg IM. de gonadorelina (Cystorelinâ); e hCG (GH; n=51), 2500 UI IM de hCG (Vetecorâ). A temperatura retal foi verificada no momento da IA, e as amostras de sangue coletadas nos dias 5; 7 e 12 após IA para avaliar as concentrações séricas de progesterona (P4). A prenhez foi determinada entre os dias 42 e 49 após IA. Os dados foram analisados pelo procedimento MIXED do SAS, e foram incluídos no modelo efeitos do tratamento, ordem de lactação, produção de leite, temperatura retal no momento da IA e suas interações. O tratamento com GnRH ou hCG aumentou a P4 sérica (P<0,01). As concentrações séricas de P4 (ng/ml; média ± EPM) para GC, GG, e GH foram, respectivamente, no dia 5: 2,71±0,43; 2,45±0,44 e 3,23±0,45, no dia 7: 4,79±0,43; 4,15±0,44 e 5,75±0,45, e no dia 12 após IA: 5,21±0,43; 6,91±0,44 e 8,50±0,45. Devido ao aumento proporcional na concentração sérica de P4 entre os dias 5 e 7 após IA (GC: 77, GG: 69, GH: 77%; P<0,01) é provável que os tratamentos não tenham induzido o efeito luteotrópico no CL existente, porém devido ao grande aumento na P4 sérica no dia 12 nos animais tratados (GG: 112, GH: 87%; P<0,01) em relação aos animais controle (GC: 16%; P=0,31), provavelmente houve a indução de um novo CL. A temperatura retal média das vacas no momento da IA foi de 39,7°C e o tratamento com GnRH ou hCG aumentou as taxas de concepção (média ± EPM) nas vacas com temperatura retal abaixo de 39,7°C... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study evaluated the effect of GnRH (gonadotropin releazing hormone) or hCG (human chorionic gonadotropin) injection on day 5 after artificial insemination (AI) on conception rates in lactating dairy cows during the summer. Holstein cows, 158, producing 26 ± 9 kg milk/d and 213 ± 112 days in milk, were randomly assigned to one of 3 treatments groups: control (CG: n=52); GnRH (GG: n=55), injection of 100 mcg i.m. of gonadorelin (Cystorelin®) and hCG (HG: n=51), injection of 2500 UI hCG i.m. (Vetecor®). Rectal temperature was checked at the moment of AI and blood samples collected on days 5, 7 and 12 after AI to evaluate serum progesterone (P4) concentrations. Pregnancy was determined between 42 and 49 d after AI. Data were analyzed by the MIXED procedure of SAS and were included in the model the effects of treatment, parity, milk production, rectal temperature at the moment of AI and interactions. Treatment with GnRH or hCG increased serum P4 (P<0,01). Serum P4 concentrations (ng/ml, mean±SEM) for CG, GG and HG were, respectively, on day 5 2.71±0.43, 2.45±0.44 and 3.23±0.45, on day 7, 4.79±0.43, 4.15±0.44 and 5.75±0.45 and on day 12 after AI, 5.21±0.43, 6.91±0.44, 8.50±0.45. Due to the proportional increase in serum P4 concentration from d 5 to 7 after AI (CG: 77, GG: 69, HG: 77%, P<0,01), it is likely that treatments did not have luteotropic effect on the existing CL, but due the higher increase in serum P4 on day 12 in the treated animals (GG: 112, HG: 87%; P<0,01) in relation to the control group animals (GC: 16%; P=0,31), probably induced the formation of a new CL. The average rectal temperature of cows at time of AI was 39,7°C. Treatment with GnRH and hCG increased conception rates (mean±SEM) in cows with rectal temperature below 39,7°C (CG: 10.1±0.075, n= 26, GG: 36.8±0.073, n=27, HG: 32.8±0.088%, n=21; p<.01)... (Complete abstract click electronic address below) / Mestre