Intracanal dressings are substances used during endodontic treatment and requiring biocompatible with periradicular tissues, not causing tissue damage or interfere in repair process. This study aimed to assess the cytotoxicity of endodontic dressing when in contact with L929 mouse fibroblast cells, after different periods. To assess the cytotoxicity of three intracanal dressings and three vehicles were divided into seven groups, namely: calcium hydroxide/camphorated paramonochlorophenol/ glycerin (CPG); iodoform/ glycerin (IG); calcium hydroxide/iodoform/distilled water (CIW); iodoform/distilled water (IW); calcium hydroxide/distilled water (CW); Otosporin® (OT); and control group. The eluates of the medications were prepared and placed in contact with the cells (1 x 105 cells/well) during periods of 24, 48, 72hours, 5 and 7 days. After each evaluation time, a colorimetric assay was conducted using methyl tetrazolium reagent (MTT) and the reading of the plates was performed in a spectrophotometer with optical density of 570 nm. Data were tabulated and subjected to statistical analysis by ANOVA-Tukey test with a significance level of 5%. At 24hours, IG and OT (P <0.001) showed greater cytotoxicity, as also observed by the OT group (P <0.001) when analyzed in 48hours. In 72 hours, it could be observed that the CW and OT groups were more cytotoxic compared to the control group. These data were also demonstrated in groups CPG, IW, CW and OT in 5 days. Within 7 days all drugs showed cytotoxicity, but OT group showed the most cytotoxic (P <0.001). With respect to experimental time factor was observed in all groups significant differences between 24hours and 7 days. It is concluded that all medications showed cytotoxicity at some point in the research being Otosporin ® the most cytotoxic and that time influenced the cytotoxicity of all medications analyzed intracanal medication. / As medicações intracanais são substâncias utilizadas no tratamento endodôntico que necessitam apresentar biocompatibilidade com os tecidos perirradiculares, de modo a não causar danos teciduais e nem interferir no processo de reparo. O estudo objetivou avaliar a citotoxicidade de medicamentos de uso endodôntico, quando em contato com células fibroblásticas de murinos L929, em diferentes períodos de observação. Para avaliar a citotoxicidade, foram utilizadas três medicamentos e três veículos, divididos em sete grupos experimentais, a saber: hidróxido de cálcio-paramonoclorofenol canforado-glicerina (HPG); iodofórmio-glicerina (IG); hidróxido de cálcio-iodofórmio-água destilada (HCI); iodofórmio-água destilada (IA); hidróxido de cálcio-água destilada (HC); Otosporin® (OT) e grupo controle - composto por células e meio de cultura. Foram preparados os eluatos das medicações sendo estes colocados em contato com as células (1 x 105 células/poço) por períodos de 24h, 48h, 72h, 5 e 7 dias. Após cada tempo experimental, foi executado o ensaio colorimétrico, utilizando o reagente metiltetrazólio (MTT) e a leitura das placas foi realizada no espectrofotômetro utilizando a densidade óptica de 570nm. Os dados foram tabulados e submetidos a análise por meio da ANOVA-Tukey, com um nível de significância de 5%. Em 24h, IG e OT (P<0,001) demonstraram maior citotoxicidade, fato este também observado pelo grupo OT (P<0,001) quando analisado em 48h. Em 72h, pôde-se observar que os grupos HC e OT foram mais citotóxicos quando comparados ao grupo controle. Estes resultados também foram demonstrados nos grupos HPG, IA, HC e OT em 5 dias. Em 7 dias todas as medicações apresentaram citotoxicidade, porém o grupo OT mostrou-se mais citotóxico (P<0,001). Com relação ao fator tempo experimental, foi observado em todos os grupos diferença significativa entre 24h e 7 dias. Conclui-se que todas as medicações apresentaram citotoxicidade em algum momento da pesquisa sendo o Otosporin® a medicação intracanal mais citotóxica e, que o tempo influenciou na citotoxicidade de todas medicações analisadas.