Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3945606 bytes, checksum: 97945457d5010095f7d0a7748febe3fa (MD5) Previous issue date: 2013-11-08 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The genus Phyllanthus belongs to Phyllanthaceae family that consists on non-latescent herbs, shrubs and trees with a predominantly pantropical distribution, including 55 genera and 1,745 species and which was recently detached from the family Euphorbiaceae. In Brazil, the species of the genus Phyllanthus are distributed in subareas of wastelands and backlands in savanna vegetation. The genus is characterized by the presence of several classes of secondary metabolites, including lignans. The objective of this study was to increase knowledge of the genre through the study of Phyllanthus species Phyllanthus acuminatus Vahl, isolating their constituents and evaluating potential activities of these. The following methodologies were used: Column chromatography (CC), analytical thin layer chromatography (CCDA), infrared spectroscopy, Mass, uni and two dimensional 1H and 13C Nuclear Magnetic Resonance, evaluation of modulated antimicrobial activity by efflux pump, antitumor evaluation in vitro and cytotoxicity against erythrocytes. Here we describe the isolation and identification of two lignans, justicidin B, already found in the roots of the species and luclaricin, never previously found in Phyllanthus acuminatus Vahl species. We evaluated the pharmacological activity of justicidin B, major component in the plant s aerial parts, which showed low cytotoxicity against erythrocytes CH50 > 1000 mg / mL, however it showed no biological activity in the modulation test of response towards antimicrobial resistant strains by efflux pump. Regarding antitumor activity it presented activity in several cell lineages, corroborating with literature. Thus this study contributed with new knowledge about the genus and species studied by isolating a new lignan the luclaricin and adds data on the pharmacological activity of justicidin B / O gênero Phyllanthus pertence à família Phyllanthaceae que é composta por ervas, arbustos e árvores não latescentes com uma distribuição predominantemente pantropical, incluindo 55 gêneros e 1.745 espécies e que foi recentemente desmembrada da família Euphorbiaceae. No Brasil, as espécies do gênero Phyllanthus estão distribuídas nas subzonas do agreste e sertão em vegetação de caatinga. Este gênero caracteriza-se pela presença de diversas classes de metabólitos secundários, incluindo lignanas. O objetivo desse trabalho foi ampliar o conhecimento sobre o gênero Phyllanthus através do estudo da espécie Phyllanthus acuminatus Vahl, isolando seus constituintes e avaliando possíveis atividades dos mesmos. Foram utilizadas as seguintes metodologias: Cromatografia em coluna (CC), Cromatografia em camada delgada analítica (CCDA), Espectroscopia de Infravermelho, Massas, Ressonância Magnética Nuclear de 1H e 13C uni e bidimensionais, avaliação de modulação da atividade antimicrobiana por bomba de efluxo, avaliação antitumoral in vitro e citotoxicidade frente a eritrócitos. Neste trabalho, descrevemos o isolamento e identificação de duas lignanas, justicidina B, já descrita nas raízes da espécie e luclaricina, substância inédita. Foi avaliada a atividade farmacológica da justicidina B, componente majoritário, que apresentou baixa citotoxicidade frente a eritrócitos CH50 >1000 μg/mL, porém nos testes de modulação de resposta a antimicrobianos, em cepas resistentes por bomba de efluxo, não apresentou atividade biológica. Quanto à atividade tumoral, apresentou-se ativa em diversas linhagens celulares corroborando com a literatura. Dessa forma o presente trabalho contribuiu com o conhecimento sobre o gênero e espécie estudada com o isolamento de uma nova lignana, a luclaricina, e acrescenta dados sobre a atividade farmacológica da justicidina B

Made available in DSpace on 2015-05-14T13:00:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2069742 bytes, checksum: 30969d68a1c51eddd37190cde04e71ac (MD5) Previous issue date: 2014-06-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Leishmaniasis is a complex of inserted parasitic diseases in the group of neglected tropical diseases. The drugs used primarily in the treatment of leishmaniasis are pentavalent antimonials and amphotericin B. However, these drugs are associated with serious side effects. Therefore, it is necessary to search for new antileishmanial drugs. In this context natural products are a source of new active molecules. This study, it was investigated the antileishmanial activity of the ethanol extract of Phyllanthus acuminatus and Justicidin B, lignan obtained from this plant and the ethanol extract, the dichloromethane phase and Hyptenolide obtained from Hyptis macrostachys in vitro experimental models. All samples assessed showed antileishmanial activity, initially demonstrated by inhibition of growth of L. amazonensis promastigotes in logarithmic growth phase. The concentration that inhibits 50% of growth (IC50) for the tested substances was 35.58 μg /mL for the ethanolic extract of P. acuminatus, 12.51 μg/mL for Justicidin B; 280.69 μg/mL for the ethanol extract of H. macrostachys, 55.3 μg/mL for dichloromethane phase of H. macrostachys and 22.67 μg/mL for Hyptenolide. These samples were also evaluated for cytotoxicity in murine peritoneal macrophages of swiss mice, which resulted in the measurement of the cytotoxic concentration for 50% macrophages (CC50), which were 39.62 μg/mL for the ethanolic extract of P. acuminatus, 58.56 μg/ml for Justicidin B; 121,36 μg/mL for the ethanol extract of H. macrostachys, 40.45 μg/mL for dichloromethane phase of H. macrostachys and 61.78 μg/ml for Hyptenolide. These data resulted in IC50 and CC50 resulted in a selectivity index of 1.11 for the ethanol extract of P. acuminatus; 4.68 for Justicidin B; 0.43 for the ethanol extract of H. macrostachys; 0.73 to dichloromethane phase of H. macrostachys and 2.72 to Hyptenolide. Given these results, we selected the lignan Justicidina B for further study of antileishmanial activity against L. amazonensis. In the evaluation of the DNA fragmentation pattern of L. amazonensis promastigotes, it was observed in higher concentration evaluated of Justicidin B (4x IC50) induction of DNA fragmentation similar to that observed in the positive control H2O2 (4mM). In infection model macrophage with L. amazonensis and treated with lignan Justicidin B showed reduction in both the percentage of infected macrophages as the number of amastigotes per infected macrophage, resulting in a reduction in the rate of infection compared to control, resulting decrease in the effective concentration for 50% of infection (EC50) of 9.14 and 3.58 for 24 hours and 72 hours after treatment. This result was correlated with an immunomodulatory activity of this lignan, associated with decreased levels of interleukin (IL) -10, and increased levels of nitric oxide (NO). It can be concluded that the lignan Justicidin B has significant activity antipromastigote and antiamastigote and presents immunomodulatory properties in models of infection in vitro. / As leishmanioses são um complexo de doenças parasitárias inseridas no grupo de doenças tropicais negligenciadas. Os principais medicamentos utilizados na terapêutica das leishmanioses são antimoniais pentavalentes e anfotericina B. Contudo, esses medicamentos estão associados a sérios efeitos colaterais. Portanto, é necessária a busca de novas drogas leishmanicidas. Nesse contexto, os produtos naturais são uma fonte de novas moléculas ativas. Neste trabalho, investigou-se a atividade antileishmania do extrato etanólico de Phyllanthus acuminatus e Justicidina B, lignana obtida dessa planta, bem como o extrato etanólico, a fase diclorometano e o Hiptenolideo, obtidos de Hyptis macrostachys em modelos experimentais in vitro. Todas as amostras avaliadas apresentaram atividade antileishmania, demonstrada inicialmente pela inibição de crescimento de formas promastigotas de L. amazonensis em fase logarítmica de crescimento. A concentração que inibe 50% do crescimento (CI50) para as substâncias avaliadas foi de 35,58μg/mL para o extrato etanólico de P. acuminatus, 12,51μg/mL para Justicidina B; 280,69μg/mL para o extrato etanólico de H. macrostachys, 55,3μg/mL para fase diclorometano de H. macrostachys e 22,67μg/mL para o Hiptenolideo. Essas amostras também foram avaliadas quanto à citotoxicidade em macrófagos peritoneais murinos de camundongos suíços, o que resultou na medida da concentração citotóxica para 50% dos macrófagos (CC50), que foram de 39,62μg/mL para o extrato etanólico de P. acuminatus, 58,56μg/mL para Justicidina B; 121,36μg/mL para o extrato etanólico de H. macrostachys, 40,45μg/mL para fase diclorometano de H. macrostachys e 61,78μg/mL para o Hiptenolideo. Esses dados de CI50 e CC50 resultaram no Índice de Seletividade que foram de 1,11 para o extrato etanólico de P. acuminatus; 4,68 para Justicidina B; 0,43 para o extrato etanólico de H. macrostachys; 0,73 para fase diclorometano de H. macrostachys e 2,72 para o Hiptenolideo. Diante desses resultados, foi selecionada a lignana Justicidina B para aprofundar os estudos de atividade antileishmania sobre L. amazonensis. Na avaliação do padrão de fragmentação do DNA de formas promastigotas de L. amazonensis observou-se que a Justicidina B na maior concentração avaliada (4x IC50) foi capaz de induzir a fragmentação do DNA semelhante ao observado no controle positivo H2O2 (4mM). Em modelo de infecção de macrófagos com L. amazonensis e tratados com a lignana Justicidina B observou-se redução tanto da porcentagem de macrófagos infectados quanto do número de amastigotas por macrófago infectado, resultando em uma redução no índice de infecção quando comparados ao controle, resultando em concentração efetiva para diminuir 50% da infecção (EC50) de 9,14 e 3,58 para 24 horas e 72 horas de tratamento. Esse resultado foi correlacionado com uma atividade imunomoduladora dessa lignana, associada à diminuição nos níveis de interleucina (IL)-10, e a um aumento nos níveis de óxido nítrico (NO). Pode-se concluir que a lignana Justicidina B possui significativa atividade antipromastigota e antiamastigota e apresenta propriedades imunomodulatórias em modelos de infecção in vitro