FRUTUOSO, Mércia Sindeaux. Avaliação do mecanismo de modulação da resposta imunológica à Leishmaniose visceral chagasi in vitro em indivíduos baixos produtores de INF-Y. 2009. 114 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-04T15:50:37Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_msfrutuoso.pdf: 2262232 bytes, checksum: b7189beec1520220c5fd9efcefb3cb5e (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-12-04T15:51:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_msfrutuoso.pdf: 2262232 bytes, checksum: b7189beec1520220c5fd9efcefb3cb5e (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-04T15:51:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_msfrutuoso.pdf: 2262232 bytes, checksum: b7189beec1520220c5fd9efcefb3cb5e (MD5) Previous issue date: 2009 / Introduction: Visceral leishmaniasis is a serious public health problem in several parts of the developing world. In leishmaniasis, protection and healing correlate with the development of Th1 immune response, and IFN-γ is considered a key molecule in this response. In contrast, the Th2 response results in disease progression. It is noteworthy that after contact with Leishmania the production of IFN-γ differs between healthy individuals. Some of them are high IFN-γ producer (HIFN-γP), while others respond with low IFN-γ producer (LIFN-γP). This has been observed in the in vitro response to several species of Leishmania, as well as in the early phase of the disease in patients with leishmaniasis. The activation of T lymphocytes can be modulated by immunomodulatory receptors present on the surface of lymphocytes and antigen presenting cells (APCs). Signaling lymphocytic activation molecule (SLAM, CD150) is a transmembrane protein that promotes Th2 differentiation. Evidences support the involvement of this molecule in the immune response against parasites. Objective: To evaluate the role of SLAM signaling pathway in the modulation of immune response of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from individuals low IFN-γ producers (LP) against Leishmania chagasi. Methodology: Healthy individuals’ PBMC were stimulated in vitro with L. chagasi and monoclonal anti-SLAM (α-SLAM), in the presence or not of inflammatory cytokines (rIFN-γ or rIL-12). The supernatants of the cultures were analyzed by ELISA for the determination of IFN-γ and interleukin 10 (IL-10) concentrations. Results: Upon stimulation of PBMC with L. chagasi, the blocking of the SLAM signaling pathway with α-SLAM did not affect the synthesis of IFN-γ and IL-10, regardless of treatment with rIL-12. However, after rIFN-γ treatment of antigen stimulated cells it occurred a download of IL-10 synthesis and upload IFN-γ secretion, regardless of the blockade of SLAM signaling pathway. Conclusions: The blocking of SLAM signaling pathway with α-SLAM at the concentration of 10μg/mL does not interfere significantly in the IFN-γ and IL-10 production of PBMC from individuals LP stimulated with Leishmania chagasi promastigotes. Treatment of PBMC with rIFN-γ is able to induce a reduction of IL-10 and an increment of IFN-γ in the supernates cultures, whereas treatment with rIL-12 enhanced IFN-γ production, but does not interfered with IL-10. It is necessary to make further studies to better understand the role of the SLAM signaling pathway in the immune response of LP against Leishmania chagasi. / Introdução: Nas leishmanioses, proteção e cura se correlacionam com o desenvolvimento de resposta imune tipo Th1, e IFN-γ é considerada uma molécula chave nesta resposta. Ao contrário, a resposta Th2, resulta na progressão da doença. Vale ressaltar que a produção de IFN-γ, após o contato com a Leishmania, difere entre indivíduos sadios, alguns apresentam alta produção de IFN-γ (AP), enquanto outros respondem com baixa produção (BP). Isto tem sido observado com diversas espécies de Leishmania, assim como na infecção natural, na fase inicial da doença. A ativação do linfócito T pode ser modulada por coestimuladores, presentes na superfície de linfócitos e nas APCs, a exemplo da molécula sinalizadora na ativação de linfócitos T (SLAM). Evidências apontam para o envolvimento dessas moléculas na regulação da resposta imunológica. Objetivo: Avaliar o papel da via de sinalização de SLAM na modulação da resposta imune em células mononucleares de sangue periférico (CMSP) de indivíduos BP, frente à estimulação in vitro por Leishmania chagasi. Metodologia: CMSP de indivíduos sadios BP foram estimuladas in vitro com L. chagasi na ausência ou na presença do anticorpo monoclonal anti-SLAM (α-SLAM), com ou sem tratamento por citocinas proinflamatórias (rIFN-γ ou rIL-12). Os sobrenadantes das culturas foram analisados por ELISA para IFN-γ e interleucina (IL)-10. Resultados: Sob estimulação de L. chagasi, o bloqueio da via SLAM não modificou a síntese de IFN-γ e IL-10, independente do tratamento com rIL-12. No entanto, o tratamento com rIFN-γ reduziu a síntese de IL-10 e elevou a secreção de IFN-γ endógeno, independente do bloqueio da via SLAM. Conclusões: O bloqueio da via SLAM, com adição de α-SLAM (10µg/mL), não interfere significativamente na produção de IFN-γ e IL-10. O tratamento das CMSP com rIFN-γ é capaz de induzir a redução da produção de IL-10 e o aumento de IFN-γ de forma significativa, enquanto que o tratamento com rIL-12 aumenta a produção de IFN-γ, mas não interfere na produção de IL-10 dos indivíduos baixos produtores. Faz-se necessário ampliar o estudo da ação imunomoduladora da SLAM frente à Leishmania chagasi, para um melhor entendimento do papel desta via de sinalização na resposta imunológica dos BP.

MESQUITA, Charles Jean Gomes de. Efeitos do imiquimode na cicatrização de queimaduras em ratos. 2008. 109 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-02-18T13:41:39Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_cjgmesquita.pdf: 4136987 bytes, checksum: 86d772cc98740c7e330f8881443b4d47 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-02-18T13:43:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_cjgmesquita.pdf: 4136987 bytes, checksum: 86d772cc98740c7e330f8881443b4d47 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-18T13:43:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_cjgmesquita.pdf: 4136987 bytes, checksum: 86d772cc98740c7e330f8881443b4d47 (MD5) Previous issue date: 2008 / Burns can result in substantial morbidity because of fibroblastic hyperproliferation and contracture. Imiquimod is a immunomodifier -TLR-7 agonist used in viral diseases and in neoplastic conditions like actinic keratosis, melanoma, and non-melanoma skin cancer. It acts by promoting endogenous cytokines known to suppress fibroblast proliferation. A new recent use is in treating keloids and hypertrophic scars to reduce scarring. No study of the effect of imiquimod on cutaneous burns has been performed. This study examined burn healing in the presence of topical imiquimod by evaluation of wound appearance, computer-aided image analysis, and histology in a rat model. Standardized partial-thickness burns were produced on the dorsum of thirty-two Wistar rats. Right-sided wounds received therapy with isotonic saline (sham). Left-sided wounds were treated with imiquimod cream at 5% (IMQ). This was repeated 3 times/week after injury. Euthanasia was performed at 4th, 7th, 14th and 21st Postburn days (PBD). Wounds were harvested for histological analysis. Evaluation of wound appearance was performed using clinical assessment scale (CAS) and a visual analogue scale (VAS). Scars area and perimeter were measured using digital planimetry to assess wound edge migration by Gilman’s modified Equation. Inflammation type and intensity was graded by histological scale. Collagen type was identified by picrosirius-polarization and morphometric analysis was performed. VAS scores showed discretally improved appearance in the imiquimod-treated wounds versus the saline-treated control at PBD21 (P=0.0491). There was no difference in CAS scores. Wound edge migration was significantly slowest in imiquimod-treated wounds (p<0.05). Histological evidence of partial thickness dermal injury with sparing of dermal appendage epithelial cells was seen in all wounds. Histologic characteristics of gradually diminished injured area between groups were similar except in imiquimod-treated wounds at PBD14 (p<0.05). Inflamattory state was bigger in imiquimod-treated wounds at PBD7 and PBD21 (p<0.005). At PBD7 there was no chronic-type of inflammatory reaction in imiquimod-treated group, although in saline-treated group chronic plus sub-acute type was present in 87.5% (p<0.005). At PBD21 68.75% of imiquimod-treated group showed acute plus subacute inflammatory state, and saline-treated group displayed chronic-type in 56.25% of the wounds. The total amount of collagen increased in both groups throughout all time points. Morphometry showed an inversed ratio type I to type III collagen. Ratios of type I collagen to type III collagen was much lower in imiquimod-treated wounds at PBD4 and PBD21. Topical treatment with Imiquimod 5% cream for partial-thickness burn wounds 3 times/week courses do not improve clinical appearance and scarring during late healing. There is no difference in histology during the short-term healing process. Computer-aided image proccessing was efficient to evaluate burned-wound healing. Wound healing and fibrosis was impaired in imiquimod- treated wound group. / Queimaduras podem causar substancial morbidade e contraturas devido à hiperproliferação fibroblástica. O imiquimode, imunomodulador utilizado em doenças virais e neoplasias cutâneas, promove resposta imune inata e adaptativa, interagindo com Toll-Like Receptors, permitindo reconhecer antígenos e células invasoras, ativando células de Langerhans e citocinas endógenas capazes de suprimir a hiperproliferação fibroblástica, mostrando-se útil no tratamento de cicatrizes hipertróficas e quelóides. Inexistiam trabalhos sobre o imiquimode em queimaduras cutâneas. Avaliou-se os efeitos do imiquimode na cicatrização de queimaduras utilizando-se métodos macroscópicos, microscópicos e computacionais. Produziram-se queimaduras dérmicas profundas de cada lado da linha média dorsal em 32 ratos Wistar utilizando um ferro-de-solda modificado aplicado a pele por 9s. Instituiram-se tratamentos 3X/semana a partir do segundo dia pós-queimadura (D2PQ). No lado direito (controle) utilizou-se solução salina isotônica (SAL). À esquerda utilizou-se imiquimode (IMQ) tópico 5%. Oito animais foram eutanasiados nos D4, D7, D14 e D21PQ, obtendo-se fotografias digitais e amostras teciduais. Na análise macroscópica utilizou-se escala visual analógica (EVA), escala de exame clínico (EEC) e planimetria digital. Para análises microscópicas utilizaram-se amostras coradas pela hematoxilina-eosina (HE) ou picrosirius-red (PR). Nas amostras HE, sob microscopia ótica, quantificou-se o tipo e a intensidade da reação inflamatória e a involução temporal do dano tecidual pela atribuição de escores. Amostras PR foram analisadas à microscopia de luz polarizada, quantificando-se a densidade do colágeno tipo I e tipo III e razão colágeno I: colágeno III (Razão I:III). Não houve mortes, infecção nem autocanibalismo. Os parâmetros biométricos não evidenciaram efeitos deletérios sobre o estado nutricional. A EVA favoreceu discretamente o grupo SAL (P=0,0491). A EEC não mostrou diferenças significativas. A planimetria digital evidenciou menor velocidade de reparação nas feridas do grupo IMQ (P<0,05). A quantificação da área de lesão mostrou involução similar, exceto no D14PQ onde a área de necrose era maior no grupo IMQ (P<0,05). A análise histológica qualitativa mostrou um processo reparatório mais lentificado no grupo IMQ em todos os tempos. No D7PQ, a intensidade da reação inflamatória foi classificada como discreta em 50% das feridas do grupo SAL e intensa ou moderada em 75% do grupo IMQ (P<0,005). No D21PQ a inflamação foi mais extensa no grupo IMQ (P<0,005). Observou-se que 50% das feridas do grupo SAL exibiam reação inflamatória subaguda e 37,5% crônica, enquanto nenhuma ferida do grupo IMQ mostrava inflamação crônica no D7PQ (P<0,005). No D21PQ a inflamação no grupo IMQ era subaguda (68,75%) e no grupo SAL 56,25% era crônica (P<0,05). A morfometria do colágeno evidenciou aumento do colágeno tipo I e diminuição do colágeno tipo III nos dois grupos. A razão colágeno I: colágeno III foi menor no grupo IMQ em D4 e D21PQ (P<0,05). O modelo reproduziu queimaduras dérmicas, preservando anexos essenciais à reepitelização. A picrossirius-polarização foi eficaz no reconhecimento do colágeno e os métodos computacionais foram eficientes, identificando diferenças mínimas no processo lesão-reparação. O imiquimode foi eficaz em promover o processo inflamatório e retardar a maturação, gerando menor quantidade de fibrose.

Submitted by Chaylane Marques (chaylane.marques@ufpe.br) on 2015-03-12T18:13:12Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) dissertacao_ingridcampos_PPGBI.pdf: 2920400 bytes, checksum: eb7ccfe28c12a36650a311a078315f60 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-12T18:13:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) dissertacao_ingridcampos_PPGBI.pdf: 2920400 bytes, checksum: eb7ccfe28c12a36650a311a078315f60 (MD5) Previous issue date: 2012 / Os micro-organismos com ação imunomoduladora afetam de maneira benéfica o organismo hospedeiro pela melhora no equilíbrio microbiano e balanço imunológico. A bactéria Zymomonas mobilis é reportada pelas suas propriedades antagônicas sobre leveduras e bactérias invasoras entéricas. A translocação de bactérias patogênicas, bem como a destruição da barreira epitelial do trato gastrointestinal são apontados como um dos principais fatores responsáveis pelo desenvolvimento e progresso da sepse. Desta forma, investigar as propriedades imunomoduladoras de Z. mobilis e seu potencial combate à infecção instalada durante a sepse se faz necessário para o conhecimento dos mecanismos deste micro-organismo. Neste estudo foi avaliado o efeito da cultura de Z. mobilis UFPEDA 202 (109UFC/mL)sobre a sepse polimicrobiana letal induzida por ligadura e perfuração cecal (CLP) utilizando camundongos machos albinos swiss Mus musculus (n=16 ou 8/grupo). O efeito profilático (10 dias, 2 vezes ao dia, via oral), terapêutico (4 dias, 2 vezes ao dia, via oral) ou a associação de ambos foi avaliado na sobrevida de animais submetidos à sepse letal. Seis horas após a indução da sepse, metade dos animais que receberam o pré-tratamento com Z. mobilis e o controle foram sacrificados e tiveram a migração de neutrófilos, contagem bacteriana, TNF-α, IL-6, MCP-1 e IL-10 determinados no lavado peritoneal. Dosagem de MPO no tecido pulmonar também foi realizada para os grupos. Alterações histopatológicas, incluindo infiltrado leucocitário no ceco e pulmão dosanimais foram avaliadas através de microscopia óptica, bem como a apoptose dos linfócitos no baço por microscopia eletrônica de transmissão.Como resultado, os dados apontam que a combinação dos tratamentos profilático e terapêutico com Z. mobilis aumentou em 50% a sobrevida dos animais após 96 horas em relação ao grupo controle. Houve redução nos níveis de TNF- α e na concentração bacteriana no lavado peritoneal. Por outro lado, ocorreu aumento na migração neutrofílica, nos níveis de IL-6 e IL-10. Os níveis de MCP-1 mantiveram-se semelhantes para os grupos tratado e controle. Ocorreu redução nos níveis de MPO no grupo pré-tratado com Z. mobilis. A análise histopatológica do ceco demonstrou aumento da migração leucocitária no grupo pré-tratado em relação ao grupo controle. A histologia do pulmão mostrou melhora da lesão aguda para o grupo pré-tratado. Através da microscopia eletrônica observou-se que houve 83% de linfócitos apoptóticos no baço dos animais controle, diferindo do grupo pré-tratado e o grupo sham, com 24% e 19% de linfócitos apoptóticos respectivamente. Os dados obtidos neste trabalho mostram que Z.mobilis possui atividade imunomoduladora in vivo mediante ação regulatória sobre as citocinas, migração leucocitária e pela diminuição da apoptose dos linfócitos no baço. Ainda funciona como antagonista bacteriano in vivo, uma vez que houve redução na contagem bacteriana no lavado peritoneal. Z. mobilis se comportou como um microorganismo promissor a ser utilizado na prevenção à sepse.

Submitted by Chaylane Marques (chaylane.marques@ufpe.br) on 2015-03-12T18:18:54Z No. of bitstreams: 2 DISSERTACAO JOSE BRUNO NUNES F SILVA1.pdf: 1053159 bytes, checksum: a48e447775ceb490115f967616656248 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-12T18:18:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTACAO JOSE BRUNO NUNES F SILVA1.pdf: 1053159 bytes, checksum: a48e447775ceb490115f967616656248 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-03-30 / CAPES / Sepse é uma resposta inflamatória sistêmica que apresenta falha na resposta imune do hospedeiro associado à infecção. Propionibacterium acnes é uma bactéria conhecida por sua atividade imunomoduladora in vitro e in vivo. Neste estudo, foi avaliado o efeito da P. acnesinativada por fenol, na formulação comercial Imunoparvum®, sobre a infecção polimicrobiana induzida por ligadura e perfuração cecal (CLP). Camundongos albinos suíços machos (Mus musculus) foram divididos em 5 grupos (n=8-16/grupo). A administração de salina 0,9% (grupo controle S-CLP) ou Imunoparvum®(grupo tratado) foi realizada 1, 3, 5 e 7 dias antes da CLP. A CLP foi realizada no oitavo dia. A taxa de sobrevida foi analisada com oito animais de cada grupo.Para determinação do número de células peritoneais, citocinas, contagem bacteriana e MPO, os animais foram sacrificados 6 h após a indução de sepse e tiveram a cavidade peritoneal lavada com PBS + EDTA. O grupo tratado comImunoparvum®mostrou aumento da taxa de sobrevivência de 50% em 96 horas. O tratamento com Imunoparvum®casusou um aumento na migração celular para o peritôneo, induziu uma significante redução no lavado peritoneal da citocinas pró-inflamatórias TNF-α, MCP-1 e a citocina antiinflamatória IL-10 (TNF-α de 112,89±7,31pg/mL para 61,04±18,93 pg/mL, MCP-1 de 1321,98 ± 3,84 pg/mL para 778,89±1,24 pg/mL e IL-10 de 1837,41 ± 173,87 pg/mL para 718,80 ± 47,52 pg/mL). Por outro lado, houve um aumento nas concentrações de IL-6 (de 340,33 ± 11,48 pg/mL para 416,89 ± 8,14 pg/mL) no grupo tratado em relação ao controle. Não houve diferença nos níveis de mieloperoxidase (MPO) no pulmão dos animais do grupos Imunoparvum® e controle. O tratamento com Imunoparvum® reduziu o número de bactérias viáveis na cavidade peritoneal. De acordo com os resultados, Imunoparvum®promoveu o aumento da taxa de sobrevida de animais com sepse, em parte atribuída às suas propriedades imunomoduladoras, importantes no combate de microorganismos patogênicos, bem como ao melhor comtrole da infecção através da redução da contagem bacteriana.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-25T21:58:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 287559.pdf: 517631 bytes, checksum: ec350fa2e545cb38f933d0b6feb4f38b (MD5) / O presente trabalho propôs desenvolver uma metodologia in vitro simples, sensível e reprodutível para a prospecção de compostos obtidos de produtos naturais ou seus derivados sintéticos com potencial atividade imunomodulatória sobre linfócitos B, principal célula efetora da resposta imune humoral, como alternativa ao uso de sistemas experimentais in vivo. O planejamento do estudo fundamentou-se na utilização da linhagem linfoblastóide B humana SKW 6.4, imortalizada via EBV, como modelo preditivo in vitro; na padronização do método ELISA para a titulação de imunoglobulinas totais secretadas em cultura, empregada como parâmetro inicial de avaliação; e na definição de condições experimentais e padrões comparativos que propiciem a análise do modelo selecionado quanto à modulação de suas funções imunes. O protocolo de cultivo celular e demais variáveis foram determinados para placas de cultura de 96 micropoços. Células SKW 6.4 foram fortemente imunoestimuladas em tratamento com PMA ou LPS nas concentrações ótimas de 100ng·mL-1 ou 100µg·mL-1, respectivamente. Condições referenciais de imunossupressão foram estabelecidas após ensaio com 25µg·mL-1 de AZA, 50ng·mL-1 de MPA ou 10ng·mL-1 de RAPA. A secreção de IL-6 pelo modelo in vitro foi claramente modulada na presença de LPS e DEX, possibilitando sua dosagem como parâmetro avaliativo adicional de resposta imunológica. A análise de diferentes extratos polissacarídicos de Agaricus subrufescens conforme o ensaio padronizado revelou significativa atividade imunoestimulatória sobre células SKW 6.4 para frações com maior peso molecular médio (~630kDa), permitindo especular sobre possíveis rotas de ativação e sugerir um método ótimo de purificação para futura aplicação biotecnológica. Os resultados globais alcançados neste estudo demonstraram a sensibilidade e eficácia do ensaio in vitro desenvolvido, viabilizando sua utilização na pesquisa e triagem de compostos com potencial atividade imunomodulatória sobre linfócitos B como possível método substitutivo ao uso de animais de experimentação.

Submitted by Lucas Pires Garcia Oliveira (pires081@hotmail.com) on 2018-08-21T18:41:21Z No. of bitstreams: 1 dissertação Lucas_P_G_Oliveira.pdf: 2241331 bytes, checksum: 52bfd0bd55f75641925f261173e0ce0d (MD5) / Approved for entry into archive by Sulamita Selma C Colnago null (sulamita@btu.unesp.br) on 2018-08-22T18:26:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 oliveira_lpg_me_bot.pdf: 2241331 bytes, checksum: 52bfd0bd55f75641925f261173e0ce0d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-22T18:26:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 oliveira_lpg_me_bot.pdf: 2241331 bytes, checksum: 52bfd0bd55f75641925f261173e0ce0d (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O câncer é uma doença que atinge pessoas em diversos continentes, acarretando milhões de mortes anualmente. Os tratamentos antineoplásicos são conhecidos por sua ampla lista de efeitos colaterais como toxicidade, indução de resistência em células tumorais, falta de seletividade entre células normais e tumorais, além de acometimento do sistema imunológico com consequente aparecimento de infecções. Com o intuito de atenuar os efeitos colaterais causados pelos agentes antitumorais, a administração de produtos naturais concomitantemente com fármacos tem sido investigada. O presente trabalho foi delineado visando elucidar a possível ação citotóxica e imunomoduladora da geoprópolis (GEO) associada à doxorrubicina (DOX) em menor concentração sobre monócitos de indivíduos saudáveis. A análise da viabilidade celular foi realizada pelo método do MTT, a produção de citocinas (IL-1β, TNF-α, IL-6 e IL-10) por ELISA, a expressão de marcadores de superfície (HLA-DR, CD80, CD40, TLR-2, TLR-4) por citometria de fluxo. Também foi avaliada a atividade microbicida de monócitos frente ao desafio com Candida albicans, Escherichia coli e Streptococcus mutans, a expressão gênica por RT-PCR e a produção de proteínas por western blot. O ensaio de MTT demonstrou que nenhum dos tratamentos apresentou ação citotóxica. Monócitos incubados com GEO e com a associação GEO + DOX apresentaram produção de TNF-α e IL-10 aumentada, e produção de IL-1β e IL-6 diminuídas. Houve aumento na expressão de TLR-4 e CD80 após incubação com a associação, enquanto a GEO isoladamente induziu somente aumento da expressão de TLR-4. A ação bactericida dos monócitos foi aumentada frente ao desafio com E. coli. A atividade fungicida não sofreu alterações significativas pelos diferentes tratamentos, assim como a atividade microbicida contra S. mutans. A expressão gênica de LC3 e NF-κB foi inibida por todos os tratamentos, enquanto a expressão de fosfo-ΙκBα foi diminuída pela GEO, mas a associação manteve os níveis basais. Nossos dados permitem concluir que a associação não é citotóxica para monócitos humanos e possui ação imunomoduladora quanto à expressão de marcadores de superfície celular e produção de citocinas, sugerindo um possível perfil ativador da associação. Como implicações práticas, a utilização da associação permitiria reduzir a concentração de uso da doxorrubicina e os efeitos adversos causados pelo tratamento quimioterápico. / Cancer is a disease that strikes people on many continents, resulting in millions of deaths annually. The antineoplastic treatments are known for their wide range of side effects such as toxicity, induction of resistance in tumor cells, lack of selectivity between normal and tumor cells, as well as immunosuppression with consequent onset of infections. In order to mitigate the side effects caused by antitumor agents, the administration of natural products concomitantly with drugs has been investigated. The present work was designed to elucidate a possible cytotoxic and immunomodulatory action of geopropolis (GEO) combined with doxorubicin (DOX) in a lower concentration on monocytes of healthy individuals. Cell viability was analyzed by the MTT method, the expression of surface markers (HLA-DR, CD80, CD40 , TLR-2, TLR-4) by flow cytometry, the production of cytokines (IL-1β, TNF-α, IL-6 and IL-10) by ELISA, gene expression by RT-PCR, protein production by western blot. The microbicidal activity of monocytes was evaluated against Candida albicans, Escherichia coli and Streptococcus mutans, as well as hydrogen peroxide production. MTT assay showed that none of the treatments exerted a cytotoxic action. Monocytes incubated with GEO and the GEO + DOX had an increased TNF-α and IL-10 production, while IL-1β and IL-6 production decreased when compared to control. An increased TLR-4 and CD80 expression was seen after incubation with the combination, whereas GEO alone increased TLR-4 expression. The combination increased the bactericidal action of monocytes against E. coli. No alterations were found in the fungicidal activity nor in the bactericidal activity against S. mutans. Gene expression of LC3 and NF-κB were decreased by all treatments, whereas phospho-ΙκBα expression was decreased by GEO but the association maintained baseline levels. Our findings indicated that the combination was not cytotoxic for monocytes and exerted an immunomodulatory action on the expression of cell surface markers and cytokine production, suggesting an activator profile of GEO + DOX. The use of this combination could reduce the concentration of DOX and the side effects caused by chemotherapy. / 2016/02249-4

SILVA, A. F. B. Modulação imunológica preventiva aplicada ao controle de infecções bacterianas por salmonella typhimurium pelo uso de lectinas. 2014. 187 f. Tese (Doutorado em Biotecnologia) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2015-01-26T20:09:35Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_afbsilva.pdf: 3169804 bytes, checksum: a77234431314940251d5a522a74d4cae (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-11-25T13:48:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_afbsilva.pdf: 3169804 bytes, checksum: a77234431314940251d5a522a74d4cae (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-25T13:48:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_afbsilva.pdf: 3169804 bytes, checksum: a77234431314940251d5a522a74d4cae (MD5) Previous issue date: 2014 / Infectious diseases are a leading cause of death throughout the world. Among these, bacterial infections stand out due to the enormous diversity of bacteria and their evolutionary and adaptive abilities. Inappropriate inflammatory responses have been associated with these infections and despite contemporaneous scientific approaches, timely diagnosis and proper treatment of systemic bacterial infection are still a challenge for public health. Thus, this study evaluated the ability of Canavalia brasiliensis (ConBr) and Cratylia argentea (CFL) lectin in modulating systemic inflammation caused by Salmonella enterica serovar Typhimurium. The lectins were purified by affinity chromatography on Sephadex G50. Toxicology and the pharmacological security of lectins was evaluated. Both lectins exhibited no toxicity up to 2000 mg/kg. Mice were inoculated intraperitoneally with lectins (10 mg/kg) within 72, 48 and 24 h before infection with Salmonella (107 CFU/mL). Animals treated with ConBr and CFL, respectively, showed 100% and 90% survival, seven days after infection. This protocol significantly reduced the bacteria in blood, peritoneal fluid and in main organs such as liver and spleen. It was also observed a reversal of the neutrophil migration failure, leukopenia, as well as reduction of cytokine levels (TNF- α, IL- 1 and IL -10) and nitric oxide on the serum. In addition, elevated peritoneal fluid concentration of nitric oxide and increase in the number of platelets were found. In vitro analyzes identified that both lectins did not exhibit antibacterial activity, can decrease the time of activation of complement system and increase intrinsic and extrinsic clotting time. Lectins had no curative effect when administered after infection and none protective effect when inoculated either intravenously or orally. Through proteomic analysis, proteins related to infection and to modulating action of lectins were identified. According to our results, we found that lectins can act on macrophages/monocytes, controlling their activation and thereby influencing the inflammatory process, protecting the animals from septic shock. These results represent an interesting approach for the control of infections, using lectins independently or associated with antibiotics whose action is directly on microorganisms. / Doenças infecciosas constituem a principal causa de morte em todo o mundo. Dentre estas, as causadas por infecções bacterianas se destacam devido à diversidade de bactérias e à sua capacidade evolutiva e adaptativa. Respostas inflamatórias inadequadas estão associadas a essas infecções e em detrimento de avanços científicos, o diagnóstico precoce e o tratamento de quadros de infecções bacterianas sistêmicas permanecem um desafio à saúde pública. Neste contexto, este estudo avaliou a capacidade da lectina de Canavalia brasiliensis (ConBr) e Cratylia argentea (CFL) em modular a inflamação sistêmica causada por Salmonella enterica sorotipo Typhimurium. As lectinas foram purificadas por cromatografia de afinidade em coluna de Sephadex G-50 e ensaios de avaliação toxicológica e segurança farmacológica foram realizados. Ambas as lectinas não demonstraram toxicidade até a máxima dose de 2000 mg/kg. Então, camundongos foram inoculados, por via intraperitoneal, com as lectinas (10 mg/kg), 72, 48 e 24 horas antes de serem infectados com a Salmonella (107 UFC/mL). Foi observada uma sobrevida de 100% e 90% dos animais tratados com a ConBr e CFL, respectivamente, avaliados no sétimo dia. Este protocolo reduziu significativamente o número de bactérias no sangue, fluído peritoneal e nos principais órgãos da infecção (baço e fígado). Foi observado ainda reversão da falência na migração de neutrófilos, leucopenia, bem como, redução nos níveis de citocinas (TNF-α, IL-1 e IL-10) e óxido nítrico no soro. Foi também verificado um aumento na concentração de óxido nítrico no fluido peritoneal e do número de plaquetas no sangue. Análises in vitro mostraram que ambas as lectinas não apresentam atividade bactericida, reduzem o tempo de ativação do sistema complemento e aumentam o tempo de coagulação intrínseca e extrínseca. As lectinas não apresentaram efeito curativo quando administradas após a infecção e não demonstraram efeito preventivo quando inoculadas por via endovenosa ou oral. Através da análise proteômica, proteínas relacionadas à infecção e à ação moduladora das lectinas foram identificadas. Assim, as lectinas possivelmente atuam sobre os macrófagos/monócitos, controlando sua ativação, e desta forma, atenuando o processo inflamatório e protegendo os animais do choque séptico. Estes resultados representam uma interessante perspectiva para o controle de infecções, com uso independente ou associado a antibióticos de ação direta sobre microrganismos

Submitted by João Arthur Martins (joao.arthur@ufpe.br) on 2015-04-17T14:23:08Z No. of bitstreams: 2 TESE Adriana Antunes.pdf: 2496493 bytes, checksum: 0e67b36e20f1c0ef9790170e54497078 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T14:23:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Adriana Antunes.pdf: 2496493 bytes, checksum: 0e67b36e20f1c0ef9790170e54497078 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-05-28 / CNPq / A asma é uma doença heterogênea com quadros clínicos e mecanismos patogênicos distintos. Sua fisiopatologia envolvendo a predominância de fenótipo Th2 não tem sido suficiente para explicar a diversidade fenotípica observada nestes pacientes. Com a descoberta das células Th17, produtoras de IL-17A, IL-17F e IL-22, várias evidências têm sido descritas implicando sua participação na patogênese da asma. Com isso, novas perspectivas terapêuticas a uma série de doenças vêm sendo consideradas. Os derivados tiazolidínicos são drogas agonistas dos receptores ativados por proliferadores de peroxissoma gama (PPARγ) e atuam em várias doenças auto-imunes e inflamatórias. Em nosso estudo revisamos o papel das citocinas da via Th17 na asma brônquica. Esta tese tem ainda dois artigos originais: No primeiro avaliamos a produção destas citocinas em uma população de crianças com asma persistente moderada e grave, na tentativa de correlacionar estes níveis com a gravidade da doença, e ainda comparar com controles não asmáticos. Avaliamos ainda, in vitro, se as citocinas pró-inflamatórias presentes em meio de cultura de células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) seriam inibidas pela presença de um composto tiazolidínico, o GQ-147, o que motivou o segundo artigo original. Os pacientes foram avaliados e classificados clinicamente quanto à gravidade da asma e submetidos a exames complementares. As citocinas foram dosadas no soro e nos sobrenadantes das PBMCs. Observamos níveis séricos de IL-17 e IL-22 abaixo do limite de detecção da técnica. Nas culturas celulares observamos uma elevação da IL-17 quando comparamos o grupo de asmáticos persistentes graves com os moderados, embora esta diferença não tenha sido estatisticamente significante. Com o GQ-147, verificamos uma diminuição das IL-17, IFNγ e IL-22. Além disto, demonstramos por reação em cadeia da polimerase em tempo real (Real-time PCR) que o GQ-147 teria uma ação imunomoduladora nos PPARγ mais eficiente que a rosiglitazona, tiazolidínico comercialmente disponível. Frente à complexidade que é tratar uma doença de fenótipos inflamatórios tão distintos, outros estudos com um maior número de pacientes, são necessários para a confirmação deste possível predomínio das citocinas Th17 nos casos de asma grave, bem como a ação imunomoduladora do composto estudado, para posterior avaliação em ensaios clínicos.

Orientador: José Mauricio Sforcin / Resumo: O câncer é uma doença que atinge pessoas em diversos continentes, acarretando milhões de mortes anualmente. Os tratamentos antineoplásicos são conhecidos por sua ampla lista de efeitos colaterais como toxicidade, indução de resistência em células tumorais, falta de seletividade entre células normais e tumorais, além de acometimento do sistema imunológico com consequente aparecimento de infecções. Com o intuito de atenuar os efeitos colaterais causados pelos agentes antitumorais, a administração de produtos naturais concomitantemente com fármacos tem sido investigada. O presente trabalho foi delineado visando elucidar a possível ação citotóxica e imunomoduladora da geoprópolis (GEO) associada à doxorrubicina (DOX) em menor concentração sobre monócitos de indivíduos saudáveis. A análise da viabilidade celular foi realizada pelo método do MTT, a produção de citocinas (IL-1β, TNF-α, IL-6 e IL-10) por ELISA, a expressão de marcadores de superfície (HLA-DR, CD80, CD40, TLR-2, TLR-4) por citometria de fluxo. Também foi avaliada a atividade microbicida de monócitos frente ao desafio com Candida albicans, Escherichia coli e Streptococcus mutans, a expressão gênica por RT-PCR e a produção de proteínas por western blot. O ensaio de MTT demonstrou que nenhum dos tratamentos apresentou ação citotóxica. Monócitos incubados com GEO e com a associação GEO + DOX apresentaram produção de TNF-α e IL-10 aumentada, e produção de IL-1β e IL-6 diminuídas. Houve aumento na expressão de TLR-4 e CD80 ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-08-14T20:57:37Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Leonardo Nascimento Santos.pdf: 1769409 bytes, checksum: 84530b31d51dfec9bf3c5617b8fb1217 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-14T20:57:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Leonardo Nascimento Santos.pdf: 1769409 bytes, checksum: 84530b31d51dfec9bf3c5617b8fb1217 (MD5) / CAPES; FAPESB / Estudos epidemiológicos e experimentais indicam que helmintos regulam respostas imunes a aeroalérgenos através da estimulação de uma rede de regulatória. Tem sido relatado que infecção por T. trichiura e outros trichuroides levam à proteção contra atopia, doenças alergicas e autoimunes. O objetivo deste estudo foi identificar frações do extrato somático de T. trichiura (TtEFs) com atividade imunomodulatória, avaliando seus efeitos sobre a produção de citocinas por células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de doadores saudáveis. Quatorze TtEFs (TtEF1 a TtEF14) foram obtidos pelo fracionamento do extrato somático de T. trichiura por cromatografia líquida de troca iônica. Para avaliar o efeito estimulatório das TtEFs sobre a produção de citocinas (IL-10, IL-12 p40, TNF-α, IL-5 e IL-13) por CMSP, essas células foram obtidas de doadores saudáveis e cultivados na presença das TtEFs (50 ug de proteína/mL). Efeitos inibitórios foram avaliados por incubação das células com as TtEFs e: (a) uma concentração subótima de LPS (4 UE/mL), para IL-10 e TNF-α, (b) LPS e interferon (IFN) γ (100 ηg/mL), para IL-12 p40, e (c) fitohemaglutinina (5 μg/mL), para IL-5 e IL-13. As citocinas foram quantificados por ELISA de captura. Oito das frações (TtEF6, TtEF8 a TtEF14), bem como o extrato somático de T. Trichiura, induziram a produção de IL-10, TNF-α e, em menor quantidade, IL-12 p40. Três das frações (TtEF8, TtEF9 e TtEF10) não induziram significantemente a produção de IL-12 p40. Nenhuma das frações estimulou a produção de IL-13. Estas oito frações que estimularam a produção de IL-10 foram analisados por eletroforese em gel de poliacrilamida na presença de dodecilsulfato de sódio e para a atividade inibitória sobre a produção de citocinas por CMSP estimuladas. Todas as frações inibiram a produção de pelo menos uma citocina, mas nenhuma delas inibiu a produção de IL-10. Apenas uma das frações (TtEF9) inibiu significativamente a produção de todas as outras citocinas analisadas. TtEF10 inibiu a produção de TNF-α, IL-5 e IL-13; TtEF11 reduziu a produção de ambos TNF-α e IL-12 p40; três frações (TtEF6, TtEF12 e TtEF13) inibiram apenas a produção de TNF- α e duas frações (TtEF8 e TtEF14) inibiram significativamente apenas a produção de IL-5. Os resultados obtidos indicam que T. trichiura produz mais de uma molécula com atividade imunomodulatórias. TtEF9, que, além de estimular a produção de IL-10, sub-regula a produção de todas as outras citocinas estudadas, é o melhor candidato para conter uma molécula imunoregulatória que deve ser caracterizada e purificada à homogeneidade, a fim de investigar a sua utilização como um agente terapêutico para doenças imunomediadas. / Salvador