Les lymphocytes T de type régulateur sont engagés dans la régulation de plusieurs réponses immunes physiologiques et pathologiques. Certains d’entre eux, comme les lymphocytes T régulateurs (Treg) et invariants Natural Killer T (iNKT), sont essentiels pour le maintien de la tolérance périphérique et la prévention de l’auto-immunité. Les patients atteints de la maladie de Graves ont des auto-anticorps activant le récepteur de la TSH exprimé sur les cellules de la glande thyroïde et sur les fibroblastes de l’orbite. En conséquence, les deux principales manifestations cliniques de la maladie sont une hyperthyroïdie ainsi qu’une orbitopathie. Lorsque l’hyperthyroïdie est traitée par l’iode radioactif (IR), une apparition ou une exacerbation de l’atteinte auto-immune ophtalmique peut survenir. L’irradiation de la glande cause une augmentation et une persistance temporelle des auto-anticorps dans la circulation sanguine qui ne sont pas observées suivant d’autres traitements de l’hyperthyroïdie tels que les médicaments antithyroïdiens. L’hypothèse proposée était que l’amplification de l’auto-immunité survenant après le traitement à l’IR résultait d’une perte de régulation des cellules T autoréactives par les lymphocytes T de type régulateur, puisque ceux-ci ont un rôle déterminant dans le contrôle de l’auto-immunité. L’objectif du projet de recherche était donc d’étudier les effets du traitement à l’IR sur les lymphocytes Treg et les lymphocytes iNKT des patients atteints de la maladie de Graves. Nous avons démontré que le traitement à l’IR induit un changement de la fréquence périphérique des lymphocytes Treg et des lymphocytes iNKT, ainsi que de la fonction des lymphocytes Treg. En effet, nous avons démontré une réduction de la fonction suppressive de ces lymphocytes, et ce, accompagnée d’une diminution de la production d’IL-10. Ainsi, la fenêtre temporelle suivant le traitement à l’IR s’est avérée un moment critique pour étudier une altération de ces lymphocytes qui corroborait l’amplification de l’auto-immunité décrite après le traitement. De plus, nous avons démontré qu’un prétraitement avec un antithyroïdien de synthèse prévient partiellement les altérations observées chez les lymphocytes Treg, supportant la propriété immunomodulatrice de ces médicaments. Ces résultats accentuent la perspective d’une régulation immunitaire déficiente suivant certains traitements de l’hyperthyroïdie auto-immune.

published_or_final_version / Paediatrics and Adolescent Medicine / Doctoral / Doctor of Philosophy

Introduction: Human papillomavirus (HPV) is the most commonly occurring sexually transmitted infection and is a necessary cause of cervical cancer. The progression from HPV infection to cervical cancer is incompletely understood. Innate immune response to HPV infection has recently been identified as a potential cofactor in this progression. This study examined potential association(s) between killer cell immunoglobulin-like receptors (KIR) and HPV infection. HPV concordance was estimated among heterosexual couples demonstrating the complexity of HPV infection.Methods: HPV concordance was cross-sectionally estimated in 29 heterosexual couples. A polymerase chain reaction based assay for KIR genotyping was developed and validated. 283 women from the Young Women's Health Study and 259 men from the HPV Infection in Men: A Prospective Cohort Study had HPV infection data and samples available for KIR genotyping. Associations between KIR genotype and haplotype with HPV prevalence, incidence and clearance were assessed.Results: Among 29 couples, prevalence for any HPV type was comparable between women 86.2% and men, 75.9%. Partial concordance was observed in 66% of the couples. Forty-one percent (41%) of couples had perfect concordance. A high degree of concordance was observed, however HPV type distributions differed in men and women. In women from the YWHS, KIR2DS5 was significantly associated with oncogenic HPV prevalence (Odds ratio [OR]: 0.56, 95% Confidence Interval [CI]: 0.31-0.99). Any HPV incidence was significantly associated with KIR2DL2 (Hazards Ratio [HR]: 2.11, 95% CI: 1.0-4.44), KIR2DS2 (HR: 2.44, 95% CI: 1.13-5.24), KIR2DS3 (HR: 2.36, 95% CI: 1.16-4.81), and KIR haplotype B (HR: 2.48, 95% CI: 1.02-6.02). Women lacking KIR2DS5 had an increased risk of any HPV acquisition in the presence of KIR2DL2 (HR: 2.95, 95% CI: 1.28-6.86), KIR2DS2 (HR: 3.33, 1.39-7.99), or KIR2DS3 (2.77, 95% CI: 1.24-6.19). In Men, KIR2DS3 was significantly associated with increased probability of any HPV clearance (HR: 1.91, 95% CI: 1.04-3.49).Conclusions: This research contributes to our understanding of HPV infection dynamics through the assessment HPV type concordance in sexual partners. Additionally, through the development of an assay for KIR genotyping, we were able to identify associations with KIR gene positivity and HPV prevalence, incidence, and clearance in men and women.

Out of fruits and berries there was analyzed and prepared around 230 spontaneous fermentations. Out of them was extracted 17 strains, characterised with activated biocidic, evaluated it´s immune and fungicidal properties, comparing it with yeast S. cerevisiae sensitive and killer strains. The temperatures and pH for the best killer toxin secretion of killer yeast strains and bacterial isolates were defined. It shows that toxins of the isolates can be used against plants, animals and humans pathogenic microorganisms: Candida spp., Fusarium spp., Aspergillus spp., Penicillium spp., Verticillium spp., Venturia spp. 1M yeast strain was found, which had features, necessary for wine yeast and fermentated apple juice quality parameters and was used for natural apple wine semimanufactures production in cooperative company „Vaisių sultys“. During this research it was the first time when the K2 killer preprotoxin gene was cloned successfully to plant Nicotiana tabacum L. and analysed its expression. / Iš vaisių – uogų buvo paruošta ir išanalizuota apie 230 spontaninių raugų. Iš jų išskirta 17 kamienų, pasižyminčių biocidiniu aktyvumu, įvertintos jų imuninės ir fungicidinės savybės, lyginant juos su mielių S. cerevisiae jautriais ir kileriniais kamienais. Parodyta, kad izoliatų toksinai gali būti panaudoti kovai su patogeniniais mikroorganizmais. Nustatytos išskirtų kilerinių mielių ir bakterijų izoliatų sekretuojamų toksinų geriausios raiškos temperatūros ir pH sąlygos. Nustatytas rastų bakterinių izoliatų poveikis augalų, gyvūnų bei žmonių patogenams: Candida spp., Fusarium spp., Aspergillus spp., Penicillium spp., Verticillium spp., Venturia spp. Aptiktas naujas mielių S. cerevisiae kilerinis kamienas, kuris pasižymėjo savybėmis, reikalingomis pramoninėms vynų mielėms ir fermentuotų obuolių sulčių kokybės parametrams, ir buvo panaudotas obuolių vyno natūralaus pusgaminio gamyboje kooperatinėje bendrovėje „Vaisių sultys“. Atlikus transformuoto augalo Nicotiana tabacum L., nešančio mielių S. cerevisiae K2 kilerinio preprotoksino geno vektorius, molekulinę analizę, parodytas kilerinio geno buvimas. Įvertinta K2 kilerinio preprotoksino geno, reguliuojamo CaMV promotoriumi, raiška mielėse.

Iš vaisių – uogų buvo paruošta ir išanalizuota apie 230 spontaninių raugų. Iš jų išskirta 17 kamienų, pasižyminčių biocidiniu aktyvumu, įvertintos jų imuninės ir fungicidinės savybės, lyginant juos su mielių S. cerevisiae jautriais ir kileriniais kamienais. Parodyta, kad izoliatų toksinai gali būti panaudoti kovai su patogeniniais mikroorganizmais. Nustatytos išskirtų kilerinių mielių ir bakterijų izoliatų sekretuojamų toksinų geriausios raiškos temperatūros ir pH sąlygos. Nustatytas rastų bakterinių izoliatų poveikis augalų, gyvūnų bei žmonių patogenams: Candida spp., Fusarium spp., Aspergillus spp., Penicillium spp., Verticillium spp., Venturia spp. Aptiktas naujas mielių S. cerevisiae kilerinis kamienas, kuris pasižymėjo savybėmis, reikalingomis pramoninėms vynų mielėms ir fermentuotų obuolių sulčių kokybės parametrams, ir buvo panaudotas obuolių vyno natūralaus pusgaminio gamyboje kooperatinėje bendrovėje „Vaisių sultys“. Atlikus transformuoto augalo Nicotiana tabacum L., nešančio mielių S. cerevisiae K2 kilerinio preprotoksino geno vektorius, molekulinę analizę, parodytas kilerinio geno buvimas. Įvertinta K2 kilerinio preprotoksino geno, reguliuojamo CaMV promotoriumi, raiška mielėse. / Out of fruits and berries there was analyzed and prepared around 230 spontaneous fermentations. Out of them was extracted 17 strains, characterised with activated biocidic, evaluated it´s immune and fungicidal properties, comparing it with yeast S. cerevisiae sensitive and killer strains. The temperatures and pH for the best killer toxin secretion of killer yeast strains and bacterial isolates were defined. It shows that toxins of the isolates can be used against plants, animals and humans pathogenic microorganisms: Candida spp., Fusarium spp., Aspergillus spp., Penicillium spp., Verticillium spp., Venturia spp. 1M yeast strain was found, which had features, necessary for wine yeast and fermentated apple juice quality parameters and was used for natural apple wine semimanufactures production in cooperative company „Vaisių sultys“. During this research it was the first time when the K2 killer preprotoxin gene was cloned successfully to plant Nicotiana tabacum L. and analysed its expression.

Early pregnancy is characterized by complex interactions between blood vessels, leukocytes, and conceptus-derived trophoblasts within the gestational uterus. Uterine Natural Killer (uNK) cells become the most abundant leukocyte during decidualization and produce a wide array of angiogenic factors, yet little is known regarding their early pregnancy functions. To characterize the role(s) of uNK cells, whole mount in situ immunohistochemistry of live early implant sites was performed. A timecourse examination of murine early pregnancy (virgin, and gd4.5-9.5) implantation sites was performed. Comparison of Gd6.5, 8.5 and 9.5 implant sites from BALB/c+/+ controls (BALB/c) and BALB/c-Rag2-/-Il2rg-/- (alymphoid) identified anomalies that result from the absence of lymphocytes. In alymphoid decidua basalis, mesometrial angiogenesis was widespread but pruning of nascent vessels within alymphoid decidua basalis was deficient. As early gestation progressed, vessels of alymphoid decidua basalis showed no evidence for remodeling. Alymphoid implantation sites showed ~24h delay in uterine lumen closure and embryonic development. To determine if uNK cells would normalize the anomalies observed in alymphoid implantation sites, adoptive cell transfer of NK+ B- T- marrow to alymphoid mice was performed. All of the above anomalies were reversed by adoptive transfer of NK+B-T- marrow. My results suggest that uNK cells support vascular growth and development which ensures the decidua can support the growing conceptus early in pregnancy prior to formation and function of the placenta. Human decidual NK cells may fill similar roles and be important targets for strategies designed to correct intra-uterine growth restriction. / Thesis (Master, Anatomy & Cell Biology) -- Queen's University, 2013-08-02 08:42:06.487

La zone marginale de la rate apparaît comme un lieu stratégique de détection des antigènes et agents pathogènes véhiculés par le sang. Ces propriétés sont principalement liées à la présence de cellules appartenant au système immunitaire inné parmi lesquelles se trouvent des nombreuses cellules présentatrices d’antigènes (APC), comme les macrophages, les lymphocytes B de la zone marginale (MZB) ou encore les cellules dendritiques (DC). Ces cellules représentent une première ligne de défense contre les pathogènes véhiculés par le sang et sont importantes pour l’initiation des réponses immunes. Il a fortement était suggéré la localisation dans la zone marginale d’une autre population appartenant au système immunitaire inné : les lymphocytes T Natural Killer invariants ou iNKT. Ces lymphocytes T non conventionnels sont caractérisés par l’expression de marqueurs de cellules NK et de lymphocytes T conventionnels notamment le TCR. Contrairement aux lymphocytes T conventionnels, les iNKT reconnaissent des antigènes (Ag) lipidiques (d’origine exogène ou endogène) présentés par l’intermédiaire de la molécule CD1d exprimée à la surface des APC, notamment les DC. En réponse à ces lipides, et notamment l’α-galactosylceramide (α-GalCer), les cellules iNKT ont la capacité unique de sécréter rapidement de grandes quantités de cytokines immunomodulatrices comme l’IFN-γ et/ou l’IL-4 qui, en retour, permettent l’activation d’autres populations immunes telles que les DC, les cellules NK, les lymphocytes B et lymphocytes T conventionnels. Les DC, en tant qu’APC professionnelles, sont de puissantes cellules activatrices des lymphocytes T conventionnels mais également des iNKT. Cependant, bien que souvent souligné dans la littérature, le rôle des autres APC dans l’activation des lymphocytes T conventionnels mais surtout des iNKT restait relativement obscur lorsque ce travail de thèse a débuté. Parmi les APC, les MZB représentaient des cibles idéales puisqu’elles ont la particularité d’exprimer fortement les molécules de présentation telle que les molécules du CMH de classe II, la molécule CD1d mais aussi les molécules de co-stimulation. Nous avons donc débuté notre travail par l’étude du rôle des MZB dans l’activation des lymphocytes conventionnels et des iNKT. Nous montrons que les MZB sensibilisés avec un peptide de l’ovalbumine sont capables d’activer les lymphocytes T CD4+, dont la réponse est orientée vers un profil Th1 après l’activation des MZB par le CpG-ODN (agoniste du TLR-9). Ainsi, les MZB se comportent comme de véritables APC. Nous avons ensuite étudié l’activation des iNKT en réponse à lα’-GalCer. De façon surprenante, bien que les MZB expriment fortement la molécule CD1d, elles sont incapables d’activer in vitro les iNKT primaires en réponse l’α-GalCer libre. Elles sont cependant capables de présenter l’α-GalCer aux iNKT suggérant qu’il manque aux MZB des facteurs (solubles ou non) pour induire l’activation des iNKT. De façon intéressante, l’ajout de DC non sensibilisées restaure la production d’IFN-γ et d’IL-4 par les iNKT co-cultivés en présence de MZB sensibilisés avec l’α-GalCer. Nous montrons que les DC participent à cette activation via un mécanisme de présentation croisée mais également via l’apport de facteurs nécessaires aux MZB pour induire l’activation des iNKT. Il existe une réelle coopération entre ces deux types d’APC pour une activation optimale des iNKT. Finalement, nous montrons que les MZB sensibilisés avec l’α-GalCer induisent l’activation des lymphocytes iNKT et NK in vivo. Nous nous sommes ensuite concentrés sur les DC qui comme indiqué ci-dessus, sont des APC professionnelles. Cependant, dans la rate, les DC représentent une population très hétérogène dont le rôle de chaque sous-population notamment dans l’activation des iNKT était également très peu connu lorsque ce travail a débuté. / The spleen, with its highly specialized lymphoid compartments, plays a central role in clearing blood-borne pathogens. Innate immune cells, that are mainly present in the marginal zone of the spleen, are strategically located to respond to blood-borne microorganisms and viruses. Among innate cells, macrophages and marginal zone B (MZB) cells represent the first line of defense against blood-borne pathogens and with dendritic cells (DC) are important for initiation of the immune response. Along with these populations of antigen-presenting cells (APC), it was also suggested that invariant Natural Killer T (iNKT), a population of innate-like T lymphocytes, were also located in the marginal zone of the spleen. Unlike conventional T lymphocytes, iNKT cells recognize exogenous and self (glyco)lipid antigens (Ag) presented by the non-classical class I Ag presenting molecule CD1d expressed on APC, in particular DC. Upon lipid recognition, in particular in response to the non-mammalian glycolipid, α-galactosylceramide (α-GalCer), iNKT cells have the unique capacity to rapidly produce large amounts of immunoregulatory cytokines, including IFN-γ and IL-4, which lead to downstream activation of other immune populations (DC, NK cells, B cells and conventional T cells). Through this property, iNKT cells influence the strength and quality of the ensuing immune response. Dendritic cells, as professional APC, are potent activators of conventional T lymphocytes and iNKT cells. When we started our PhD, the role of APC other than DC in the priming of T lymphocytes including iNKT cells remained unclear. Among them, MZB cells represented good candidates since they express high levels of MHC class II and CD1d molecules and their ability to activate and orientate conventional and innate-like T lymphocytes, such as iNKT cells, were elusive. We show that MZB cells, when loaded OVA peptide promote the release of IFN-γ and IL-4 by antigen specific CD4+ T lymphocytes and their stimulation with CpG-ODN biases them toward more Th1 inducers. Surprisingly, although able to activate iNKT hybridomas, MZB cells sensitized with free α-GalCer do not directly activate ex vivo sorted iNKT cells unless DC are added to the culture system. Dendritic cells help MZB cells to promote iNKT cell activation in part through α-GalCer cross-presentation and also through DC-expressed co-factors. Interestingly, MZB cells amplify the DC-mediated activation of iNKT cells and depletion of MZB cells from total splenocytes strongly reduces iNKT cell activation in response to α-GalCer. Thus, DC and MZB cells provide help to each other to optimize iNKT cell stimulation. Finally, in vivo transfer of α-GalCer-loaded MZB cells potently activates iNKT and NK cells. Thus, we show for the first time a role of MZB cell in iNKT cell activation in response to free α-GalCer, an important finding to better understand the modalities of iNKT cell activation. As mentioned above, DC are professional APC and thus are strong activators of conventional and unconventional T lymphocytes. However, DC in the spleen represent an heterogeneous cell population and when we started our study, the role of DC subsets in T lymphocyte priming was still unclear. Among DC subsets, we concentrated on the major splenic DC subset located in the marginal zone, the CD8α- DC. This DC subset was further subdivided in CD4+ and CD4- subtypes. We provide evidences that CD4+ and CD4- DC are equally efficient at priming CD4+ T lymphocytes when loaded with OVA peptide and whole OVA, leading to a mixed Th1/Th2 response, and also CD8+ T lymphocytes when pulsed with OVA peptide (but not whole OVA).

La prolifération, la différenciation ainsi que les fonctions des cellules du système immunitaire sont contrôlées en partie par les cytokines. Lors de l’infection par le VIH-1, les défauts observés dans les fonctions, la maintenance, ainsi que la consistance des cellules du système immunitaire sont en large partie attribués à une production altérée des cytokines et à un manque d’efficacité au niveau de leurs effets biologiques. Durant ces études, nous nous sommes intéréssés à la régulation et aux fonctions de deux cytokines qui sont l’IL-18 et l’IL-21. Nous avons observé une corrélation inversée significative entre les concentrations sériques d’IL-18 et le nombre des cellules NK chez les patients infectés par le VIH-1. Nos expériences in vitro ont démontré que cette cytokine induit l’apoptose des cellules NK primaires et que cette mort peut être inhibée par des anticorps neutralisants spécifiques pour FasL et TNF-α. Cette mort cellulaire est due à l’expression de FasL sur les cellules NK et à la production de TNF-α par ces cellules. L’IL-18 augmente aussi la susceptibilité à la mort des cellules NK par un stimulus pro-apoptotique, en diminuant l’expression de la protéine anti-apoptotique Bcl-XL. Nous démontrons aussi que, contrairement à l’IL-18, les niveaux d’IL-18BP sont plus faibles dans les sérum de patients infectés. Ceci résulte sur une production non coordonnée de ces deux facteurs, aboutissant à des niveaux élevés d’IL-18 libre et biologiquement active chez les patients infectés. L’infection de macrophages in vitro induit la production d’IL-18 et réduit celle d’IL-18BP. De plus, l’IL-10 et le TGF-β, dont les concentrations sont élevées chez les patients infectés, réduisent la production d’IL-18BP par les macrophages in vitro. Finalement, nous démontrons que l’IL-18 augmente la réplication du VIH-1 dans les lymphocytes T CD4+ infectés. Les niveaux élevés d’IL-18 libres et biologiquement actives chez les patients infectés contribuent donc à l’immuno-pathogénèse induite par le VIH-1 en perturbant l’homéostasie des cellules NK ainsi qu’en augmentant la réplication du virus chez les patients. Ces études suggèrent donc la neutralisation des effets néfastes de l’IL-18 en utilisant son inhibiteur naturel soit de l’IL-18BP exogène. Ceci permettrait de moduler l’activité de l’IL-18 in vivo à des niveaux souhaitables. L’IL-21 joue un rôle clef dans le contrôle des infections virales chroniques. Lors de ces études, nous avons déterminé la dynamique de la production d’IL-21 lors de l’infection par le VIH-1 et sa conséquence sur la survie des cellules T CD4+ et la fréquence des cellules T CD8+ spécifiques au VIH-1. Nous avons démontré que sa production est compromise tôt au cours de l’infection et que les concentrations d’IL-21 corrèlent avec le compte de cellules T CD4+ chez les personnes infectées. Nos études ont démontré que le traitement antirétroviral restaure partiellement la production d’IL-21. De plus, l’infection par le VIH-1 de cellules T CD4+ humaines inhibe sa production en réduisant l’expression du facteur de transcription c-Maf. Nous avons aussi démontré que la fréquence des cellules T CD4+ spécifiques au VIH-1 qui produisent de l’IL-21 est réduite chez les patients virémiques. Selon nos résultats, l’IL-21 empêche l’apoptose spontanée des cellules T CD4+ de patients infectés et l’absence d’IL-21 réduit la fréquence des cellules T CD8+ spécifiques au VIH-1 chez ces patients. Nos résultats démontrent que l'IL-21R est exprimé de façon égale sur tous les sous-types de cellules NK chez les donneurs sains et chez les patients infectés. L’IL-21 active les protéines STAT-3, MAPK et Akt afin d'augmenter les fonctions effectrices des cellules NK. L'activation de STAT-3 joue un rôle clef dans ces fonctions avec ou sans un traitement avec de l'IL-21. L'IL-21 augmente l'expression des protéines anti-apoptotiques Bcl-2 et Bcl-XL, augmente la viabilité des cellules NK, mais ne possède aucun effet sur leur prolifération. Nous démontrons de plus que l'IL-21 augmente l'ADCC, les fonctions sécrétrices et cytotoxiques ainsi que la viabilité des cellules NK provenant de patients chroniquement infectés par le VIH-1. De plus, cette cytokine semble présenter ces effets sans augmenter en contrepartie la réplication du VIH-1. Elle permet donc d'inhiber la réplication virale lors de co-cultures autologues de cellules NK avec des cellules T CD4+ infectées d'une manière dépendante à l'expression de perforine et à l'utilisation de la protéine LFA-1. Les niveaux d’IL-21 pourraient donc servir de marqueurs biologiques pour accompagner les informations sur le taux de cellules T CD4+ circulantes en nous donnant des informations sur l’état de fonctionnalité de ce compartiment cellulaire. De plus, ces résultats suggèrent l’utilisation de cette cytokine en tant qu’agent immunothérapeutique pour restaurer les niveaux normaux d’IL-21 et augmenter la réponse antivirale chez les patients infectés par le VIH-1. / The proliferation, differentiation, function and maintenance of immune cells is controlled in large part by cytokines. HIV-induced dysfunctions of the antiviral immunity is in part related to defects in the cytokine network, as manifested by altered cytokine secretion and responsiveness to these cytokines. In these studies, we investigated the regulation and the functions of two cytokines, IL-18 and IL-21, during HIV-1 infection. In our studies, we observed an inverse correlation between IL-18 concentrations and absolute numbers of various subsets of NK cells in infected persons. IL-18 caused increased death of a human NK cell line, as well as of primary human NK cells in vitro. The IL-18-mediated cell death was dependent upon Fas-FasL interactions and TNF- secretion. IL-18 induced the expression of TNF-, induced the expression of FasL on NK cells, increased the transcription from the human FasL promoter, reduced the expression of Bcl-XL in NK cells, and increased their sensitivity to FasL-mediated cell death. In contrast to IL-18 levels, IL-18BP levels decreased in the serum of HIV-infected patients. This decrease resulted in enhanced levels of free IL-18 in the serum of such patients. The infection increased production of IL-18 but decreased that of IL-18BP in monocyte-derived macrophages (MDM). Furthermore, IL-10 and TGF-β, two cytokines for which concentrations are increased in HIV-infected persons, also decreased production of IL-18BP by human MDM. Finally, recombinant human IL-18 enhanced HIV-1 replication in human CD4+ T cells. The uncoordinated production of these two cytokines represents an imbalance between these two soluble factors in HIV-infected patients. Our study shows that enhanced IL-18 bioactivity in HIV-infected patients may contribute to the pathogenesis of AIDS by disrupting NK cell homoeostasis and increasing viral replication. This uncoordinated production of IL-18 and IL-18BP contribute to IL-18-induced immunopathology and pathogenesis in HIV-infected AIDS patients. Therefore, these studies suggest that the neutralization of IL-18 may represent an appropriate and useful immunotherapeutic strategy in these patients. It may delay AIDS progression and improve the immune status of infected persons. The best way to achieve this goal may be using exogenous interleukin-18 binding protein. IL-21 is a relatively newly discovered immune enhancing cytokine, which plays an essential role in controlling chronic viral infections. Therefore, we sought to determine the dynamics of the cytokine production and its potential consequences on the viability of CD4+ T cells in HIV-infected persons. We show here that the cytokine production is compromised early in the course of the infection. The serum cytokine concentrations correlated with CD4+ T cell counts in the infected persons. Among different groups of HIV-infected persons, only Elite Controllers maintain normal production of the cytokine. The HAART partially restores production of this cytokine. Interestingly, HIV-1 infection of human PBMC as well as of purified CD4+ T cells inhibits the production of the cytokine by decreasing the expression of c-Maf, a transcription factor involved in the activation of the cytokine gene, in the virus-infected cells but not in uninfected bystander cells. We also show that the frequencies of IL-21 producing HIV-specific antigen experienced CD4+ T cells are decreased in HIV-infected viremic patients. Furthermore, we show that recombinant human IL-21 acts as pro-survival factor and prevents enhanced spontaneous apoptosis of ex vivo cultured CD4+ T cells from HIV-infected patients and that increased serum levels of the cytokine are associated with higher frequencies as well as with better functions of HIV-specific CTL in HIV-infected individuals. We show that the cytokine receptors are expressed equally on all NK cell subsets. We demonstrate that the cytokine activates STAT-3, MAPK and Akt to enhance NK cell functions. IL-21 increases expression of anti-apoptotic proteins Bcl-2 and Bcl-XL, and enhances viability of NK cells, but has no effect on their proliferation. We further show that the cytokine enhances HIV-specific ADCC, secretory and cytotoxic functions as well as viability of NK cells from HIV-infected persons. Furthermore, it exerts its biological effects on NK cells with minimal enhancement of HIV-1 replication, and the cytokine-activated NK cells inhibit viral replication in co-cultured HIV-infected autologous CD4+ T cells in a perforin- and LFA-1-dependent manner. These studies suggest that serum IL-21 concentrations may serve as useful biomarker to accompany CD4+ T cell counts for monitoring HIV-1 disease progression and the fitness of the antiviral immunity. Furthermore, the cytokine may be considered for immunotherapy in HIV-infected patients in order to restore the physiological levels of the cytokine and promote their antiviral immunity.

Psychological profiling of an offender Psychological profiling is a method of investigation developed in the 70's in the USA. This method is founded on research of behaviour of unknown offender with purpose to make conclusions about his personality. The purpose of my thesis is to find out how psychological profile can help during investigation. I would like to prove that psychological profiling belongs to investigation, that it can help during investigation and that it can bring a new view on case. The source of knowledge about the offender's behaviour and personality is the crime scene or text analyse. The thesis is composed of three chapters, each of them dealing with different aspects of psychological profiling. Chapter One is introductory and is subdivided into two parts. Part one describes history of psychological profiling. Part Two deals with theorethical background of psychological profiling. Chapter Two focuses on practical part of psychological profiling and consists of seven parts. This chapter explains the process of making a psychological profile, differences between mass-murder, serial-killer ad spree killer, characteristics of expert who creates a psychological profile, limits of psychological profile and differences between crimes committed by intimate people and those by unknown...

After the Snow: The Oakland County Child Murders and the Search for the Killer is a work of nonfiction that recounts the murders of four children who lived in the suburbs of Oakland County, Michigan and the subsequent search for their murderer, the Oakland County Child Killer. The first of the four murders occurred in February 1976 and the last in March 1977. This thesis chronicles the unsolved case and the police investigation that began in 1976 and seems close to a successful conclusion in the spring of 2009. Over the course of the last two-and-a-half years, I have conducted lengthy interviews with Cathy King, the sister of one of the victims, and researched primary sources, the Detroit Free Press and the Detroit News, as well as other materials. My research also includes the use of Cathy King’s private and confidential correspondences with people involved in this case.