Infecções causadas por tripanossomatídeos causam milhares de mortes anualmente, além de levarem a redução da capacidade produtiva, com elevada morbidade na população acometida. A eficácia terapêutica é limitada na maioria dos casos, sendo o benzonidazol o único fármaco aprovado para uso do tratamento do Trypanosoma cruzi, sendo ativo somente na fase aguda da Doença de Chagas, com grande efeitos colaterais. No caso das leishmanioses, as substâncias de tratamento existentes causam toxicidade renal e cardíaca, além de induzirem a resistência e apresentarem eficácia insuficiente. Observando todo o contexto torna-se necessário a busca por novas substâncias que sejam mais eficazes e menos tóxicas. Assim, o trabalho representa uma contribuição para a busca de novas moléculas bioativas para o tratamento da doença de Chagas e leishmaniose a partir da padronização e realização de ensaios celulares usando a forma epimastigota da cepa Y do T. cruzi e promastigota para Leishmania chagasi e L. amazonensis. A padronização do método colorimétrico de MTT foi realizada a partir da comparação com o método tradicional de contagem por microscopia usando câmara de Neubauer, seguido do estudo de viabilidade por citometria de fluxo, como método confirmatório e, finalmente a padronização do ensaio de ciclo celular usando os fármacos de referência benzonidazol (T. cruzi) e anfotericina B (Leishmania spp.). Os compostos testados neste estudo são proveniente de classes distintas de inibidores de alvos macromoleculares (cisteíno proteases, DHODH, GAPDH, quinases) e foram planejados e/ou selecionados pelo Grupo de Química Medicinal (NEQUIMED). Dentre todas as substâncias, inibidores de quinases apresentaram maior potencial para estudos subsequentes, sendo o T. cruzi o parasito mais sensível, onde um grande número de substâncias apresentou atividade nos estudos de triagem. Para uma delas (Neq0474) foi realizado o ensaio de dose-resposta, com EC50 = 53 &micromol/L. L. chagasi apresentou a maior resistência dentre todos os parasitos estudados neste trabalho, enquanto que L. amazonensis foi sensível para Neq0438. Algumas substâncias estudadas apresentaram potencial para estudos mais aprofundados visando identificar novas alternativas terapêuticas para estas doenças parasitárias. / Infections caused by trypanosomatides lead to thousands of deaths annually, besides the reduction of the quality of life and working capability, with high morbidity to the patients. The therapy efficacy is limited in most cases, being benznidazole the only approved drug in Brazil, which works only in the acute phase of the Chagas Disease with severe collateral effects. For leishmaniasis, the drugs cause renal and cardiac toxicity and trigger resistance. In this context, novel efficacious and secure substantes are necessary to improve the current therapeutic strategies, which was the goal of this project by means of cell-based assays. The first step was the standardization of the MTT colorimetric assay for the epimastigote form of the Y strain of Trypanosoma cruzi and promastigote form of Leishmania chagasi and Leishmania amazonensis. This was achieved by comparing the results with the standard counting using the Neubauer chamber. The use flow cytometry for the determination of cell viability and the perturbation of the cell cycle were also standardized using the reference drugs benznidazole (T. cruzi) and amphotericin B (Leishmania spp.). New compounds tested in this project were designed or selected based on different macromolecular targets (cysteine proteases, DHODH, GAPDH, kinases) by the Medicinal Chemistry Group (NEQUIMED). Among them, many kinase inhibitors promoted the most dramatic results for T. cruzi, reducing the cell viability of this parasite. One of them (Neq0474) was subjected for a follow-up dose-response assay, with EC50 = 53 &micromol/L. L. chagasi was the most resistant parasite in this work, whereas L. amazonensis was sensitive to Neq0438. Some of these new compounds are of interest for more in-depth studies to these parasitic diseases.

Infecções causadas por tripanossomatídeos causam milhares de mortes anualmente, além de levarem a redução da capacidade produtiva, com elevada morbidade na população acometida. A eficácia terapêutica é limitada na maioria dos casos, sendo o benzonidazol o único fármaco aprovado para uso do tratamento do Trypanosoma cruzi, sendo ativo somente na fase aguda da Doença de Chagas, com grande efeitos colaterais. No caso das leishmanioses, as substâncias de tratamento existentes causam toxicidade renal e cardíaca, além de induzirem a resistência e apresentarem eficácia insuficiente. Observando todo o contexto torna-se necessário a busca por novas substâncias que sejam mais eficazes e menos tóxicas. Assim, o trabalho representa uma contribuição para a busca de novas moléculas bioativas para o tratamento da doença de Chagas e leishmaniose a partir da padronização e realização de ensaios celulares usando a forma epimastigota da cepa Y do T. cruzi e promastigota para Leishmania chagasi e L. amazonensis. A padronização do método colorimétrico de MTT foi realizada a partir da comparação com o método tradicional de contagem por microscopia usando câmara de Neubauer, seguido do estudo de viabilidade por citometria de fluxo, como método confirmatório e, finalmente a padronização do ensaio de ciclo celular usando os fármacos de referência benzonidazol (T. cruzi) e anfotericina B (Leishmania spp.). Os compostos testados neste estudo são proveniente de classes distintas de inibidores de alvos macromoleculares (cisteíno proteases, DHODH, GAPDH, quinases) e foram planejados e/ou selecionados pelo Grupo de Química Medicinal (NEQUIMED). Dentre todas as substâncias, inibidores de quinases apresentaram maior potencial para estudos subsequentes, sendo o T. cruzi o parasito mais sensível, onde um grande número de substâncias apresentou atividade nos estudos de triagem. Para uma delas (Neq0474) foi realizado o ensaio de dose-resposta, com EC50 = 53 &micromol/L. L. chagasi apresentou a maior resistência dentre todos os parasitos estudados neste trabalho, enquanto que L. amazonensis foi sensível para Neq0438. Algumas substâncias estudadas apresentaram potencial para estudos mais aprofundados visando identificar novas alternativas terapêuticas para estas doenças parasitárias. / Infections caused by trypanosomatides lead to thousands of deaths annually, besides the reduction of the quality of life and working capability, with high morbidity to the patients. The therapy efficacy is limited in most cases, being benznidazole the only approved drug in Brazil, which works only in the acute phase of the Chagas Disease with severe collateral effects. For leishmaniasis, the drugs cause renal and cardiac toxicity and trigger resistance. In this context, novel efficacious and secure substantes are necessary to improve the current therapeutic strategies, which was the goal of this project by means of cell-based assays. The first step was the standardization of the MTT colorimetric assay for the epimastigote form of the Y strain of Trypanosoma cruzi and promastigote form of Leishmania chagasi and Leishmania amazonensis. This was achieved by comparing the results with the standard counting using the Neubauer chamber. The use flow cytometry for the determination of cell viability and the perturbation of the cell cycle were also standardized using the reference drugs benznidazole (T. cruzi) and amphotericin B (Leishmania spp.). New compounds tested in this project were designed or selected based on different macromolecular targets (cysteine proteases, DHODH, GAPDH, kinases) by the Medicinal Chemistry Group (NEQUIMED). Among them, many kinase inhibitors promoted the most dramatic results for T. cruzi, reducing the cell viability of this parasite. One of them (Neq0474) was subjected for a follow-up dose-response assay, with EC50 = 53 &micromol/L. L. chagasi was the most resistant parasite in this work, whereas L. amazonensis was sensitive to Neq0438. Some of these new compounds are of interest for more in-depth studies to these parasitic diseases.

Leishmania (Leishmania) amazonenses está associada à leishmaniose cutânea difusa (DCL) e localizada (LCL). LCL se apresenta como uma lesão única com cura espontânea e DCL apresenta nódulos não ulcerativos que se espalham pela pele. Até o momento não se conhecem os fatores que influenciam na apresentação destas manifestações. A virulência do parasito tem sido associada com a capacidade de sobreviver no macrófago ativado. CD200 é uma glicoproteína reguladora que ativa o CD200R, gerando a inibição da resposta próinflamatória do macrófago. Recentemente foi demonstrado que no processo de infecção por L. (L.) amazonenses, há indução de CD200 no começo da infecção, aumentando a supervivência do parasito. O objetivo principal foi determinar a associação da expressão de CD200 na infecção de macrófagos com isolados de L. (L.) amazonenses associados à LCL ou DCL. Observamos que o aumento da expressão da proteína nos tempos avançados de infecção está relacionado com um aumento na infectividade dos isolados e um maior número de parasitos por célula infectada. / Leishmania (Leishmania) amazonenses is one of the etiologic agents of two forms of leishmaniasis: diffuse (DCL) and localized (LCL) cutaneous leishmaniasis. LCL is presents a unique ulcerated lesion and DCL multiple non-ulcerative nodules. Until now, it is not well known which factors influence the development of LCL or DCL. The parasites virulence has been associated with the ability to survive inside the activated macrophage. CD200 is a glycoprotein that interacts with CD200R inhibiting the proinflammatory response of the cell. Recently it was revealed during the infection process in macrophages L. (L.) amazonenses enhances CD200 expression in the early stages of infection resulting in the intracellular survival of amastigotes. The aim of this study was to determine the association between the induction of CD200 during infection with L. (L.) amazonenses isolates associated with LCL or DCL. An increase in CD200 expression was noteworthy in the late stages of infection, which was also related to a higher infectivity rate of L. (L.) amazonenses isolates.

Leishmania (Leishmania) amazonenses está associada à leishmaniose cutânea difusa (DCL) e localizada (LCL). LCL se apresenta como uma lesão única com cura espontânea e DCL apresenta nódulos não ulcerativos que se espalham pela pele. Até o momento não se conhecem os fatores que influenciam na apresentação destas manifestações. A virulência do parasito tem sido associada com a capacidade de sobreviver no macrófago ativado. CD200 é uma glicoproteína reguladora que ativa o CD200R, gerando a inibição da resposta próinflamatória do macrófago. Recentemente foi demonstrado que no processo de infecção por L. (L.) amazonenses, há indução de CD200 no começo da infecção, aumentando a supervivência do parasito. O objetivo principal foi determinar a associação da expressão de CD200 na infecção de macrófagos com isolados de L. (L.) amazonenses associados à LCL ou DCL. Observamos que o aumento da expressão da proteína nos tempos avançados de infecção está relacionado com um aumento na infectividade dos isolados e um maior número de parasitos por célula infectada. / Leishmania (Leishmania) amazonenses is one of the etiologic agents of two forms of leishmaniasis: diffuse (DCL) and localized (LCL) cutaneous leishmaniasis. LCL is presents a unique ulcerated lesion and DCL multiple non-ulcerative nodules. Until now, it is not well known which factors influence the development of LCL or DCL. The parasites virulence has been associated with the ability to survive inside the activated macrophage. CD200 is a glycoprotein that interacts with CD200R inhibiting the proinflammatory response of the cell. Recently it was revealed during the infection process in macrophages L. (L.) amazonenses enhances CD200 expression in the early stages of infection resulting in the intracellular survival of amastigotes. The aim of this study was to determine the association between the induction of CD200 during infection with L. (L.) amazonenses isolates associated with LCL or DCL. An increase in CD200 expression was noteworthy in the late stages of infection, which was also related to a higher infectivity rate of L. (L.) amazonenses isolates.