Protein synthesis is frequently dysregulated in cancer cells; such conditions are known to favor aberrant cell growth and proliferation which lead to cancer. LARP1 is a novel target of the mammalian target of rapamycin complex 1 (mTORC1) signaling pathway, a circuitry often hyperactivated in cancer which regulates cell growth and proliferation primarily through the regulation of protein synthesis. I aimed to determine if LARP1 plays a role in cancer progression by comparing its expression in normal versus cancer tissues. My results demonstrate that LARP1 expression is altered (lost or overexpressed) in various cancers and correlates with cancer patients survival. My systematic bioinformatics assessment, the results of my functional assays assessing the effect of LARP1 knockdown on cancer cells, together with my antibody validation do not only provide new insights for its role in cancer progression and mRNA translation, but also emphasizes the potential of LARP1 as a cancer therapeutic target.

Legionella pneumophila is an intracellular pathogen and the etiological agent of Legionnaires’ disease, a severe atypical pneumonia. This bacterium is ubiquitous to freshwater ecosystems where it spreads in the planktonic form but is primarily found associated with protozoa. Protozoa serve as a niche for its replication because the extracellular environment often does not offer sufficient nutrients to support the growth of this bacterium. L. pneumophila is an opportunistic pathogen in humans and utilizes an arsenal of virulence factors to colonize hosts and cause Legionnaires’ disease. The transition between extracellular and intracellular milieus triggers a series of metabolic, morphological and genetic changes that define two developmental stages in this bacterium: replicative and transmissive. Relatively high concentration of nutrients triggers the replicative stage of growth, where the bacterium has the appearance of a thin, elongated rod without the presence of flagella. In addition, is characterized by active metabolism and expression of genes required for productive replication. In contrast, once nutrient levels are relatively low, L. pneumophila switches to its transmissive form. In this form, the bacterium activates a genetic program that includes the expression of many traits associated with the transmissive stage, such as coccoid cell shape, motility, pigmentation and important virulence factors. These multifaceted changes in gene expression leading the differentiation from replicative to the transmissive form, are controlled by two-component regulatory systems. Specifically, the LetAS two-component system plays a key role in the regulation of cell morphology and in the production of the pigment pyomelanin. Here we report the identification of a LetAS-regulated protein, Lpg0586 (designated as Larp1), capable of inducing changes in cell morphology and pigment production. We found that Larp1 expression was accompanied by accumulation of the RecA protein, but evaluation of recA deletion mutants indicated that RecA is not involved in cell morphology changes in L. pneumophila. The specific reason as to why RecA accumulates upon Larp1 expression remains to be elucidated. However, we show that upon synthetic HGA treatment, L. pneumophila cultures display cell elongation and increased RecA levels. Lastly, Larp1 expression restored pyomelanin production in an un-pigmented mutant and increased the transcription of important genes involved in the pyomelanin production pathway. Based on these findings, Larp1 is the first LetAS-regulated protein reported to be involved in pyomelanin production.

La biogenèse des ribosomes est un processus complexe finement régulé pour s’adapter à la disponibilité en nutriments et en facteurs de croissance ainsi qu’à la présence éventuelle de stress. Une étape clé de la régulation de la biogenèse des ribosomes se fait par la régulation de la traduction des ARNm 5’ Terminal OligoPyrimidine (5’TOP) qui codent pour les protéines ribosomiques. Bien que la voie de signalisation mechanistic Target of Rapamycin (mTOR) ait été identifiée depuis des décennies comme activatrice de cette traduction des ARNm 5’TOP, les régulateurs impliqués ainsi que leur contrôle par la voie mTOR n’ont jamais été identifiés avec précision. Dans ce travail, nous avons montré que La-related protein 1 (Larp1), une protéine de liaison à l’ARN cible de mTOR, est indispensable à l’inhibition de la traduction des ARNm 5’TOP en aval de mTOR. De plus, Larp1 semble participer à l’inhibition de la formation du complexe d’initiation de la traduction eIF4F, qui est responsable du recrutement du complexe de pré-initiation 43S sur la coiffe m7G présente à l’extrémité 5’ de tous les ARNm. Nous avons également démontré que Larp1 peut se lier à la protéine Poly(A)-Binding Protein (PABP) et à la protéine de la petite sous-unité ribosomique RPS6 et que cette dernière interaction diminue lorsque les sites de phosphorylation de Larp1 dépendants de mTOR Ser 689 et 697 sont mutés en alanine. Ces résultats représentent une avancée importante dans la compréhension de la régulation de la traduction des ARNm 5’TOP par la voie mTOR. Cependant, des études complémentaires sont nécessaires afin de comprendre plus en détail le mécanisme exact par lequel Larp1 réprime la traduction des ARNm 5’TOP. / Ribosome biogenesis is a process that is finely tuned to adapt to nutrients and growth factors availability as well as to cellular stress and insults. Ribosomal proteins, the protein component of ribosomes, are encoded by 5’ Terminal Oligopyrimidine (5’TOP) mRNAs. A key step in ribosome biogenesis is the up-regulation of the translation of 5’TOP mRNAs. Although the mechanistic Target of Rapamycin (mTOR) pathway have been known for decades to promote 5’TOP mRNAs translation, the regulators involved and their control by the mTOR pathway remains obscure. In this work we demonstrated that La-related protein 1 (Larp1), an RNA-binding protein and substrate of mTOR, is necessary for the inhibition of 5’TOP mRNAs translation downstream of mTOR. In particular Larp1 seems to interfere with the formation of the translation initiation complex eIF4F, which is responsible for the recruitment of the 43S preinitiation complex to the m7G cap present at the 5’ end of mRNAs. Furthermore we found that Larp1 interacts with the protein Poly(A)-Binding Protein (PABP) and with the small ribosomal subunit protein RPS6 and that the latter interaction is decreased by mutation to alanine of the mTOR-dependent phosphorylation sites Ser 689 and 697. These findings are an important contribution to the understanding of the regulation of the translation of 5’TOP mRNAs by the mTOR pathway. Nevertheless more studies will be needed in order to dissect the mechanism by which Larp1 represses translation of 5’TOP mRNAs.

La biogenèse des ribosomes est un processus complexe finement régulé pour s’adapter à la disponibilité en nutriments et en facteurs de croissance ainsi qu’à la présence éventuelle de stress. Une étape clé de la régulation de la biogenèse des ribosomes se fait par la régulation de la traduction des ARNm 5’ Terminal OligoPyrimidine (5’TOP) qui codent pour les protéines ribosomiques. Bien que la voie de signalisation mechanistic Target of Rapamycin (mTOR) ait été identifiée depuis des décennies comme activatrice de cette traduction des ARNm 5’TOP, les régulateurs impliqués ainsi que leur contrôle par la voie mTOR n’ont jamais été identifiés avec précision. Dans ce travail, nous avons montré que La-related protein 1 (Larp1), une protéine de liaison à l’ARN cible de mTOR, est indispensable à l’inhibition de la traduction des ARNm 5’TOP en aval de mTOR. De plus, Larp1 semble participer à l’inhibition de la formation du complexe d’initiation de la traduction eIF4F, qui est responsable du recrutement du complexe de pré-initiation 43S sur la coiffe m7G présente à l’extrémité 5’ de tous les ARNm. Nous avons également démontré que Larp1 peut se lier à la protéine Poly(A)-Binding Protein (PABP) et à la protéine de la petite sous-unité ribosomique RPS6 et que cette dernière interaction diminue lorsque les sites de phosphorylation de Larp1 dépendants de mTOR Ser 689 et 697 sont mutés en alanine. Ces résultats représentent une avancée importante dans la compréhension de la régulation de la traduction des ARNm 5’TOP par la voie mTOR. Cependant, des études complémentaires sont nécessaires afin de comprendre plus en détail le mécanisme exact par lequel Larp1 réprime la traduction des ARNm 5’TOP. / Ribosome biogenesis is a process that is finely tuned to adapt to nutrients and growth factors availability as well as to cellular stress and insults. Ribosomal proteins, the protein component of ribosomes, are encoded by 5’ Terminal Oligopyrimidine (5’TOP) mRNAs. A key step in ribosome biogenesis is the up-regulation of the translation of 5’TOP mRNAs. Although the mechanistic Target of Rapamycin (mTOR) pathway have been known for decades to promote 5’TOP mRNAs translation, the regulators involved and their control by the mTOR pathway remains obscure. In this work we demonstrated that La-related protein 1 (Larp1), an RNA-binding protein and substrate of mTOR, is necessary for the inhibition of 5’TOP mRNAs translation downstream of mTOR. In particular Larp1 seems to interfere with the formation of the translation initiation complex eIF4F, which is responsible for the recruitment of the 43S preinitiation complex to the m7G cap present at the 5’ end of mRNAs. Furthermore we found that Larp1 interacts with the protein Poly(A)-Binding Protein (PABP) and with the small ribosomal subunit protein RPS6 and that the latter interaction is decreased by mutation to alanine of the mTOR-dependent phosphorylation sites Ser 689 and 697. These findings are an important contribution to the understanding of the regulation of the translation of 5’TOP mRNAs by the mTOR pathway. Nevertheless more studies will be needed in order to dissect the mechanism by which Larp1 represses translation of 5’TOP mRNAs.

La biogenèse des ribosomes est un processus complexe finement régulé pour s’adapter à la disponibilité en nutriments et en facteurs de croissance ainsi qu’à la présence éventuelle de stress. Une étape clé de la régulation de la biogenèse des ribosomes se fait par la régulation de la traduction des ARNm 5’ Terminal OligoPyrimidine (5’TOP) qui codent pour les protéines ribosomiques. Bien que la voie de signalisation mechanistic Target of Rapamycin (mTOR) ait été identifiée depuis des décennies comme activatrice de cette traduction des ARNm 5’TOP, les régulateurs impliqués ainsi que leur contrôle par la voie mTOR n’ont jamais été identifiés avec précision. Dans ce travail, nous avons montré que La-related protein 1 (Larp1), une protéine de liaison à l’ARN cible de mTOR, est indispensable à l’inhibition de la traduction des ARNm 5’TOP en aval de mTOR. De plus, Larp1 semble participer à l’inhibition de la formation du complexe d’initiation de la traduction eIF4F, qui est responsable du recrutement du complexe de pré-initiation 43S sur la coiffe m7G présente à l’extrémité 5’ de tous les ARNm. Nous avons également démontré que Larp1 peut se lier à la protéine Poly(A)-Binding Protein (PABP) et à la protéine de la petite sous-unité ribosomique RPS6 et que cette dernière interaction diminue lorsque les sites de phosphorylation de Larp1 dépendants de mTOR Ser 689 et 697 sont mutés en alanine. Ces résultats représentent une avancée importante dans la compréhension de la régulation de la traduction des ARNm 5’TOP par la voie mTOR. Cependant, des études complémentaires sont nécessaires afin de comprendre plus en détail le mécanisme exact par lequel Larp1 réprime la traduction des ARNm 5’TOP. / Ribosome biogenesis is a process that is finely tuned to adapt to nutrients and growth factors availability as well as to cellular stress and insults. Ribosomal proteins, the protein component of ribosomes, are encoded by 5’ Terminal Oligopyrimidine (5’TOP) mRNAs. A key step in ribosome biogenesis is the up-regulation of the translation of 5’TOP mRNAs. Although the mechanistic Target of Rapamycin (mTOR) pathway have been known for decades to promote 5’TOP mRNAs translation, the regulators involved and their control by the mTOR pathway remains obscure. In this work we demonstrated that La-related protein 1 (Larp1), an RNA-binding protein and substrate of mTOR, is necessary for the inhibition of 5’TOP mRNAs translation downstream of mTOR. In particular Larp1 seems to interfere with the formation of the translation initiation complex eIF4F, which is responsible for the recruitment of the 43S preinitiation complex to the m7G cap present at the 5’ end of mRNAs. Furthermore we found that Larp1 interacts with the protein Poly(A)-Binding Protein (PABP) and with the small ribosomal subunit protein RPS6 and that the latter interaction is decreased by mutation to alanine of the mTOR-dependent phosphorylation sites Ser 689 and 697. These findings are an important contribution to the understanding of the regulation of the translation of 5’TOP mRNAs by the mTOR pathway. Nevertheless more studies will be needed in order to dissect the mechanism by which Larp1 represses translation of 5’TOP mRNAs.