Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O câncer colorretal (CCR) é o terceiro tipo de câncer mais incidente no mundo para o sexo masculino, o segundo para o sexo feminino e a radioterapia é um dos tratamentos de primeira linha no combate a este tipo de câncer. Durante a progressão do CCR as células sofrem alterações morfogenéticas, sendo a desorganização do complexo juncional apical (CJA) um dos eventos iniciais desse processo. As junções oclusivas (JTs) são um dos principais componentes da CJA e desempenham papel importante no controle do fluxo paracelular, na determinação da polaridade celular e na transdução de sinais relacionados com a progressão tumoral. As claudinas são proteínas transmembrana, constituintes das JTs e cumprem um importante papel no controle desses eventos. Alterações na expressão das claudinas são observadas em tumores de diferentes órgãos e têm sido relacionadas com a progressão tumoral. No entanto os mecanismos que regulam essas alterações e sua consequência na progressão do CCR são poucos conhecidos. Desta forma, o presente estudo teve como objetivo avaliar a influência da superexpressão da claudina-3 na radiorresposta de células CCR. Nossos resultados mostraram que a superexpressão de claudina-3 minimiza alterações morfológicas causadas pela radiação, causa diminuição da resistência elétrica transepitelial e não tem efeito na permeabilidade a macromoléculas após a irradiação. Além disso, observamos que a superexpressão de claudina-3 aumenta o potencial proliferativo das células e que esta característica torna as células mais sensíveis a radiação. Porém quando avaliamos eventos celulares relacionados a progressão tumoral observamos que apesar da radiação diminuir a capacidade migratória das progênies, as células que superexpressam claudina-3 apresentam migração mais elevada. Além disso, verificamos que a superexpressão de claudina-3 diminui a invasão e a capacidade de formação de colônias frente ao tratamento com a radiação. Em seguida fomos avaliar o efeito da inibição das vias de proliferação (MEK/ERK) e sobrevivência (PI3K-Akt) na resposta das células que superexpressam claudina-3 frente a radiação. Observamos que a inibição de MEK é capaz de sensibilizar as células que superexpressam claudina-3 à radiação no ensaio de proliferação celular, no entanto a inibição de MEK e PI3K antes da exposição à radiação é capaz aumentar a migração e a capacidade de formação de colônias de células que superexpressam claudina-3 contribuindo para o aumento do potencial maligno. Em conjunto nossos resultados mostram que a superexpressão de claudina-3 contribui para um fenótipo mais maligno, no entanto frente ao tratamento com a radiação é capaz de sensibilizar as células. / Colorectal cancer (CRC) is the third more incident cancer for males, the second for females worldwide and radiotherapy is one of the first-line treatments to fighting this type of cancer. During the progression of CRC cells undergo morphogenetic alterations and the apical junctional complex disorganization (AJC) is one of the initial events of this process. The tight junctions (TJs) is a major component of AJC and play an important role in paracellular flux control, determination of cell polarity and in signal transduction related to tumor progression. Claudins are transmembrane proteins, members of TJs and play an important role on these events. Changes on claudins expression are found in tumors of different organs and have been associated with tumor progression. However the mechanisms that regulate these changes and their consequences in the CRC progression are not completely understood. Thus, this study aimed to evaluate the influence of claudin-3 overexpression on cellular response after radiation treatment of CRC cells. Our results show that claudin-3 overexpression minimizes morphological changes caused by the radiation, decrease transepithelial electrical resistance, and has no effect on macromolecules permeability after irradiation. Moreover, we observed that claudin-3 overexpression increases the proliferation rate of cells and that this feature makes the cells more sensitive to radiation. However, when evaluating the cellular events associated tumor progression we observed that despite decrease on migratory capacity caused by radiation, cells that overexpress claudin-3 have higher migration. In addition, we found that claudin-3 overexpression decreases the invasion and the capacity to form colonies after treatment with radiation. Then we evaluate the effect of inhibition of proliferation (MEK / ERK) and survival (PI3K-Akt) pathways in cells that overexpress claudin-3 in the response to radiation. We observed that inhibition of MEK could sensitize cells overexpressing claudin-3 radiation on cell proliferation assay, but the inhibition of MEK and PI3K before radiation exposure can increase the migration and colony forming ability cells overexpressing claudin-3 contributes to the increase of malignant potential. Altogether, our results show that claudin-3 overexpression contributes to a more malignant phenotype, however, claudin-3 overexpression is able to sensitize the cells to radiation.

Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O câncer colorretal (CCR) é o terceiro tipo de câncer mais incidente no mundo para o sexo masculino, o segundo para o sexo feminino e a radioterapia é um dos tratamentos de primeira linha no combate a este tipo de câncer. Durante a progressão do CCR as células sofrem alterações morfogenéticas, sendo a desorganização do complexo juncional apical (CJA) um dos eventos iniciais desse processo. As junções oclusivas (JTs) são um dos principais componentes da CJA e desempenham papel importante no controle do fluxo paracelular, na determinação da polaridade celular e na transdução de sinais relacionados com a progressão tumoral. As claudinas são proteínas transmembrana, constituintes das JTs e cumprem um importante papel no controle desses eventos. Alterações na expressão das claudinas são observadas em tumores de diferentes órgãos e têm sido relacionadas com a progressão tumoral. No entanto os mecanismos que regulam essas alterações e sua consequência na progressão do CCR são poucos conhecidos. Desta forma, o presente estudo teve como objetivo avaliar a influência da superexpressão da claudina-3 na radiorresposta de células CCR. Nossos resultados mostraram que a superexpressão de claudina-3 minimiza alterações morfológicas causadas pela radiação, causa diminuição da resistência elétrica transepitelial e não tem efeito na permeabilidade a macromoléculas após a irradiação. Além disso, observamos que a superexpressão de claudina-3 aumenta o potencial proliferativo das células e que esta característica torna as células mais sensíveis a radiação. Porém quando avaliamos eventos celulares relacionados a progressão tumoral observamos que apesar da radiação diminuir a capacidade migratória das progênies, as células que superexpressam claudina-3 apresentam migração mais elevada. Além disso, verificamos que a superexpressão de claudina-3 diminui a invasão e a capacidade de formação de colônias frente ao tratamento com a radiação. Em seguida fomos avaliar o efeito da inibição das vias de proliferação (MEK/ERK) e sobrevivência (PI3K-Akt) na resposta das células que superexpressam claudina-3 frente a radiação. Observamos que a inibição de MEK é capaz de sensibilizar as células que superexpressam claudina-3 à radiação no ensaio de proliferação celular, no entanto a inibição de MEK e PI3K antes da exposição à radiação é capaz aumentar a migração e a capacidade de formação de colônias de células que superexpressam claudina-3 contribuindo para o aumento do potencial maligno. Em conjunto nossos resultados mostram que a superexpressão de claudina-3 contribui para um fenótipo mais maligno, no entanto frente ao tratamento com a radiação é capaz de sensibilizar as células. / Colorectal cancer (CRC) is the third more incident cancer for males, the second for females worldwide and radiotherapy is one of the first-line treatments to fighting this type of cancer. During the progression of CRC cells undergo morphogenetic alterations and the apical junctional complex disorganization (AJC) is one of the initial events of this process. The tight junctions (TJs) is a major component of AJC and play an important role in paracellular flux control, determination of cell polarity and in signal transduction related to tumor progression. Claudins are transmembrane proteins, members of TJs and play an important role on these events. Changes on claudins expression are found in tumors of different organs and have been associated with tumor progression. However the mechanisms that regulate these changes and their consequences in the CRC progression are not completely understood. Thus, this study aimed to evaluate the influence of claudin-3 overexpression on cellular response after radiation treatment of CRC cells. Our results show that claudin-3 overexpression minimizes morphological changes caused by the radiation, decrease transepithelial electrical resistance, and has no effect on macromolecules permeability after irradiation. Moreover, we observed that claudin-3 overexpression increases the proliferation rate of cells and that this feature makes the cells more sensitive to radiation. However, when evaluating the cellular events associated tumor progression we observed that despite decrease on migratory capacity caused by radiation, cells that overexpress claudin-3 have higher migration. In addition, we found that claudin-3 overexpression decreases the invasion and the capacity to form colonies after treatment with radiation. Then we evaluate the effect of inhibition of proliferation (MEK / ERK) and survival (PI3K-Akt) pathways in cells that overexpress claudin-3 in the response to radiation. We observed that inhibition of MEK could sensitize cells overexpressing claudin-3 radiation on cell proliferation assay, but the inhibition of MEK and PI3K before radiation exposure can increase the migration and colony forming ability cells overexpressing claudin-3 contributes to the increase of malignant potential. Altogether, our results show that claudin-3 overexpression contributes to a more malignant phenotype, however, claudin-3 overexpression is able to sensitize the cells to radiation.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-11-07T17:19:42Z No. of bitstreams: 1 JoaoHenrique Oliveira Reis Avaliação de Biomarcadores de risco em pacientes con anemia falciforme....pdf: 1377034 bytes, checksum: 7f73cec9e7b7d96382bf9705d9a5ad51 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-07T17:19:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JoaoHenrique Oliveira Reis Avaliação de Biomarcadores de risco em pacientes con anemia falciforme....pdf: 1377034 bytes, checksum: 7f73cec9e7b7d96382bf9705d9a5ad51 (MD5) Previous issue date: 2013 / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil. / Os indivíduos com anemia falciforme (HbSS) possuem quadro clínico heterogêneo, com alterações múltiplas em órgãos ou tecidos, que são secundárias a hemólise contínua e aos fenômenos de vaso-oclusão, sendo estes últimos decorrentes da falcização dos eritrócitos e da ativação de moléculas na superfície de leucócitos, plaquetas e células endoteliais, além do aumento de proteínas plasmáticas inflamatórias. O presente estudo teve como objetivo avaliar biomarcadores relacionados ao prognóstico em pacientes HbSS hospitalizados em crise e no estado estável, de maneira a identificar marcadores de risco para cada uma dessas fases da doença. A casuística foi composta por 31 pacientes HbSS em crise e 45 em estado estável provenientes do hospital pediátrico das Obras Sociais irmã Dulce (HPOSID) e da Fundação de Hematologia e Hemoterapia do estado da Bahia (HEMOBA), respectivamente. O estudo foi aprovado pelo CEP do CPqGM da FIOCRUZ e os dados clínicos foram obtidos a partir da consulta aos prontuários médicos. A dosagem sorológica de citocinas, quimiocinas e moléculas de adesão (ICAM-1s e VCAM-1s) solúveis foram realizadas pela reação de ELISA. A análise de moléculas na superfície dos leucócitos foi investigada por citometria de fluxo. A citocina IL-1β teve correlação negativa significativa com a fração de LDL-c (r=0,450, p=0,011) nos pacientes HbSS em crise. Correlações positivas significativas foram observadas para a análise entre VCAM-1s e ácido úrico (r=0,547, p=0,002), triglicérides e IL6 (r=0,547, p=0,00). Em relação ao parâmetro HDL-c foi verificado que os pacientes que apresentaram níveis menores do que a média (percentil <50) tiveram risco de 11,6 vezes maior de desenvolver vaso-oclusão. Os pacientes HbSS que apresentaram níveis ≥ a média (percentil ≥50) das citocinas IL-12 e IL-8 tiveram risco maior para o desenvolvimento de crise álgica. Os pacientes HbSS em crise apresentaram níveis mais elevados para a AST e LDH quando comparados aos pacientes HbSS no estado estável; e os níveis de colesterol total, HDL-c e LDL-c foram menores nos pacientes HbSS em crise que nos pacientes no estado estável. Os níveis da citocina TNF-α estiveram associados aos níveis elevados de VCAM-1s, IL-1 e IL-10 nos pacientes em crise, quando comparados aos pacientes no estado estável. Com base nos resultados, pode-se concluir que a citocina TNF-α está associada a elevação sérica de VCAM-1s nos pacientes HbSS em crise; o nível de triglicerídeos foi considerado fator protetor para o desenvolvimento de infecção nos pacientes HbSS em crise. Os pacientes que apresentaram níveis menores do que a média de HDL-c tiveram risco maior para o desenvolvimento de vaso-oclusão. Os pacientes HbSS que apresentaram níveis superiores a média de VCAM-1s apresentaram risco elevado para vaso-oclusão, tanto no estado estável quanto em crise. Verificou-se que existe correlação positiva significativa entre ácido úrico e VCAM-1s. Em conjunto, os nossos resultados indicam que moléculas distintas estão associadas ao período estável e de crise nas duas fases da HbSS investigadas, de forma a constituirem elementos importantes para estratégias voltadas ao desenho de fármacos e ao monitoramento clínico destes pacientes / Sickle cell anemia (HbSS) individuals have heterogeneous clinical picture, with multiple changes in organs or tissues, which are secondary to ongoing hemolysis and vaso-occlusive phenomena, the latter are due to sickling of erythrocytes and molecules activation on the leukocytes, platelets and endothelial cells surface, as well as an increase of inflammatory plasma proteins. The aim of this study was evaluate biomarkers related to prognosis in HbSS patients hospitalized in crisis and in steady-state in order to identify markers of risk for each of these disease stages. A total of 31 HbSS patients in crisis and 45 in steady-state from the pediatric hospital of Obras Sociais irmã Dulce (HPOSID) and the Fundação de Hematologia e Hemoterapia Bahia state (HEMOBA) were studied respectively. The study was approved by the Research Board of CPqGM/FIOCRUZ and clinical data were obtained from medical records. Serum levels of cytokines, chemokines and solubles adhesion molecules (ICAM-1s and VCAM-1s) were investigated by ELISA. The analysis of leukocyte surface molecules was investigated by flow cytometry. The cytokine IL-1β had a significant negative correlation with the fraction of LDL-C (r = 0.450, p = 0.011) in HbSS patients in crisis-state. Significant positive correlations were observed for the analysis of VCAM-1s and uric acid (r = 0.547, p = 0.002), triglycerides and IL6 (r = 0.547, p = 0.00). Regarding the parameter HDL-C was found that patients who had lower than average (percentile <50) had 11.6 fold greater risk of developing vascular occlusion. HbSS patients who had levels ≥ average (percentile ≥ 50) cytokine IL8 and IL12 had a greater risk for the development of painful crises. Patients HbSS in crisis-state had higher levels for AST and LDH compared to HbSS steady-state patients and the levels of total cholesterol, HDL-c and LDL-c were lower in HbSS patients in crisis-state than in patients in steady-state. Levels of the cytokine TNF-α were associated with elevated levels of VCAM-1s, IL-1  and IL-10 in patients in crisis-state when compared with patients in steady-state. Based on the results, we can conclude that the cytokine TNF-α is associated with an increase of serum VCAM-1s in HbSS patients in crisis-state, the triglyceride level was considered a protective factor against the development of infection in patients in crisis-state. HbSS patients with HDL-C levels lower than average had an increased risk for the vaso-occlusion development. HbSS patients who had higher than average levels of VCAM-1s showed elevated risk for vaso-occlusion in both steady-state and in crisis-state. It has been found that there is positive correlation between uric acid and VCAM-1s. Based on the results, it is concluded that different molecules are associated with the steady and crisis-state, the two stages studied in HbSS, which can constitute an important element in the design of drugs strategies of and clinical monitoring of these patients

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-10-29. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:34Z : No. of bitstreams: 1 Publico-018.pdf: 1910669 bytes, checksum: a40b61267560276f1db47642341c6e56 (MD5) / Introdução: Polimorfismos genéticos estão associados com um aumento do risco de tromboembolismo venoso (TEV) e outras doenças cardiovasculares. Estudos prévios sugerem que a doença venooclusiva hepática (DVOH), que se desenvolve intra transplante de medula óssea pode ser atribuída à polimorfismos gênicos. Objetivos: Avaliar a correlação entre polimorfismos genéticos e o risco de doença venooclusiva hepática no transplante de medula óssea e a associação com a presença de variáveis como o uso de vancomicina, drogas citotóxicas usadas no regime de condicionamento, presença de disfução hepática anterior ao transplante, presença de infecção por citomegalovírus, e grupos de doenças avaliáveis. Pacientes e métodos: Este estudo caracteriza-se por um estudo clinico observacional multicêntrico. Foram avaliados 120 pacientes, submetidos a transplante alogênico de medula óssea. Cada paciente foi avaliado propectivamente para DVOH, confirmado pelo critério de Seattle modificado, idade variando de 2 a 65 anos. Fatores de risco para DVOH severo foram analisados usando modelos estatisticos de avaliação. Detectamos simultaneamente através de PCR seguido de digestão e detecção através de eletroforese em gel de agarose, mutação do HFE C282Y, H63D, S65C; MTHFR C677T; Fator V de Leiden, Protrombina 20210A e glutationa S-tranferase. Resultados: Neste estudo observacional de pessoas, submetidas a transplante de medula óssea alogênico, a presença de disfução hepática pré transplante foi um fator de risco significante para DVOH. Nós tambem observamos uma associação entre a presença de mutação HFE S65C e disfunção hepática. Conclusões: Em resumo, nossos dados sugerem que disfunção hepatica observada pré transplante de medula óssea é um fator de risco estatisticamente significante para DVOH e que a presença da mutação do HFE S65C apresenta uma tendência ao desenvolvimento de dano hepático. Contudo, não evidenciamos associação dos polimorfismos estudados com DVOH. / TEDE