Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La lapa (Fissurella sp.) es uno de los moluscos gastrópodos extraídos habitualmente para el consumo humano. Su captura desde los bancos naturales ha aumentando progresivamente en los últimos años, debido a sus características físico-organolépticas muy similares al loco (Concholepas concholepas) y al abalone (Haliotis sp.). El alza en los precios y el consecuente aumento de las exportaciones, sumado a la falta de vedas, hacen pensar en una posible crisis de este recurso en el futuro. Tanto para el manejo sustentable de las especies, como para el desarrollo de procedimientos de cultivo de ellas, es necesario conocer los procesos reproductivos y de crecimiento, y su regulación. Los objetivos de este trabajo fueron describir histológicamente el ovario, caracterizando los diversos estados de madurez gonadal de esta especie; detectar la presencia de progesterona en la gónada y analizar si existe relación entre la concentración hormonal con el estado de madurez gonadal. Se trabajó con 12 lapas hembras, mayores de 45 mm de longitud de concha, recolectadas en el sector de Montemar (V Región), mensualmente durante agosto, octubre y diciembre de 1997; febrero y abril de 1998 (total n=60). Luego de identificar las hembras, se registró la longitud y ancho de la concha, peso total, peso blando del animal y el de cada ovario, determinándose el Indice Gonadosomático: relación peso de la gónada con respecto al peso total de las partes blandas. Se observó que presentan dos períodos de evacuación de gametos, en relación al valor de IGS: el principal en el mes de diciembre (6,73) y otro menor en agosto (7,98), calificados histológicamente como desoves parciales y no totales como ocurre en otras especies de lapas. Además, se registró un incremento del IGS de mayor magnitud en el mes de octubre (9,95) y otro secundario en febrero (8,80). El análisis histológico del ovario de cada individuo, se realizó obteniendo una muestra de 5 a 8 mm de tejido gonadal que se fijó en Bouin alcohólico. Cortes histológicos de 5 grosor, fueron teñidos con Hematoxilina–Eosina. Adicionalmente, con el objeto de diferenciar en forma clara y selectiva los diversos elementos que comprenden el estroma ovárico, se realizaron 2 tinciones complementarias: Van Gieson para la identificación de fibras colágenas y PAS (Ácido Peryódico Shiff) para glicosaminoglicanos. El estudio de los cortes histológicos de los ovarios se dividió en dos partes principales: la primera, fue realizar una descripción de la línea germinal de F. crassa, reconociéndose una Línea Germinal Temprana (LGT) y una Línea Germinal Avanzada (LGA). La segunda, fue clasificar los cinco estados de madurez histológica del ovario: inmaduro E° 0, en maduración temprana E°1, en maduración avanzada E° 2, maduro E°3 y desove E° 4, según las características de la línea germinal y estructurales de la gónada. Durante los meses en estudio se encontraron presentes todos los tipos celulares que comprenden la LGT y LGA, en los cinco diferentes estados de madurez ovárica, caracterizados por un predominio celular diferente, según la época del año. De acuerdo al análisis de la estructura gonadal macro y microscópica observada, se puede concluir que Fissurella crassa posee similares características morfológicas, reproductivas y gametogénicas que otras especies de la familia Fissurellidae. Finalmente, con el objeto de estimar la concentración de progesterona, se tomaron 2; 1 ó 0,5 gramos de gónada respectivamente, según el peso de cada ovario y posteriormente se congelaron a - 20°C, hasta su procesamiento. La progesterona contenida en la fracción lipídica del tejido gonadal se obtuvo mediante triple extracción con diclorometano al 99,5 %, que luego se evaporó a sequedad, obteniéndose un extracto seco, el cual fue resuspendido con buffer PBS 0,01 M a pH 7,4 a partir del cual se realizó el radioinmunoanálisis (RIA) (D.P.C., Coat-A-Count ®). La concentración promedio mensual de progesterona, fue mayor en el mes de agosto (1,75 pmol/g ovario) y menor en el mes de febrero (1,19 pmol/g ovario). El análisis estadístico (ANDEVA y Test de Tukey) indicó que existe diferencia significativa (p<0,05) en la concentración de progesterona, entre los meses de agosto y abril con respecto a diciembre y febrero; la muestra de octubre no difiere significativamente del resto de los meses. Además, se encontró que no existe una fuerte correlación entre el grado de madurez del ovario y la concentración de progesterona (Correlación de Pearson = 0,56). Los resultados obtenidos en el presente estudio, todavía no permiten establecer el papel que cumple esta hormona en el ciclo reproductivo de Fissurella crassa. Lo más probable es que existan además de la progesterona, otros factores neuroendocrinos, de naturaleza tanto esteroidal como proteica, relacionados con el ciclo reproductivo de esta especie

Tesis para optar al grado académico de Magíster en Bioquímica, área de especialización Bioquímica de Proteínas y Biotecnología, y Memoria para optar al título de Bioquímico / La respuesta inmune de invertebrados se basa en un conjunto de elementos del sistema inmune innato, donde los péptidos antimicrobianos (AMPs) juegan un importante rol. Los AMPs son moléculas anfifílicas que se almacenan en el interior de los hemocitos o circulan libremente en la hemolinfa. Su efectividad en la defensa innata se basa en su baja especificidad, actuando contra un amplio rango de microorganismos; su pequeño tamaño y baja toxicidad abren potenciales aplicaciones como nuevos antibióticos, con la ventaja de que no hay evidencia de bacterias resistentes a ellos. Considerando la diversidad de moluscos marinos en nuestras costas, la hipótesis de este trabajo ha sido que existen AMPs en la hemolinfa o hemocitos de moluscos chilenos comestibles. Mediante ensayos en medio sólido, encontramos que extractos de hemocitos de Concholepas y especies de Lapas del género Fissurellidae, exhiben actividad AM contra V. parahaemolyticus y E. coli, ambas cepas Gram negativas. A través de análisis mediante microscopia electrónica, caracterizamos los hemocitos y encontramos al menos dos tipos celulares que presentan diferentes tipos de gránulos electrón-densos en su citoplasma, que de acuerdo a lo descrito en la literatura podrían almacenar AMPs. La caracterización y purificación de los extractos de hemocitos mediante métodos electroforéticos mostró un péptido principal de 3,7 kDa, y los estudios cromatográficos indican la presencia de AMPs de naturaleza hidrofóbica. La identificación de estos péptidos esta en progreso, y se espera a futuro iniciar su utilización en alguna aplicación biomédica o biotecnológica / The immune response of invertebrates relies on elements of the innate immune system, among them, antimicrobials peptides (AMPs) play a relevant role. They are amphiphilic molecules that are accumulated inside the hemocytes or are circulating freely in the hemolymph. Their effectiveness in the innate defence relay in their low specificity, thus acting on a wide range of microorganism; its small size and low toxicity open potential applications as new antibiotics, with the advantage that there are no evidence of building resistant bacteria. Considering the diversity of Chilean mollusc marine species, we hypothesized that there are AMPs in hemolymph or hemocytes of Chilean commercial molluscs. Using solid agar plate assays, we found that extracts of hemocytes from Concholepas and limpets of the Fissurellidae genus, exhibit antibacterial activity against Vibrio parahaemolyticus and Escherichia coli both Gram negative bacteria. Through electron microscopic analysis, we characterized the hemocytes and found at least two cellular types bearing different kind of electron-dense granules, according to literature, these granules may contain AMPs. The characterization and purification of hemocytes extracts through electrophoresis showed the presence of a principal peptide of 3,7 kDa, and chromatographic methods indicate the presence of AMPs with hydrophobic nature. The identification of these peptides is in progress to assess their utilization in some biomedical and biotechnological applications / Fundación COPEC-Pontificia Universidad Católica CQ057 Fondecyt

Seminario de Título entregado a la Universidad de Chile en cumplimiento parcial de los requisitos para optar al Título de Químico Ambiental. / El contenido de Cd, Cu y Zn fue analizado en tejido blando de la lapa Fissurella sp., colectadas en abril de 2017 en la zona intermareal de la bahía de Chañaral, caleta Palito y caleta Pan de Azúcar, región de Atacama, Chile. Los organismos seleccionados fueron deshidratados, sometidos a digestión ácida y analizados por espectrofotometría de absorción atómica. En cuanto al tamaño de las lapas, estas se separaron en dos grupos, tamaños pequeños (1,06 g a 2,77 g) y grandes (9,19 g a 16,12 g), en donde las primeras presentaron una mayor retención de los metales Cu (873,94 μg/g) y Zn (143,11 μg/g), mientras que las lapas de mayor tamaño acumularon más Cd (17,09 μg/g). Se discutió las vías de incorporación de Cu, Cd y Zn en los tejidos de la lapa, así como otros factores externos que influyen en la captación de estos metales por parte del organismo, la influencia del tamaño, la ubicación de las fuentes de contaminación, como la importancia de la contaminación realizada en Chañaral anterior al año 1975. El análisis se realiza en lapas inmaduras (de menor tamaño) para una comparación entre sitios sin la influencia de cambios físicos asociados a la época reproductiva. Las concentraciones promedio de Cu, en las lapas pequeñas, fueron más elevadas en bahía de Chañaral (1955,58 μg/g), mientras que el Zn lo fue en la caleta Palito (285,76 μg/g) y el Cd levemente mayor en la caleta Pan de Azúcar (8,96 μg/g). Finalmente, se realizó un análisis de Cluster y de ACP, indicando que existen diferencias estadísticamente significativas entre los niveles de concentración de Cd, Cu y Zn en los tejidos de las lapas Fissurella sp. que habitan en la bahía de Chañaral, caleta Palito y la caleta Pan de Azúcar, siendo las lapas de la bahía de Chañaral, las más afectadas por la contaminación de estos metales. / The contents of Cd, Cu and Zn were analyzed in soft tissue of the Fissurella sp., collected in April 2017 in the intertidal zone corresponding to the Bahía Chañaral, Caleta Palito and Caleta Pan de Azúcar, Atacama region, Chile. The selected organisms were dehydrated, subjected to acid digestion and analyzed by atomic absorption spectrophotometry. As for the size of the limpets, these were separated into two groups, small sizes (1.06 g to 2.77 g) and large (9.19 g to 16.12 g) sizes, where the former had a higher retention of Cu 873.94 μg/g) and Zn (143.11 μg/g), while the larger scale limpets retained a little more Cd (17.09 μg/g). The pathways for incorporation of Cu, Cd and Zn into the tissues of the lapa were discussed, as well as other external factors that influence the organism's uptake of these metals, the influence of size, location of sources of contamination, such as the importance of pollution in Chañaral prior to 1975. The analysis is performed in immature (of smaller size) limpets for a comparison between sites without the influence of physical changes associated with the breeding season. Mean Cu concentrations in the small limpets were higher in Bahía Chañaral (1955.58 μg/g), while the Zn was in the Caleta Palito (285.76 μg/g) and the slightly higher Cd in the Caleta Pan de Azúcar (8.96 μg/g). Finally, a Cluster and PCA analysis was performed, indicating that there are statistically significant differences between the concentration levels of Cd, Cu and Zn in the tissues of the Fissurella sp. that live in the Bahía Chañaral, Caleta Palito and the Caleta Pan de Azúcar, being the limpets of the Bahía Chañaral, those most affected by the contamination of these metals.