Made available in DSpace on 2012-05-07T14:44:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000015.pdf: 2487327 bytes, checksum: 6520eb85095f58fb23d5988ebeb8a27a (MD5) Previous issue date: 2007 / A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença endêmica em Pernambuco (PE), onde a espécie circulante é a Leishmania (Viannia) braziliensis. As infecções por Leishmania apresentam uma resposta imune específica por parte do hospedeiro, dependente de células T, apresentando um perfil de citocinas Th1 e Th2. Neste estudo os objetivos foram avaliar a resposta linfoproliferativa e identificar a produção das citocinas IFN-g e IL-10 em células mononucleares do sangue periférico (PBMC) de 15 pacientes com LTA antes e 12 meses após o término do tratamento quimioterápico com GlucantimeÒ e de 10 indivíduos saudáveis (controle). Para avaliar a linfoproliferação foi utilizada timidina tritiada e para dosagem de citocinas, ELISA de captura. A resposta linfoproliferativa, bem como a produção de citocinas foram avaliadas frente a estímulos da fração antigênica solúvel de L. (V.) braziliensis (1,25 mg/ml), fitohemaglutinina (5 mg/ml) e concanavalina A (2,5 mg/ml) durante 5 dias e 48 horas, respectivamente. Os resultados mostraram que todos os indivíduos apresentaram proliferação celular em resposta aos mitógenos, não havendo diferença significativa entre os grupos. Em relação ao antígeno, nenhum indivíduo do grupo controle apresentou linfoproliferação. Os pacientes apresentaram elevada resposta proliferativa antes e após tratamento, embora sem diferença estatística ao comparar esses dois momentos. A análise na produção das citocinas IFN-g e IL-10 identificou diferença significativa ao comparar o grupo de pacientes em relação ao controle. Após tratamento quimioterápico, embora sem diferença estatística, a dosagem dos sobrenadantes dos pacientes revelou diminuição nos níveis de IFN-g e aumento de IL-10. Estes resultados indicam que os pacientes produziram uma resposta celular específica a fração antigênica solúvel de L. (V.) braziliensis, sugerindo que mecanismos de regulação imunológica com a participação de células T de memória e células T regulatórias, além da dicotomia Th1 x Th2 estão presentes na evolução clínica desses indivíduos.

SILVA, Cláudio Gleidiston Lima da. Avaliação da eficácia terapêutica do fluconazol na Leishmaniose tegumentar humana. 2012. 96 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-07-26T14:09:59Z No. of bitstreams: 1 2012_tese_cglsilva.pdf: 1330564 bytes, checksum: 104fa01b5458dfeac0d10d080d4ff283 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-08-06T11:55:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_tese_cglsilva.pdf: 1330564 bytes, checksum: 104fa01b5458dfeac0d10d080d4ff283 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-06T11:55:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_tese_cglsilva.pdf: 1330564 bytes, checksum: 104fa01b5458dfeac0d10d080d4ff283 (MD5) Previous issue date: 2012 / A leishmaniose é um grupo de doenças com um extenso espectro, cosmopolita, porém com ampla e significativa incidência na zona tropical. A leishmaniose apresenta-se sob duas formas, uma visceral envolvendo estruturas do sistema hemolinfopoiético; outra com envolvimento cutâneo e/ou mucoso, amiúde, sem visceralização. Esta última, conhecida como leishmaniose tegumentar (LT), alvo deste estudo, tem como um dos grandes problemas o tratamento, realizado mediante formulações injetáveis com risco de complicações no local da aplicação e o risco de danos às funções hepática e renal, além de alterações cardíacas. Vários ensaios mostram resultados satisfatórios utilizando o Fluconazol®. Visando a consolidar os resultados descritos na literatura, este estudo procurou demonstrar a eficácia terapêutica do Fluconazol® em altas doses no tratamento da LT, em pacientes de uma área endêmica no Sul do Estado do Ceará, Brasil, Município de Barbalha. Realizou-se um estudo prospectivo, randomizado, com dois grupos de pacientes. Sessenta do Grupo I fizeram uso de 300mg ou 450mg de Fluconazol® durante seis semanas. Sessenta do Grupo II fizeram uso de Glucantime com 20mg/kg/dia, durante 20 dias consecutivos. O diagnóstico de LT foi realizado com Imprint, cultura, biopsia com histopatológico corado pelo Giemsa e Imuno-histoquímica, e a Intradermorreação de Montenegro. Todos os pacientes foram avaliados clinicamente e acompanhados durante até 90 dias. As variáveis contínuas foram avaliadas pelo Test t de Student; para a correlação de variáveis, utilizou-se o Coeficiente de Correlação de Pearson (r). O tempo de cura de cada grupo teve sua avaliação realizada pelo método de Kaplan-Meier. Em todos os testes de hipótese o α foi considerado significante quando menor do que 5% (p < 0,05). A eficácia terapêutica (ET) foi calculada com base na redução do risco relativo. A população estudada era predominantemente constituída de indivíduos com faixa etária entre 30 e 40 anos de idade, cor de pele parda, rurícolas agricultores, com discreta prevalência do sexo feminino. Os resultados mostraram uma eficácia terapêutica de 38,7%. A cura teve relação com o tamanho da lesão, dados estatatiscamente representativos p< 0,0001. Lesões com tamanho inferior a 30 mm (isolada ou somatório de várias lesões), responderam prontamente ao Fluconazol®.

Made available in DSpace on 2012-05-07T15:26:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000002.pdf: 10706331 bytes, checksum: 67cfd02c18eea5bef8f461520c5f3b46 (MD5) Previous issue date: 2006 / Lutzomyia intermedia e Lutzomyia whitmani são transmissores de leishmanioses no Novo Mundo e Phlebotomus papatasi e Phlebotomus duboscqi no Velho Mundo. Neste estudo observamos e comparamos os aspectos morfológicos gerais e detalhados dos ovos e larvas de L. intermedia e L. whitmani. Estudamos também a microanatomia dos seus órgãos sensoriais nas larvas e nos adultos comparando-as com P. papatasi e P. duboscqi. Observações detalhadas do exocório dos ovos mostraram que ambas as espécies L. intermedia e L. whitmani possuem ornamentações de cristas não conectadas. Em geral, todas as fases larvais das duas espécies são similares. Contudo, algumas características distintas foram observadas, tais como: morfologia do lóbulo anal e padrão dos poros dos filamentos caudais. As larvas das duas espécies apresentaram uma antena lobular em L1, a qual é trocada para a forma digitiforme em L2 que persiste até a fase L4. Foram visualizados três tipos de sensilas nas larvas: basicônica clavada, celocônica (romba pequena e clavada multiporo) e tricóide (longa, pequena, longa curva, tipo escova, fracamente escova, longa multiporo). Nas antenas das fêmeas das quatro espécies estudadas foram encontrados cinco tipos de sensilas: celocônica (sulcada I, II e "mãos em prece"), tricóide (de ponta fina, de ponta romba e pequena), caética, escamiforme e campaniforme. Sensilas basicônicas foram encontradas somente para o gênero Phlebotomus. Poucas variações foram observadas nos tipos de sensilas das quatro espécies estudadas. Porém, diferenças foram observadas em quantidade e localização. Diferenças na dimensão dos segmentos antenais e da sensila caética foram também encontradas. Poros ou sulcos porosos foram visualizados na superfície dos filamentos caudais e na sensila celocônica clavada das larvas; e, na sensila caética e celocônica dos adultos, indicando a função de quimiorecepção. Este estudo poderá estabelecer novas bases para a taxonomia desses importantes vetores e poderá auxiliar no direcionamento adequado dos trabalhos de eletrofisiologia e de controle biológico com semioquímicos

PRACIANO, Claudênia Costa. Press imprint smear : um método simples, rápido e de baixo custo no diagnóstico de Leishmaniose cutânea. 2014. 80 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-01-27T11:01:27Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_ccpraciano.pdf: 2009797 bytes, checksum: 917bc1b9cc42e4e9dfece1dd9427da86 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-01-27T11:22:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_ccpraciano.pdf: 2009797 bytes, checksum: 917bc1b9cc42e4e9dfece1dd9427da86 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-27T11:22:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_ccpraciano.pdf: 2009797 bytes, checksum: 917bc1b9cc42e4e9dfece1dd9427da86 (MD5) Previous issue date: 2014 / The cutaneous leishmaniasis (CL) is the most common form of leishmaniasis, with 1 million new cases per year. Presents a broad clinical spectrum, which may be confused with other diseases that affect the skin. Thus, it is of fundamental importance to rapid and accurate diagnosis of the disease. Parasitological diagnosis is the most used test in laboratory routine, however direct examination generally has low sensitivity. As a result, it becomes necessary to find alternative techniques for the diagnosis of leishmaniasis. This study compared the test press imprint smear with histological examination and immunohistochemistry, for the direct diagnosis of leishmaniasis. Patients with clinical suspicion of LC underwent a sampling from two samples of biopsies from the edge of the lesions, with a punch of 3 mm for the tests: press imprint smear, histological examination and immunohistochemistry. The latter was considered the gold standard test. The press imprint smear consisted in crushing the biopsy fragment between two glass plates under pressure so that the extract (juice) tissue spreads on the surface of the two blades. The smears were stained with Giemsa for the detection of amastigotes. Another fragment was fixed in 10% formalin. From this sample, a blade was used in histology, stained with hematoxylin-eosin, and one for the immunohistochemical test. In total, 78 patients were included with clinical and epidemiological diagnosis of LC. The press imprint smear technique and histologic examination were conducted on the sample of all patients. However, immunohistochemistry was performed in only 73 samples. Seventy-two (98,6%) were positive for leishmania in immunohistochemistry, with sensitivity of 98,6%; the press imprint smear was positive in 48 patients (61,5%), with sensitivity of 58,3%. In the histological examination were identified amastigotes in 35 patients (44,9%), with sensitivity of 45,8%. The press imprint smear was more sensitive than histological examination for the diagnosis of cutaneous leishmaniasis. In addition, a technique is inexpensive and easy to perform. / A leishmaniose cutânea (LC) é a forma mais comum da leishmaniose, com 1 milhão de novos casos por ano. Apresenta um amplo espectro clínico, podendo ser confundida com outras doenças que acometem a pele. Desse modo, é de fundamental importância o diagnóstico rápido e preciso da doença. O diagnóstico parasitológico é o mais utilizado na rotina laboratorial, entretanto o exame direto geralmente apresenta baixa sensibilidade. Em virtude disso, torna-se necessário buscar técnicas alternativas para o diagnóstico das leishmanioses. Neste trabalho, comparou-se o teste do press imprint smear com o exame histológico e a imuno-histoquímica, no diagnóstico direto de leishmaniose cutânea. Pacientes com suspeita clinica de LC foram submetidos à coleta de duas biópsias da borda das lesões, com punch de 3 mm, para a realização dos testes: press imprint smear, exame histológico e imuno-histoquímica. Este último foi considerado o teste padrão ouro. O press imprint smear consistiu em esmagar o fragmento de biópsia entre duas lâminas de vidro sob pressão, de tal modo que o extrato (suco) tissular se espalha na superfície das duas lâminas. Os esfregaços foram corados com Giemsa, para pesquisa de amastigotas. Outro fragmento foi fixado em formalina a 10%. Desta amostra, uma lâmina foi utilizada no exame histológico, corada com hematoxilina-eosina, e outra para o teste de imuno-histoquímica. Ao total, foram incluídos 78 pacientes com diagnóstico clinico-epidemiológico de LC. A técnica do press imprint smear e o exame histológico foram realizados na amostra de todos os pacientes. Entretanto, a imuno-histoquímica foi realizada em apenas 73 amostras. Setenta e dois (98,6%) foram positivos para Leishmania na imuno-histoquímica, com sensibilidade de 98,6%; o press imprint smear foi positivo em 48 pacientes (61,5%), com sensibilidade de 58,3%. No exame histológico foram identificadas amastigotas em 35 pacientes (44,9%), apresentando sensibilidade de 45,8%. Os resultados mostraram que o press imprint smear apresentou maior sensibilidade do que o exame histológico, para o diagnóstico da leishmaniose cutânea. Além disso, é uma técnica de baixo custo e fácil execução.

Made available in DSpace on 2018-03-07T16:51:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) silvia_vasconcelos_ioc_mest_2017.pdf: 3587086 bytes, checksum: 4d78bababf4956d9a42fb96d0a2d0446 (MD5) / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma antropozoonose tropical negligenciada que acomete o homem e animais silvestres. A transmissão ocorre através da picada do flebótomo infectado com a Leishmania. A LTA tem apresentado elevada incidência em algumas regiões do estado do Piauí e tem despertado a atenção da vigilância epidemiológica e dos serviços de saúde por ser uma patologia relativamente recente no estado. A procura por potenciais vetores da leishmaniose tegumentar no Piauí é de grande importância entomológica e epidemiológica pela carência de estudos nessa área, o qual permitirá estratégias de controle destes insetos. O objetivo deste estudo foi identificar os potenciais vetores da LTA em áreas de surto na cidade de Altos, município este que tem apresentado altas taxas de detecção de casos da doença nos últimos dez anos. Para este estudo, foram listados os endereços com registros de notificação da doença por meio do Sistema de Informação de Agravos de Notificação. Foram instaladas armadilhas luminosas tipo CDC nas regiões com maior ocorrência de notificações, abrangendo zona urbana e zona rural. Oitenta e seis coletas foram realizadas em 12 bairros da cidade de Altos. As capturas ocorreram de outubro de 2016 a janeiro de 2017. O material capturado foi conduzido ao laboratório de entomologia para seleção dos flebótomos e preparo para identificação O método de preparo das espécies para identificação foi o de Young e Duncan (1994). Foram identificados 1.308 espécimes de flebótomos, sendo 1.300 de Lutzomyia longipalpis, 06 Lutzomyia whitmani, 01 Lutzomyia sordelli e 01 Lutzomyia carmelinoi. Destacou-se uma variação anatômica verificada em três espécimes de Lutzomyia longipalpis, o que demonstra o predomínio da referida espécie em Altos no período de captura. O presente trabalho traz uma contribuição ao identificar flebótomos presentes na cidade de Altos, entre eles Lutzomyia whitmani, flebótomo incriminado como transmissor da LTA no Brasil e nos ajuda a começar a entender os mecanismos de transmissão da LTA no Piauí / American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) is a neglected tropical zoonosis that affects humans and wild animals. Transmission occurs through the bite of the sandfly infected with Leishmania. ACL has a high incidence in some regions of Piauí state and it has attracted the attention of epidemiological surveillance and a health service is a relatively new disease in the state. The study of potential vectors of cutaneous leishmaniasis in Piaui still unknown and is of great epidemiological and entomological importance in this area and will enable control strategies. Previous studies have only address vectors of visceral leishmaniasis. The aim of this study was to identify potential vectors of American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) in an area of outbreak in the city of Altos. This municipality has shown a high case detection rate of ACL in the past decade. For this study, we initially accessed notification records of ACL through the Information System for Notifiable Diseases Later luminous type CDC traps were installed in regions with higher incidence of notifications, including urban and rural areas. A total of 86 sand fly captures were performed in 12 different neighborhoods in Altos, between October 2016 and January 2017. Captured sand flies were taken to an entomology laboratory for separation of sandflies and preparation for identification. Identification of sand fly species was performed according to Young and Duncan (1994). A total of 1.308 specimens were identified, including Lutzomyia longipalpis (n= 1.300), Lutzomyia whitmani (n= 06), Lutzomyia sordelli (n= 01) and Lutzomyia carmelinoi (n= 01). An anatomical variation was identified in three Lutzomyia longipalpis specimens, the predominant sand fly species in Altos. This work suggests that Lutzomyia whitmani, among the captured sandflies, might be responsible for transmitting ACL in Brasil contributing to the understanding of ACL transmission in Piauí

Submitted by Éder Freyre (eder.freyre@icict.fiocruz.br) on 2014-05-13T19:05:09Z No. of bitstreams: 1 Tese Matheus Fernandes Costa-Silva VERSÃO FINAL.pdf: 5012766 bytes, checksum: f7f611cddfc11239b281f2bab089aae4 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-13T19:05:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Matheus Fernandes Costa-Silva VERSÃO FINAL.pdf: 5012766 bytes, checksum: f7f611cddfc11239b281f2bab089aae4 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil. / A leishmaniose cutânea (LC) é uma doença inflamatória crônica causada por espécies dermotrópicas pertencentes aos subgêneros Viannia e Leishmania, sendo a L. (V.) braziliensis o principal agente etiológico no Brasil. O estabelecimento e evolução das lesões causadas pela infecção por L. (V.) braziliensis são altamente dependentes da imunidade celular, contudo um estudo que avalia o impacto da interação parasito-monócitos no perfil de resposta imune associado ao estabelecimento/manutenção da infecção em humanos ainda não foi realizado. Nesse contexto, o objetivo do trabalho foi caracterizar biomarcadores imunológicos, no sangue periférico e no infiltrado inflamatório de lesões cutâneas, em indígenas da comunidade Xakriabá portadores de LC (grupo LC) e com teste de Montenegro positivo sem lesão (grupo TM + sL), com intuito de melhor compreender os mecanismos imunológicos envolvidos na progressão dessa patologia, bem como dos eventos associados à resistência à infecção. A análise dos resultados mostrou que pacientes do grupo LC apresentaram menor capacidade em internalizar formas promastigotas vivas de L. (V.) braziliensis em relação ao grupo TM + sL. Além disso, observou-se que pacientes do grupo LC apresentaram perfil ativado, principalmente pelo maior percentual/Índice de Estimulação (IE) da molécula de ativação CD23, com produção de altos níveis de TNF-, provenientes de monócitos que não fagocitaram e fagocitaram formas promastigotas de L. (V.) braziliensis. Contudo, os níveis de TNF- correlacionaram de forma negativa com a produção de NO, sugerindo que essa citocina estaria muito mais associada ao desenvolvimento das lesões do que controle da doença. Por outro lado, pacientes do grupo TM + sL apresentaram maior equilíbrio entre a produção de citocinas inflamatórias (IL-12, IFN-, IL-17) e moduladoras (IL-10, IL-4) e sintetizaram maiores níveis de NO, indicando que esse perfil de resposta imune balanceada e efetora poderia combater a infecção sem provocar dano tecidual. A análise do perfil fenotípico-funcional de monócitos e linfócitos T CD4 + e CD8 + circulantes e de citocinas e quimiocinas no infiltrado inflamatório das lesões mostrou que o tempo de evolução da lesão teve grande influência no perfil de resposta imune dos pacientes do grupo LC. Nesse contexto, observou-se que monócitos e linfócitos T CD4 + e CD8 + circulantes de pacientes do grupo lesão recente apresentaram menor IE das moléculas de ativação CD23 e co-estimulação CD80, acompanhado pela menor produção das citocinas inflamatórias (TNF-, IL-17) e moduladoras (IL-10, TGF- e IL-4) em relação ao grupo lesão tardia. Por outro lado, observou-se que esses pacientes apresentaram maior capacidade fagocítica juntamente com maior IE de monócitos expressando os receptores CD16, TLR-2 e TLR-4 e produção de NO. A análise da resposta imune localizada mostrou que pacientes do grupo lesão recente apresentaram maiores níveis de transcritos de IL12B, IFNG, TNF, IL10, TGFB1, IL4, CCL2, CCL3, CCL5 e CXCL10, bem como maior carga parasitária em relação ao grupo lesão tardia. Os resultados obtidos no presente estudo forneceram informações importantes sobre a infecção causada pela L. (V.) braziliensis, permitindo a identificação e proposição de potenciais biomarcadores associados à resistência à LC (IL-12, IL-17 e NO) e ao desenvolvimento e manutenção da lesão (TNF-α). Além disso, esse foi o primeiro estudo que avaliou aspectos imunológicos da LC em uma população indígena brasileira. / Cutaneous leishmaniasis (CL) is a chronic inflammatory disease caused by dermotropic Leishmania species belonging to the Viannia and Leishmania subgenera, with Leishmania (V.) braziliensis considered the main agent in Brazil. The establishment and evolution time of the lesions caused by L. (V.) braziliensis infection are highly affected by the cellular immunity. However, a study evaluating the impact of parasite-monocyte interactions in the immune response profile associated with the establishment/maintenance of the infection in humans has not been previously performed. In this context, the aim of this study was to characterize immunological biomarkers in peripheral blood as well as in inflammatory infiltrate of cutaneous lesions from patients with CL (CL group) or with positive Montenegro skin test without injury (TM + sL group) living in the Xakriabá indigenous community, Minas Gerais, Brazil, in order to better understand the mechanisms involved in the disease progression as well as events associated with resistance to the infection. The results showed that CL group presented less ability to internalize promastigotes of L. (V.) braziliensis as compared with the TM + sL group. Furthermore, it was observed that patients of the CL group showed activated profile, with high percentage/Stimulation Index (SI) of CD23, and production of high levels of TNF- by monocytes that non phagocytized and phagocytized promastigotes of L. (V.) braziliensis. However, the levels of TNF- were negatively correlated with NO production, suggesting that this cytokine would be much more related to the development of lesions instead of disease control. On the other hand, patients from TM + sL group showed better balance between the production of inflammatory (IL-12, IFN-, IL-17) and modulatory (IL-10, IL-4) cytokines, and synthesized highest levels of NO, indicating that this balanced immune response profile may contribute to the infection resolution without causing tissue damage. The analysis of the phenotypic-functional profile of circulating monocytes, CD4 + , CD8 + T cells, and cytokines and chemokines in the inflammatory infiltrate of the cutaneous lesions showed that the evolution time of lesions had great influence in the immune response profile of the CL group. In this context, it was observed that circulating monocytes, CD4 + and CD8 + T lymphocytes of theith recent lesion group showed a lower SI of CD23 and CD80, accompanied by lower production of inflammatory (TNF-, IL-17) and modulatory (IL-10, TGF- and IL-4) cytokines as compared with late lesion group. On the other hand, it was observed that these patients showed greater phagocytic capability along with the highest SI of monocytes expressing CD16, TLR-2 and TLR-4, and NO production. The analysis of the localized immune response showed that patients of the recent lesion group presented higher transcript levels of IL12B, IFNG, TNF, IL10, TGFB1, IL4, CCL2, CCL3, CCL5 and CXCL10, as well as higher parasite burden as compared with late lesion group. This study has provided important information about the infection caused by L. (V.) braziliensis allowing the identification of potential biomarkers associated to the resistance to CL (IL-12, IL-17 and NO) and to the development and maintenance of the lesion (TNF-α). Furthermore, this was the first study that evaluated immunological aspects of CL in a Brazilian indigenous population.

Made available in DSpace on 2012-05-07T14:43:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000016.pdf: 4291233 bytes, checksum: f149ce1f280b020c58832d513c7acb8b (MD5) Previous issue date: 2007 / O presente estudo teve como objetivo caracterizar a eco-epidemiologia da leishmaniose tegumentar americana no município de São Vicente Férrer, Zona da Mata Norte de Pernambuco, visando identificar e incriminar hospedeiros reservatórios silvestres e ou domésticos envolvidos na manutenção da endemia, identificar a(s) espécie (s) de Leishmania circulantes e identificar as espécies de flebotomíneos. No período de dezembro de 2002 a novembro de 2003, foram realizadas capturas de flebotomíneos, através de coleta manual, com armadilha de Shannon, e armadilhas luminosas CDC. Os animais silvestres foram capturados com armadilhas do tipo Tomahawk, no período de março a outubro de 2006. Um inquérito epidemiológico foi realizado com cães onde foi aplicado um questionário. Na ocasião foi coletado material de medula óssea para confecção de lâminas e realização da PCR onde obtivemos um cão positivo. Outro inquérito epidemiológico foi realizado na população humana da localidade de Mundo Novo onde de um total de 181 pacientes, 68 (37,6 por cento) foram positivos para IDRM. Um isolado foi obtido de paciente e a cepa caracterizada através de isoenzimas e anticorpos monoclonais como sendo L. (V.) brazileinsis. Dos 118 animais silvestres e sinatropicos examinados 22 (9,32 por cento) foram positivos L. (V.) braziliensis de três espécies diferentes: Nectomys squamipes, Rattus rattus e Holochilus sciureus. Foi realizado também um isolamento de L. braziliensis, caracterizado através de anticorpos monoclonais, obtido através de hamster incoculado com material do animal silvestre Nectomys squamipes. 23.156 exemplares de flebotomíneos foram coletados em resquícios de Mata Atlântica, domicílios e peridomicílios, dos quais L. complexa obteve predominância com 14.445 (62,5 por cento) do total, seguido de L. migonei, com 7.677 (33,2 por cento). L. whitmani, vetor de L. (V.) braziliensis foi encontrado em baixa densidade nesta região.

Made available in DSpace on 2015-05-15T13:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 215.pdf: 2592111 bytes, checksum: 804f8cb6e33b01bf63dd4d4e6914d708 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 / Dentre os diversos problemas associados à leishmaniose tegumentar americana (LTA), a dificuldade para a obtenção do diagnóstico exerce destaque pelos vários métodos associados para que se obtenha sua definição. A coleta do material biológico tem papel fundamental neste processo, tendo em vista a severidade das lesões aliada às comuns infecções secundárias observadas. O método de coleta empregado no serviço de saúde baseia-se no raspado da lesão e na obtenção de biópsia do local lesionado, caracterizado por promover riscos aos pacientes O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia do método de coleta de amostra biológica através do swab para ao diagnóstico molecular da LTA. Entre os meses de março de 2011 a junho de 2012 foram selecionados 88 pacientes, dos quais foram coletadas amostras de biópsia, exsudatos cutâneos através do swab e raspado cutâneo. As amostras de biópsia e exsudatos foram avaliadas através da reação em cadeia da polimerase tendo como alvo o minicírculo do DNA do cinetoplasto (kDNA) de Leishmania. As amostras de raspado cutâneo foram avaliadas através da pesquisa direta microscópica do parasito. O perfil epidemiológico dos pacientes revelou a predominância da doença em indivíduos do sexo masculino (57,8 por cento) e as faixas etárias acometidas com predominância foram a jovem e adulto, sendo 40,36 anos a média das idades. A maioria dos pacientes foi procedente do município de Moreno, região metropolitana do Recife (70/ 79,54 por cento). Foram observadas majoritariamente lesões ulceradas com presença de exsudato (90,9 por cento) e estas se concentraram nos membros inferiores (71,6 por cento). Ao comparar o resultado do diagnóstico molecular entre as amostras analisadas, obteve-se a convergência de 86,36 por cento, sendo este valor estatisticamente significativo (p-value 0,001). Os resultados obtidos sugerem que o método de coleta de amostra biológica através do swab para o diagnóstico molecular da LTA apresenta excelente eficácia quando comparado com o método de biópsia e pode ser implantado em caráter auxiliar no serviço de saúde haja vista sua simplicidade e facilidade de execução, não oferecendo riscos secundários ao paciente

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-18T17:24:12Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Taís Menezes Cerqueira Campos.pdf: 1224117 bytes, checksum: 93142e385e22b4c0f7393af2a0cc02a4 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira (flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-10-31T17:01:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Taís Menezes Cerqueira Campos.pdf: 1224117 bytes, checksum: 93142e385e22b4c0f7393af2a0cc02a4 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-31T17:01:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Taís Menezes Cerqueira Campos.pdf: 1224117 bytes, checksum: 93142e385e22b4c0f7393af2a0cc02a4 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq; National Institute of Health - NIH; Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia de Doenças Tropicais - INCT-DT. / A leishmaniose cutânea causada por Leishmania braziliensis é caracterizada pela presença de uma ou mais lesões ulceradas, de bordas elevadas. Células T CD4+ e CD8+ atuam como fonte produtora de citocinas que ativam macrófagos para destruição do parasita. Monócitos circulantes constituem uma população heterogênea, subdividida em: monócitos clássicos (CD14++CD16-), intermediários (CD14++CD16+) e não-clássicos (CD14+CD16++), e são conhecidos por migrarem para sítios inflamatórios e secretarem citocinas. TNF pode mediar a patologia da LC através de vários mecanismos entre eles, indução de óxido nítrico (NO), aumento de citotoxidade e expressão de metaloproteinases de matriz (MMPs). MMP-9 é uma enzima dependente de zinco, que degrada colágeno tipo IV, componente da membrana basal e, é controlada pelo TIMP-1 (tissue inhibitor of metalloproteinase-1). Recentemente, foi demonstrada que a infecção de macrófagos por L. braziliensis aumenta a expressão de MMP-9. Embora os fatores que induzem a ruptura da membrana basal levando ao desenvolvimento da úlcera ainda não sejam conhecidos, é provável que a MMP-9 contribua para os danos teciduais na LC. Objetivo: investigar a contribuição das sub-populações de monócitos para produção de MMP-9. Desenho do estudo: Estudo transversal, com 28 pacientes com LC, 12 com LCR e 20 controles sadios. Material e Métodos: Células mononucleares foram obtidas de todos os participantes da pesquisa para a marcação ex-vivo das sub-populações de monócitos e MMP-9, e a frequência destas células foi determinada por citometria de fluxo. Realizou-se cultura por 72 horas estimulando as células com SLA e os níveis de MMP-9 e TIMP-1 nos sobrenadantes foram determinados por ELISA. A contribuição de TNF para a produção de MMP-9 foi determinada na presença ou ausência de TNF recombinante em cultura de CMSP por 24 horas e os níveis de MMP-9 foram determinados por ELISA. Resultados: Monócitos foram as principais células produtoras de MMP-9 e as três sub-populações de monócitos de pacientes com LCR e LC expressaram mais MMP-9, quando comparados com as de indivíduos sadios. Em pacientes com LC a sub-população de monócitos não-clássicos foi a principal fonte produtora de MMP-9. Níveis elevados de MMP-9 e baixos níveis de TIMP-1 foram encontrados em sobrenadantes de cultura de CMSP de pacientes com leishmaniose cutânea. A presença de TNF em cultura de CMSP induziu a secreção de MMP-9. Conclusão: Altos níveis de TNF em pacientes com leishmaniose cutânea contribuem para a produção de MMP-9 por monócitos. / Salvador

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O enfoque do nosso trabalho foi avaliar a antigenicidade de uma cisteína proteinase recombinante de Leishmania (Leishmania) amazonensis e a capacidade protetora desse antígeno contra a infecção homóloga em camundongos BALB/c. Um fragmento de 500 pb do gene Lacys24, codificador de uma isoforma de cisteína proteinase de L. (L.) amazonensis previamente clonado em nosso laboratório, foi subclonado e expresso no vetor bacteriano pHis, originando uma proteína recombinante de 24 kDa, rLacys24. Por experimentos de “Western blotting” foi demonstrado que anticorpos produzidos contra essa proteína reconhecem uma banda de 30 kDa do extrato de amastigotas de L. (L.) amazonensis, indicando que a rLacys24 corresponde a uma isoforma de cisteína proteinase de 30 kDa abundantemente expressa nesses parasitas. A antigenicidade da rLacys24 foi avaliada pela análise das populações de linfócitos dos camundongos BALB/c previamente imunizados com a proteína recombinante mais Propionibacterium acnes ou adjuvante completo de Freund (ACF) como adjuvantes. A análise por citometria de fluxo dos linfócitos provindos dos linfonodos inguinais e poplíteos dos animais imunizados com a rLacys24 + ACF por via subcutânea mostrou um aumento significante da expressão de linfócitos CD8+ comparada à dos controles que receberam apenas ACF. Quanto à CD4+ , não houve diferença na expressão dessa população de linfócitos entre os controles e os animais imunizados com a rLacys24. Por outro lado, foi baixa a expressão de linfócitos CD4+ e CD8+ no baço dos camundongos imunizados com a rLacys24 + P. acnes pela via intraperitoneal. O ensaio de citotoxicidade dos linfócitos dos camundongos imunizados com a rLacys24 + ACF foi realizado utilizando-se como células-alvo macrófagos peritoneais de camundongos BALB/c infectados com L. (L.) amazonensis. A lise dos macrófagos infectados na presença dos linfócitos dos animais imunizados com a rLacys24 foi significantemente maior que a observada quando as células-alvo foram incubadas com os linfócitos dos animais controle. A imunização ativa dos camundongos BALB/c com a rLacys24 + ACF resultou em pequeno, porém significante decréscimo das lesões das patas dos animais após o desafio com a L. (L.) amazonensis, enquanto que nos animais imunizados com a rLacys24 + P. acnes as lesões apresentaram aumento gradativo até três meses após o desafio. No outro esquema de imunização avaliado, os animais foram imunizados com a cisteína proteinase de amastigotas de L. (L.) chagasi, rLdccys, além da rLacys24, e P. acnes como adjuvante e desafiados com a L. (L.) amazonensis. A avaliação das respostas imunes dos animais imunizados foi realizada por citometira de fluxo e pela detecção por ELISPOT de IFN-γ, IL-4 e IL-10 nas culturas dos linfócitos dos animais três meses após o desafio. Em todos os animais imunizados houve predomínio da expressão de linfócitos CD4+ , enquanto que a dos linfócitos CD8+ foi baixa (em torno de 8-10%). IFN-γ foi secretado pelos linfócitos isolados de todos os animais estudados, não tendo havido diferenças significantes na secreção dessa linfocina entre os animais imunizados com os antígenos recombinantes e os controles que receberam apenas a P. acnes. Enquanto IL-10 não foi detectada nas culturas de linfócitos de nenhum dos animais imunizados, IL-4 foi secretada pelos linfócitos de todos os animais estudados. Entretanto, a expressão da IL-4 foi significantemente menor nas culturas de linfócitos dos animais imunizados com os antígenos recombinantes comparada à dos controles. Não foram observadas diferenças do tamanho das lesões das patas dos camundongos imunizados com os antígenos recombinantes em relação aos controles, sendo esses resultados confirmados quando a infecção dos animais foi avaliada pelo crescimento em meio axênico dos parasitas isolados das lesões. Apesar da reduzida proteção conferida pela rLacys24, os dados do presente trabalho sugerem que esse antígeno pode ser útil em novos esquemas de imunização que induzam respostas mediadas por linfócitos CD4+ e CD8+ mais eficazes contra a infecção pela L. (L.) amazonensis. / Our work focused on the antigenicity of a recombinant cysteine proteinase from Leishmania (Leishmania) amazonensis and on the protective role of this antigen in the infection of BALB/c mice with the parasite. A 500 bp fragment from the Lacys24 gene, encoding an isoform of cysteine proteinase from L. (L.) amazonensis previously cloned in our laboratory, was subcloned and expressed in the pHis vector, resulting in a recombinant protein of 24 kDa, rLacys24. In Western blots of L. (L.) amazonensis extracts, antibodies directed to the rLacys24 antigen recognized a 30 kDa band identified as an isoform of cysteine proteinase abundantly expressed in these parasites. The antigenicity of the rLacys24 was evaluated by analysis of the T lymphocyte profile in BALB/c mice previously immunized with this recombinant protein plus either Propionibacterium acnes or Freund’s complete adjuvant (CFA). Lymphocytes isolated from the popliteal and inguinal lymph nodes of animals immunized with rLacys24 plus CFA by the subcutaneous route were analysed by fluorescence-activated cell sorter (FACS). A significantly higher expression of CD8+ lymphocytes was observed in animals immunized with rLacys24 plus CFA compared to the controls which received CFA alone. In contrast, a low expression of CD4+ lymphocytes was observed in these animals. On the other hand, the expression of CD4+ and CD8+ lymphocytes there was lower in spleens from animals immunized with rLacys24 plus P. acnes by intraperitoneal route. The cytotoxicity of lymphocytes isolated from mice immunized with rLacys24 plus CFA was assyed by use of L. (L.) amazonensis-infected macrophages as the target cells. The cytotoxicity of lymphocytes from rLacys24-immunized mice was significantly higher than that observed when the target cells were incubated with lymphocytes from control animals. Active immunization of BALB/c mice with rLacys24 plus CFA resulted in a low but significant decrease of foot lesions after challenge with L. (L.) amazonensis in comparison with the lesion size in control mice. In contrast, there was a similar increase of foot lesions among mice immunized with rLacys24 plus P. acnes or with P. acnes alone. In another immunization protocol, animals were immunized with a recombinant cysteine proteinase from L. (L.) chagasi, rLdccys1, besides rLacys24, plus P. acnes as the adjuvant. Immune responses were evaluated by FACS and ELISPOT for detection of IFN-γ, IL-4 and IL-10 in lymphocyte cultures from animals three months after challenge with L. (L.) amazonensis. All of the immunized animals showed a predominance of T CD4+ lymphocytes and a low expression of CD8+ (8-10%). IFN-γ was secreted by lymphocytes isolated from all immunized animals and there were no significant differences of IFN-γ secretion among animals immunized with the recombinant antigens or with P. acnes alone. IL-10 was not detected in lymphocyte cultures from the immunized animals. However, IL-4 expression was significantly lower in lymphocyte cultures from animals immunized with the recombinant antigens compared to the controls. There were no significant differences in foot lesion size from BALB/c mice immunized with the recombinant antigens compared to the controls; these results were confirmed by estimates of parasites isolated from the foot lesions. In spite of the low protection conferred by the rLacys24, our data suggest that this recombinant antigen may be useful in new immunization schedules aiming to elicit more efficient CD4+ and CD8+ protective responses against L. (L.) amazonensis infection. / BV UNIFESP: Teses e dissertações