Made available in DSpace on 2014-10-09T12:33:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:03:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Linfomas são cânceres provenientes da transformação de um linfócito no sistema linfático, sendo que, o mais comum é o Linfoma Não-Hodgkin (LNH). Avanços na imunologia e na biologia molecular têm auxiliado na detecção desses tumores e aberto caminhos para novas estratégias de tratamento, como a Radioimunoterapia. O rituximab é um anticorpo monoclonal quimérico anti-CD20 já utilizado como imunoterápico no tratamento de LNH refratários ou recidivos. O objetivo deste trabalho foi estudar a conjugação deste anticorpo ao quelante bifuncional DOTA-NHS-éster e radiomarcar este imunoconjugado com o radioisótopo 177Lu, com o objetivo de desenvolver um radioimunoterápico para tratamento de LNH. Estudos de imunoconjugação com diferentes razões molares rituximab:DOTA foram estudadas (1:5, 1:10, 1:20, 1:50, 1:250, 1:500 e 1:1000) afim de avaliar qual condição conferia maior pureza radioquímica. A estabilidade dos imuconjugados foi analisada por cromatografia de alta eficiência por até 240 dias em diferentes condições de armazenamento. A estabilidade do imuconjugado radiomarcado foi avaliada após incubação a 2-8 °C e em soro humano a 37 °C e a ligação às proteínas séricas foi determinada. Estudos de biodistribuição foram realizados em camundongos Swiss sadios a fim de caracterizar biologicamente o imunoconjugado radiomarcado. Com o objetivo de analisar se os processos de conjugação e de radiomarcação não danificaram a capacidade de reconhecimento do antígeno (imunorreatividade) deste anticorpo, realizou-se estudos preliminares de ligação às células de LNH (Raji). Os imuconjugados de razão molar baixa (1:5, 1:10 e 1:20) mostraram-se estáveis quando armazenados por até 240 dias em diferentes condições. A análise em cromatografia em camada delgada e CLAE, revelou que o Acm conjugado na razão molar 1:50 foi radiomarcado com alta pureza radioquímica (superior a 95%) quando purificado em coluna PD-10. Este mesmo radioimunoconjugado apresentou razoável estabilidade a 2-8° C. A análise da estabilidade em soro humano não indicou grande metabolismo pelas enzimas do soro. O radioimuconjugado apresentou alta ligação às proteínas séricas indicando clareamento sanguíneo lento, o qual foi confirmado pelos estudos in vivo. O radioimunoconjugado apresentou alta captação no fígado o que é característico de anticorpos monoclonais. Os estudos preliminares de competição indicaram que o processo de obtenção do radioimunoconjugado não prejudicou sua ligação às células Raji sendo esta ligação específica. / Dissertação (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:47:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:07:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 08712.pdf: 2365459 bytes, checksum: 3be7f0aa24629302df9709de6db64f86 (MD5) / Tese (Doutoramento) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

O valor nutricional do milho é limitado devido ao seu alto conteúdo de proteínas de reserva (zeínas), que são deficientes em aminoácidos essenciais como lisina e triptofano. Por esse motivo, a Embrapa (Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária) desenvolveu a variedade de milho BR473, que tem um excelente valor energético e um maior conteúdo protéico quando comparado ao milho comum. Tal variedade possui 0,9 e 4,0 g/kg de grão de triptofano e lisina, respectivamente, contra 0,6 e 2,6 do milho comum. O alto conteúdo de lisina em algumas variedades de milho como a opaco-2 (o2), por exemplo, é relacionado à presença de proteínas não-zeínas. Para identificar essas proteínas, o que poderia explicar o alto conteúdo protéico da variedade BR473, foi analisado o proteoma dos corpos protéicos dos grãos desse milho. Para tal, foram usadas e avaliadas as cromatografias uni e bidimensional, acopladas a espectrometria de massas (LC-MS/MS e LC/LC-MS/MS), uma vez que tais técnicas se tornaram ferramentas poderosas para seqüenciamento e identificação de proteínas. Neste trabalho, foram identificadas seis proteínas por LC-MS/MS e dezesseis proteínas por LC/LC-MS/MS. / The nutritional value of maize seed is limited due to its high content of zeins (storage proteins), which are deficient in essential amino acids as lysine and tryptophan. Because of this, Embrapa (Brazilian Agricultural Research Corporation) developed the BR 473 maize variety, which has excellent energetic value and higher proteic content than the normal maize. BR 473 maize variety has 0.9 and 4.0 g/kg of grain of tryptophan and lysine, respectively, against the 0.6 and 2.6 from normal maize. The high lysine content in some maize varieties as opaque-2 (o2), for example, has been related to the presence of non-zein proteins. In order to identify them, which could explain the high proteic content of BR 473 maize variety, the protein bodies proteome of these grains were analyzed. For this purpose, one and two-dimensional liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS and LC/LC-MS/MS) were used and evaluated, since these techniques have become a powerful tool for protein sequencing and identification. We have identified six proteins by LC-MS/MS and sixteen proteins by LC/LC-MS/MS.

Este trabalho teve como principal objetivo o desenvolvimento da técnica de cromatografia líquida de alta eficiência para a análise SARA de amostras de petróleo. As amostras de petróleo foram separadas em frações contendo saturados, aromáticos, resinas e asfaltenos. Para se obter êxito no desenvolvimento da técnica de cromatografia líquida em escala preparativa, o primeiro passo foi o desenvolvimento da técnica em escala analítica. Os parâmetros encontrados foram então extrapolados para escala preparativa. Através da técnica de cromatografia líquida de alta eficiência desenvolvida, foi possível obter uma separação eficaz das frações SARA de amostras de petróleo, resultado que não se mostra tão eficiente quando se trabalha com cromatografia líquida clássica. As comparações entre as metodologias por cromatografia clássica de coluna aberta e cromatografia líquida de alta eficiência desenvolvida no trabalho mostram que a cromatografia líquida possui enorme vantagem em relação à metodologia clássica. Dentre elas podemos destacar a grande reprodutibilidade já que os parâmetros de análise são altamente controlados o que não ocorre em cromatografia de coluna aberta, além da capacidade de automação e menor risco ocupacional. As frações separadas foram caracterizadas por espectrometria de massas, espectroscopia de fluorescência e infravermelho. Através da espectrometria de massas foi possível observar uma distribuição de massas entre o intervalo de massa que vai do ion de m/z 100 Da até o íon de m/z 800 Da, com esta distribuição centrada em 350 Da. A espectrometria de massa aliada a software de identificação de componentes de frações de petróleo através de massas moleculares permitiu determinar a fórmula molecular dos compostos presentes nas frações de asfaltenos das amostras de petróleo analisadas. A análise realizada pelo programa gerou os seguintes resultados: o programa encontrou estrutura molecular para aproximadamente 60% dos picos contidos no espectro de massas, destes, 6,05% dos compostos encontrados possuíam enxofre, 45,2% dos compostos possuem N e 32,1% possuem oxigênio em sua composição. A análise dos espectros de emissão de fluorescência mostrou que petróleos mais leves apresentam emissão de fluorescência mais intensas isso se deve ao fato de que petróleos mais pesados, de menor API, possuem mais espécies propensas a desativar o estado excitado, justificando assim a diminuição da emissão de fluorescência com aumento do API. / This work had as main objective the development of the technique of high performance liquid chromatography for SARA analysis of oil samples. The oil samples were separated into fractions containing saturates, aromatics, resins and asphaltenes. To achieve successful development of the technique for preparative scale liquid chromatography, the first step was the development of the technique in analytical scale. The parameters obtained were then extrapolated to preparative scale. Through the technique of high performance liquid chromatography developed, it was possible to obtain an effective separation of SARA fractions of oil samples, a result that does not show as efficient when working with classical liquid chromatography. Comparisons between both methodologies, classical and HPLC has showed that HPLC has huge advantage over classical methods. The separated fractions were characterized by mass spectrometry, fluorescence spectroscopy and infrared. Through mass spectrometry was possible to observe a distribution of masses between the mass range that goes from the ion m / z 100 Da to the ion m / z 800 Da, with this distribution centered at 350 Da. The analysis of the fluorescence emission spectra showed that lighter oils exhibit more intense fluorescence emission that is due to the fact that heavier oils, smaller API, have more likely species to disable the excited state, thus justifying the reduction of emissions fluorescence with an increased API.

Class of 2012 Abstract / Specific Aims: To assess the chemical stability of ampicillin for injection in normal saline at pH values ranging from 5 to 6. Methods: A stability-indicating high performance liquid chromatography (HPLC) method was developed and used to determine the stability of ampicillin for injection in normal saline following buffering with sodium acetate and acid adjustment with HCl at pH values of 5, 5.5, and 6. To confirm that the assay was stability-indicating, ampicillin trihydrate reference standard (1 mg/mL) was exposed to alkali, acid, and oxidative stress conditions and analyzed by HPLC for the presence of degradation products. Analysis was performed on a reverse-phase (C-18) column with a mobile phase consisting of water, acetonitrile, 1 M monobasic potassium phosphate, and 1 N acetic acid (909:80:10:1). Other HPLC parameters were: flow rate 1 mL/min; detection wavelength 254 nm; injection volume 20 µL; column temperature 30˚C. The method was evaluated for linearity, precision, and accuracy. The chemical stability of ampicillin for injection (18 mg/mL) in normal saline and sodium acetate (pH adjusted at values of 5, 5.5, and 6) was assessed at baseline (t=0), 7, 11, 17, 31, and 44 hours and compared to a control solution (no pH adjustment). Measurements at each time interval were performed in triplicate. Main Results: Ampicillin trihydrate reference standard (1 mg/mL) was adequately separated from degradation products following exposure to alkali, acid, and oxidative stress conditions. After 16 hours, a precipitate was observed in the solution at pH 6, and therefore stability is not reported. All other solutions (pH 5, pH 5.5, and control) were stable for at least 24 hours at room temperature and yielded t90 values of 110, 64.2, and 27.5 hours, respectively. Conclusions: Adjustment of intravenous ampicillin solutions to pH values of 5 or 5.5 significantly increased stability. Ampicillin appears to be most stable at a pH near its isoelectric point (pH 5).

Phenylpropanolamine (PPA), a sympathomimetic amine, has been widely used over the past 40 years as a decongestant and, in much larger dosages, as an appetite suppressant. Considerable interest has recently been shown in this drug due to its increasing popularity as an over-the-counter anorectic agent. Much controversy exists concerning the unfavourable side-effects of PPA resulting from the higher doses required for appetite suppression and the potential of this drug for abuse. A literature search revealed a paucity of information concerning the determination of PPA in biological fluids and, most noticeably, on the pharmacokinetics of this drug. An original method for determining PPA in serum and urine using high performance liquid chromatography (HPLC) which has increased sensitivity over other published HPLC methods is presented here. The simplicity of the extraction from biological fluids and subsequent determination by HPLC, enables concentrations of PPA to be monitored after a single dose of the drug. This method is therefore readily applicable to bioavailability and pharmacokinetic studies. The dissolution profiles of 4 sustained-release formulations of PPA were determined in a modified USP rotating paddle apparatus and the samples analysed using HPLC. A mathematical equation was applied to these data which are expressed in terms of dissolution parameters. Oral test dosage forms and solutions of PPA were investigated in bioavailability trials using the developed HPLC method to analyse the urine and serum samples. Linear one body compartment kinetics were assumed and the WagnerNelson method used to transform in vivo serum data to absorption plots which were then fitted to the well known Weibull equation. In order to more appropriately characterize the kinetic processes of absorption, distribution and elimination, a more complex model was utilized which involved numerical integration of a series of differential equations. The data were fitted to these models using nonlinear regression techniques. The pharmacokinetics of PPA are shown to exhibit some evidence of nonlinearity. The absorption of the drug appears to be di scontinuous and PPA seems to favour a two body compartment model.

Abstract Sensitive chromatographic methods were developed for the quantitative analysis of secondary metabolites in Hypericum perforatum (St. John's wort) and Rhodiola rosea (Golden root, rose root) extracts. Sample preparation methods were developed for plant, cell culture and biotransformation suspension matrixes. High performance liquid chromatography (HPLC) was used for the separation of analytes, and chromatographic data was acquired using photodiode array (PDA) detection or atmospheric pressure ionization mass spectrometry (API-MS). Ionization efficiencies with electrospray ionization (ESI) and atmospheric pressure chemical ionization (APCI) were compared under different conditions. Specific mass spectrometric detection methods such as multiple reaction monitoring (MRM) and selective ion monitoring (SIM) were utilized. For identification of known and new secondary metabolites in plant tissues, mass spectrometric methods with triple quadrupole and time-of-flight mass spectrometers were used together with one- and two-dimensional nuclear magnetic resonance spectroscopy (NMR).

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