Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Les stratégies d'ingénierie du génome par recombinaison homologue basées sur la technologie CRISPR/Cas-9 ont été largement utilisées pour modifier la séquence de gènes chez C. elegans. Cependant, l'efficacité de sélection des animaux modifiés nécessite d'être améliorée. Nous avons développé un nouveau marqueur, le gène miniSOG, qui permet la contre-sélection des animaux non modifiés et que nous avons intégré dans une cassette de double sélection. Les animaux contenant la cassette HySOG sont d'abord sélectionnés pour leur résistance à un antibiotique, l'hygromycine B. HySOG est ensuite excisée et les modifications sont insérées au locus cible. Les souches recombinantes résistent à une exposition à la lumière bleue, qui tue les vers exprimant le gène miniSOG. Nous montrons que la méganucléase I-SceI peut être utilisée pour exciser HySOG et pour introduire des modifications dans la lignée germinale avec la même efficacité que la technologie CRISPR/Cas-9.Des technologies d'ingénierie du génome ont été utilisées pour étiqueter la sous-unité des GABAAR UNC-49 et pour analyser le rôle de MADD-4/Punctin, UNC-40/DCC et NLG-1/neurologine sur l'agrégation synaptique des GABAAR à la jonction neuromusculaire GABAergique. Nous montrons que MADD-4, une protéine de la matrice extracellulaire sécrétée par les motoneurones, est un nouveau ligand de NLG-1 et de UNC-40 et constitue un organisateur synaptique antérograde des synapses GABAergiques. D'abord, l'isoforme courte de MADD-4, MADD-4B, lie directement NLG-1 et assure sa localisation à la membrane post-synaptique. Ensuite, MADD-4B lie, recrute et active probablement le récepteur UNC-40, qui renforce l'interaction des GABAAR avec NLG-1. / CRISPR/Cas-9-based techniques have been widely used to engineer any gene in C. elegans by homologous recombination. However, the selective efficacy of engineered animals needs to be expanded. We have developed miniSOG as a counter-selection marker in a dual selection strategy. Animals containing the dual selection cassette HySOG are firstly selected by the resistance to the antibiotic hygromycin B. HySOG is then excised and customized gene modifications are inserted into target sites. Recombinant strains are selected based on the resistance to blue light exposure, which otherwise kills miniSOG expressing worms. We demonstrate that meganuclease I-SceI can be used to excise HySOG and to introduce gene modifications in C. elegans germline as efficiently as CRISPR/Cas-9. Genome-engineering techniques have been used to tag the GABAAR subunit UNC-49 with RFP and to analyze the role of MADD-4/Punctin, UNC-40/DCC and NLG-1/neuroligin on GABAARs clustering at GABAergic NMJs. We showed that MADD-4/Punctin, an extracellular matrix protein secreted by GABAergic neurons, is a new ligand of NLG-1/neuroligin and of UNC-40/DCC and functions as a central anterograde organizer of GABAergic synapses. First, the short isoform of MADD-4, MADD-4B directly binds NLG-1/neuroligin and localizes it in the post-synaptic membrane of GABAergic synapses. Second, MADD-4B binds, recruits and likely activates the netrin receptor UNC-40/DCC, which in turn promotes the interaction of GABAAR with NLG-1/neuroligin and its localization at the synapse.