L’activation de la signalisation NF-κB par de nombreux immunorécepteurs met en jeu un large signalosome. Afin de propager cette signalisation en réponse à différents stimuli, l’oligomérisation d’adaptateurs pourvus de domaines d’interaction protéine-protéine est nécessaire. Alors que certains adapteurs sont communs d’autres sont spécifiques à un immunorécepteur donné. Une des principales caractéristiques partagées par toutes ses protéines est leur capacité à être poly-ubiquitinylé de façon non-dégradative afin d’aboutir à une activation optimale de NF-κB. Ce projet avait pour objectif d’identifier de nouvelles déubiquitinylases impliquées dans la signalisation NF-κB. C’est ainsi que nous avons identifié USP34 comme étant un régulateur négatif de la signalisation NF-κB induite par le TCR dans des cellules Jurkats, une lignée de lymphocytes T immortalisés. Nos données suggèrent un modèle dans lequel USP34 permet d’éviter l’activation excessive de NF-κB, en agissant directement ou indirectement sur les dimères NF-κB/IκBα, en aval d’IKK, et en modulant l’affinité du facteur de transcription pour l’ADN. Parallèlement, l’étude du microenvironnement des membranes endocellulaires responsables du recrutement des signalosomes formés en réponse à l’activation du TCR, du TNFR et du CD40 a permis l’identification d’une protéine - clé de la signalisation NF-κB, la MTDH. Cette protéine du RE s’est révélée être un relais déterminant pour l’activation d’IKK et donc la propagation du signal NF-κB. / Large signalosome assembly is a prerequisite for NF-κB signaling upon engagement of various immunoreceptors. Adaptor proteins containing protein-protein interaction domains oligomerise in response to such stimuli in order to propagate signaling. Each immunoreceptor uses distinct adaptors, as well as common ones, to achieve that. The main characteristic shared by these proteins is their ability to undergo poly-ubiquitinylation in a non-degradative manner, leading to optimal NF-κB activation. In this work, we aimed to identify novel deubiquitinylating enzymes that control ubiquitinylation status. That is how USP34 came up to be a negative regulator of NF-κB signaling in TCR-activated Jurkat cells, a T lymphocyte cell line. Our data suggest a model whereby USP34 prevents excessive NF-κB activation by acting rather late, directly or indirectly on the NF-κB:IκBα dimers, downstream of IKK, altering transcription factor DNA binding affinity. In parallel, studies of the endocellular membrane microenvironment that hosts mature signalosomes in response to TCR-, TNFR- and CD40 ligation led to the identification of an ER-residing protein, Metadherin (MTDH), which seems to globally integrate signaling before forwarding it to downstream pathway components able to activate IKK.

Ο καρκίνος εκ του επιθηλίου επιφανείας των ωοθηκών είναι η 5η πιο κοινή αιτία θανάτου σε γυναίκες στο Δυτικό κόσμο και είναι υπεύθυνος για τους περισσότερους θανάτους από ότι όλες οι γυναικολογικές κακοήθειες μαζί. Τόσο ο μηχανισμός του νεοπλαστικού μετασχηματισμού όσο και τα μοριακά μονοπάτια που οδηγούν στο ωοθηκικό επιθηλιακό καρκίνωμα δεν έχουν εξακριβωθεί πλήρως. Ένα πρόσφατα αναγνωρισμένο γονίδιο, η μετατχερίνη (MTDH), γνωστή και ως AEG-1 ή LYRIC ενοχοποιείται ως πιθανός σημαντικός διαμεσολαβητής κατά την καρκινογένεση, την μετάσταση και την αντίσταση στις χημειοθεραπείες. Ωστόσο, η κλινική σημασία και ο βιολογικός ρόλος της μετατχερίνης (MTDH), στο επιθηλιακό καρκίνωμα των ωοθηκών δεν έχουν γίνει αποσαφηνισθεί πλήρως. Η υπερέκφραση της MTDH/AEG-1 μπορεί να ενεργοποιήσει πολλά σηματοδοτικά μονοπάτια, όπως για παράδειγμα το NF-κΒ σηματοδοτικό μονοπάτι σε διάφορους καρκινικούς τύπους. Ο NF-κΒ έχει πρόσφατα συσχετισθεί με την ανάπτυξη και την εξέλιξη των όγκων και επιπλέον τα διμερή του NF-κΒ ενισχύουν την έκφραση ποικίλων γονιδίων που αφορούν την κυτταρική αύξηση, τη διαφοροποίηση, τις φλεγμονώδεις αντιδράσεις και τη ρύθμιση της απόπτωσης. Η παρούσα μελέτη σχεδιάστηκε προκειμένου να διερευνηθεί η έκφραση των πρωτεϊνών MTDH και NF-kB (p65/p50) σε επιθηλιακά ωοθηκικά καρκινώματα (καλοήθεις, οριακής κακοήθειας και διηθητικά καρκινώματα). Για το σκοπό αυτό μελετήθηκαν τμήματα επιθηλιακών νεοπλασμάτων ωοθηκών από 76 ασθενείς (15/46 οριακής κακοήθειας όγκοι, 30/46 διηθητικά αδενοκαρκινώματα και 31/76 κυσταδενώματα), μονιμοποιημένα σε ουδέτερη φορμόλη και εγκλεισμένα σε παραφίνη με τη μέθοδο της ανοσοϊστοχημείας για την έκφραση των πρωτεϊνών MTDH και NF-κB (p50/p65). Επίσης εκτιμήθηκε η σχέση της MTDH/AEG-1 με τον NF-κB και με κλινικοπαθολογοανατομικές παραμέτρους όπως ο βαθμός κακοήθειας του όγκου, το στάδιο, η μέγιστη διάμετρος του όγκου και η ηλικία της ασθενούς. Τα αποτελέσματα της ανοσοϊστοχημείας αναλύθηκαν με τη χρήση του στατιστικού πακέτου SPSS. Ο φυσιολογικός ωοθηκικός ιστός και τα κυσταδενώματα ήταν κυρίως αρνητικά για τις πρωτεΐνες MTDH/AEG-1 και NF-κB (p50, p65). Η έκφραση των MTDH/AEG-1 και NF-kappa B/ p50, πρωτεϊνών ήταν σημαντικά αυξημένες στα αδενοκαρκινώματα σε σχέση με τους οριακής κακοήθειας όγκους. Σε αντίθεση η έκφραση της NF-kappa B/ p65 πρωτεΐνης δεν έδειξε σημαντικές διαφορές μεταξύ των οριακής κακοήθειας όγκων και των αδενοκαρκινωμάτων. Σημαντική στατιστική συσχέτιση παρατηρήθηκε στην έκφραση των πρωτεϊνών MTDH/AEG-1, NF-kappa B/p50 και NF-kappaB/p65 στα αδενοκαρκινώματα. Καμία στατιστική συσχέτιση δεν παρατηρήθηκε στην έκφραση μεταξύ του NF-κB, της MTDH πρωτεΐνης και κλινικοπαθολογοανατομικών παραμέτρων. Συμπερασματικά, τα αποτελέσματα μας υποδεικνύουν ότι η MTDH/AEG-1 ίσως παίζει ένα σημαντικό ρόλο στην παθογένεια του ανθρώπινου ωοθηκικού καρκίνου, πιθανώς μέσω της ενεργοποίησης του σηματοδοτικού μονοπατιού του πυρηνικού μεταγραφικού παράγοντα NF-κB. Επειδή η MTDH συσχετίζεται σημαντικά με την αντίσταση στη χημειοθεραπεία, θα μπορούσε ενδεχομένως να αποτελέσει σημαντικό στόχο για θεραπεία, ενισχύοντας την αποτελεσματικότητα της χημειοθεραπείας στον επιθηλιακό ωοθηκικό καρκίνο. / Epithelial ovarian cancer is the fifth most common cause of cancer death in women in the Western world and the leading cause of death from gynaecological malignancies. Little is known about the mechanism of neoplastic transformation and the molecular events leading to epithelial ovarian cancer are poorly understood. A recently discovered gene, metadherin (MTDH, also known as AEG-1 or LYRIC) has emerged as a potentially crucial mediator of tumor progression, metastasis, and resistance to chemotherapies. The clinical significance and biological role of metadherin (MTDH), in epithelial ovarian carcinoma however, remains unclear. Overexpression of MTDH/AEG-1 can activate several downstream pathways, including the NFκB pathway in various types of cancer cells. Recently, NF-kB has been related to cancer development and progression and NF-kB dimers (p50/p65) could induce the expression of various genes regarding cell growth, differentiation, inflammatory responses and the regulation of apoptosis. This study was designed in order to determine the expression of the MTDH and NF-kB (p65/p50) proteins in epithelial ovarian tumors (benign, borderline and malignant). Formalin-fixed and paraffin embedded tissue blocks from 76 patients with epithelial ovarian neoplasms (15/46 borderline tumors, 30/46 invasive adenocarcinomas and 31/76 cystadenomas) were studied. Expressions of MTDH/AEG-1, NF-κB (p50, p65) were investigated immunohistochemically. The relationship of MTDH/AEG-1 with NF-κB and clinicopathological parameters such as tumor grade, stage, tumor maximal diameter and patient age were evaluated. The results of immunohistochemistry were analyzed with the SPSS statistic analyze protocol. Normal ovarian tissue and benign ovarian cystadenomas were mostly MTDH/AEG-1, NF-κB (p50, p65) negative. The expression of MTDH/AEG-1 and NF-kappaB p50, proteins were significantly higher in adenocarcinoma tissue in comparison with borderline tumors. In contast NF-kappaB p65 expession shows no significant differences between borderline tumors and adenocarcinomas. A statistical significant correlation was observed between MTDH/AEG-1 and NF-kappaB p50, p65 protein expression in adenocarcinomas. No statistical correlation was observed between the NF-Kb and MTDH protein expression and clinicopathological parameters. In conclusion our data indicate that the upregulation of MTDH/AEG-1 may play an important role in the pathogenesis of human ovarian cancer possibly through activation of Nuclear factor-κB signalling pathway. Since MTDH has also a significant correlation with chemoresistance could be an important therapeutic target enhancing chemotherapy efficacy in ovarian epithelial cancer.

Large signalosome assembly is a prerequisite for NF-κB signaling upon engagement of various immunoreceptors. Adaptor proteins containing protein-protein interaction domains oligomerise in response to such stimuli in order to propagate signaling. Each immunoreceptor uses distinct adaptors, as well as common ones, to achieve that. The main characteristic shared by these proteins is their ability to undergo poly-ubiquitinylation in a non-degradative manner, leading to optimal NF-κB activation. In this work, we aimed to identify novel deubiquitinylating enzymes that control ubiquitinylation status. That is how USP34 came up to be a negative regulator of NF-κB signaling in TCR-activated Jurkat cells, a T lymphocyte cell line. Our data suggest a model whereby USP34 prevents excessive NF-κB activation by acting rather late, directly or indirectly on the NF-κB:IκBα dimers, downstream of IKK, altering transcription factor DNA binding affinity. In parallel, studies of the endocellular membrane microenvironment that hosts mature signalosomes in response to TCR-, TNFR- and CD40 ligation led to the identification of an ER-residing protein, Metadherin (MTDH), which seems to globally integrate signaling before forwarding it to downstream pathway components able to activate IKK.