Las enfermedades ampollosas autoinmunes constituyen un grupo de enfermedades cutáneas caracterizadas por la presencia de anticuerpos en el suero de los pacientes dirigidos contra antígenos propios de la piel. Por dicho motivo, estos anticuerpos se denominan "autoanticuerpos" y pueden detectarse utilizando técnicas de inmunofluorescencia, bien circulando en el suero, bien unidos "in vivo" a la piel de los pacientes. Cada enfermedad suele presentar una clínica, histopatología y patrones de inmunofluorescencia producidos por los autoanticuerpos que le son propios y permiten realizar el diagnóstico. Los conocimientos adquiridos en los últimos años han permitido demostrar que los antígenos contra los cuales van dirigidos los autoanticuerpos en las enfermedades ampollosas autoinmunes son al mismo tiempo las moléculas responsables de mantener el contacto entre los queratinocitos o entre los queratinocitos basales y la matriz extracelular en condiciones fisiológicas. Además se ha demostrado que los anticuerpos dirigidos contra estos antígenos epidérmicos son capaces de inducir enfermedad en ratones nacidos cuando se transfieren de forma pasiva; estos animales de experimentación reproducen las pérdidas de cohesión epidérmicas típicas de las enfermedades humanas cuando son inyectados con los autoanticuerpos. Por lo tanto, el estudio de estas enfermedades permite no tan sólo avanzar en el conocimiento de estas patologías concretas, sino que también amplia nuestros conocimientos en el campo de la biología cutánea. Por tanto, en este proyecto el objetivo ha sido el de investigar y reevaluar el mecanismo molecular por el cual se produce la acantolisis desde el punto de vista de la valencia de los autoanticuerpos. Para estudiar el papel de dicha valencia en la patogenia de la enfermedad, se comparó la capacidad de inducción de acantolisis de fragmentos bivalentes (IgG y F(ab')2) y monovalentes (Fab) de anticuerpos de pénfigo vulgar. El poder investigar si los autoanticuerpos de pénfigo vulgar difieren realmente de los de pénfigo violáceo en el modo en que producen la acantolisis nos proporciona una nueva visión sobre los mecanismos patógenos relevantes por los cuales estos autoanticuerpos son capaces de desencadenar acantolisis.

La determatitis atópica (DA) es una enfermedad inflamatoria cutánea de curso crónico y recidivante, cuyo aspecto clínico difiere en las distintas edades, por lo que es probable que también intervengan agentes etiológicos distintos siendo este motivo la hipótesis de este trabajo.El presente trabajo se ha planificado persiguiendo los siguientes objetivos:1.Comprobar si los niños afectos de eczema atópico están sensibilizados a neumoalergenos. 2.Comprobar si esos neumoalergenos son responsables de la dermatitis o si son la causa de alguna enfermedad respiratoria de etiología alérgica (rinitis, asma), concomitante con la DA. 3.Comprobar si existe sensibilización a alimentos. 4.Verificar si la sensibilización a uno u otro tipo de alergeno tiene lugar a cualquier edad o si se observan diferencias en distintas edades.El grupo de trabajo consta de 79 pacientes pediátricos divididos en 3 grupos:1º Niños con DA(según Hanifin y Rajka) 64, divididos en 2 subgrupos según presenten alergia respiratoria(AR)-asma y/o rinitis- 37 pacientes, el motivo de incluir este grupo es comprobar si las pruebas positivas podrían relacionarse o no con la enfermedad cutánea, el otro subgrupo esta formado por pacientes con DA con un total de 27. 2º Grupo control: 8 niños con AR, para comprobar si este grupo reacciona a la prueba del parche con neumoalergenos, esta prueba será la base para comprobar la posible responsabilidad de los neumoalergenos en la etiología de la DA, pero su utilidad se vería invalidada si este grupo también respondiese a esta prueba. 3º Grupo control:7 niños sanos para descartar pruebas positivas inespecíficas en la población no atópica. Todos los grupos se han dividido por edades según las fases de la D.A., fase lactante (< 2 años): 21, fase infantil (2-10 años).37, fase adolescente (>10 años):21. A todos los pacientes se les efectuó : IgE sérica total (RIA), IgE alérgeno específica (RAST), Prick-test y Patch-test esta prueba se realizo en la espalda con los mismos extractos que los del Prick-test. Estas 3 pruebas se realizaron con un estándar de neumoalergenos y alergenos alimentarios. En caso de prueba del parche positiva se realizó biopsia con estudio anatomopatológico y con Ac. Monoclonales (CD3,CD4,CD8,CD19,CD54-ICAM,OKT6,HLA-DR, Anti-human IgE,CD57)para ver si se reproduce la lesión de eczema. Entre los resultados destacan diferencias etiológicas entre los pacientes con DA según presenten clínica respiratoria y según la edad, con un claro predominio de sensibilización a alimentos en el grupo de menos de 2 años, existiendo una correlación etiológica de la DA con la sensibilización a alimentos. En la edad intermedia de 2 a 10 años destaca la sensibilización mixta, en gran parte por la afectación respiratoria simultánea, pero es muy probable que los neumoalergenos participen en la etiopatogenia de la DA. En los mayores de 10 años predomina la sensibilización a neumoalergenos por coincidir la mayoría con clínica respiratoria. Un 34,3% de pacientes con DA presentan prueba del parche positiva, siendo prácticamente la mitad de las pruebas positivas a ácaros. En los casos en que la prueba del parche a neumoalergenos fue positiva y se realizó biopsia (48,5%), en todas ellas fue compatible con eczema. La prueba del parche proporciona un importante valor diagnostico en la DA, no encontrándose ninguna prueba del parche positiva en el grupo control. Todas las biopsias de pruebas del parche a neumoalergenos reproducen la lesión típica del eczema lo que demuestra su implicación en la etiopatogenia de la dermatitis. Por último mencionar que en los pacientes con DA sin clínica respiratoria con prueba del parche positiva a neumoalergenos, parece ser que la vía de sensibilización es la cutánea puesto que no presentan clínica respiratoria.

Se han desarrollado y optimizado dos nanoemulsiones que contienen Nistatina (N1 y N2) para su aplicación en piel y mucosa oral, respectivamente. Estas formulaciones tuvieron un tamaño de gota nanométrico y resultaron ser estables a lo largo del tiempo. Adicionalmente se determinó el comportamiento reológico de ambos sistemas resultando ser fluidos newtonianos. Se evaluó la actividad antifúngica in vitro, observado que la potencia de la nistatina aumentó al ser introducida en las nanoemulsiones, cuando se comparaba con la nistatina libre. El mecanismo de liberación de la nistatina de las nanoemulsiones siguió una cinética de orden uno para ambas formulaciones. Trás el ensayo de permeación ex vivo en piel humana con la nanoemulsion N1 se observó que la cantidad de fármaco permeada fue muy baja, pudiendo descartarse la posible aparición de efectos adversos a nivel sistémico. De la misma manera se realizó el ensayo de permeación ex vivo en mucosa oral porcina para la formulación N2 llegando a la misma conclusión que en el caso de la permeación en piel. En ambos casos la cantidad de fármaco retenido en el tejido (tanto en piel o mucosa) es suficiente para observar un efecto fungistático, fungicida y un prolongado efecto post-antifungico (PAFE). Con el fin de determinar el efecto de la nanoemulsion N2 sobre la mucosa oral se visualizó la ultra-estructura del tejido y no observándose variaciones significativas cuando se comparaban con el control (mucosa no tratada con la nanoemulsion). Las nanoemulsiones N1 y N2 son formulaciones prometedoras para el potencial tratamiento clínico de candidiasis muco-cutáneas. / Muco-cutaneous candidosis is a common opportunistic infection must be treated to prevent other tissue invasion. Nystatin is one of the most prescribed drugs to treat this pathology, but due to its physicochemical properties its pharmaceutical-technological requirements make it a challenge. The purpose of this work was the development and characterization of an optimal nystatin delivery system for the potential treatment of oral candidosis avoiding undesirable side effects and toxicity of potential systemic absorption. Two nanoemulsion (N1 and N2) was developed, evaluated and characterized. It has been formulated successfully as a stable nanoemulsion with a droplet size of 75 and 138 nm, respectively. First order release parameters were estimated using different mathematical approaches and ex vivo permeation of nystatin through human skin and porcine buccal mucosa were found no systemic effects would happen. Microbiologic studies performed revealed an enhanced antifungal effect of the nystatin loaded nanoemulsion. Also the evaluation of buccal mucosa ultrastructure by transmission electron microscopy methodology showing a harmless effect in the mucosa microstructure. We can infer that the selected nystatin nanoemulsion could be potentially used on candidosis infection under mucositis conditions.