Orientador: Silvia Regina Rogatto / Banca: Maria Inês de Moura Campos Pardini / Banca: Carlos Eduardo Bacchi / Resumo: O câncer de mama (CM) ocupa o primeiro lugar em incidência e o segundo em mortalidade entre as mulheres no mundo. É considerada uma doença heterogênea com alterações em diversas vias de sinalização molecular. Os fatores prognósticos atuais são incapazes de predizer a evolução da totalidade dos pacientes, assim como os marcadores preditivos não conseguem evitar que grande parte das pacientes com CM sejam submetidas à tratamento desnecessário. A busca de outros marcadores tumorais, tanto prognósticos quanto preditivos tem sido alvo de inúmeras pesquisas, que buscam predizer a evolução clínica de um número maior de pacientes. Dois marcadores tumorais com possíveis implicações clínicas são o TGFB1 e o seu receptor TGFBR2. No entanto, o papel do TGFB1 na carcinogênese e na progressão do câncer de mama ainda não é totalmente conhecido. Desta forma, o objetivo deste estudo foi avaliar a expressão do TGFB1 e do TGFBR2 em tumores de mama e correlacionar com os dados clínicos e histopatológicos. Para tanto, foram analisadas 49 amostras de carcinomas ductais invasivos primários e sete amostras de mamas normais como controles pelas técnicas de RT-PCR quantitativa em tempo real (qRTPCR) e imunohistoquímica (IHQ). Os resultados mostraram que baixos níveis de expressão protéica de TGFB1 nas células tumorais estavam associados a menor sobrevida livre de doença. Os tumores apresentaram acentuada diminuição da expressão do transcrito TGFBR2 quando comparados ao controle normal. Além disso, foram observados baixos níveis dos transcritos TGFB1 e TGFBR2 nos tumores com fenótipos mais agressivos (alto índice proliferativo e estadio avançado). Esses dados sugerem que o TGFB1 atua como supressor tumoral em CMs e que a diminuição da expressão TGFB1 e TGFBR2 é um evento importante na carcinogênese mamária. A detecção dos níveis de expressão protéica... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Breast cancer (BC) is the leading female cancer in incidence and the second one in mortality worldwide. BC is considered a heterogeneous disease, that presents abnormalities in several molecular pathways. The known prognostic markers are not capable to predict the outcome of all the patients, as well as the predictive markers are not capable to avoid unnecessary treatments. It is necessary to search for other tumor markers, even prognostic and predictive, regarding the prediction of a higher number of patient's outcome. Two tumor markers with possible clinical implications are TGFB1 and its receptor TGFBR2. However the role of TGFB1 in carcinogenesis and in the BC progression is not totally understood yet. In this way, the aim of this study was to analyze the expression of TGFB1 and TGFBR2 in breast tumors and to correlate it with clinical and histopathological data. For this, it were analyzed 49 ductal invasive carcinomas and 7 normal breast tissues as controls with quantitative real time PCR (qRT-PCR) and immunohistochemistry (IHC) technologies. The results showed that low expression levels of TGFB1 protein in tumor cells were associated with a lower disease-free survival. Tumors presented highly diminished TGFBR2 transcript expression when compared with normal controls. Moreover, low levels of TGFB1 and TGFBR2 transcripts were observed in tumors with aggressive phenotypes (high proliferation index and advanced stage). These results suggests that TGFB1 acts like a tumor supressor in BCs and that the TGFB1 and TGFBR2 lowering expression is an important event in mammary carcinogenesis. The detection of tumor TGFB1 protein expression levels can be helpful in clinical practice like a prognostic marker in mammary carcinomas. / Mestre

Resumo: Transição epithelial-mesenquimal (EMT) é a conversão de células epiteliais polarizadas para células migratórias com fenótipo fibroblasto-símile. A EMT está envolvida na progressão e metástase em diversos cânceres nos seres humanos, porém permanece a ser mais bem explorada na literatura veterinária. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a imunoexpressão de proteínas relacionadas à EMT nos carcinomas mamários de cadelas (CMCs). Seis proteínas foram avaliadas por meio de imunoistoquímica em 94 amostras de CMCs. Tecidos mamários não neoplásicos de 17 cadelas e amostras de 9 tumores mamários benignos de cadelas foram avaliados de modo a determinar o perfil de imunoexpressão de Snai-1. Características anatomopatológicas foram comparadas com a imunoexpressão de proteínas relacionadas à EMT nos CMCs. A perda de proteínas epiteliais e/ou a aquisição de proteínas mesenquimais foi observada principalmente em neoplasias com evidência de invasão estromal; entretanto, somente foi observada significância estatística quando comparado S100A4 e invasão vascular. Snai-1 foi observado em células luminais de neoplasias simples malignas e em células mioepiteliais de tumores benignos ou malignos de caráter complexo, sendo também significativamente relacionado à baixa de expressão de Caderina-E. Conclui-se que a perda de proteínas epiteliais e/ou a aquisição de proteínas mesenquimais está associada com EMT e pode possuir importante papel na avaliação de CMCs. O padrão único de imunoexpressão de Snai-1 pode ajudar a distinção entre um adenoma e um carcinoma não metastático e aparenta estar relacionado à conversão de células mioepiteliais a um fenótipo mesenquimal completo. A perda de Caderina-E e citoqueratina e a mudança no padrão de imunoexpressão de Snai-1, Caderina-N, S100A4 e MMP-2 indica a ocorrência de EMT em carcinomas mamários de cadelas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Epithelial-mesenchymal transition (EMT) is defined as switching of polarized epithelial cells to a migratory fibroblastoid phenotype. EMT is known to be involved in the progression and metastasis of various cancers in humans, but this specific process is still little explored in the veterinary literature. The aim of this research was to evaluate the expression of EMT-related proteins in canine mammary carcinomas (CMCs). The expression of six EMT-related proteins in CMC of 94 female dogs was evaluated by immunohistochemistry. Additionally, mammary tissues from 17 female dogs with no history of mammary tumor development and from 9 bitches with benign tumors were evaluated in order to determine Snai-1 immunoexpression patterns. Anatomopathological characteristics were compared with the expression of EMTrelated proteins in CMCs. Loss of epithelial protein and/or acquisition of the expression of mesenchymal proteins were observed, particularly in tumors with evidence of stromal invasion; however, significance was only observed between the S100A4 and vascular invasion. Snai-1 was only expressed in luminal cells of histologically malignant tumors and in myoepithelial cells of benign and malignant complex tumors and was significantly related to E-cadherin loss. In conclusion, loss of epithelial proteins and/or the acquisition of mesenchymal proteins are associated with EMT and may have an important role in the evaluation of CMC patients. The unique immunoexpression pattern of Snai-1 could help to distinguish between an adenoma and a non-metastatic carcinoma and seems to be related to conversion of myoepithelial cells to a complete mesenchymal-like phenotype. Loss of E-cadherin and cytokeratin and change of immunoexpression pattern of Snai-1, N-cadherin, S100A4 and MMP-2 indicate the occurrence of EMT in canine mammary carcinomas and should result in an en bloc resection or a close follow-up. / Orientador: Noeme Souza Rocha / Coorientador: Rafael Malagoli Rocha / Banca: Deilson Elgui de Oliveira / Banca: Geovanni Dantas Cassali / Mestre