A neoplasia mamária é uma afecção que acomete freqüentemente as fêmeas da espécie canina sendo responsável por grande parte das neoplasias que atingem esses animais. Esta pesquisa visou comparar, no momento pré-operatório, o exame tomográfico contrastado ao exame radiográfico para pesquisa de metástases na cavidade torácica de cadelas com neoplasias mamárias malignas, de forma que, nesta oportunidade, ateve-se à análise descritiva das imagens radiográficas e tomográficas. Para tanto foram realizados exames radiográficos e de tomografia computadorizada contrastada da cavidade torácica de vinte fêmeas da espécie canina portadoras de neoplasias mamárias malignas atendidas pelos Serviços de Obstetrícia e Ginecologia e de Cirurgia do Hospital Veterinário da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo. Constaram do grupo experimental, somente animais que não apresentaram evidências de portarem nódulos pulmonares. Dos vinte animais estudados nesta pesquisa 20% apresentaram quadros pulmonares (10% quadro intersticial - difuso, 5% quadro intersticial - nódulo suspeito e 5% quadro misto) e um animal (5%) apresentou efusão pleural aos exames radiográficos. Já aos exames tomográficos foram observados os seguintes achados: quadro alveolar em 25% dos animais, quadro brônquico em 30% e em 45% quadro misto; em 25% dos animais foram visibilizados nódulos pulmonares e em 75% linfonodos mediastinais. Apenas um animal (5%) apresentou tamanho de linfonodo mediastinal maior que 10mm, 20% apresentaram tamanho entre 6 e 10mm e 50 % dos animais apresentaram linfonodos que mediam até 5mm. Em 65% dos animais os linfonodos axilares foram visibilizados pelos exames tomográficos, sendo que, em 25% dos animais eles mediam até 5mm, em 35% eles mediam de 6 a 10mm e em apenas uma cadela o linfonodo media mais que 10mm. Em 30 % dos exames foi possível, através das imagens tomográficas, observar alterações em fígado e em 40% alterações em pele e/ou subcutâneo. Também foram relacionados aspectos relativos à técnica tomográfica com a finalidade de possibilitar a reprodução das técnicas utilizadas. O exame tomográfico mostrou-se um importante complemento do exame radiográfico na pesquisa de metástases de neoplasias mamárias em cadelas especialmente no que se refere à avaliação do interstício pulmonar e dos linfonodos mediastinais e axilares. O exame tomográfico mostrou-se superior ao exame radiográfico nos detalhes da avaliação de campos pulmonares, mediastino e espaço pleural. O exame tomográfico possibilitou, de forma suplementar, o estudo dos linfonodos mediastinais e axilares, das alterações presentes em pele, subcutâneo e em fígado, que não puderam ser avaliados pelo exame radiográfico. / Mammary gland tumors affect frequently female dogs, accounting for the majority of neoplasias that occur in these animals. This research was performed in bitches with malignant mammary gland tumors, to compare contrast computed tomographyc and survey radiographc techniques in detecting thoracic metastasis at preoperatory moment. Twenty bitches with malignant mammary gland tumors were examined at the Obstetric and Ginecology and Surgery Services of the Veterinary School Hospital of the Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia of the University of São Paulo. Only animals with no evidence of pulmonary nodules were studied. Of the 20 studied animals, 20% presented pulmonary patterns (10% diffuse intersticial pattern, 5% suspected nodule and 5% presented mixed pattern). At the tomographic exam, 25% presented alveolar pattern, 30% bronquial pattern and 45% mixed pattern; 25% of the animals presented pulmonary nodules and in 75% mediastinal lymph nodes were seen. Only one animal (5%) had lymph node bigger than 10mm, 20% between 6 and 10 and 50% of the animals had lymph nodes measuring up to 5mm. Axilary lymph nodes were seen in 65% of the cases, 25% of the animals presented axilary lymph nodes measuring up to 5mm, 35% had had lymph nodes measuring between 6 to 10mm and only one had lymph node bigger than 10mm. In 30% of the exams hepatic findings could be determined, also in 40% of the cases, skin and subcutaneous alterations were seen. Aspects related to the tomographic technique were also registered to make the techniques reproduction possible. The tomographic exam showed up as an important complement of the radiographic exam, in searching for mammary gland metastasis in female dogs, specialy concerning the evaluation of the pulmonary intersticium and the axilary and mediastinal lymph nodes. The tomographic exam was considered superior in details than the radiographic exam in the evaluation of the pulmonary fields, mediastinal structures and pleural space. Different from the radiographic examinations, the tomographic technique allowed the study of mediastine and axilary lymph nodes, skin, subcutaneous and liver.

A neoplasia mamária é uma afecção que acomete freqüentemente as fêmeas da espécie canina sendo responsável por grande parte das neoplasias que atingem esses animais. Esta pesquisa visou comparar, no momento pré-operatório, o exame tomográfico contrastado ao exame radiográfico para pesquisa de metástases na cavidade torácica de cadelas com neoplasias mamárias malignas, de forma que, nesta oportunidade, ateve-se à análise descritiva das imagens radiográficas e tomográficas. Para tanto foram realizados exames radiográficos e de tomografia computadorizada contrastada da cavidade torácica de vinte fêmeas da espécie canina portadoras de neoplasias mamárias malignas atendidas pelos Serviços de Obstetrícia e Ginecologia e de Cirurgia do Hospital Veterinário da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo. Constaram do grupo experimental, somente animais que não apresentaram evidências de portarem nódulos pulmonares. Dos vinte animais estudados nesta pesquisa 20% apresentaram quadros pulmonares (10% quadro intersticial - difuso, 5% quadro intersticial - nódulo suspeito e 5% quadro misto) e um animal (5%) apresentou efusão pleural aos exames radiográficos. Já aos exames tomográficos foram observados os seguintes achados: quadro alveolar em 25% dos animais, quadro brônquico em 30% e em 45% quadro misto; em 25% dos animais foram visibilizados nódulos pulmonares e em 75% linfonodos mediastinais. Apenas um animal (5%) apresentou tamanho de linfonodo mediastinal maior que 10mm, 20% apresentaram tamanho entre 6 e 10mm e 50 % dos animais apresentaram linfonodos que mediam até 5mm. Em 65% dos animais os linfonodos axilares foram visibilizados pelos exames tomográficos, sendo que, em 25% dos animais eles mediam até 5mm, em 35% eles mediam de 6 a 10mm e em apenas uma cadela o linfonodo media mais que 10mm. Em 30 % dos exames foi possível, através das imagens tomográficas, observar alterações em fígado e em 40% alterações em pele e/ou subcutâneo. Também foram relacionados aspectos relativos à técnica tomográfica com a finalidade de possibilitar a reprodução das técnicas utilizadas. O exame tomográfico mostrou-se um importante complemento do exame radiográfico na pesquisa de metástases de neoplasias mamárias em cadelas especialmente no que se refere à avaliação do interstício pulmonar e dos linfonodos mediastinais e axilares. O exame tomográfico mostrou-se superior ao exame radiográfico nos detalhes da avaliação de campos pulmonares, mediastino e espaço pleural. O exame tomográfico possibilitou, de forma suplementar, o estudo dos linfonodos mediastinais e axilares, das alterações presentes em pele, subcutâneo e em fígado, que não puderam ser avaliados pelo exame radiográfico. / Mammary gland tumors affect frequently female dogs, accounting for the majority of neoplasias that occur in these animals. This research was performed in bitches with malignant mammary gland tumors, to compare contrast computed tomographyc and survey radiographc techniques in detecting thoracic metastasis at preoperatory moment. Twenty bitches with malignant mammary gland tumors were examined at the Obstetric and Ginecology and Surgery Services of the Veterinary School Hospital of the Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia of the University of São Paulo. Only animals with no evidence of pulmonary nodules were studied. Of the 20 studied animals, 20% presented pulmonary patterns (10% diffuse intersticial pattern, 5% suspected nodule and 5% presented mixed pattern). At the tomographic exam, 25% presented alveolar pattern, 30% bronquial pattern and 45% mixed pattern; 25% of the animals presented pulmonary nodules and in 75% mediastinal lymph nodes were seen. Only one animal (5%) had lymph node bigger than 10mm, 20% between 6 and 10 and 50% of the animals had lymph nodes measuring up to 5mm. Axilary lymph nodes were seen in 65% of the cases, 25% of the animals presented axilary lymph nodes measuring up to 5mm, 35% had had lymph nodes measuring between 6 to 10mm and only one had lymph node bigger than 10mm. In 30% of the exams hepatic findings could be determined, also in 40% of the cases, skin and subcutaneous alterations were seen. Aspects related to the tomographic technique were also registered to make the techniques reproduction possible. The tomographic exam showed up as an important complement of the radiographic exam, in searching for mammary gland metastasis in female dogs, specialy concerning the evaluation of the pulmonary intersticium and the axilary and mediastinal lymph nodes. The tomographic exam was considered superior in details than the radiographic exam in the evaluation of the pulmonary fields, mediastinal structures and pleural space. Different from the radiographic examinations, the tomographic technique allowed the study of mediastine and axilary lymph nodes, skin, subcutaneous and liver.

Submitted by Mayara Caroline Rosolem null (mayara_rosolem@yahoo.com.br) on 2017-12-13T13:13:58Z No. of bitstreams: 1 Tese_Mayara_Caroline_Rosolem.pdf: 2522128 bytes, checksum: af877102b33947d3515c6cd2c29b01af (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br) on 2017-12-13T13:40:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 rosolem_mc_dr_jabo.pdf: 2522128 bytes, checksum: af877102b33947d3515c6cd2c29b01af (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-13T13:40:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rosolem_mc_dr_jabo.pdf: 2522128 bytes, checksum: af877102b33947d3515c6cd2c29b01af (MD5) Previous issue date: 2017-11-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os tumores mamários malignos possuem várias formas de evadir o sistema imune e, dentre elas está a modulação das células dendríticas (DCs), por interferência na sua maturação, resultando em apresentação de antígenos ineficiente aos linfócitos T e consequente indução da tolerância imunológica. As DCs moduladas pelo tumor recrutam muitos linfócitos T regulatórios (Tregs) para o microambiente tumoral, o que amplia os efeitos imunossupressores locais. A forte relação entre as DCs e os linfócitos Tregs no microambiente tumoral ainda foi pouco estudada, principalmente em cães. Por isso, este estudo teve o objetivo de avaliar a relação existente entre as DCs e os linfócitos Tregs em carcinomas mamários caninos do tipo simples de cadelas, por meio da técnica de imunohistoquímica. Foram utilizadas 10 amostras de glândula mamária sem tumor (G1) e 40 amostras de neoplasias mamárias (G2: adenomas; G3: carcinomas papilares; G4: carcinomas tubulares e G5: carcinomas sólidos), que foram submetidas a imunodetecção de linfócitos Treg (FOXP3+), linfócitos T CD4 e T CD8, MHC-II, DCs mieloides (imaturas e maduras), as citocinas TGF-β, IL-10, a enzima Indoleamine 2,3-dioxigenase (IDO) e dos receptores de quimiocina (CCR6 e CCR7). A maioria das células, citocinas e receptores imunológicos mostraram correlação positiva dentro da população tumoral e controles avaliados, principalmente sobre o efeito fixo “idade”, que teve alta correlação positiva com o tamanho tumoral e com CCR6. Quanto às correlações negativas, o anticorpo CD83 foi o único que não teve correlação significativa positiva com nenhuma outra variável. Observou-se que houve ocorreu relação entre as DCs mieloides imaturas/maduras e linfócitos Tregs, bem como TGF-β e IL-10, e a enzima IDO apresentaram marcante presença nas amostras malignas. A imunodetecção de CCR6 e CCR7 ocorreu principalmente nos tumores mais agressivos, onde CCR6 teve alta relação com as pacientes mais idosas e com tumores maiores, o que, no final de tudo pode refletir que o envelhecimento do sistema imunológico possa ser mais um fator pró-tumoral. / The malignant mammary tumors have several ways of evading the immune system, including the modulation of dendritic cells (DCs), by interfering with their maturation, resulting in inefficient presentation of antigens to T cells and consequent induction of immunological tolerance. Tumor-modulated DCs recruit many regulatory T cells (Tregs) into the tumor microenvironment, which amplifies local immunosuppressive effects. The strong relationship between DCs and Tregs cells into the tumor microenvironment was poorly studied, especially in dogs. Therefore, this study aimed to evaluate the relationship between DCs and Tregs cells in the simple type canine mammary carcinomas, using the immunohistochemical technique. Ten samples of mammary gland without tumor (G1) and 40 samples of mammary neoplasms (G2: adenomas, G3: papillary carcinomas, G4: tubular carcinomas and G5: solid carcinomas) were submitted to immunodetection of Treg cells (FOXP3 +), CD4 and CD8 T cells, MHC-II, myeloid DCs (immature and mature), cytokines TGF-β, IL10, Indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO) and chemokine receptors (CCR6 and CCR7). Most of the cells, cytokines and immunological receptors showed positive correlation within the tumor population and controls evaluated, mainly on the fixed effect "age” that had high positive correlation with the tumor size and with CCR6. As for the negative correlations, the CD83 antibody was the only one that had no significant positive correlation with any other variable. It was observed that there was a relationship between immature / mature myeloid DCs and Tregs cells, as well as TGFβ and IL-10, and the IDO enzyme showed a marked presence in the malignant samples. Immunodetection of CCR6 and CCR7 occurred mainly in the most aggressive tumors, where CCR6 had a high relation with older patients and with larger tumors, which, in the end, may reflect that the aging of the immune system may be more of a pro- tumor. / FAPESP: 2012/09385-0

Les tumeurs mammaires canines (CMT) sont les plus fréquents néoplasmes chez les chiennes intactes. Aucun consensus n’existe, actuellement, concernant le protocole thérapeutique des tumeurs invasives ou métastatiques. Des études récentes démontrent l’implication du dérèglement de la voie Hippo dans le développement et la progression des CMTs. Les statines, en inhibant la geranylgeranylation (GGylation) protéique, activent la voie Hippo et suspendent les effets transcriptionnels de YAP et TAZ. Cette étude évalue le ciblage thérapeutique de la voie Hippo avec deux statines (atorvastatine et fluvastatine) sur deux lignées cellulaires de CMT (CMT9 et CMT47). Les deux statines ont démontré une cytotoxicité pour CMT9 et CMT47 avec de IC50 de 0,95 µM et 23,5 µM respectivement. Les statines ont également diminué les niveaux des protéines effectrices de la voie, YAP et TAZ, ainsi que les niveaux d’ARNm de trois gènes cibles de YAP-TAZ/TEAD connus pour leur rôle dans la progression du cancer du sein et la chimiorésistance : CYR61, CTGF et RHAMM. De plus, la migration cellulaire de CMT47 et la croissance indépendante de l’ancrage des deux lignées ont été inhibées en présence de statines mais pas l’invasion de la matrice extracellulaire. Enfin, les analyses FACS ont montré une augmentation de l’apoptose et un arrêt du cycle cellulaire. Nos résultats suggèrent que les statines activent la voie Hippo et ciblent différents mécanismes moléculaires et cellulaires dans les CMT in vitro. Les statines agissent sur la voie Hippo et pourraient représenter une approche innovante pour le traitement des tumeurs mammaires canines invasives ou métastatiques. / Canine mammary tumours (CMTs) are the most common neoplasms in intact bitches, and no effective chemotherapeutic options are available for highly invasive and metastatic tumors. Recent studies show the potential involvement of dysregulated Hippo signaling in CMT development and progression. Protein geranylgeranylation (GGylation) is an important post-translational modification for many signaling molecules, and its blockade with statins has been shown to inhibit YAP/TAZ-mediated transcriptional activity via activation of the Hippo pathway. In this study, we sought to determine if protein GGylation represents a valid pharmacological target in CMTs. Two CMT cell lines (CMT9 and CMT47) were evaluated for their sensitivity to atorvastatin and fluvastatin. Results demonstrated statins to be cytotoxic to both cell lines, with IC50 values ranging from 0.95 µM to 23.5 µM. In addition, both statins lowered Hippo pathway effector proteins YAP and TAZ and reduced the mRNA levels of key transcriptional target genes known to be involved in breast cancer progression and chemoresistance (CYR61, CTGF and RHAMM). Moreover, both statins effectively inhibited cell migration in CMT47 and anchorage independent growth in CMT9 and CMT47, but did not modulate matrix invasion. Finally, our FACs results showed that both statins increase apoptosis and promote cell cycle arrests. Taken together, our results indicate that statins activate the Hippo pathway in CMTs and modulate several aspects of CMT’s molecular and cellular behaviours. These findings suggest that targeting the Hippo pathway with statins could be a novel approach for the treatment of invasive, metastatic or inoperable canine mammary gland cancers.