Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-11-27Bitstream added on 2014-06-13T19:30:08Z : No. of bitstreams: 1 toledo_czp_me_jabo.pdf: 2114280 bytes, checksum: 3353189f0d92e6cea2a99b3bf82c63cc (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Objetivou-se com este estudo analisar a morfologia placentária de fêmeas asininas, espécie, cuja importância no meio rural é de inestimável valor, sendo poucas as informações detalhadas sobre sua placenta, “órgão” imprescindível à viabilidade fetal e a interação materno-fetal, mediante estudo macroscópico, microscópico e de microscopia eletrônica de varredura, os quais, exceto a macroscopia, foram realizados também na interação materno-fetal (útero-placentária). Para tanto, utilizaram-se onze fêmeas desta espécie e foram colhidas 11 placentas logo após a parição a campo, no instante de sua liberação, além de fragmentos de uma placenta oriunda de uma dessas 11 fêmeas, que teve sua gestação acompanhada por duas vezes. Assim, na primeira delas realizou-se operação cesariana e fragmentos da interação materno-fetal foram colhidos; parte deles fixados para posterior processamento usual em histologia e, outra parte, fixada e processada para análise à microscopia eletrônica de varredura. Sua segunda gestação foi acompanhada até o momento da parição e a liberação da placenta após parto normal, sendo colhida na íntegra. Após a colheita, as onze placentas foram pesadas, analisadas macroscopicamente e alguns fragmentos placentários fixados para subseqüente processamento usual em histologia; outros fragmentos foram fixados convenientemente para posterior processamento à microscopia eletrônica de varredura. Das peças analisadas e das preparações microscópicas e ultraestruturais, foram realizadas fotografias, fotomicrografias e ultrafotografias para a documentação. Verificou-se que o valor médio dos pesos dos jumentos, como os pesos das placentas, em relação aos neonatos foi de 8.36.1.10 e 13,18% respectivamente... / The objective of this study was analyzing the placental morphology of female asinines, species whose importance in the rural area is priceless, being little the detailed information about their placenta, vital “organ” to fetal viability and maternal fetal interaction, upon macroscopic, microscopic study, and scanning electron microscopy, which, except the macroscopy, were performed also in the maternal fetal interaction (placental-uterus). Therefore, eleven females of this species were used and eleven placentae were collected right after the calving down at field, in the instant of their release, besides the placenta fragments of one of these eleven females, which had its gestation followed-up twice. Thus, in the first of them, a caesarian operation was performed and fragments of the maternal fetal interaction were collected; part of them fixed for future usual processing in histology and, the other part, fixed and processed for analyses to scanning electron microscopy. Its second gestation was followed up until the moment of calving and the liberation of the placenta after the normal calving, being collected at full. After being collected, the eleven placentae were weighed, analyzed macroscopically and some placental fragments fixed for later usual processing in histology; other fragments were fixed conveniently for future processing to scanning electron microscopy. Among the analyzed pieces and the microscopic and ultra structural preparations, photographs, photomicrographs and ultra photographs were taken for the documentation. It was found that the average weights of the donkeys, as the weights of the placentae, in relation to the neonates were 8.36.1.10 and 13.18% respectively... (Coplete abstract click electronic access below)

Resumo: Objetivou-se com este estudo analisar a morfologia placentária de fêmeas asininas, espécie, cuja importância no meio rural é de inestimável valor, sendo poucas as informações detalhadas sobre sua placenta, "órgão" imprescindível à viabilidade fetal e a interação materno-fetal, mediante estudo macroscópico, microscópico e de microscopia eletrônica de varredura, os quais, exceto a macroscopia, foram realizados também na interação materno-fetal (útero-placentária). Para tanto, utilizaram-se onze fêmeas desta espécie e foram colhidas 11 placentas logo após a parição a campo, no instante de sua liberação, além de fragmentos de uma placenta oriunda de uma dessas 11 fêmeas, que teve sua gestação acompanhada por duas vezes. Assim, na primeira delas realizou-se operação cesariana e fragmentos da interação materno-fetal foram colhidos; parte deles fixados para posterior processamento usual em histologia e, outra parte, fixada e processada para análise à microscopia eletrônica de varredura. Sua segunda gestação foi acompanhada até o momento da parição e a liberação da placenta após parto normal, sendo colhida na íntegra. Após a colheita, as onze placentas foram pesadas, analisadas macroscopicamente e alguns fragmentos placentários fixados para subseqüente processamento usual em histologia; outros fragmentos foram fixados convenientemente para posterior processamento à microscopia eletrônica de varredura. Das peças analisadas e das preparações microscópicas e ultraestruturais, foram realizadas fotografias, fotomicrografias e ultrafotografias para a documentação. Verificou-se que o valor médio dos pesos dos jumentos, como os pesos das placentas, em relação aos neonatos foi de 8.36.1.10 e 13,18% respectivamente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was analyzing the placental morphology of female asinines, species whose importance in the rural area is priceless, being little the detailed information about their placenta, vital "organ" to fetal viability and maternal fetal interaction, upon macroscopic, microscopic study, and scanning electron microscopy, which, except the macroscopy, were performed also in the maternal fetal interaction (placental-uterus). Therefore, eleven females of this species were used and eleven placentae were collected right after the calving down at field, in the instant of their release, besides the placenta fragments of one of these eleven females, which had its gestation followed-up twice. Thus, in the first of them, a caesarian operation was performed and fragments of the maternal fetal interaction were collected; part of them fixed for future usual processing in histology and, the other part, fixed and processed for analyses to scanning electron microscopy. Its second gestation was followed up until the moment of calving and the liberation of the placenta after the normal calving, being collected at full. After being collected, the eleven placentae were weighed, analyzed macroscopically and some placental fragments fixed for later usual processing in histology; other fragments were fixed conveniently for future processing to scanning electron microscopy. Among the analyzed pieces and the microscopic and ultra structural preparations, photographs, photomicrographs and ultra photographs were taken for the documentation. It was found that the average weights of the donkeys, as the weights of the placentae, in relation to the neonates were 8.36.1.10 and 13.18% respectively... (Coplete abstract click electronic access below) / Orientador: Gilson Hélio Toniollo / Coorientador: Márcia Rita Fernandes Machado / Banca: Marion Burkhardt de Koivisto / Banca: Marcos Lania de Araújo / Mestre

Orientador: Aureo Tatsumi Yamada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T15:32:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Farias_AlineMacedo_M.pdf: 19526520 bytes, checksum: dc55dc97ad91bfacd185ea4b6bfb7e81 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: o sucesso da implantação e desenvolvimento embrionário em animais de placentação do tipo hemocorial requer além da presençafísica do embrião/feto,uma dinâmica de alterações seqüenciais na interface materno-fetal do útero gestante. Tais alterações são mediadas e controladas pelas ações sincronizadas de uma série de fatores de efeito endócrino, parácrino e autócrino, com o comprometimento de diversas células presentes nesta interface. Dentre as peculiaridades do útero gestante, o recrutamento e o acúmulo de células uNK têm sido apontado como de fundamental importância na modulação da homeostase da interface materno-fetal para o desenvolvimento normal da gestação. Por outro lado, a complexidade das múltiplas interações célula-célula e citocinas-células que modulam a interação materno-fetal, dificulta a compreensão plena dos mecanismos envolvendo a participação das células uNK na imunomodulação do útero gestante. Portanto, procuram-se por procedimentos que permitam as análises do comportamento das células uNK em condiçõesexperimentais controladas,assim como, elucidar tanto as vias da ativação, quanto da inibição das atividades moduladorasdestas células na gestação. O presente trabalho teve como objetivo estabelecer um modelo experimental de cultivo de células uNK avaliando desde a viabilidade das células isoladas do útero de camundongos gestantes e, testando diversas condições para manipulação e manutenção in vitro destas células. Foram aprimorados os procedimentos de isolamento positivo e purificação das células uNK de camundongos pelo método da esfera magnética revestida com lectina DBA. Foram conduzidos testes quanto aos efeitos dos componentes da matriz extracelular -fibronectina, laminina e colágeno I na sobrevida destas células e, quanto aos efeitos isolados e combinados das interleucinas IL-2, IL-15 e GM-CSF e, das quimiocinas MIP-1j3e CXCL10. Para otimização dos procedimentos destes ensaios, foi desenvovido um protocolo de cultivo em micro-spots, visando manipular células em escala mínima (5x103 células) com reprodutibilidade e sensibilidade que permitisse a padronização dos ensaios in vitro. Dentre os componentes da matriz extracelular testados, a fibronectina proporcionou a manutenção de maior número de células viáveis pelo período de até sete dias de cultivo, enquanto a citocina IL-15 promoveu a diferenciação das células uNK notadamente pelo aumento de grânulos citoplasmáticos. A quimiocina MIP-1j3 induziu a migração de células in vitro, enquanto a CXCL10 teve um efeito inibidor desta ação do MIP-1j3. Por outro lado, as análises quantitativas mostraram que a combinação da CXCL10 e IL-15 manteve o maior número de células uNK aderidas ao substrato de fibronectina em períodos prolongados de cultura, alem de promover a diferenciação destas células. A integridade e viabilidade das células uNK pode ser comprovada pela amplificação de transcriptomas isoladas de 5x103 células através do RT-PCR. Porém, as reações imunocitoquímicas com anti-PCNA não demonstraram qualquer atividade proliferativa nas células uNK mantidas nestas condições de cultivo.Estes resultados demonstram a adequação deste protocolo de cultivo em microspot para diversos ensaios in vitro com as células uNK isoladas de camundongos mesmo em pequenas quantidades e, um protocolo inovador para estudos da fisiologia destas células em situações experimentais controladas / Abstract: The success of embryo implantation and development in the animais of hemochorial type placentation requires beside the presence of the embryo/fetus properly,a dynamic sequential changes at the maternal-fetal interface in the pregnant uterus. These changes are mediated and controlled by synchronized actions of many endocrine, paracrine and autocrine factors with commitment of several cells present at this interface. Among the peculiar features of normal pregnant uterus, the uNK cells recruitment and accumulation has been hallmarked as essential to modulate the maternal-fetal interface homeostasis. Otherwise, the complexity of multiple cell-cell and cytokine-cells interactions involved at the maternal-fetal interaction of pregnant uterus, make difficult the fully understanding of mechanisms related to the participation of uNK cells in the immunomodulation of pregnant uterus. Therefore, it is widely expected to establish and experimental procedures that benefit the analysis of uNK cells behavior under controlled condition and those allowing elucidation of both activation and inhibition of modulator activities of these cells. The present work aimed to establish an experimental model of uNK cells culture evaluating since the viability of isolated from pregnant mouse uterus and testing several conditions for in vitro manipulation and maintenance of these cells. There were improved the procedures of positive isolation and purification of mouse uNK cells by OSAlectin coated magnetic-beadmethod. Tests regarding the effects of extracellular matrix components - fibronectin, lamminin and collagen I on surviving of these cells and effects of interleukin IL-2, IL-15 and GM-CSF and, chemokines MIP-1[3and CXCL10 alone or in combination were perfomerd.To optimize the procedures of these in vitro assays, it was set up a protocol of micro-spot culture for manipulation of minimal scale (5.103cells) of cells with reproducibility and sensibility. Among the extracellular matrix components, the fibronectin promoted the maintenance of highest proportion of viable cells during seven days culture, while the cytokine IL15 induced the uNK cell differentiation noticeable by increasing of cytoplasmatic granules. The chemokine MIP-1[3induced the cell migration in vitro, while CXCL-10 inhibited the effect on MIP-1[3.On the other hand, the quantitative analysis showed the combination of CXCL-10 and IL-15 maintained the largest number of uNK cells for longest time adhered on fibronectin-coated cultures, as so as, the differentiation of these cells. However, the PCNA immunocytochemistry did not show any proliferation activity of uNK cells in culture. The integrity and viability of uNK cells in culture was confirmed by RT-PCR of transcriptomes obtained from 5.103 cells. These results confirm the adequacy of micro-spot culture as new insight using small number of uNK cells for in vitro assays and the establishment of required conditions to maintain these cells in primary culture to study their physiology under controlled experimental conditions / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural