Diss. Linköping : Linköpings universitet, 2007.

Thesis (Ph. D.)--University of Oklahoma. / Bibliography: leaves 153-217.

Orientador: Gisele Fabrino Machado / Banca: Mary Marcondes / Banca: Antonio Carlos Alessi / Resumo: A leishmaniose visceral canina, causada pelo protozoário Leishmania (Leishmania) chagasi, é uma doença de grande ocorrência principalmente na América Latina. A caracterização das lesões sistêmicas associadas à infecção pelo parasita tem sido amplamente estudada, entretanto, poucos autores elucidam a patogenia na forma nervosa. Com o objetivo de compreender melhor os mecanismos envolvidos na inflamação do sistema nervoso central de cães naturalmente infectados por L. chagasi, amostras de liquor e plexo coróide foram colhidas e submetidas à zimografia para a detecção de metaloproteinases (MMPs). Amostras do plexo coróide e liquor de cães sadios foram avaliadas como controle. Os géis de zimograma foram analisados quanto à presença e atividade proteolítica das metaloproteinases -2 e -9. Formas inativas das proteases foram detectadas no plexo coróide, sendo que o Grupo de animais positivos não diferiu do negativo. No liquor foram encontradas formas ativas e inativas das MMPs-2 e -9 e a atividade proteolítica das mesmas diferiu entre os Grupos positivo e negativo. A MMP-2 teve maior detecção nos animais negativos e a MMP-9 nos positivos. O aumento da MMP- 9 no liquor dos cães doentes representa seu possível envolvimento na patogenia das lesões encefálicas ao ocasionarem o rompimento das barreiras hematoencefálica e/ou hematoliquórica, permitindo a passagem de células e proteínas envolvidas no processo inflamatório / Abstract: Canine visceral leishmaniasis, caused by the protozoan Leishmania (Leishmania) chagasi, is a disease with high occurrence in Latin America. The characteristics of the systemic lesions related to the infection have been widely studied, but few studies clarify the disease on a neurological aspect. With the aim of a better understanding of the inflammation mechanisms within the central nervous system of dogs naturally infected by L. chagasi, some samples of cerebrospinal fluid and choroid plexus were collected and submitted to zymography to detect metalloproteinases (MMPs). Samples of choroid plexus and cerebrospinal fluid from healthy dogs were evaluated as control. The zymogram gels were analysed taking into account the presence and the proteolytic activity of metalloproteinase -2 and -9. Inactive forms of the proteases were detected in the choroid plexus, and the group of positive animals did not differ from negative ones. In the cerebrospinal fluid, active and inactive forms of MMP-2 and -9 were found, and their proteolytic activity differed between negative and positive groups. MMP-2 had higher detection in the negative animals and MMP-9 in the positive ones. The increasing of MMP-9 in the cerebrospinal fluid of infected dogs represents its possible involvement in the brain injuries, by causing the disruption of blood-cerebrospinal fluid barrier and/or blood-brain-barrier, allowing the passage of cells and proteins involved in inflammation process / Mestre

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-05-25T14:19:45Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação_Dafne_C_A_Quixabeira.pdf: 2494498 bytes, checksum: df9aad949df97edff70e2580bdd977c5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-25T14:19:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação_Dafne_C_A_Quixabeira.pdf: 2494498 bytes, checksum: df9aad949df97edff70e2580bdd977c5 (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / CAPES / CNPQ / FACEPE / O câncer de colo do útero apresenta distribuição a nível mundial, correspondendo ao quarto mais incidente entre as mulheres. Está associado à infecção prévia pelo Papillomavírus Humano (HPV) em quase a totalidade dos casos. Diversos cofatores atuam em consonância ao HPV para o surgimento de lesões cervicais e posterior carcinoma. Importante destaque como cofator deve ser dado às metaloproteinases de matriz (MMP), enzimas proteolíticas que participam da lise tanto de componentes da matriz extracelular (MEC), como os que não pertencem a matriz. Particularmente a MMP-2 tem destaque relevante no câncer cervical, por favorecer a progressão de lesões in situ para a invasão ao lisar a membrana basal. Polimorfismos na região promotora desse gene têm sido associados ao aumento do risco da progressão do câncer e formação de metástases. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a possível associação dos polimorfismos de base única (SNP) -1306C/T e -735C/T, presentes na região promotora do gene da MMP-2 em lesões cervicais em mulheres de dois Estados da região Nordeste do Brasil. Foram avaliados 52 casos de lesões intraepiteliais de baixo grau (LSIL) e 67 lesões intraepiteliais de alto grau (HSIL) para o polimorfismo -1306 C/T. Enquanto que 63 casos de LSIL e 73 casos de HSIL foram selecionados para a avaliação do SNP 735C/T. 95 casos com citologia normal foram selecionados como grupo controle do -1306C/T e 91 casos para o -735 C/T. A amplificação gênica e posterior genotipagem foram feitas por meio de PCR-RFLP, com o uso das enzimas Pvu II e Hinf I, para os SNP-1306C/T e -735C/T, respectivamente. A MMP-2 C1306T não apresentou associação significativa entre os grupos LSIL e o controle (p=0,1734OR=0.37; 95 % CI=0.3-1.58). Assim como entre os grupos controle e HSIL (p=0,7118 OR=0.08; 95 % CI=0.93-3.3). O mesmo foi observado para a avaliação do MMP-2 C735T, pois não foi encontrada associação significativa entre o grupo LSIL e o controle (p=0,7948; OR=0,94; 95 % CI=0,56-2,15), bem como entre o grupo HSIL e o controle (p=0,7398; OR=1,07; 95 % CI=0,50-1,64). A presença do genótipo TT no modelo recessivo apresentou-se como fator protetor da progressão das lesões cervicais (p=0,03566; OR=0,66; 95 % CI=0,10-0,96). Em relação ao uso de contraceptivo oral como cofator, não foram encontradas associações, tanto entre os casos LSIL (p=0,370 OR=0.65; 95 % CI=0.35-1.93) e HSIL (p=0,6527; OR=0.08; 95 % CI=0.93-3.3) -1306C/T, quanto para os casos LSIL (p=0,57649; OR= 0,9; 95% CI=0.60-2.54) e HSIL (p=0,6269; OR= 0,74; 95% CI=0.47-1.57) do -735C/T. A associação entre a infecção pelo HPV e os genótipos C735T e C1306T não foi significativa (p >0,05). No presente estudo, apenas a presença do genótipo TT do MMP-2 C735T apresentou relevância estatística como fator protetor da progressão das lesões cervicais para a malignidade. / Cervical cancer is a global health problem being the fourth most incident cancer in women. This type of cancer is associated with prior infection with Human Papillomavirus (HPV) in almost all cases. Some cofactors act with HPV in the development of lesions and posterior cervical carcinoma. An important cofactor are matrix metalloproteinases (MMP). Proteolytic enzymes that participate in the lysis component of the extracellular matrix (ECM). Particularly MMP-2 excels in cervical cancer progression by promoting the intraepithelial lesions to invasion due to lysis of the basal membrane. Polymorphisms in the promoter region of the MMP-2 gene has been associated with increased risk of progression to cancer and metastasis. This study aimed to evaluate the possible association of single nucleotide polymorphisms (SNP) -1306C / T and 735C / T, present in the promoter region of the MMP-2 gene in cervical lesions in women in States of northeastern Brazil. We evaluated 52 cases of low grade intraepithelial lesions (LSIL) and 67 cases of high grade (HSIL) for the polymorphism -1306 C/T. While other 63 LSIL cases and 73 HSIL cases were evaluated for SNP -735C/T. 95 cases with normal cytology were selected with the control group -1306C / T and 91 cases for the -735 C / T. Gene amplification and subsequent genotyping were performed by PCR-RFLP. For this we used the restriction enzyme Pvu II (for SNP-1306C / T) and Hinf I (for SNP -735C / T). The MMP-2 C1306T showed no significant association between the LSIL group and the control (p = 0,1734OR = 0:37; 95% CI = 0.3-1.58). As well as between the control group and HSIL (p = 0.7118 OR = 0:08; 95% CI = 0.933.3). The same was observed for the evaluation of MMP-2 compared C735T LSIL group and the control group (p = 0.7948, OR = 0.94; 95% CI = 0.56 to 2.15). There was also no association between HSIL group and the control (p = 0.7398; OR = 1.07; 95% CI = 0.50 to 1.64). The presence of the TT genotype in recessive model was presented as a protective factor in the progression of cervical lesions (p = 0.03566; OR = 0.66; 95% CI = .10-.96). Regarding the use of oral contraceptive as a cofactor, no significant associations found between LSIL cases (p = 0.370 OR = 0.65; 95% CI = 0.35-1.93) and HSIL (p = 0.6527; OR = 0:08; 95% CI = 0.93-3.3) from -1306C / T group, as well as LSIL (p = 0.57649; OR = 0.9; 95% CI = 0.60-2.54) and HSIL (p = 0.6269, OR = 0 74; 95% CI = 0:47 to 1:57) of -735C / T group. The association between HPV infection and the C735T and C1306T genotypes was not significant (p> 0.05). In the present study, only the presence of the TT genotype of MMP-2 C735T showed statistically significant protective factor in the progression of cervical lesions to malignancy.

A MMP-2 é uma protease que está envolvida em muitos eventos fisiológicos e patológicos e que compartilha similaridades estruturais com a enzima conversora de angiotensina (ECA), de modo que os inibidores da ECA passaram a ser estudados com relação ao efeito inibitório também sobre a MMP-2. No entanto, este potencial inibitório não foi ainda testado na MMP-2 altamente purificada. Este estudo teve como objetivo investigar o potencial inibitório do captopril sobre a atividade da MMP- 2. Primeiramente, supôs-se que a dissolução do captopril poderia induzir a mudanças no pH de soluções tampão. Em segundo lugar, avaliou-se o efeito direto do captopril sobre a MMP-2 presente no plasma humano e a MMP-2 recombinante humana (rhMMP-2) produzida e purificada de E. coli. As análises de atividade in vitro incluíram zimogramas com gelatina e ensaios fluorimétricos com DQ gelatin. A solubilização do captopril reduziu significativamente o pH da solução tampão 50 mM (p<0,01) mas não alterou o pH da solução tampão 200 mM (p>0,05). Resultados de zimografia do plasma e da rhMMP-2 mostraram inibição da atividade gelatinolítica com significância estatística somente em concentrações iguais ou maiores que 4 e 1 mM de captopril, respectivamente (p<0,05). A presença de captopril nos ensaios de fluorimetria resultaram na inibição significante da atividade de rhMMP-2 somente em concentrações iguais ou maiores que 2 mM (p<0,01), enquanto a rhMMP-2 ativada com APMA apresentou inibição significativa diante de 0,5 mM de captopril (p<0,01). As concentrações de captopril efetivas em inibir a MMP-2 in vitro foram muito superiores àquelas referentes à concentração plasmática máxima encontrada no plasma humano após a administração de uma dose de 50 mg de captopril. Em conjunto nossos resultados sugerem que o captopril não parece promover inibição significativa da MMP-2 nas concentrações relatadas in vivo. Além disso, o pH das soluções tamponantes é um aspecto que requer mais atenção durante ensaios de inibição de protease in vitro. / MMP-2 is involved in many physiological and pathological processes. This protease shares structural similarities with the angiotensin-converting enzyme (ACE), and ACE inhibitors have been described to inhibit MMP-2. However, this inhibitory potential has not been tested using a highly purified MM-2 so far. This study aimed at investigating the inhibitory potential of captopril on MMP-2 activity. First it was tested whether the dissolution of captopril would induce changes in the pH of the solutions. Secondly, the direct inhibitory effect of captopril on plasma MMP-2 and on a recombinant human MMP-2 (rhMMP-2) produced and purified from E. coli was tested. The in vitro activity assays included gelatin zymography and a fluorimetric assay with DQ gelatin. Captopril solubilization significantly decreased the pH of the 50 mM Tris buffer solution (p<0.01) but did not decreased the pH of the 200 mM Tris Buffer solution (p>0.05). Zymography results of plasma and rhMMP-2 showed that inhibition of the activity only reached statistical significance >= 4 and 1 mM of captopril, respectively (p<0,05). The presence of captopril in the fluorimetric assay resulted in a significant inhibition of the rhMMP-2 activity only at concentrations >= 2 mM (p<0.01), whereas APMA-activated rhMMP-2 was inhibited by 0.5 mM of captopril (p<0.01). The captopril concentrations found to inhibit MMP-2 are several times of magnitude higher than the maximum plasma concentration after a dose of 50 mg of captopril. In conclusion, captopril does not seem to cause significant inhibition of MMP-2 in the concentrations found in vivo, and more attention has to be given to the pH of the solutions when testing protease inhibition in vitro.

A MMP-2 é uma protease que está envolvida em muitos eventos fisiológicos e patológicos e que compartilha similaridades estruturais com a enzima conversora de angiotensina (ECA), de modo que os inibidores da ECA passaram a ser estudados com relação ao efeito inibitório também sobre a MMP-2. No entanto, este potencial inibitório não foi ainda testado na MMP-2 altamente purificada. Este estudo teve como objetivo investigar o potencial inibitório do captopril sobre a atividade da MMP- 2. Primeiramente, supôs-se que a dissolução do captopril poderia induzir a mudanças no pH de soluções tampão. Em segundo lugar, avaliou-se o efeito direto do captopril sobre a MMP-2 presente no plasma humano e a MMP-2 recombinante humana (rhMMP-2) produzida e purificada de E. coli. As análises de atividade in vitro incluíram zimogramas com gelatina e ensaios fluorimétricos com DQ gelatin. A solubilização do captopril reduziu significativamente o pH da solução tampão 50 mM (p<0,01) mas não alterou o pH da solução tampão 200 mM (p>0,05). Resultados de zimografia do plasma e da rhMMP-2 mostraram inibição da atividade gelatinolítica com significância estatística somente em concentrações iguais ou maiores que 4 e 1 mM de captopril, respectivamente (p<0,05). A presença de captopril nos ensaios de fluorimetria resultaram na inibição significante da atividade de rhMMP-2 somente em concentrações iguais ou maiores que 2 mM (p<0,01), enquanto a rhMMP-2 ativada com APMA apresentou inibição significativa diante de 0,5 mM de captopril (p<0,01). As concentrações de captopril efetivas em inibir a MMP-2 in vitro foram muito superiores àquelas referentes à concentração plasmática máxima encontrada no plasma humano após a administração de uma dose de 50 mg de captopril. Em conjunto nossos resultados sugerem que o captopril não parece promover inibição significativa da MMP-2 nas concentrações relatadas in vivo. Além disso, o pH das soluções tamponantes é um aspecto que requer mais atenção durante ensaios de inibição de protease in vitro. / MMP-2 is involved in many physiological and pathological processes. This protease shares structural similarities with the angiotensin-converting enzyme (ACE), and ACE inhibitors have been described to inhibit MMP-2. However, this inhibitory potential has not been tested using a highly purified MM-2 so far. This study aimed at investigating the inhibitory potential of captopril on MMP-2 activity. First it was tested whether the dissolution of captopril would induce changes in the pH of the solutions. Secondly, the direct inhibitory effect of captopril on plasma MMP-2 and on a recombinant human MMP-2 (rhMMP-2) produced and purified from E. coli was tested. The in vitro activity assays included gelatin zymography and a fluorimetric assay with DQ gelatin. Captopril solubilization significantly decreased the pH of the 50 mM Tris buffer solution (p<0.01) but did not decreased the pH of the 200 mM Tris Buffer solution (p>0.05). Zymography results of plasma and rhMMP-2 showed that inhibition of the activity only reached statistical significance >= 4 and 1 mM of captopril, respectively (p<0,05). The presence of captopril in the fluorimetric assay resulted in a significant inhibition of the rhMMP-2 activity only at concentrations >= 2 mM (p<0.01), whereas APMA-activated rhMMP-2 was inhibited by 0.5 mM of captopril (p<0.01). The captopril concentrations found to inhibit MMP-2 are several times of magnitude higher than the maximum plasma concentration after a dose of 50 mg of captopril. In conclusion, captopril does not seem to cause significant inhibition of MMP-2 in the concentrations found in vivo, and more attention has to be given to the pH of the solutions when testing protease inhibition in vitro.

Thesis (Ph. D.)--University of Oklahoma. / Bibliography: leaves 164-207.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-11-09Bitstream added on 2014-06-13T20:16:24Z : No. of bitstreams: 1 marangoni_nr_me_araca.pdf: 326349 bytes, checksum: 7dc73435330e73a5c923b91991a9e1f1 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A leishmaniose visceral canina, causada pelo protozoário Leishmania (Leishmania) chagasi, é uma doença de grande ocorrência principalmente na América Latina. A caracterização das lesões sistêmicas associadas à infecção pelo parasita tem sido amplamente estudada, entretanto, poucos autores elucidam a patogenia na forma nervosa. Com o objetivo de compreender melhor os mecanismos envolvidos na inflamação do sistema nervoso central de cães naturalmente infectados por L. chagasi, amostras de liquor e plexo coróide foram colhidas e submetidas à zimografia para a detecção de metaloproteinases (MMPs). Amostras do plexo coróide e liquor de cães sadios foram avaliadas como controle. Os géis de zimograma foram analisados quanto à presença e atividade proteolítica das metaloproteinases -2 e -9. Formas inativas das proteases foram detectadas no plexo coróide, sendo que o Grupo de animais positivos não diferiu do negativo. No liquor foram encontradas formas ativas e inativas das MMPs-2 e -9 e a atividade proteolítica das mesmas diferiu entre os Grupos positivo e negativo. A MMP-2 teve maior detecção nos animais negativos e a MMP-9 nos positivos. O aumento da MMP- 9 no liquor dos cães doentes representa seu possível envolvimento na patogenia das lesões encefálicas ao ocasionarem o rompimento das barreiras hematoencefálica e/ou hematoliquórica, permitindo a passagem de células e proteínas envolvidas no processo inflamatório / Canine visceral leishmaniasis, caused by the protozoan Leishmania (Leishmania) chagasi, is a disease with high occurrence in Latin America. The characteristics of the systemic lesions related to the infection have been widely studied, but few studies clarify the disease on a neurological aspect. With the aim of a better understanding of the inflammation mechanisms within the central nervous system of dogs naturally infected by L. chagasi, some samples of cerebrospinal fluid and choroid plexus were collected and submitted to zymography to detect metalloproteinases (MMPs). Samples of choroid plexus and cerebrospinal fluid from healthy dogs were evaluated as control. The zymogram gels were analysed taking into account the presence and the proteolytic activity of metalloproteinase -2 and -9. Inactive forms of the proteases were detected in the choroid plexus, and the group of positive animals did not differ from negative ones. In the cerebrospinal fluid, active and inactive forms of MMP-2 and -9 were found, and their proteolytic activity differed between negative and positive groups. MMP-2 had higher detection in the negative animals and MMP-9 in the positive ones. The increasing of MMP-9 in the cerebrospinal fluid of infected dogs represents its possible involvement in the brain injuries, by causing the disruption of blood-cerebrospinal fluid barrier and/or blood-brain-barrier, allowing the passage of cells and proteins involved in inflammation process

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O cÃncer colorretal(CCR) à altamente prevalente nos paÃses mais ricos e industrializados. As metaloproteinases de matriz (MMPs) sÃo importantes enzimas que facilitam a invasÃo e disseminaÃÃo do tumor em vÃrios tipos de cÃncer, inclusive o colorretal. Os inibidores teciduais de metaloproteinases (TIMPs) sÃo os principais inativadores fisiolÃgicos destas enzimas. Este estudo avaliou a expressÃo de metaloproteinase-2 (MMP-2), metaloproteinase-14 (MMP-14) e inibidor tecidual de metaloproteinases-2 (TIMP-2) no cÃncer colorretal. O imunomarcador CD68 foi utilizado para caracterizar a natureza das cÃlulas mononucleadas do estroma. Amostras teciduais de 50 casos de colectomias, devido ao cÃncer colorretal no perÃodo de 2004 a 2010, obtidas dos arquivos do Departamento de Patologia e Medicina Legal (DPML), Faculdade de Medicina da Universidade Federal do Cearà (UFC), foram analisadas. Realizou-se tissue microarrays e a seguir imuno-histoquÃmica para avaliar a expressÃo de MMP-2, MMP-14 e TIMP-2 de acordo com os seguintes escores baseados em outros relatos: 0= sem imunomarcaÃÃo ou raras cÃlulas marcadas (<5%); 1 = discreta marcaÃÃo na maioria (> 50%) das cÃlulas tumorais ou cÃlulas mononucleares do estroma, ou moderada marcaÃÃo em uma minoria de cÃlulas (<50 %); 2 =marcaÃÃo moderada na maioria (> 50%) de cÃlulas tumorais ou cÃlulas mononucleares ou intensa marcaÃÃo em minoria de cÃlulas (<50%); 3 = marcaÃÃo intensa na maioria (> 50%) de cÃlulas tumorais ou cÃlulas mononucleares. Observou-se relaÃÃo entre a expressÃo aumentada de MMP-14 em mononucleares de tumor primÃrio e casos sem metÃstases linfonodais (MMP-14, escores 2 e 3/N0 : 23/24 = 95%; N1-N3: 14/20 = 70%, p = 0,0353). No entanto, nenhuma relaÃÃo significativa foi encontrada entre a expressÃo de MMP-14, MMP-2 e TIMP-2 nos tumores primÃrios em cÃlulas cancerosas ou mononucleares e outros parÃmetros clÃnico-patolÃgicos. A imunoexpressÃo de MMP-2 foi negativa nas cÃlulas neoplÃsicas, em tumores primÃrios (47/47=100%) e metastÃticos (12/12 = 100%). A imunorreatividade de MMP-14 em cÃlulas neoplÃsicas foi frequentemente positiva em tumores primÃrios (50/50 = 100%) e metastÃticos (7/8= 88%). Em mononucleares, a maioria dos quais macrÃfagos (corados pelo CD68), a expressÃo positiva de MMP-14 tambÃm predominou marcadamente, tanto em tumores primÃrios (46/47 = 98%) como em carcinomas metastÃticos (9/10 = 90%). A expressÃo de TIMP-2 em cÃlulas neoplÃsicas, discreta, ocorreu em 70% de tumores primÃrios (35/50 casos) e 100% dos metastÃticos (8/8). A imunocoloraÃÃo para TIMP-2 em macrÃfagos associados ao tumor (TAMs) foi ainda mais elevada do que nas cÃlulas neoplÃsicas. Em conclusÃo, a MMP-14 e TIMP-2 sÃo frequentemente expressas em carcinomas colo-retais em ambas localizaÃÃes anatÃmicas, principalmente nas metÃstases para linfonodos , sugerindo que estas proteases desempenham papel importante na invasÃo local e na progressÃo tumoral neste tipo de cÃncer. A predominÃncia destes marcadores nas cÃlulas mononucleares (sobretudo macrÃfagos) , claramente evidentes na positividade para a MMP-2, enfatiza a importÃncia do microambiente tumoral no desenvolvimento de neoplasias. / The colorectal cancer (RCC) is highly prevalent in richer and industrialized countries. The matrix metalloproteinases (MMPs) are regarded as important for facilitating tumor invasion and spread in various cancers, including colorectal. Tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs) are the major physiological inhibitors of MMPs. The expression of metalloproteinase-2 (MMP-2), metalloproteinase 14 (MMP-14) and tissue inhibitor of metalloproteinases-2 ( TIMP-2) in colorectal cancer was assessed. CD68 immunostaininig was utilized to the characterization of mononuclear cells nature. Paraffin-embedded tissues from patients undergoing colectomy for colorectal cancer in the period 2004 to 2010, were selected from the files of the Department of Pathology and Forensic Medicine (DPML), Medical School , Federal University of Cearà (UFC). Tissue microarrays were performed and slides were obtained for immunohistochemical detection of the expression of MMP-2, MMP-14 and TIMP-2 and the tissue samples analyzed. The following scores were applied: 0 = no immunostaining or rare labeled cells (<5%), 1 = slight marking the majority (> 50%) of tumor cells or stromal mononuclear cells, or moderate marking in a minority of cells (<50%) 2 = moderate labeling in the majority (> 50%) of tumor or mononuclear cells or intense marking in the minority of cells (<50%) and 3 = intense labeling in the majority (> 50%) of tumor cells or mononuclear cells. In this study, the relationship between increased expression of MMP-14 in mononuclear primary tumor cells and cases without lymph node metastases (MMP-14, 2 and 3/N0 scores: 23/26 = 88%; N1-N3: 14/21 = 67%, p = 0.0353) was stablished . However, no significant relationship was found between the immunohistochemical expression of MMP-14, MMP-2 and TIMP-2 in primary tumors in cancer cells and mononuclear cells and other clinico-pathological parameters. The expression of MMP-2 were negative in the neoplastic cells both in primary tumors (47/47 = 100%) and in metastatic ones (12/12 = 100%). The immunoreactivity of MMP-14 in neoplastic cells in primary tumors was positive (50/50 = 100%) and in all cases except one of metastatic carcinoma (7/8 = 88%). In mononuclear cells, most of them characterized as macrophages (CD68 stained), MMP-14 positive expression also predominated markedly, both in primary tumors (46/47 = 98%) and in metastatic carcinomas (9/10 = 90%). TIMP-2 expression in neoplastic cells of primary tumors occurred in 35/50 cases (70%) and lymph nodes showed positive immunostaining in all cases (8/8 = 100%). In both sites there were no cases with high expression. The TIMP-2 immunoreactivity in tumour associated macrophages (TAMs) was even higher than in the neoplastic cells. In conclusion, MMP-14 and TIMP-2 are frequently expressed in colorectal carcinomas in both anatomical sites , mainly in lymph node metastasis, suggesting that these proteases play an important role in local invasion and tumor progression of these cancers. The predominance of these biomarkers in mononuclear cells, clearly evident in the positivity for MMP-2, emphasizes the importance of tumor microenvironment in the development of neoplasms.

Orientador: Sergio Luis Felisbino / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T13:08:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Amorim_ElaineManoelaPorto_D.pdf: 2896871 bytes, checksum: d7581f6efdb5920a39d589672ca2a350 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Diabetes mellitus é uma síndrome clínica heterogênea, causada pela falta de produção de insulina pelas células beta (?) pancreáticas ou pelo defeito nos receptores para insulina nas células-alvo, resultando em uma doença metabólica hiperglicêmica. Estudos têm demonstrado que as disfunções sexuais e reprodutivas incluindo impotência, redução da libido, prejuízo da espermatogênese, infertilidade e diminuição da qualidade espermática são frequentemente associadas com o diabete no homem e em animais de experimentação. Apesar dos efeitos do diabete sobre as funções testiculares e fertilidade de machos estarem bem esclarecidos, o impacto da doença sobre morfogênese e crescimento da próstata ainda não foi completamente descrito. Assim, o presente estudo teve por objetivo analisar os possíveis efeitos do diabete e da reposição com insulina durante o crescimento prostático na puberdade, com especial atenção para a atividade das metaloproteinases de matriz 2 e 9 (MMP-2 e MMP-9), enzimas envolvidas na remodelação dos componentes da matriz extracelular. Para tanto, foram realizadas análises morfológicas, morfométricas, imunoistoquímicas e bioquímicas de zimografia, nos lobos ventral, dorsolateral e anterior da próstata de ratos Wistar, nos quais o diabete foi induzido quimicamente aos 40 dias de idade por estreptozotocina. Nossos resultados mostraram que o diabete experimental prejudicou o crescimento glandular, caracterizado por um menor ganho de peso absoluto dos diferentes lobos da próstata e diminuição da relação parênquima/estroma, principalmente do lobo dorsolateral. O diabete causou diminuição nas concentrações plasmáticas de testosterona, mas não alterou a concentração de diidrotestosterona. As atividades das MMP-2 e MMP-9 foram menores no grupo diabético. O tratamento simultâneo e/ou tardio com insulina exógena além de reverter os parâmetros alterados nos animais diabéticos também foi efetivo em restaurar características histológicas e morfométricas dos lobos prostáticos em padrões semelhantes aos observados nos animais controles. Estes resultados permitem concluir que o diabete prejudica, mas não impede, o crescimento da próstata e causa importantes alterações estromais, evidenciadas pela diminuição da atividade das MMPs -2 e -9, reforçando o papel destas enzimas na próstata. Por outro lado, o tratamento com insulina reverteu os parâmetros alterados sugerindo que as alterações prostáticas causadas pelo diabete na próstata, nesta fase do desenvolvimento pós-natal, são aparentemente reversíveis. / Abstract: The Diabetes mellitus is a heterogeneous clinical syndrome caused by lack of insulin production by beta cells (?) or the pancreatic defect in insulin receptors on target cells, resulting in hyperglycemic metabolic disease. Studies have shown that the reproductive and sexual dysfunctions including impotence, decreased libido, impaired spermatogenesis and infertility, decreased sperm quality, are often associated with diabetes in humans and experimental animals. Although vast publications have checked the effects of diabetes on testicular function and fertility in males, the impact of disease on growth and morphogenesis of the prostate is still poor understood. Thus, this study aimed to examine the possible effects of diabetes and insulin replacement, during the maturation process prostate, with special attention to the matrix metalloproteinases 2 and 9 (MMP2 and MMP9), enzymes involved in the extracellular matrix components remodeling during development and growth of prostate. For both, analyze morphological, morphometric, immunocytochemical and biochemical zymography were done in the ventral, dorsolateral and anterior prostatic lobes of Wistar rats, which diabetes was chemically induced at 40 days old by streptozotocin. Our results showed that diabetes impaired th prostatic lobe growth, characterized by a low absolute weight gain and reduction in parenchyma/stroma ratio, mainly in the dorsolateral lobe. Diabetes caused a reduction in the testosterone plasma levels, but not in the dihydrotestosterone. The activities of MMP2 and MMP9 were reduced in the prostatic lobes from diabetic animals. Both simultaneous and late insulin treatment maintain and restored, respectively, the age-matched control morphological and morphometrical parameters. These results allow to conclude that diabetes interfere negatively in the prostate growth during puberty with important stromal changes, including reduction in MMP2 and MMP9 activities, reinforcing the role of these enzymes in the normal prostate morphogenesis. On the other hand, even a late insulin replacement can restore the deleterious effects of diabetes in the prostate during puberty. / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural