Orientador: Márcia Rita Fernandes Machado / Banca: Leucio Camara Alves / Banca: Maria Cecília Rui Luvizzoto / Banca: Fábio Luiz da Cunha Brito / Banca: Áureo Evangelista Santana / Resumo: A leishmaniose visceral canina (LVC) é uma zoonose causada pelo agente Leishmania infantum. O cão se destaca por seu importante papel na cadeia epidemiológica da doença, porquanto é o principal reservatório urbano da infecção, cuja transmissão é dependente de populações de Lutzomyia longipalpis. A enfermidade é multissistêmica e de patogenia complexa, envolvendo diferentes mecanismos imunológicos. A despeito do grande número de estudos sobre a patogenia e lesões que ocorrem na leishmaniose visceral canina, a fisiopatologia da lesão ocular ainda permanece obscura. O objetivo deste estudo foi detectar a presença de células inflamatórias e de formas amastigotas de L. Infantum pela imuno-histoquímica em olhos de cães experimentalmente infectados via ocular tópica. Constituiu-se um grupo inoculado (GI) composto por sete cães, que receberam a instilação de cultura de Leishmania infantum por via conjuntival, e um grupo controle (GC) composto por três cães, nos quais a instilação tópica foi realizada com solução salina. Após 60 dias, os tecidos oculares foram analisados utilizando-se as técnicas de coloração em Hematoxilina e Eosina (HE) e a reação de imuno-histoquímica pela streptoavidina-peroxidase. A análise histopatológica revelou uma resposta inflamatória com predomínio de plasmócitos e linfócitos, perivasculite, congestão vascular e hiperplasia das células caliciformes em conjuntiva. As glândulas lacrimais da terceira pálpebra apresentaram infiltrado inflamatório com atrofia focal e desorganização do estroma. Formas amastigotas de L. infantum foram observadas através da detecção imuno-histoquímica em 100% das amostras do grupo infectado / Abstract: Canine visceral leishmaniasis (CVL) is an infection caused by Leishmania infantum agent. The dog stands out for its important role in the epidemiology of the disease, since it is the main urban reservoir of infection, whose transmission is dependent on populations of Lutzomyia longipalpis. The disease is multisystemic and complex pathogenesis, involving different immunological mechanisms. Despite the large number of studies regarding the pathogenesis and lesions that occur in canine leishmaniasis, the pathophysiology of a ocular lesion still remains obscure. The goal of this study was to evaluate the inflammatory cells and immunohistochemical detection of L. infantum in eyes from dogs experimentally infected by topical ocular infection. Constituted an inoculated group (IG), composed of seven dogs that received instillation of culture of Leishmania infantum by conjunctival route, and a control group (CG) composed of three dogs, in which the topical instillation was performed with saline. After 60 days, the ocular tissues were analyzed using the techniques of staining in hematoxylin and eosin (HE) and immunohistochemical reaction for streptoavidin-peroxidase. Histopathological analysis revealed an inflammatory response characterized by the presence of plasma cells, lymphocytes, congestion, perivasculitis and hyperplasia of the goblet cells in conjuctiva. In the lachrymal gland of the third eyelid were observed inflammatory response with focal atrophy and stromal disorganization. Amastigotes forms of L. infantum were observed by immunohistochemical detection in 100% of samples from infected group / Doutor

Resumo: As leishmanioses são mantidas na natureza com a participação de várias espécies animais. Este trabalho avaliou a presença de Leishmania spp. em amostras de pele de marsupiais de vida livre Micoureus paraguayanus (n=95) e Didelphis albiventris (n=191) capturados no Parque Estadual Morro do Diabo, e em fragmentos de mata do seu entorno, na região do Pontal do Paranapanema-SP, Brasil. As amostras foram avaliadas para a presença de DNA de Leishmania spp. por meio da reação em cadeia pela polimerase (PCR) convencional e em tempo real (qPCR). Todas as amostras de D. albiventris avaliadas por PCR convencional foram negativas para a presença de kDNA de Leishmania spp., entretanto, quando avaliadas por qPCR, a positividade foi de 1,6%. Para M. paraguayanus, foi observada positividade de 7,4% e 11,6% por PCR convencional e qPCR, respectivamente. A maioria dos animais positivos estava restrita ao mesmo fragmento de mata. Apesar de D. albiventris ser a espécie marsupial mais estudada por seus hábitos mais urbanos, outras espécies marsupiais como M. paraguayanus podem ser potenciais reservatórios das leishmanioses e devem ser estudados / Abstract: Leishmaniasis is maintained in nature with the participation of several animal species. This research evaluated the presence of Leishmania spp. in skin samples of free-living marsupials Micoureus paraguayanus (n=95) and Didelphis albiventris (n=191) captured at the Parque Estadual Morro do Diabo and forest fragments of its surroundings, in the region of "Pontal do Paranapanema", São Paulo, Brazil. Skin samples were evaluated for the presence of Leishmania spp. DNA by conventional polymerase chain reaction (PCR) and real-time PCR (qPCR). All samples of D. albiventris evaluated by conventional PCR were negatives for the presence of Leishmania spp. kDNA however, when assessed by qPCR, the positivity was 1.6%. For M. paraguayanus positivity was observed in 7.4% and 11.6% by conventional PCR and qPCR, respectively. Most of the positive animals were restricted to the same forest fragment. Although D. albiventris is the most studied marsupial specie, others species as M. paraguayanus can be potential leishmaniasis reservoirs and should be studied / Orientador: Cáris Maroni Nunes / Coorientador: Fernando Pacheco Rodrigues / Banca: Wagner André Pedro / Banca: Wilma Aparecida Starke Buzetti / Mestre

Orientador: Jairo Aparecido Ayres / Banca: Maria de Lourdes da Silva Marques Ferreira / Banca: Roseli Moralez de Figueiredo / Resumo: A constante busca do progresso em virtude da globalização tem contribuído para causar alterações no equilíbrio biológico, social e cultural, repercutindo diretamente no processo saúde-doença da população. Neste contexto, destaca-se as doenças emergentes, dentre estas tem-se a Leishmaniose Visceral como problema de saúde publica com alta letalidade quando não diagnosticada e tratada precocemente. Na Divisão Regional de Saúde VI Bauru (DRS VI Bauru) entre os anos de 1999 e 2009 ocorreram 417 casos da doença, sendo que, 41 destes evoluíram para óbitos. Por estas informações sobre a LV, despertou interesse em estudar os aspectos sociodemografico, estabelecer os diagnósticos de enfermagem e sistematizar a assistência. Para tanto, no período estudado foram realizadas 22 entrevista semi-estruturadas com portadores, internados em hospital de referencia. Estes, eram adultos procedentes de Bauru - SP e região, de ambos os sexos, sendo 15 do sexo masculino (68,19%) e sete do sexo feminino (31,81%), na faixa etária de 20 a 66 anos, com prevalência do 1º grau incompleto (16 casos - 72,74%) e renda familiar entre um a dois salários mínimos (10 casos - 45,45%), revelavam comprometimento sistêmico compatível com LV clássica. Foi aplicado o Processo de Enfermagem para identificar os principais Diagnostico de Enfermagem segundo NANDA e propor plano assistencial. Por estes dados, possibilitou conhecer os aspectos epidemiológicos, fisiopatológicos e terapêuticos da LV, assim como Diagnósticos de Enfermagem, que possibilitaram estabelecer ações independentes, dependentes e interdependentes, proporcionando o bem estar, com olhar diferenciado da assistência individualizada e integralizada aos portadores desta doença. Acredita-se também que com este estudo foi possível destacar alem do papel assistencial e a ação educacional do enfermeiro, que ocorreu durante... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The constant search for progress because of globalization has contributed to cause changes in the biological, social and cultural balance, with significant repercussions on the health-disease population. In this context, the emerging diseases stands out, among them, the Visceral Leishmaniasis, as public health problem with high mortality if not diagnosed and treated early. In Division VI Regional Health Bauru (Bauru DRH VI) between the years 1999 and 2009 there were 417 cases of the disease, of which 41 of these ones, progressed to deaths. For information about VL, interests were aroused in studying the sociodemographic characteristics, establish nursing diagnoses and systematize assistance. To this end, during the study period there were 22 semi-structured interviews with patients hospitalized in a reference hospital. These patients were adults coming from Bauru - SP region, of both sexes, being 15 males (68.19%) and seven females (31.81%), aged between 20 to 66 years old, with prevalence of an incomplete degree (16 cases - 72.74%) and family income between one and two minimum wages (10 cases - 45.45%) showed systemic involvement consistent with classic VL. The nursing process was applied and identified the main Nursing Diagnosis according to NANDA, and care planning was proposed. For these data, the epidemiology, pathophysiology and treatment of VL were better known, as well as nursing diagnoses, which enabled the establishment of independent, dependent and interdependent actions that, giving the well-being, with a fully different individual care view to the disease patients. It is also believed that this study could highlight beyond the action role and the nurses care and education, which occurred during the hospitalization and interactions period, even not being an objective of study, showed its importance for the ill clarification, since it evidenced some unfamiliarity about... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Isabel Kinney Ferreira de Miranda Santos / Resumo: A leishmaniose visceral é uma zoonose, considerada como uma entre seis doenças tropicais mais importantes nos países em desenvolvimento. O agente etiológico da enfermidade no Brasil, a Leishmania chagasi, é transmitida pela picada do flebotomíneo Lutzomyia longipalpis, que adquire o parasito ao realizar o hematofagismo em animais infectados. No ambiente doméstico, o cão é considerado o principal reservatório da leishmaniose visceral e, em consequência disso, é também o principal alvo das campanhas de controle da forma humana da doença. Neste trabalho foi avaliado o potencial diagnóstico para a leishmaniose visceral canina de um antígeno recombinante, produzido a partir do gene de uma proteína, isolado em L. chagasi, amostra Jaboticabal. O gene isolado apresenta similaridade com a família A2 de L. chagasi e foi expresso utilizando o vetor pET28a em E. coli. A proteína de 11 KDa expressa, foi avaliada pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). O ELISA com o antígeno recombinante His6_A2 detectou anticorpos anti-A2 em 52% dos cães infectados com L. chagasi. Enquanto que, 67% dos soros de animais vacinados e 65% dos animais de áreas-não endêmicas, foram negativos pelo ELISA_A2. Os testes de Western-blotting e Dot-ELISA realizado com soros de camundongos inoculados com essa proteína His_A2 demonstrou resultados positivos de antigenicidade e imunogenicidade. Todos os sequenciamentos de DNA mostraram homologia com genes da família A2. / Abstract: Visceral leishmaniasis is a zoonosis and one of six most important tropical diseases in developing countries. The causative agent of the disease in Brazil, Leishmania chagasi, is transmitted by the bite of the sandfly Lutzomyia longipalpis, who acquired the parasite biting infected animals. In domestic environment, the dog is considered the main reservoir of visceral leishmaniasis, and in consequence it is also the main target of campaigns to control the disease in human beings. This study evaluated the potential of a recombinant antigen produced from the A2 gene Jaboticabal strain L. chagasi for diagnosis of canine visceral leishmaniasis (LVC). The isolated gene showed similarity with L. chagasi family A2 gene, and was expressed using pET28a expression vector in E. coli. The 11-kDa protein expressed was evaluated by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) using known positive and negative sera, previously tested by Indirect Immunofluorescence Assay (IFA). The His-A2 recombinantantigen detected anti-A2 antibodies in 52% of L. chagasi infected dogs. Seventy-seven percent of vaccinated dogs and 65% of dogs from non-endemic areas were both negative by A2-ELISA. The antigenicity and immunogenicity of the expressed protein was confirmed by Western blot and Dot-ELISA assays, performed using sera from mice inoculated with this protein. / Mestre

Orientador: Valéria Marçal Félix de Lima / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Cáris Maroni Nunes / Resumo: Os cães são o principal reservatório doméstico de Leishmania. (L.) chagasi. No hospedeiro vertebrado, incluindo o homem, o parasita pode causar leishmaniose visceral, transmitida aos humanos. As células T regulatórias (Treg) estão envolvidas na indução de supressão de mecanismos efetores relacionados à imunidade celular. Para investigar a possível implicação das células Treg durante a infecção por Leishmania spp., a presença de Treg no baço e no sangue periférico foi avaliada em cães naturalmente infectados e com sinais clínicos compatíveis com a doença. Quinze cães adultos provenientes do Centro de Controle de Zoonoses da Prefeitura Municipal de Araçatuba - SP, Brasil, com reação sorológica positiva para antígenos de Leishmania (L.) chagasi determinada por ELISA indireto e teste rápido rK39 (Kalazar Detect TM Rapid Test, InBios Inc-Seattle, WA-USA). Cinco cães saudáveis, provenientes de área não endêmica foram incluídos no estudo. As células T regulatórias foram quantificadas em amostras de baço e em células mononucleares do sangue periférico utilizando-se anticorpos monoclonais e citometria de fluxo. No baço, menor número de células Treg foi observado em cães infectados do que nos controles (p<0,05), enquanto que nenhuma diferença foi observada nas células mononucleares de sangue periférico. Esses resultados sugerem que as células Treg estão envolvidas na infecção por Leishmania spp. e que podem ter um papel na persistência do parasita e o estabelecimento da infecção crônica / Abstract: Dogs are the main domestic reservoirs of L. (L.) chagasi. Once in the vertebrate host, the parasite may cause visceral leishmaniasis, which can also be transmitted to humans. Regulatory T cells (Treg) have been shown to be involved in the direct induction of immunosupression of effector cellular immune response. To investigate the possible involvement of T reg cells during Leishmania infection, the presence of Treg cells from the spleen and peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of dogs naturally infected with L. (L.) chagasi, and showing clinical signs, was quantified. A total of 15 adult dogs from the Center for Zoonosis Control of Araçatuba - SP, Brazil, positive for Leishmania (L.) chagasi by indirect ELISA and TM rapid test rK39 (Kalazar Detect TM Rapid Test, InBios Inc-Seattleadult healthy dogs from non endemic area were included in the sspleen and PBMC were used for quantification of Treg by flow cytometmonoclonal antibodies. In spleen, Treg levels in infected dogs control group (p<0.05); in PBMC, no differences were observed betgroups. These results suggest that Treg population is involved in infection and may play a role in promoting parasite persistence achronic infection / Mestre

Orientador: Mary Marcondes / Banca: Paulo César Ciarlini / Banca: Raimundo Souza Lopes / Resumo: A leishmaniose visceral é uma zoonose causada por um protozoário do gênero Leishmania, cujo agente etiológico no Brasil é a Leishmania chagasi. O primeiro caso canino autóctone no Estado de São Paulo, Brasil, foi identificado em 1998 no município de Araçatuba. Desde então a doença vem se espalhando por todo o Estado. O objetivo do presente estudo foi determinar a freqüência de ocorrência de anticorpos anti-Leishmania chagasi em amostras de soro de 584 cães de São José do Rio Preto, São Paulo, área não endêmica para a doença e que dista 160 Km de Araçatuba. Asoroprevalência foi de 0,86% por ELISA e 0,17% por imunocromatografia. Areação de imunofluorescência indireta foi utilizada em 138 amostras eidentificou 1,45% de soropositividade. O ELISA identificou cinco cães positivos,a RIFI dois e um cão foi identificado pela imunocromatografia. Um dos cãespositivo pela RIFI havia sido vacinado para leishmaniose visceral. Dois cãesque foram considerados positivos pelo ELISA indireto foram testados por PCRpara detecção da presença de Leishmania chagasi, mas os resultados foram negativos, não confirmando a doença. Somente um cão foi soropositivo em todos os métodos. Ele apresentava sinais clínicos inespecíficos e foi adquirido pelo proprietário em uma área endêmica para a doença. O diagnóstico não pôde ser confirmado por exame parasitológico direto ou PCR porque o cão morreu antes dos resultados dos exames sorológicos. Os resultados obtidos na população do presente estudo permitem concluir que São José do Rio Preto deve ser, ainda, área não endêmica para leishmaniose visceral canina. / Abstract: Visceral leishmaniasis is a zoonosis caused by a protozoa of the genus Leishmania, whose etiological agent in Brazil is Leishmania chagasi. The first canine autochthonous case of the disease in the São Paulo State, Brazil, was identified in 1998 in Araçatuba. Since then, the disease has spread to great part of the State. The aim of the present study was to determine the frequency of occurrence of anti-Leishmania chagasi antibodies in serum samples of 584 dogs from São José do Rio Preto, São Paulo, a non endemic area for the disease, 160km far from Araçatuba. Seroprevalence was 0,86% by ELISA and 0,17% by imunochromatography. IFAT, used to test 138 samples, identified 1,45% of seropositivity. ELISA identified five positive dogs, IFAT two, and immunochromatography one. One of the dogs that were considered positive by IFAT has been vaccinated for visceral leishmaniasis. Two dogs that were considered positive by indirect ELISA were tested by PCR for the presence of leishmania chagasi, but the results were negative, not confirming the disease. Only one dog was seropositive by all methods. He presented inespecific clinical signs and was acquired by his owner in an endemic area for the disease. The diagnoses could not be confirmed by direct parasitological test or PCR, because the dog has died before serologic results. The population results achieved in this study allow us to conclude that São José do Rio Preto city still must be a canine visceral leishmaniasis non-endemic area. / Mestre

Orientador: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: Edelberto Santo Dias / Banca: Eunice Aparecida Bianchi Galati / Resumo: A leishmaniose visceral americana (LVA) é, primariamente, uma zoonose crônica, tendo como agente etiológico, nas Américas, protozoários da espécie Leishmania chagasi. Sua transmissão, inicialmente silvestre ou concentrada em pequenas localidades rurais, já ocorre em centros urbanos. É um crescente problema de saúde pública no Brasil sendo uma endemia em franca expansão geográfica. Está distribuída em 19 dos 27 Estados da Federação, atingindo quatro das cinco regiões brasileiras. Entre 1985 e 2000, a leishmaniose atingiu no Brasil 422,5 mil pessoas. O contínuo crescimento antrópico desordenado vivenciado nas grandes áreas urbanas do Estado de São Paulo, ocasiona em um gradativo aumento de áreas onde as condições precárias de moradia contribuem para o aumento da população de flebotomíneos. A região oeste do Estado de São Paulo registrou em 1998, pela primeira vez, um caso de cão infectado. A doença em cães, desde o primeiro registro, já foi notificada em 45 municípios, ocorrendo em seis regiões administrativas: Araçatuba, Bauru, Marília, Presidente Prudente, São João da Boa Vista e Grande São Paulo. Em humanos, até junho de 2006, a doença já havia sido registrada em 34 municípios das regiões de Araçatuba. Bauru, Marília e Presidente Prudente. A espécie Lutzomyia longipalpis até junho de 2006 foi detectada em zona urbana de 68 municípios das regiões administrativas de Araçatuba, Bauru, Marília e Presidente Prudente, e mais recentemente na região de São João da Boa Vista, no município de Espírito Santo do Pinhal. Desde então, a sua expansão vem sendo verificada a partir da adaptação do vetor em municípios vulneráveis. A importância do estudo da população destes insetos é para potencializar o combate e a erradicação de tal moléstia, além de incentivar esforços no sentido preventivo quanto a atividades sanitárias... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: American visceral leishmaniasis (AVL) is a chronic zooanotic disease that can affect the humans and is caused by Leishmania chagasi. Its transmission first was in wild areas or small agricultural localities, but recently it occurs in urban centers. It is an increasing problem in the Public Health in Brazil. It is distributed in 19 of 27 states of this country. Between 1985 and 2000 the AVL reached 422, 5 thousand people. The continuous and disordered population growth in big urban centers at São Paulo state leads increase gradual areas where precarious conditions of habitation contribute to an increasing of vector population. The first register of AVL in this state was in 1998, an infected dog case. Since this first register, the disease was informed in 45 cities, divided in 6 administrative regions: Araçatuba, Bauru, Marília, Presidente Prudente, São João da Boa Vista e Grande São Paulo. In humans even 2006 June was registered in 34 cities around Araçatuba region. The specie Lutzomyia longipalpis was detected in urban areas of 68 cities of the: Araçatuba, Bauru, Marília e Presidente Prudente and more recently São João da Boa Vista region. Since then its expansion comes being noticed with a vector adaptation in vulnerable cities. The studies about population this insect is important to control and eradicate the AVL, beyond stimulating efforts to prevention in detriment of sanity providences actuality utilized that involve animals sacrifices. However evidences have been accumulated that Lutzomyia longipalpis isn't single specie but is species complex in the nature. The objective this study was to compare different Brazilian populations of Lutzomyia longipalpis by amplification and sequencing the12S rDNA mitochondrial to study intra-specifics variations to understand the history of introduction this disease in São Paulo state and control your vector in Brazil. / Mestre

Orientador: Valéria Marçal Felix de Lima / Banca: Rosangela Zacarias Machado / Banca: Alexandre Barbosa Reis / Resumo: O cão é o principal reservatório da Leishmania (Leishmania) chagasi, o parasita responsável pela Leishmaniose Visceral (LV) nas Américas. Na (LV) estudos em modelos experimentais, têm mostrado diferenças na resposta imunológica entre macho e fêmea. Na (L VC) tais estudos, não foram realizados. Este trabalho investigou em cães assintomáticos machos e fêmeas, naturalmente infectados por Leishmania (L.) chagasi, os níveis séricos de IgG contra antígenos totais de Leishmania, o nível de IL-10 e IFN-y, no sobrenadante do extrato do baço e fígado, e a citocina regulatória TGF-j3 no sobrenadante do extrato do baço e fígado, e sua produção natural no sobrenadante de cultura de células esplênicas. Os níveis de anticorpos anti-L. (L.) chagasi da classe IgG nos cães assintomáticos machos e fêmeas, não apresentaram diferença significativa entre o sexo. O nível de IL-10 mostrou-se elevado, no sobrenadante do extrato do fígado em cães infectados machos e fêmeas assintomáticos e apresentou dominância marcante em relação às outras citocinas. O nível do TGF-j3 mostrou-se aumentado no extrato do baço. O nível de IFN-y no baço dos grupos avaliados foi quantitativamente menor que as citocinas IL-10 e TGF-B. diferindo do observado no fígado onde foi observado uma baixa produção de TGF-j3 em relação ao IFN-y. No baço, o IFN-y apresentou diferença significativa em fêmeas assintomáticas quando comparadas com os machos assintomáticos. A observação da predominância das citocinas TGF-j3 no baço, e IL-10 no baço e fígado, em modelo ex vivo, sugere uma polarização da resposta imunológica para o padrão Th2 em cães naturalmente infectados por Leishmania (L.) chagasi. / Abstract: The dog is the main reservoir of Leíshmanía (Leíshmanía) chagasí, the parasite responsible for Visceral Leishmaniasis (VL) in the Americas. Experimental studies on VL have shown differences in the immune response of males and females. Such studies have not been carried out on canine visceral leishmaniasis. This study investigated the seric levei of IgG against Leíshmanía total antigens, the levels of IL-10 and IFN-y in the supernatant of spleen and liver extracts, the regulatory cytokine TGF-131 in the supernatant of spleen and liver extracts, and its natural production in the supernatant of spleen cell culture, in male and female asymptomatic dogs naturally infected by Leíshmanía (L.) chagasi. The levels of anti-L. (L.) chagasí IgG antibodies in male and female asymptomatic dogs did not differ significantly between the sexes. IL-10 levei was high in the supernatant of the liver extract of male and female asymptomatic infected dogs and predominated over the other cytokines. TGF-131 levei was increased in the spleen extract. The levei of IFN-y in the spleen of the group evaluated was quantitatively lower than the IL-10 and TGF-131 cytokine levels, different from what was observed in the liver, where a low productíon of TGF-131 was observed when compared to IFN-y. In the spleen, IFN-y presented a significant difference in the asymptomatic females when compared to the asymptomatic males. The observation of a predominance of TGF-131 cytokines in the spleen and of IL-10 in the spleen and liver of an ex vívo model suggests a polarization of the immune response towards the Th2 pattern in dogs naturally infected by Leíshmanía (L.) chagasí. / Mestre

Orientador: Caris Maroni Nunes / Banca: Paulo Roberto Martins Ribolla / Banca: Valéria Marçal Felix de Lima / Resumo: A importância da leishmaniose visceral no contexto da saúde pública tem aumentado na ultima década. A manifestação da leishmaniose visceral nos cães é variável e estudos sobre a genética e a sua relação com a leishmaniose visceral têm indicado alguns genes envolvidos na susceptibilidade e resistência a esta doença. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre as variantes alélicas dos gene Slc11a1 (solute carrier family 11 member 1) e DLA-DRB1 (dog leukocyte antigen) com a positividade para leishmaniose, determinada por meio da amplificação de DNA de cinetoplasto de Leishmania sp., por PCR, e pela presença de anticorpos anti-Leishmania sp. ao teste ELISA indireto. Foram observadas associações estatisticamente significantes entre a positividade para leishmaniose e: i. a presença do alelo (141, 145 ou 149) da região microssatélite (TAAA)n localizada no íntron 1 do gene Slc11a1 (P< 0,0001) ii. a variação do número de guaninas (8 ou 9 G) da região promotora (P=0,0280) (em ambos os casos quando analisados separadamente) e iii. a presença de qualquer dos alelos da região microssatélite associado a 8 ou 9 G da região promotora (P= 0,0025). A presença do alelo 141 foi estatisticamente associada à negatividade em cães (P<0,0001). Não foi observada associação estatisticamente significante entre a positividade à leishmaniose e a freqüência dos alelos do exon 2 do gene DLA- DRB1, embora tenha sido observada associação significante entre a freqüência dos alelos DRB1-W, DRB1*00101 ou DRB1-T e o resultado negativo para leishmaniose, podendo ser estes potenciais marcadores para resistência à leishmaniose em cães / Abstract:he importance of visceral leishmaniasis in the context of public health has increased in the last decade. The manifestation of visceral leishmaniasis in dogs is variable and genetic studies and its relationship with visceral leishmaniasis have shown some candidate genes involved in susceptibility and resistance to this disease. This study aimed at evaluating the relationship between polymorphism of the genes Slc11a (solute carrier family 11 member 1), and DLA-DRB1 (dog leukocyte antigen) and the positivity to leishmaniasis determined by the amplification of Leishmania sp. kinetoplast DNA by PCR and the presence of anti-Leishmania sp. the indirect ELISA. We observed statistically significant associations between the leishmaniasis positive diagnosis and i. the presence of intron 1 microsatellite region alleles (141, 145 or 149) (P<0.0001), ii. the variation on the guanine number (8 or 9) in the promoter region (P=0.0280) (in both cases when analyzed separately), iii. the presence any of the microsatellite alleles associated to 8 or 9 G in the promoter region (P=0.0025). Microsatellite allele 141 was associated to negativity to leishmaniasis (P<0.0001). There was no association between the presence of any of the exon 2 DLA-DRB1 alleles and the leishmaniasis positive animals, although significant association between the frequency of the alleles DRB1-W, DRB1*00101 or DRB1-T and negative results to leishmaniasis were observed. These might be potential markers for dog's resistance to visceral leishmaniasis / Mestre

Orientador: Valéria Marçal Félix de Lima / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Hiro Goto / Resumo: O objetivo desde estudo foi avaliar a apoptose de linfócitos T do baço e do sangue periférico de cães naturalmente infectados com leishmaniose visceral (LV) apresentado sintomas clínicos da doença e comparar ao observado em cães saudáveis. Treze cães provenientes do CCZA de Araçatuba (SP) área endêmica para leishmaniose visceral canina foram diagnosticados como positivos para a doença utilizando dos três métodos: o ELISA indireto utilizando antígeno total, a imunocromatografia com antígeno rK39 e a PCR. No grupo controle foram utilizados seis cães oriundos de área não endêmica que apresentaram resultados negativos nos testes para Leishmania spp e apresentaram hemograma normal. Após a eutanásia dos cães infectados, o sangue periférico e fragmentos de baço foram coletados para análise da apoptose. As amostras de baço do grupo controle foram retiradas por excisão cirúrgica após sedação, o sangue foi obtido por punção venosa, e coletado em tubos contendo EDTA. As amostras dos dois grupos foram processadas imediatamente após a coleta para determinação de apoptose utilizando dois marcadores diferentes e simultânea marcação para CD3 com anticorpo monoclonal. Nos cães infectados os linfócitos T do sangue periférico e do tecido esplênico mostram um aumento significativo dos níveis de apoptose comparado com o observado em cães controles. Esses resultados sugerem que em cães infectados a imunossupressão da resposta celular associada à infecção crônica pode ser conseqüência da aceleração das taxas de apoptose de células T, esses dados contribuem para o entendimento da resposta imune em cães infectados com L. (L.) chagasi, que pode levar ao desenvolvimento de medidas profiláticas ou preventivas para estes animais / Abstract: The aim of this study was to evaluate the apoptosis of T lymphocytes in the spleen and peripheral blood of dogs naturally infected with visceral leishmaniasis demonstrating symptoms of the disease and comparing to those observed in healthy dogs. Thirteen dogs from CCZA of Araçatuba, SP endemic area for canine visceral leishmaniasis were diagnosed as positive for the disease using three methods: ELISA using total antigen, the antigen rK39 immunochromatography and PCR. Six dogs from non-endemic area were tested negative in tests for Leishmania spp and had normal blood account. After euthanasia of infected dogs, the peripheral blood and fragments of spleen were collected for analysis of apoptosis. Samples of spleen in the control group were removed by surgical excision after sedation; blood was obtained by venipuncture and collected into tubes containing EDTA. Samples of both groups were processed immediately after collection to determinate of apoptosis using two different markers and simultaneous marking with CD3 monoclonal antibody. In dogs infected T lymphocytes from peripheral blood and spleen tissue showed a significant increasing in levels of apoptosis compared to those seen in control dogs. These results were supposed to be about those dogs in the immunosuppression of the cellular response associated with chronic infection being a consequence of accelerated rates of apoptosis of T cells, these data contributed to understanding the immune response in dogs infected with L. (L.) chagasi, which may lead to the development of prophylactic or preventive procedures for these animals / Mestre