Made available in DSpace on 2014-06-12T15:07:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo912_1.pdf: 2141428 bytes, checksum: 78c219a71473401dd243d8415154e84f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Existem alternativas viáveis para a obtenção de compostos liquênicos bioativos sem a destruição de grande quantidade de biomassa; os sistemas de imobilização consistem de uma alternativa acessível e barata. Sabendo que a obtenção de células para experimentos de imobilização causava danos à simbiose, este trabalho teve o objetivo de produzir metabólitos de Pseudocyphellaria aurata (Ach.) Vainio, ocorrente em Saloá (PE), a partir da imobilização de fragmentos do seu talo, em biorreatores com sistemas fixo, de fluxo contínuo e em movimento, com e sem a utilização de caulinita como matriz e, o acetato de sódio (NaOAc) como precursor enzimático, mantidos sob luz branca. Alíquotas coletadas dos biorreatores foram extraídas com solventes orgânicos e lidas em espectrofotômetro. A partir do talo liquênico obtiveram-se extratos orgânicos. Estes e os resultantes das imobilizações foram submetidos a cromatografias em camada delgada (CCD) e líquida de alta eficiência (CLAE). O sistema móvel mostrou ser o mais produtivo, sobretudo na concentração de 10,0mM de NaOAc, independentemente do uso da matriz de aprisionamento. A oxigenação provocada pela rotação contínua deste sistema deve ser importante para as trocas gasosas dos fragmentos do líquen sob constante saturação de água. Os níveis de clorofila dos fragmentos deste sistema não foram alterados significativamente, ao contrário do que aconteceu nos demais sistemas. Apesar disso, o sistema fixo foi o que apresentou maiores percentagens de vitalidade celular na camada de algas, principalmente no sistema com caulinita. Esta deve ter conferido maior proteção aos fragmentos imobilizados, tendo a função de fixar/imobilizar validada. O sistema de fluxo contínuo foi o menos produtivo quando comparado aos demais, porém a técnica utilizando fragmentos do talo demonstrou ser bem mais produtiva do que com células. A CCD dos extratos orgânicos apresentou calicina, ácido pulvínico e sua lactona no talo in natura e no talo após as imobilizações, além de várias bandas não identificadas de compostos intermediários produzidos nos biorreatores. Durante a realização da CLAE foi observado que a calicina e a lactona do ácido pulvínico podem se converter em ácido pulvínico. Por este motivo não foi detectada a presença dessas substâncias nas CLAEs, visto que até a preparação para a cromatografia os eluatos ficaram solubilizados até a evaporação e sob iluminação natural, o que deve ter sido responsável pela conversão entre os compostos produzidos

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-12T13:58:24Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Graciely Gomes Corrêa.pdf: 2438516 bytes, checksum: a95852e5811a7fda5cb9187fdec3ccc8 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-12T13:58:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Graciely Gomes Corrêa.pdf: 2438516 bytes, checksum: a95852e5811a7fda5cb9187fdec3ccc8 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-02-24 / CNPQ; CAPES / O bioma Caatinga é o principal ecossistema da Região Nordeste que apresenta características peculiares devido ao seu clima quente e seco, típico do semi-árido. As actinobactérias de regiões de condições extremas são importantes em decorrência dos mecanismos de adaptação que estimulam a produção de novos compostos com potencial biotecnológico. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi isolar e identificar actinobactérias da rizosfera da Caatinga, além de determinar a atividade antimicrobiana. O isolamento dos micro-organismos rizosféricos foi realizado pela técnica de diluição seriada, utilizando diferentes temperaturas e meios de cultura. Foram realizados testes antimicrobianos para seleção de actinobactérias com atividade para bactérias Gram-positivas, Gram-negativas e fungos. No ensaio primário em blocos de gelose, foi selecionada a actinobactéria que apresentou melhor resultado no ensaio primário e, em seguida, realizado o ensaio secundário (fermentação), utilizando os meios MPE, M1, ISP3 e Ciclamicina. A partir da fermentação da actinobactéria selecionada, no melhor meio de produção e tempo de fermentação, foram realizados experimentos de extração do princípio bioativo da biomassa e do líquido metabólico, em diferentes pHs. Em seguida, foi determinada a concentração mínima inibitória (CMI) do extrato bruto, da biomassa e do líquido metabólico. A identificação das actinobactérias foi realizada pela técnica do microcultivo e análise molecular. Foram isoladas 96 actinobactérias, das quais 68% (65) foram oriundas da temperatura de 37° C e 46% (48) provenientes do meio de cultura HV-ágar. No ensaio em bloco de gelose, 55% (53) dos isolados apresentaram atividade contra pelo menos um dos micro-organismos testados. Após este ensaio, a actinobactéria 74 (HT 1A+17) foi selecionada para os testes secundários por apresentar excelentes halos de inibição frente às bactérias Gram positivas. Esta linhagem foi identificada como Sreptomyces sp. através de testes moleculares e verificou-se que o meio MPE foi o melhor para a produção do biocomposto em 72 horas de fermentação, os melhores solventes foram acetona e hexano, ambos em pH 7,0, para extração da biomassa e do líquido metabólico, respectivamente. O isolado 74 (HT 1A+17) apresentou resultados promissores na produção do composto bioativo e estudos mais detalhados deverão ser realizados para melhor caracterização.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-29T14:44:05Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Bruno Francesco Rodrigues de Oliveira - 2015.pdf: 3313694 bytes, checksum: 5cb9779c379ed9f47de7c0d65abeb95b (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-29T14:47:16Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Bruno Francesco Rodrigues de Oliveira - 2015.pdf: 3313694 bytes, checksum: 5cb9779c379ed9f47de7c0d65abeb95b (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-29T14:47:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Bruno Francesco Rodrigues de Oliveira - 2015.pdf: 3313694 bytes, checksum: 5cb9779c379ed9f47de7c0d65abeb95b (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-03-18 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The actinobacteria constitute a wide and diverse phylum of gram-positive bacteria with a high content of guanine and cytosine in their DNA, standing out by the production of secondary metabolites with antibiotic activity. The treatment of multi-drug resistant pathogens infections and cancer represents a major challenge for modern medicine and bioactive microbial metabolites constitute a rich source of antimicrobial and antitumor drugs. The main aim of this study was to analyse the potential antimicrobial and cytotoxic activities of actinobactéria isolated from various habitats. The evaluation of these bioactivities was accomplished by the application of a set of qualitative screening in vitro assays. From a total of 19 morphospecies, isolated from the goiano Cerrado soil, 16 were evaluated in the primary antimicrobial activity tests, of which 5 (31,25%) antagonized the growth of indicator microorganisms. The ECL of the morphospecie BC-A22 and the crude extracts of the strain ADU 1.3 stood out for their strong antibiotic action against MRSA. The most of the crude extracts exhibited lytic action on the staphylococcal cell wall. Only ECLs of morphospecies GUARA 1 and PEG 23 and extracts of the strain PEG 30 were cytotoxic against A. salina in low concentration. None of the extracts showed an intercalation effect on the DNA molecule. With exception of BC-A22, the other six isolates were morphologically characterized as members of the Streptomyces genus. The morphospecie ADU 1.3 was molecularly identified as Streptomyces sp., highly likely to consist of a new species. The results of this initial phase of microbial bioprospecting highlight that all the isolates are potential producers of antibiotics biomolecules, excelling the morphospecie BC-A22, which exhibited a strong antimicrobial activity against the clinical isolates of MRSA and most of gram-negative bacteria. / As actinobactérias compõem um amplo e diverso filo de bactérias gram-positivas com elevado conteúdo de guanina e citosina em seu DNA, destacando-se pela produção de metabólitos secundários com atividade antibiótica. O tratamento das infecções por patógenos multirresistentes aos antimicrobianos e do câncer representa um dos maiores desafios da medicina moderna e moléculas microbianas bioativas ainda constituem uma fonte rica de drogas antimicrobianas e antitumorais. O objetivo principal do presente estudo foi analisar as potenciais ações antimicrobiana e citotóxica de actinobactérias isoladas de vários habitats. A avaliação dessas bioatividades foi efetuada mediante aplicação de uma série de ensaios qualitativos de triagem in vitro. Do total de 19 morfoespécies, isoladas do solo de Cerrado goiano, 16 foram avaliadas nos testes primários de atividade antimicrobiana, das quais 5 (31,25%) antagonizaram o crescimento dos micro-organismos indicadores. O ECL da morfoespécie BC-A22 e os extratos brutos do isolado ADU 1.3 se sobressaíram quanto a sua alta ação antibiótica frente à MRSA. A maioria dos extratos brutos exibiu ação lítica sobre a parede celular estafilocóccica. Apenas os ECLs das morfoespécies GUARA 1 e PEG 23 e os extratos do isolado PEG 30 foram citotóxicos a A. salina em baixa concentração. Nenhum dos extratos mostrou efeito de intercalação sob a molécula de DNA. Com exceção de BC-A22, os seis isolados foram caracterizados morfologicamente como membros do gênero Streptomyces. A morfoespécie ADU 1.3 foi identificada molecularmente como Streptomyces sp., com alta probabilidade de consistir em uma espécie nova. Os resultados obtidos dessa etapa de bioprospecção inicial evidenciam que todos os sete isolados são potenciais produtores de biomoléculas antibióticas, notabilizando-se a morfoespécie BC-A22, que exibiu uma alta ação antimicrobiana frente aos MRSA hospitalares e a maior parte das bactérias gram-negativas. Palavras-chave: actinobactérias; bioprospecção microbiana; metabólitos bioativos; antibióticos.