Made available in DSpace on 2014-06-12T16:29:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2152_1.pdf: 961505 bytes, checksum: 26d85508cf7925585f4303ac19a413e7 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Streptomyces endofíticos de plantas medicinais vem contribuindo de maneira significativa como uma fonte promissora para descoberta de novos metabólitos bioativos. Este trabalho teve como objetivo selecionar o melhor meio de cultura e tempo de produção de metabólitos secundários bioativos, visando seu isolamento. Foram utilizados na fermentação cinco diferentes meios de cultura, que através do teste de difusão em disco para Bacillus subtilis ATCC 6633 mostraram boa atividade antimicrobiana. A massa celular foi extraída com solventes polares, sendo o extrato etanólico o que apresentou maior halo de inibição, quando comparado aos extratos dos líquidos metabólicos. O extrato etanólico foi submetido à coluna cromatográfica de sílica gel, seguida da purificação da fração ativa por cromatografia em placas preparativas, originando quatro novas frações, das quais apenas a fração A4 apresentou halo de inibição para bactérias Gram-positivas. Desta fração foi determinada a CMI e o melhor resultado obtido foi para Micrococcus luteus ATCC 2225 <12,5 &#956;g/mL. O espectro infravermelho desta fração mostrou a presença de grupos característicos de anima primária alifática, grupos alquila e cetona

Made available in DSpace on 2015-05-22T12:36:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000468567-Texto+Completo-0.pdf: 3711593 bytes, checksum: 32dee061e07f3464cbf1a35564001f4c (MD5) Previous issue date: 2014 / Eucalyptus is an economically important woody species, especially as a raw material in many industrial sectors. Brazil ranks the second worldwide position in acreage, totalizing approximately three million hectares. Eucalyptus species are very susceptible to pathogens such as Botrytis cinerea (gray mold), which leads to mortality of cuttings in rooting phase. Biological control of plant diseases using soil microorganisms has been considered an alternative to reduce the use of pesticides and pathogen attack. Plant growth promoting rhizobacteria can act directly on plant development for production of phytohormones or indirectly as antagonists to pathogens, as well as promote changes in secondary metabolism, and hence inducing of systemic resistance. In this study, the direct roleof Streptomyces isolates in plant development was evaluated through the production of auxin and rhizogenic potential in Eucalyptus grandis and E. globulus plants, as well as indirectly, by modulation of the secondary metabolism, and induction of sistemic resistence in plantselicited with Streptomyces sp. and challenged with the pathogenic fungus B. cinerea. Metabolic responses were evaluated throughactivity of plant defense enzymes (PPO and POX) and induced secondary compounds (total phenolics and quercetinic-flavonoids fraction). The incidence and progression of gray mold disease on plants elicited Streptomyces sp. PM9, and coculture of these microorganisms (Streptomyces and B. cinerea) were also evaluated. Streptomyces sp. PM5 and PM9 isolates produced more auxin than the other isolates tested. Streptomyces sp. PM9 showed the highest rhizogenic potential on Eucalyptus sp. and modulated secondary metabolism of these plants. Antagonism of this isolated over B. cinerea was evidenced. Plants elicited with Streptomyces sp. PM9 and challenged with B. cinerea showed changes in PPO and POX enzymes and levels of phenolic compounds at different time points of analysis, which may be related to initial defense response. Phenolic compounds chlorogenic acid and gallic acid were, on average, the most abundant, while caffeic acid, benzoic acidand catechin were induced at specific time points. A delay in the onset of disease was significant in plants of E. grandis elicited with Streptomyces. The induction of resistance, disease delay and antagonism against B. cinereaindicate the capacity of Streptomyces sp. PM9 as an inducer of plant systemic resistance, and poses this microorganism as a potential candidate for biological control programs in nurseries of Eucalyptus. Interaction of rhizobacteria with eucalyptus plant, as well as the modulation of defense mechanisms may contribute to the establishment of new biocontrol strategies applied to forestry. / O eucalipto é uma espécie lenhosa economicamente importante, destacando-se como matériaprima em diversos setores industriais. O Brasil ocupa a segunda posição mundial em área plantada, totalizando aproximadamente três milhões de hectares. As espécies de eucalipto são muito suscetíveis a patógenos como Botrytis cinerea (mofo-cinzento), o qual leva à mortalidade de estacas em fase de enraizamento. O controle biológico de doenças em plantas utilizando microrganismos do solo tem sido considerado uma alternativa para reduzir o uso de agroquímicos e o ataque de patógenos. Rizobactérias promotoras de crescimento vegetal podem agir diretamente no desenvolvimento das plantaspela produção de fitormôniosou indiretamente, como antagonistas a fungos patogênicos, além de causar alterações no metabolismo secundário, com consequente indução de resistência sistêmica. Neste trabalho, avaliou-se a ação direta no desenvolvimento vegetal de isolados rizobacterianos do gênero Streptomyces através da produção de auxinas e potencial rizogênico de Eucalyptus grandis e E. globulus, bem como oefeito modulador no metabolismo secundárioe a indução de resistência sistêmica em plantas eliciadas com Streptomyces sp. e desafiadas com o fungo patogênico B. cinerea. As respostas metabólicas foram avaliadas através das atividades de enzimas realacionadas à defesa vegetal (PPO e POX) e dos compostos secundários induzidos (compostos fenólicos totais e fração flavonóides quercetínicos).A incidência e progressão da doença mofo cinzento em plantas eliciadas com Streptomyces sp. PM9, e cocultivo destes microrganismos (Streptomyces e B. cinerea) também foram avaliados. Os isolados de Streptomycessp. PM5 e PM9 apresentaram maior produção de auxina que os demais isolados testados. Streptomyces sp. PM9 apresentou o maior potencial rizogênico em plantas de Eucalyptus sp. emodulou o metabolismo secundário destas plantas. Oantagonismo deste isolado sobre B. cinerea foi evidenciado. As plantas eliciadas com Streptomyces sp. PM9 e desafiadas com B. cinereaapresentaram alterações nas enzimas PPO e POXe nos níveis de compostos fenólicos totais em diferentes tempos de análise, as quais foram relacionadas à resposta inicial de defesa. Os compostos fenólicos ácido gálico e clorogênico foram, em média, os mais abundantes, embora os ácidos cafeico e benzoico e a catequina tenham sido induzidos em momentos específicos. O retardo no estabelecimento da doença foi significativo em plantas de E. grandis eliciadas com Streptomyces. Os resultados de indução de resistência, retardo da doença eantagonismocontra B. cinerea, demonstram a capacidade de ação de Streptomycessp. PM9 como indutor de resistência sistêmica vegetal, colocando este microrganismo como potencial candidato aos programas de controle biológico em viveiros de mudas de Eucalyptus. A interação da planta de eucalipto com a rizobactéria, bem como a modulação dos mecanismos de defesa podem contribuir para o estabelecimento de novas estratégiasde biocontrole aplicado à silvicultura.

Made available in DSpace on 2014-01-21T01:01:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000453266-Texto+Completo-0.pdf: 4427206 bytes, checksum: 875df6097aa0d8c0eb37b5aefb426750 (MD5) Previous issue date: 2014 / The Lycopodium genus plants contain secondary metabolites that make them a potential source of pharmacologically active compounds. The extract of the specie Lycopodium clavatum L. presents anticholinesterase, anti-inflammatory, antibacterial, antiviral and antifungal activities. The supercritical fluid extraction has several advantages compared to traditional extraction techniques. Therefore, this study aimed metabolites Lycopodium clavatum L. extraction thru supercritical CO2 process. The supercritical fluid pressure and temperature as well the pretreatment time (soaking the plant in basic solution) influences in lycopodine alkaloid content in the extract were evaluated by an incomplete factorial design with three factors and three levels (Box-Behnken) and response surface methodology. The extract was subjected to Stas-Otto acid-base process and then analyzed by mass spectrometry coupled gas chromatography. The content of lycopodine was defined by normalizing peak areas of the chromatogram. The pressure was evaluated between 200 and 300 bar, the temperature between 40 to 60°C and the immersion time was zero to two hours. Oniy pressure and temperature were statistically significant, for this reason they are ideal parameters for extraction: 300 bar, 40°C, without immersion of the plant in the alkaline solution. Under these conditions we obtained a content of 20. 19% of lycopodine the final extract was raised and the yield curve as a function of extraction time. This curve was modeled mathematically, with good fit, for models of Crank (1975), Sovová (1994) and Reverchon (1996).Thus parameters related the mass transfer were estimated such as difusion coefficient and mass transfer coefficient, which are important for scale-. up and process simulation. In this study, the extraction with supercritical CO2 was found toe technically feasible to obtain lycopodine, since it is more selective and with higher yields compared to the ethanol extraction case. / Plantas do gênero Lycopodium contêm metabólitos secundários que as tornam uma potencial fonte de compostos farmacologicamente ativos. O extrato da espécie Lycopodium clavatum L. apresenta atividade anticolinesterásica, anti-inflamatória, antibacteriana, antiviral e antifúngica. A extração com fluido supercrítico, frente a técnicas tradicionais de extração, apresenta diversas vantagens quando aplicada a diferentes espécies vegetais. Assim, o presente estudo teve por objetivo a aplicação do processo com CO2 supercrítico para a extração de metabólitos da Lycopodium clavatum L. Foram avaliadas, através de um planejamento fatorial incompleto com três fatores e três níveis (Box-Behnken) e da metodologia de superfície de resposta, as influências da pressão e temperatura do fluido supercrítico e do tempo de pré-tratamento (imersão da planta em solução básica) no teor do alcalóide licopodina no extrato. O extrato era purificado pelo processo ácido-base de Stas-Otto e então analisado por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas, sendo o teor de licopodina definido pela normalização das áreas dos picos do cromatograma. A pressão foi avaliada entre 200 e 300 bar, a temperatura entre 40 a 60°C e o tempo de imersão foi de zero a duas horas. Apenas pressão e temperatura foram estatisticamente significativas, sendo então parâmetros ideais para a extração: 300 bar, 40°C, sem a imersão da planta na solução alcalina. Nessas condições, obteve-se um teor de 20,29% de licopodina no extrato final e foi levantada a curva de rendimento da extração em função tempo. A curva foi modelada matematicamente, com bom ajuste, pelos modelos de Crank (1975), Sovová (1994) e Reverchon (1996).Assim, foram estimados parâmetros relacionados à transferência de massa, importantes para simulação e scale-up do processo, tais como o coeficiente de difusão e coeficientes de transferência de massa. Nesse estudo, a extração com CO2 supercrítico mostrou-se tecnicamente viável para a obtenção de licopodina, sendo mais seletiva em relação ao processo de extração com etanol.