Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-03-16T13:30:02Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇAO Jadson Diogo Bezerra.pdf: 1447785 bytes, checksum: 5ce7a69d178857885f214678553f14dd (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-16T13:30:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇAO Jadson Diogo Bezerra.pdf: 1447785 bytes, checksum: 5ce7a69d178857885f214678553f14dd (MD5) Previous issue date: 2013-02-20 / CNPq, FINEP, FAPEMIG, FACEPE e SISBIOTA / Fungos endofíticos vivem dentro dos tecidos sadios de plantas e podem promover tolerância das espécies hospedeiras para diferentes estresses ambientais. No entanto, a maioria dos estudos tem sido de plantas em ambientes úmidos e são poucos os relatos dos benefícios de tais associações com plantas de ambientes extremos. O objetivo deste trabalho foi analisar a diversidade de fungos endofíticos de Cereus jamacaru em três diferentes áreas de sucessão ecológica da floresta tropical seca brasileira (Caatinga), Paraíba, Brasil. O material vegetal foi coletado e 1215 fragmentos foram estudados em condições assépticas dos quais foram isolados 560 fungos endofíticos distribuídos nas áreas de sucessão ecológica Inicial (206 isolados), Intermediária (206 isolados) e Tardia (149 isolados) e identificados como pertencentes a 59 táxons. Cladosporium cladosporioides e Fusarium oxysporum foram as espécies mais comumente isoladas, seguidas por Acremonium terricola, Aureobasidium pullulans, Trichoderma viride, Chrysonilia sitophila, e Aspergillus flavus. As espécies dos gêneros Boeremia, Candida, Cochliobolus, Guignardia, Pestalotiopsis, Phomopsis, Purpureocillium, Redaellia (= Aspergillus), Sporobolomyces, e Syncephalastrum foram encontradas apenas uma ou duas vezes. O isolamento de Redaellia inicia discussão sobre o gênero e sua sinonímia com Aspergillus. Quarenta e sete espécies são registradas pela primeira vez como fungos endofíticos de cactos, e 18 outras como endófitos para o Brasil. Os valores dos índices de diversidade de Shannon-Wiener e Simpson indicaram a área de sucessão ecológica Tardia como a mais diversa e a mais abundante por uma ou poucas espécies, sendo esta área, segundo a equitabilidade de Pielou, a que possui a maior uniformidade de indivíduos entre as espécies de fungos endofíticos. A maior similaridade, segundo o coeficiente de Sorensen, foi entre as áreas Inicial e Intermediária. Claramente existe uma riqueza de fungos endofíticos associados C. jamacaru na Caatinga. Esta subestimada diversidade microbiana suporta a ideia de que endófitos podem estar envolvidos na proteção de plantas em ambientes extremos, e a maior frequência de fungos endofíticos em áreas de preservação recente (Inicial e Intermediária) sugere que esses microorganismos podem participar ativamente da regeneração de florestas tropicais secas. Este é o primeiro estudo de fungos endofíticos associados com o cacto C. jamacaru na floresta tropical seca brasileira conhecida como Caatinga.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:29:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2152_1.pdf: 961505 bytes, checksum: 26d85508cf7925585f4303ac19a413e7 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Streptomyces endofíticos de plantas medicinais vem contribuindo de maneira significativa como uma fonte promissora para descoberta de novos metabólitos bioativos. Este trabalho teve como objetivo selecionar o melhor meio de cultura e tempo de produção de metabólitos secundários bioativos, visando seu isolamento. Foram utilizados na fermentação cinco diferentes meios de cultura, que através do teste de difusão em disco para Bacillus subtilis ATCC 6633 mostraram boa atividade antimicrobiana. A massa celular foi extraída com solventes polares, sendo o extrato etanólico o que apresentou maior halo de inibição, quando comparado aos extratos dos líquidos metabólicos. O extrato etanólico foi submetido à coluna cromatográfica de sílica gel, seguida da purificação da fração ativa por cromatografia em placas preparativas, originando quatro novas frações, das quais apenas a fração A4 apresentou halo de inibição para bactérias Gram-positivas. Desta fração foi determinada a CMI e o melhor resultado obtido foi para Micrococcus luteus ATCC 2225 <12,5 &#956;g/mL. O espectro infravermelho desta fração mostrou a presença de grupos característicos de anima primária alifática, grupos alquila e cetona

SOUSA, Debora Bezerra de. Estudo do potencial químico de Fusarium udum. 2017. 139 f. Dissertação (Mestrado em Química) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Celia Sena (celiasena@dqoi.ufc.br) on 2017-11-07T20:09:55Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_dbsousa.pdf: 5343823 bytes, checksum: a8ff9a4e6104fc12d420f0ad30f9866c (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-11-07T22:59:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_dbsousa.pdf: 5343823 bytes, checksum: a8ff9a4e6104fc12d420f0ad30f9866c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-07T22:59:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_dbsousa.pdf: 5343823 bytes, checksum: a8ff9a4e6104fc12d420f0ad30f9866c (MD5) Previous issue date: 2017 / The present study aims to investigate the chemical potential of Fusarium udum, an endophytic fungus isolated from Chrotalaria paulinea, which is responsible for causing damage to bean planting and species of Chrotalaria. The fungus was cultivated in four distinct culture media: PD (potato-dextrose), PDY (potato-dextrose-yeast), MPD (malt-peptone-dextrose), and Czapek. The culture time was determined by the glucose rate of the culture medium. The ethyl acetate extract from the microorganism cultivated in MPD (25 days) was selected for the pre-liminary chromatographic treatment, and led to the isolation of tyrosol, fusaric acid, and monaspilosin. In another experiment that used the culture media mentioned above, F. udum produced secondary metabolites through different days of incubation (7, 14, 21, 28 days). The chromatographic fractionation of the ethyl acetate extract from the microorganism cultured in PDY (28 days) provided cycle (L-Pro-L-Leu) and triptophol. The micellar extract obtained in this culture was also studied and it supplied the substance adenosine. Usual chromatographic techniques, including liquid-liquid partition, C-18 cartridge chromatography, and high perfor-mance liquid chromatography (HPLC), were used to isolate the secondary metabolites. The structural characterization was conducted by using the spectrometric techniques mass spec-trometry (MS) and nuclear magnetic resonance (NMR) with one and two-dimensional experi-ments and comparison with literature data. / O presente trabalho objetiva a investigação do potencial químico de Fusarium udum, um fungo endofítico isolado de Chrotalaria paulinea, e responsável por causar danos a plantações de feijão e em espécies de Chrotalaria. O fungo foi cultivado em quatro meios de cultura distintos: BD (batata-dextrose), BDL (batata-dextrose-levedura), MPD (malte-peptona-dextrose) e Czapek, sendo o tempo de cultivo determinado pela taxa de glicose do meio. O extrato AcOEt do micro-organismo cultivado em meio MPD (25 dias) foi selecionado para o tratamento cromatográfico preliminar, levando ao isolamento do tirosol, ácido fusárico e monaspilosina. Em um outro experimento, e utilizando os meios de cultivo mencionados, F. udum teve a produção dos metabólitos secundários acompanhada através de diferentes dias de incubação (7, 14, 21, 28 dias). O fracionamento cromatográfico do extrato AcOEt do micro-organismo cultivado em meio BDL (28 dias) forneceu a dicetopiperazina ciclo (L-Pro-L-Leu) e o triptofol. O extrato micelar obtido neste cultivo também foi estudado e forneceu a adenosina. Técnicas cromatográficas usuais, incluindo partição líquido-líquido, cromatografia em cartucho C-18 e cromatografia de alta eficiência (CLAE) foram utilizadas para o isolamento dos metabólitos secundários, enquanto que a caracterização estrutural foi possível através do uso de técnicas espectrométricas utilizando espectrometria de massa (EM) e ressonância magnética nuclear (RMN) com experimentos uni e bidimensionais, além de comparação com dados da literatura.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:02:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1650_1.pdf: 2864470 bytes, checksum: ead5bc5b55399ccb1759ea9a797634be (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / A bananeira (Musa spp.) está presente em todas as regiões tropicais e subtropicais, sendo a banana a fruta mais conhecida e cultivada. No Brasil a bananicultura é atividade de importância econômica e social. O fungo endofítico habita o interior dos tecidos aéreos do hospedeiro, pelo menos durante uma fase do seu ciclo de vida, desempenhando variadas e estreitas relações ecológicas, sem demonstrar sintomas visíveis. Com o objetivo de isolar, identificar e avaliar o potencial antagônico dos fungos endofíticos de folhas de bananeiras contra os fitopatógenos Cladosporium musae, Fusarium oxysporum f. sp. cubense, Colletotrichum musae, Deightoniella torulosa, Pseudocercospora musae e Mycosphaerella musicola, através de testes in vitro, foram realizadas quatro coletas seguindo-se de isolamento e identificação de fungos endofíticos de folhas sadias (nova, intermediária e velha) de quatro cultivares de bananeira ( Pacovan , Nanicão , Prata-Anã e Maçã ), do município de Belo Jardim/Pernambuco, no período chuvoso e de estiagem. No total, foram identificadas 40 espécies de fungos endofíticos originadas de 751 colônias a partir de 1728 discos foliares. Apresentaram maior frequência de ocorrência em relação ao número de unidades formadoras de colônias: Acremonium polychoroma, Alternaria alternata, Cladosporium cladosporioides, Colletotrichum gloeosporioides, Colletotrichum. musae, Deightoniella torulosa, Fusarium solani, Nigrospora oryzae, Nodulisporium gregarium, Paecilomyces lilacinus, Pestalotiopsis maculans, Guignardia musae. A maior frequência de colonização por fungos endofíticos foi verificada em folhas velhas, no cultivar Pacovan . Maiores índices de frequência foram registrados no período chuvoso. Nigrospora oryzae, Pestalotiopsis maculans e Nodulisporium gregarium apresentaram mais eficiência nos testes de antagonismo in vitro contra os fitopatógenos testados

Microrganismos endofíticos apresentam grande diversidade genética e metabólica, com enorme potencial biotecnológico para aplicações em diferentes áreas. A bioprospecção desses microrganismos possibilita a obtenção de novos bioprodutos agrícolas. Endofíticos podem ser aplicados, por exemplo, para a biorremediação de áreas contaminadas ou para o controle de insetos pragas pela produção de compostos entomotóxicos. Apesar de sua importância, ainda existem poucos estudos voltados à bioprospecção da microbiota endofítica em regiões tropicais. Assim, o presente trabalho pretendeu verificar a diversidade de microrganismos endofíticos cultiváveis em milho e a comparar a diversidade de metabólitos desses endofíticos ao de isolados de Citrus. Também foi explorado o potencial dos diferentes endófitos em degradar os principais inseticidas (lufenuron, spinosad, chlorpyrifos ethyl, lambda-cyhalothrin e deltamethrin) utilizados em lavouras de milho para o controle de lagartas de Spodoptera frugiperda (J.E. Smith, 1797) (Lepidoptera, Noctuidae), para exploração dos mesmos em programas de biorremediação. Finalmente, foi avaliado o potencial entomotoxida dos extratos orgânicos dos endofíticos estudados até a identificação das moléculas ativas. Foram isolados 30 microrganismos endofíticos de milho (27 bactérias e 3 fungos), os quais foram comparados aos endófitos de citros do acervo do Laboratório de Genética de Microrganismos \"Prof. João Lúcio de Azevedo\". Dos isolados obtidos, sete apresentaram capacidade de metabolização dos cinco inseticidas testados, sendo a maioria deles capaz de metabolizar pelo menos um dos inseticidas testados. Ensaios de bioatividade dos extratos orgânicos do cultivo dos endofíticos contra lagartas de S. frugiperda, levaram à identificação de extratos que induziram 100% de mortalidade de lagartas do terceiro ínstar. O isolamento e a caracterização da molécula ativa do extrato produzido pelo isolado LGM-CR-JM-02 - Streptomyces badius, permitiu a identificação da valinomicina (CL50 = 4,38 Mi g/mL) como molécula ativa. Assim, demonstramos que a comunidade de endofíticos pode reunir grande diversidade biológica e, principalmente, metabólica, sendo uma excelente oportunidade para exploração de microrganismos com potencial para biorremediação e produção de compostos com atividade inseticida / Endophytes are microorganisms with great genetic and metabolic diversity, and with a huge biotechnological potential for applications in different areas. The bioprospection of these microorganisms makes possible to obtain new agricultural bioproducts. Endophytes may be applied, for example, to bioremediation of contaminated areas or to the control of pest insects with entomotoxic compounds. Despite its importance, there are few studies focused on the bioprospection of endophytic microbiota in tropical regions. Thus, we investigated the biological diversity of culturable endophytes from maize and compared the diversity of metabolites endophytes from maize and Citrus produced. We also explored the potential of different endophytes to grow in minumum medium containing one of the main insecticides (lufenuron, spinosad, chlorpyrifos ethyl, lambda-cyhalothrin and deltamethrin) applied in maize crops to control the caterpillars Spodoptera frugiperda (J.E. Smith, 1797) (Lepidoptera, Noctuidae) as the only source of carbon in order to evaluate their potential use in bioremediation programs. Finally, we evaluated the entomotoxic potential of the organic extracts of the endophytes and the fractions up to the identification of the active molecules. In total, thirty maize endophytes (27 bacteria and 3 fungi) and five endophytes isolated from citrus that were deposited at the collection of the Laboratory of Genetics of Microorganisms \"Prof. João Lúcio de Azevedo\" were investigated. Seven out of 35 endophytes tested metabolized the five insecticides used, and most of them were able to metabolize at least one of the tested insecticides. Bioactivity assays of the organic extracts produced from cultured endophytes were fed to third instars of S. frugiperda causing 100% mortality. The isolation and characterization of the active molecule produced by one of these isolates (LGM-CR-JM-02 - Streptomyces badius) led to the identification of valinomycin (LC50 = 4.38 Mi g / mL) as the active molecule. Thus, we demonstrated that endophytes can gather great biological and metabolic diversities, demonstrating endophytes are an excellent opportunity for the identification of microorganisms with potential for bioremediation and production of compounds with insecticidal activity

Endófitos são todos os microrganismos, cultiváveis ou não, que habitam o interior dos tecidos vegetais, não causando danos ao hospedeiro e nem o desenvolvimento de estruturas externas, excluindo, dessa forma, bactérias noduladoras e micorrizas. Theobroma cacao L. é importante para as indústrias alimentícia e cosmética, por constituir a matéria prima para a produção de manteiga de cacau. Considerando a importância do estudo do cacaueiro e sua comunidade fúngica endofítica associada, os objetivos desse trabalho foram: i) estudar a diversidade da comunidade endofítica de cacau; ii) avaliar o potencial dessa comunidade para o controle biológico de Crinipellis perniciosa, o agente causal da vassoura de bruxa e outros fitopatógenos e iii) estudar a interação endófito-patógeno e endófito-hospedeiro. O trabalho foi iniciado com o isolamento de fungos endofíticos de cacau, que foram caracterizados com base em características morfológicas e moleculares. A diversidade foi avaliada por análises de rDNA (regiões ITS1, ITS2 e 5.8) (ARDRA e sequenciamento). A análise de ARDRA gerou 64 haplótipos, os quais incluíram no mínimo, 16 espécies. A seguir, fungos endofíticos antagônicos de cacau foram selecionados in vitro contra C. perniciosa. Foi observado que, dentre os 145 isolados avaliados, 38.6% foram classificados como antagônicos, enquanto 13.1% foram classificados como parasitas. Após a seleção, os isolados foram usados para extração de metabólitos secundários e outras caracterizações. Também foi feita a detecção do gene da &#948;-(L-&#945;- aminoadipil)-L-cisteinil-D-valin (ACV), que é a precursora das &#946;-lactanas, antibióticos como as penicilinas e cefalosporinas. A amplificação desse gene gerou um fragmento de 600 pb em 9.1% dos isolados avaliados. Alguns isolados foram testados contra fungos fitopatogênicos (Colletotrichum falcatum, C. sublineorum, Erythricium salmonicolor, Rhizoctonia solani, Ceratocystis paradoxa, Phytophthora sp., P. parasitica, P. palmivora e Fusarium moniliforme). Apenas C. sublineorum de sorgo e Ceratocystis paradoxa de cana-de-açúcar foram inibidos in vitro pelos endófitos 42.3 e 2, respectivamente. Foi feita a investigação da habilidade de penetração e colonização do fungo endofítico 42.3 em cacau comum suscetível, usando as técnicas de RAPD e SEM. A penetração do fungo foi iniciada entre 3 e 6 horas após a inoculação. A interação entre o endófito de cacau 42.3 com C. perniciosa 281 (patogênico), foi avaliada por SDS-PAGE, visando a detecção de proteínas expressas pelo patógeno e pelo endófito. A SDSPAGE permitiu a visualização de bandas expressas na interação, quando os microrganismos foram crescidos juntos. Na presença do substrato de crescimento do endófito, C. perniciosa não expressou proteínas visíveis, ou distinguíveis em SDS-PAGE, mas o co-cultivo desses fungos, geraram bandas não observadas em análises prévias. / Endophytes are all microorganisms, culturable or not, that inhabit the interior of plant tissues, causing no harm to the host, and that do not develop external structures, excluding in this way, nodulating bacteria and mycorrhizal fungi. Theobroma cacao L. is important to food and cosmetic industry due the fact that it is used for production of cacao butter. Considering the importance of cacao and associated endophytic fungal community studies, the objectives of this work were to: i) study the diversity on endophytic community of cacao; ii) evaluate the potential of this community to biological control of Crinipellis perniciosa, causal agent of witches’ broom disease and other phytopathogens and iii) study the interaction endophyte-pathogen and endophyte-host. The work began with isolation of the cacao endophytic fungi that was characterizated based on morphological and molecelar characters. The diversity was evaluated by rDNA (ITS1, ITS2 e 5.8 subunit regions) analyses (ARDRA and sequencing). The ARDRA analysis generated 64 haplotypes, which included at least 16 species. Following, antagonistic endophytic fungi from cacao were selected in vitro against C. perniciosa. It was observed that in 145 evaluated isolates, 38.6% was classified as antagonic, while 13.1% were classified as parasitic. After the selection, isolates were used for secondary metabolites extraction and further characterization. Also, detection of &#948;-(L-&#945;-aminoadipil)-L-cisteinil-D-valin (ACV) gene, which is the precursor of &#946;-lactans, antibiotics like penicilins and cephalosporins, was carried out. The amplification of this gene generated a fragment of 600pb in 9.1% of the isolates evaluated. Some isolates were further evaluated against phytophathogenic fungi (Colletotrichum falcatum, C. sublineorum, Erythricium salmonicolor, Rhizoctonia solani, Ceratocystis paradoxa, Phytophthora sp., P. parasitica, P. palmivora and Fusarium moniliforme). Only C. sublineorum of sorghum and Ceratocystis paradoxa of sugarcane were in vitro inhibited by the endophytes 42.3 and 2, respectively. The investigation of the penetration and colonization ability of endophytic fungus 42.3 on susceptible cacao comum was carried out, using RAPD and SEM techniques. The penetration of the fungus was initiated between 3 and 6 hours after inoculation. The interaction between cacao endophyte 42.3 with C. perniciosa 281 (pathogenic), was evaluated by SDSPAGE, aiming the detection of expressed proteins by pathogen and endophyte. The SDS-PAGE allowed the visualization of bands expressed in the interaction, when the microorganisms were grown together. In the presence of the endophyte growth substrate, C. perniciosa do not express visible proteins or, at least, distinguishable in SDS-PAGE, but the co-cultive of these fungi generated non observed bands in previously analysis.

Submitted by Programa de Pós-graduação em Biotecnologia (mebiotec.ufba@gmail.com) on 2017-04-04T12:20:08Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Final Fúlvia - pdf.pdf: 2635541 bytes, checksum: 2467e7499254166de412e643a75fac66 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-07-06T12:50:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Final Fúlvia - pdf.pdf: 2635541 bytes, checksum: 2467e7499254166de412e643a75fac66 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-06T12:50:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Final Fúlvia - pdf.pdf: 2635541 bytes, checksum: 2467e7499254166de412e643a75fac66 (MD5) / CAPES / O bioma restinga pode ser caracterizado por áreas arenosas, de alta salinidade e com uma vegetação típica, com plantas adaptadas e de ocorrência descontínua no litoral brasileiro, sendo inclusive a transição para a mata atlântica. A maçaranduba, Manilkara salzmannii, uma sapotácea muito comum em áreas de transição e em vários biomas, inclusive na floresta amazônica atingindo mais de 20 metros de altura e usada como madeira para reflorestamento e na fabricação de móveis, mas várias espécies de plantas do gênero Manilkara sp tem características herbáceas como na restinga, sendo retorcida e com folhas duras e alternadas, A ocorrência de plantas da família Sapotaceae na restinga, pode representar um modelo para estudos desde em eco-fisiologia até de biodiversidade. Os micro-organismos endofíticos vivem no interior das plantas e desempenham importantes papéis ecológicos, podendo ser benéficos às plantas, como produtores de fito-hormônios e agentes de controle biológico e até prejudiciais, como os fitopatógenos, Recentemente, tem-se estudado fungos endofíticos principalmente para fins de bioprospecção e neste trabalho foram isolados e caracterizados endofíticos de Manilkara salzmannii quanto á atividade antimicrobiana. Um isolado, MK001, apresentou atividade antimicrobiana, onde, diferentes frações do mesmo extrato, inibiram fungos (Candida albicans ATCC18804) e bactérias (Staphylococcus aureus ATCC 25923 e Corynebacterium sp. VD57). Este isolado foi caracterizado como do gênero Lophiostoma sp., Ordem Pleosporales, e com características que podem indicar uma nova espécie. / The biome sandbank, can be characterized by sandy areas, high salinity and with a typical vegetation with plants adapted and with a discontinuous occurrence of the Brazilian coast, and even the transition to rainforest. The maçaranduba, Manilkara salzmannii, represents a sapotacea very common in transitions areas and can be found in various biomes, including the Amazon rainforest reaching over 20 feet tall and used as wood for reforestation and the manufacture of furniture, but several species of plants from this genus Manilkara sp has herbaceous characteristics, mainly in the sandbank, being twisted and stiff and alternate leaves, the occurrence of plants from the Sapotaceae family in sandbank, may represent as a model for studies on ecophysiology and biodiversity. Endophytic microorganisms living inside the plants and play important ecological roles, may be beneficial to plants as producers of phyto-hormones and biological control agents and even harmful, such as pathogens, has been recently studied, mainly endophytic fungi for bioprospecting purposes and in this work were isolated and characterized endophytic from Manilkara salzmannii with the goal to selected fungi with an antimicrobial activity. One isolate, MK001, shows antimicrobial activity, where different fractions from the same extract was able to inhibit the growth fungi Candida albicans and bacteria (Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Corynebacterium sp.). This isolate was characterized as genus Lophiostoma sp., Order Pleosporales, and can be a new species.

NASCIMENTO, Hélio Oliveira do. Estudo do potencial químico e citotóxico dos metabólitos secundários do fungo endofítico Periconia hispidula. 2016. 154 f. Dissertação (Mestrado em Química)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-08-01T20:21:47Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_honascimento.pdf: 8663458 bytes, checksum: 7310ad2651bf300ddf8cd835199d769a (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-08-01T20:22:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_honascimento.pdf: 8663458 bytes, checksum: 7310ad2651bf300ddf8cd835199d769a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-01T20:22:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_honascimento.pdf: 8663458 bytes, checksum: 7310ad2651bf300ddf8cd835199d769a (MD5) Previous issue date: 2016 / Periconia hipidula é um fungo endofítico isolado de folhas secas provenientes de dunas do semiárido do estado da Bahia. O fungo foi submetido ao cultivo através da variação de fatores nutricionais em quatro meios diferentes: MPD (malte, peptona e dextrose), BD (batata, dextrose), BDL (batata, dextrose e levedura) e MntPL (manitol, peptona e levedura), e análise dos extratos em diferentes dias de incubação (7, 14, 21, 28 dias). A prospecção da atividade citotóxica preliminar foi realizada a partir dos extratos obtidos frente à linhagem de células tumorais de câncer de cólon (HCT-116). Os extratos MPD – 28 dias, BDL - 28 dias e BD - 21 dias apresentaram uma atividade citotóxica promissora e foram preliminarmente selecionados para o estudo químico. O fracionamento cromatográfico do extrato MPD-28 dias, resultou no isolamento de 11 metabólitos secundários caracterizados como {(R), 6-hidroxi-2-metil, 4-cromanona (PS-1)}, { (S), 6-hidroxi-2-metil, 4-cromanona (PS-2)}, {E, 1-(2,5 diidroxi-fenil) but-2-en-1-ona (PS-3)}, {1-(2, 5 diidroxi-fenil)-butan-1-ona (PS-4)}, Z-3-(3 hidroxifenil) propenoato de metila (PS-5), modiolido A (PS-7), fusanolido B (PS-8), estagonolido E (PS-9), {(3R,4R)-3,4diidro,3,4,8 triidroxi,naftalen-1-(2H)-ona (PS-11)}, (4S)-isosclerona (PS-12), além de PS-10 que se encontram em fase de caracterização estrutural. Os extratos BDL-28 dias e BD-21 dias apresentaram um perfil cromatográfico bastante semelhante ao extrato MPD-28 dias, desta forma, os fracionamentos cromatográficos de ambos os extratos foram direcionados para o isolamento de substâncias ausentes em MPD-28 dias. O ácido 3,4 diidroxi-benzóico (PS-6) foi isolado apenas do extrato BD-21 dias, enquanto que o fracionamento do extrato BDL 28d forneceu PS-13 (em fase de caracterização estrutural) como diferente. Dentre os metabólitos isolados, os compostos (2S)-6-hidroxi-2-metil-4-cromanona, fusanolido B apresentaram caráter inédito na literatura. Os compostos isolados mostraram-se inativos em ensaios de atividade citotóxica frente a cepas de HCT-116 e MC-27 (adenocarcinoma de mama). No entanto, o composto 1-(2,5-diidroxifenil)-but-2-en-1-ona apresentou elevada inibição com CIM de 62,5 µg/mL ao ser submetido à ensaio antimicrobiano frente a cepas de fungos Candida Krusei (ATCC® 142432TM) e Candida albicans (ATCC® 10231TM) e 125 µg/mL frente à Candida parapsilosis (ATCC® 22019TM), enquanto que o (2R)-6-hidroxi-2-metil-4-cromanona, Z-3-(3-hidroxifenil)-propenoato de metila, o modiolido A, o estagonolido E, o fusanolido B e a 3,4-diidro- 3,4,8-triidroxi-1(2H)-naftalelona apresentaram moderada atividade com CIM de 500 µg/mL. Técnicas cromatográficas usuais, incluindo partição líquido-líquido, coluna de sílica flash e cromatografia de alta eficiência (CLAE) foram utilizadas para o isolamento dos metabólitos secundários, enquanto que a caracterização estrutural foi possível através do uso de técnicas espectrométricas utilizando infravermelho (IV), espectrometria de massa (EM) e ressonância magnética nuclear (RMN) com experimentos uni e bidimensionais, além de comparação com dados da literatura. / Periconia hispidula is an endophytic fungus isolated from dried leaves from semi-arid dunes of Bahia. The fungus was subjected to cultivation by varying nutritional factors in four different culture mediuns: MPD (malt, peptone and dextrose), BD (potato dextrose), BDL (potato, dextrose and yeast) and MntPL (mannitol, peptone and yeast), and analyzing the extracts on different incubation days (7, 14, 21, 28 days). A survey of primary cytotoxic activity was carried out from the extracts against tumor cell line of colon cancer (HCT-116). The MPD extracts - 28 days BDL - 28 days and BD - 21 days showed a promising cytotoxic activity and were preliminarily selected for the chemical study. The chromatographic fractionation of MPD-28 days extract resulted in the isolation of 11 secondary metabolites characterized as {4-chromanone, 6-hydroxy-(R) -methyl- (PS-1)}, {4-chromanone, 6-hydroxy-(S) -methyl- (PS-2)}, {E, 1-(2,5 dihydroxyphenyl) but-2-en-1-one (PS-3)}, {1-(2, 5 dihydroxyphenyl)-butan-1-one (PS-4)}, {Z-methyl-3-(3-hydroxyphenyl) propenoate (PS-5)}, modiolide A (PS-7), fusanolide B (PS-8), stagonolide E (PS-9), {(3R,4R)-3,4-dihydro, 3,4,8- trihdroxy, naphthalen-1(2H)-one (PS-11)}, {(4S) isosclerona (PS-12)}, furtermore PS-10 without structural characterization yet. The BDL-BD-28 days and 21 days extracts presented a chromatographic profile very similar to MPD-28 days extract, thus, the chromatographic fractionations of both extracts were targeted for isolation of substances absent in MPD-28 days. The 3,4 dihydoxy-benzoic acid was isolated just from the BD-extract 21 days, while the fractionation of the extract BDL 28days gave (PS-13 without structural characterization yet) as different. Among the isolated metabolites, {4-chromanone, 6-hydroxy-(S) -methyl- (PS-2)}, fusanolido B and PS10 (probably) showed were new compounds. The isolated compounds were shown to be inactive in cytotoxicity assays against strains of HCT-116 and MC-27 (breast adenocarcinoma). However, the 1- (2,5-dihydroxyphenyl) but-2-en-1-one showed strong inhibition with a MIC of 62.5 µg/mL to be subjected to antimicrobial test against strains of fungi Candida Krusei (ATCC® 142432TM) and Candida albicans (ATCC® 10231TM) and CIM of 125 µg/mL against Candida parapsilosis (ATCC® 22019TM), while {4-chromanone, 6-hydroxy-(S) -methyl-}, Z-3-(3-hydroxyphenyl) propenoate methyl, modiolide A, estagonolide E, fusanolido B and 3R,4R-dihydro-3,4,8-trihydroxy-1-(2H) -naftalelone showed moderate activity with MIC of 500 µg / mL.Usual chromatographic techniques including liquid-liquid partitioning, flash chromatography and high pressure liquid chromatography (HPLC) were used for the isolation of secondary metabolites, while the structural characterization was possible through the use of spectrometric techniques using infrared (IR), mass spectrometry (MS), and uni and bidimensional techniques of nuclear magnetic resonance (NMR), and comparison with literature data.

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Endófitos são todos os microrganismos, cultiváveis ou não, que habitam o interior dos tecidos vegetais, não causando danos ao hospedeiro e nem o desenvolvimento de estruturas externas, excluindo, dessa forma, bactérias noduladoras e micorrizas. Theobroma cacao L. é importante para as indústrias alimentícia e cosmética, por constituir a matéria prima para a produção de manteiga de cacau. Considerando a importância do estudo do cacaueiro e sua comunidade fúngica endofítica associada, os objetivos desse trabalho foram: i) estudar a diversidade da comunidade endofítica de cacau; ii) avaliar o potencial dessa comunidade para o controle biológico de Crinipellis perniciosa, o agente causal da vassoura de bruxa e outros fitopatógenos e iii) estudar a interação endófito-patógeno e endófito-hospedeiro. O trabalho foi iniciado com o isolamento de fungos endofíticos de cacau, que foram caracterizados com base em características morfológicas e moleculares. A diversidade foi avaliada por análises de rDNA (regiões ITS1, ITS2 e 5.8) (ARDRA e sequenciamento). A análise de ARDRA gerou 64 haplótipos, os quais incluíram no mínimo, 16 espécies. A seguir, fungos endofíticos antagônicos de cacau foram selecionados in vitro contra C. perniciosa. Foi observado que, dentre os 145 isolados avaliados, 38.6% foram classificados como antagônicos, enquanto 13.1% foram classificados como parasitas. Após a seleção, os isolados foram usados para extração de metabólitos secundários e outras caracterizações. Também foi feita a detecção do gene da &#948;-(L-&#945;- aminoadipil)-L-cisteinil-D-valin (ACV), que é a precursora das &#946;-lactanas, antibióticos como as penicilinas e cefalosporinas. A amplificação desse gene gerou um fragmento de 600 pb em 9.1% dos isolados avaliados. Alguns isolados foram testados contra fungos fitopatogênicos (Colletotrichum falcatum, C. sublineorum, Erythricium salmonicolor, Rhizoctonia solani, Ceratocystis paradoxa, Phytophthora sp., P. parasitica, P. palmivora e Fusarium moniliforme). Apenas C. sublineorum de sorgo e Ceratocystis paradoxa de cana-de-açúcar foram inibidos in vitro pelos endófitos 42.3 e 2, respectivamente. Foi feita a investigação da habilidade de penetração e colonização do fungo endofítico 42.3 em cacau comum suscetível, usando as técnicas de RAPD e SEM. A penetração do fungo foi iniciada entre 3 e 6 horas após a inoculação. A interação entre o endófito de cacau 42.3 com C. perniciosa 281 (patogênico), foi avaliada por SDS-PAGE, visando a detecção de proteínas expressas pelo patógeno e pelo endófito. A SDSPAGE permitiu a visualização de bandas expressas na interação, quando os microrganismos foram crescidos juntos. Na presença do substrato de crescimento do endófito, C. perniciosa não expressou proteínas visíveis, ou distinguíveis em SDS-PAGE, mas o co-cultivo desses fungos, geraram bandas não observadas em análises prévias. / Endophytes are all microorganisms, culturable or not, that inhabit the interior of plant tissues, causing no harm to the host, and that do not develop external structures, excluding in this way, nodulating bacteria and mycorrhizal fungi. Theobroma cacao L. is important to food and cosmetic industry due the fact that it is used for production of cacao butter. Considering the importance of cacao and associated endophytic fungal community studies, the objectives of this work were to: i) study the diversity on endophytic community of cacao; ii) evaluate the potential of this community to biological control of Crinipellis perniciosa, causal agent of witches’ broom disease and other phytopathogens and iii) study the interaction endophyte-pathogen and endophyte-host. The work began with isolation of the cacao endophytic fungi that was characterizated based on morphological and molecelar characters. The diversity was evaluated by rDNA (ITS1, ITS2 e 5.8 subunit regions) analyses (ARDRA and sequencing). The ARDRA analysis generated 64 haplotypes, which included at least 16 species. Following, antagonistic endophytic fungi from cacao were selected in vitro against C. perniciosa. It was observed that in 145 evaluated isolates, 38.6% was classified as antagonic, while 13.1% were classified as parasitic. After the selection, isolates were used for secondary metabolites extraction and further characterization. Also, detection of &#948;-(L-&#945;-aminoadipil)-L-cisteinil-D-valin (ACV) gene, which is the precursor of &#946;-lactans, antibiotics like penicilins and cephalosporins, was carried out. The amplification of this gene generated a fragment of 600pb in 9.1% of the isolates evaluated. Some isolates were further evaluated against phytophathogenic fungi (Colletotrichum falcatum, C. sublineorum, Erythricium salmonicolor, Rhizoctonia solani, Ceratocystis paradoxa, Phytophthora sp., P. parasitica, P. palmivora and Fusarium moniliforme). Only C. sublineorum of sorghum and Ceratocystis paradoxa of sugarcane were in vitro inhibited by the endophytes 42.3 and 2, respectively. The investigation of the penetration and colonization ability of endophytic fungus 42.3 on susceptible cacao comum was carried out, using RAPD and SEM techniques. The penetration of the fungus was initiated between 3 and 6 hours after inoculation. The interaction between cacao endophyte 42.3 with C. perniciosa 281 (pathogenic), was evaluated by SDSPAGE, aiming the detection of expressed proteins by pathogen and endophyte. The SDS-PAGE allowed the visualization of bands expressed in the interaction, when the microorganisms were grown together. In the presence of the endophyte growth substrate, C. perniciosa do not express visible proteins or, at least, distinguishable in SDS-PAGE, but the co-cultive of these fungi generated non observed bands in previously analysis.