Neutrofilų aktyvacijos produktų įtaka mezenchiminių kamieninių ląstelių migracijos aktyvumui Migracija į patologinį židinį yra pirmas esminis žingsnis, kuriuo prasideda mezenchiminių kamieninių ląstelių (MKL) vaidmuo audinio regeneracijos procese. Audinių pažeidimą visuomet lydi uždegiminė reakcija. Tai reiškia, kad MKL patenka į uždegiminę mikroaplinką. Neutrofilų infiltracija yra neatsiejamas kiekvienos uždegiminės reakcijos komponentas. Uždegimo židinyje neutrofilai išskiria savo granulių turinį, reaktyvius deguonies metabolitus, citokinus, arachidono rūgšties darinius ir kt. Šio darbo tikslas ištirti, kaip suaktyvintų neutrofilų išskiriamos medžiagos veikia mezenchiminių kamieninių ląstelių migracijos aktyvumą. MKL migracijos tyrimui buvo naudojama dešimties šulinėlių chemotaksio kamera AA10. Ląstelės kameroje migravo pro 8μm poras turinčią polikarbonatinę membraną. Migracijos aktyvumas įvertintas suskaičiavus migravusias ląsteles penkiuose regėjimo laukuose ir išvedus vidurkį. Rezultatai. Visų pirma buvo nutatyta, kad MKL būdingas chemokinezinis aktyvumas ir parinktas šių ląstelių chemotaksio induktorius (1% žmogaus kraujo plazma). Įvertintos neutrofilų degranuliacijos produktų galimybės sukelti MKL chemotaksį. Neutrofilų supernatantas, į kurį po aktyvacijos formil-Met-Leu-Phe (fMLP) išsiskyrė neutrofilų granulių turinys, sukėlė MKL chemotaksinį atsaką ir sąlygojo statistiškai reikšmingą šių ląstelių migracijos aktyvumo padidėjimą lyginant su jų chemokineziniu... [toliau žr. visą tekstą] / The Influence of the Substances Produced by Activated Neutrophils on the Migratory Activity of Mesenchymal Stem Cells Adult mesenchymal stem cells (MSCs) are multipotent stem cells which have the ability to differentiate into cells of multiple organs and systems such as bone, fat, cartilage, muscle, neurons, hepatocytes and insulin-producing cells. That is why they have generated a great deal of interest for their potential use in regenerative medicine and tissue engineering. MSCs are thought to be crucial for tissue regeneration, acting via migration into the site of injury, proliferating and differentiating into functional cells. The lesion of a tissue is always followed by the inflammatory reaction. It means that the MSCs migrate and access to the inflammatory environment. Neutrophil infiltration is a common pathological feature in acute inflammatory disorders. In the pathology sites they release oxygen species and their internal constituents, which are stored in different granules. The goal of this research work was to estimate the influence of the substances produced and released by activated neutrophils on the migratory activity of MSCs. The research work consisted of four groups of experiments. First of all we have determinated the level of the chemokinetic MSCs‘ migration and we have measured the chemotactic reponse to two different stimulus: DMEM suplemented with 10% FCS and 1% human plasma. That was an important stage for planning the further experiments. Secondly... [to full text]

Baigiamajame darbe įvertintas skirtingų titano implantų paviršiaus modifikavimo strategijų poveikis pirminių dantenų fibroblastų savybėms – adhezijai, proliferacijai ir diferenciacijai. Tyrimuose naudoti titano mėginiai, kurių paviršiaus šiurkštumas pakeistas fizikiniais metodais – smėliasrove ir lazeriu. Iš gingivektomijos metu paimto ţmogaus dantenų subepitelinio audinio buvo išskirtos ir charakterizuotos dantenų fibroblastų ląstelės. Tiriant šių ląstelių adheziją ant modifikuotų titano mėginių paviršių nustatyta, kad ankstyvuoju laikotarpiu dantenų fibloblastų adhezija buvo panaši ant visų tirtų įvairiai modifikuotų titano mėginių paviršių, tačiau vėliau efektyviausias ląstelių prikibimui paviršius buvo lazeriu suformuotos grotelės. Siekiant pagerinti modifikuotų titano paviršių adhezines savybes, jie papildomai buvo padengti tarpląstelinio uţpildo baltymais – kolagenu ir lamininu, įvertintas tokio padengimo poveikis ląstelių prikibimui ir augimui. Analizuojant mechanizmus, reguliuojančius ląstelių adhezijos ant modifikuotų paviršių procesus, buvo tirta FAK ir Akt kinazių raiška ir aktyvinimas. Vertinant karkasų paviršiaus topografijos poveikį ląstelių diferenciacijai, buvo palygintas osteogeninės diferenciacijos laipsnis ląstelėse augintose ant įvairiai modifikuotų titano mėginių paviršių. Darbą sudaro 6 dalys: įvadas, literatūros apţvalga, medţiagos ir metodai, rezultatai ir jų aptarimas, išvados, literatūros sąrašas. Darbo apimtis – p. teksto be priedų, 24 pav., 2 lent... [toliau žr. visą tekstą] / The influence of different modification strategies of titanium implant surfaces on gingival fibroblasts properties - adhesion, proliferation, and differentiation was studies in this final master thesis. Different titanium surface roughness modifications using physical methods such as sand-blasting as well as laser irradiation were developed. Gingival fibroblasts derived from human gingival subepithelial tissues obtained during gingivectomy were isolated and characterized. The data suggested that the initial adhesion between tested cells and various modified titanium surfaces was similar, but the most efficient surface for subsequent cell attachment was laser-ablated holey arranged in grid-like structures. Additionally, in order to improve the modified titanium surface adhesion properties, these surfaces were coated by extracellular matrix proteins - collagen and laminin. The coating influence on the cell growth and adhesion was evaluated. To analyze the mechanisms regulating cell adhesion processes on the modified surfaces, FAK and Akt kinase expression as well as activation were studied. In order to evaluate the effect of surface topography on cell differentiation, the level of osteogenic differentiation was compared. Structure: introduction, literature review, materials and methods, results and discussion, conclusions, references.

Human mesenchymal stem cells (MSC) have attracted a great deal of interest for their potential use in regenerative medicine and suppression of the inflammation. Nevertheless, all known therapy protocols require large amounts of MSCs, which can be obtained only by in vitro expansion. One of the most important methodological problems is associated with the use of animal-derived components in the cell culture medium. The main aim of the current research was to elucidate the influence of different serum substitutes on the proliferation, differentiation, expression of cell surface markers, and total protein expression of mesenchymal stem cells derived from human adipose tissue. In addition we were aiming to determine the features of mesenchymal stem cell populations from an exfoliated deciduous tooth (SHED) and their response to the multifunctional proinflammatory protein alpha1-antitrypsin. Our results indicate that adipose tissue derived MSCs cultivated in the presence of fetal calf serum and allogeneic human serum display similar properties, while synthetic serum substitute induces increase in growth and differentiation potential of MSCs. Moreover, our results indicate, that synthetic serum substitute also activates transcription of genes related to adipogenic and osteogenic differentiation and diminishes expression of cell surface marker CD146. In the present study, we used a proteomic approach that allowed us to compare protein expression signatures between primary cell... [to full text] / Žmogaus suaugusio organizmo mezenchiminės kamieninės ląstelės (MKL) pradėtos sėkmingai naudoti pažeistų audinių regeneracijai ir uždegiminio proceso slopinimui. Šiuolaikiniams terapijos protokolams yra reikalingi dideli ląstelių kiekiai, todėl prieš naudojimą yra būtina jas padauginti in vitro. Tačiau naudojant skirtingus MKL išskyrimo, in vitro kultivavimo ir padauginimo protokolus, yra sunku lyginti mokslinių tyrimų duomenis ir klinikinių tyrimų rezultatus. Nevienodos kultivavimo sąlygos gali įtakoti MKL funkcines savybes (augimo greitį, gebėjimą diferencijuotis, migracinį aktyvumą ir kt.). Šiame disertaciniame darbe tyrėme auginimo terpių, praturtintų skirtingais serumais (gyvulinės kilmės serumai, žmogaus alogeninis serumas, sintetinis serumas), poveikį žmogaus riebalinio audinio MKL. Taip pat charakterizavome MKL išskirtas iš žmogaus pieninių dantų pulpos ir palyginome šių ląstelių kultūros bei jų dukterinių klonų savybės. Kompleksiškai tyrėme uždegimo antiproteinazės alfa1-antitripsino (AAT) poveikį šioms ląstelėms. Nustatėme, kad, lyginant su kitais tyrime naudotais serumais, sintetinis serumo pakaitalas geriausiai skatino MKL augimą bei gebėjimą diferencijuotis adipogenine ir osteogenine kryptimis. Taip pat, skirtingai nuo kitų naudotų gyvulinės kilmės ir žmogaus serumų, sintetinis serumo pakaitalas veikė kaip adipogeninės ir osteogeninės diferenciacijos indukcijai svarbių genų PPARγ ir Msx2 transkripcijos aktyvatorius. Be to, sintetinis serumo pakaitalas slopino... [toliau žr. visą tekstą]