Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-06-18T15:07:51Z No. of bitstreams: 1 fernandapereirasilva.pdf: 1453424 bytes, checksum: b2a5a43450827f6489877e9e4ea29cca (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-06-27T11:38:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 fernandapereirasilva.pdf: 1453424 bytes, checksum: b2a5a43450827f6489877e9e4ea29cca (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-27T11:38:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fernandapereirasilva.pdf: 1453424 bytes, checksum: b2a5a43450827f6489877e9e4ea29cca (MD5) Previous issue date: 2018-02-26 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A forma e tamanho do corpo são características que diferem entre machos e fêmeas adultos de crocodilianos, entretanto, não existe relato do dimorfismo sexual para filhotes de Melanosuchus niger. O presente estudo teve como objetivo analisar a existência de dimorfismo sexual em filhotes de M. niger com base em dados morfológicos. Os espécimes analisados foram oriundos de um experimento de incubação artificial. Os ovos foram coletados no Lago Tracajá da Reserva de Desenvolvimento Sustentável Mamirauá. As gônadas foram analisadas quanto aos parâmetros macroscópicos (forma, textura, coloração e presença/ausência de ducto de Müller) para verificar se havia dimorfismo sexual. A identificação sexual dos filhotes foi confirmada a partir da análise histológica do complexo-Gônada-Adrenal-Mesonefro (GAM) conforme procedimentos de rotina. Para a análise da variação da forma utilizou-se a morfologia quantificada das placas epidérmicas da cabeça dos filhotes a partir de 13 landmarks submetidos a uma análise de morfometria geométrica. Para isto, foram fotografadas em vista dorsal, a cabeça dos exemplares e utilizados os softwares TPSUtil, TPSDig2 e MorphoJ para análises. A análise histológica serviu para confirmar o sexo dos indivíduos analisados. Foram identificados 38 fêmeas e 12 machos. Nos testículos foi possível observar a presença da túnica albugínea associada a medula pouco diferenciada, onde não foi observada a presença de túbulos seminíferos, apenas a presença de células vacuolizadas. Associado ao mesonefro observou-se a presença de ducto de Müller remanescente. Nos ovários observou-se a presença de um epitélio germinativo evidente, formado por tecido epitelial cuboide simples. Na região medular observou-se a presença de folículos ovarianos e lacunas medulares. O Ducto de Müller apresentou-se ligado ao mesonefro pelo mesossalpinge. Foi observado que as características macroscópicas das gônadas diferem entre os sexos. Os testículos apresentaram um formato elíptico com textura lisa e coloração amarela. Os ovários apresentaram textura granulosa, coloração bege clara e associada a ele observou-se a presença de Ducto de Müller. A análise de componentes principais (PCA) mostrou variação na forma das placas epidérmicas da cabeça de filhotes de M. niger, indicando a presença de dimorfismo sexual. O Componente Principal 1 (PC1) explicou 52,6 % da variação da forma, enquanto o Componente Principal 2 (PC2) explicou 14,4%, e a variação geral explicada por esses dois eixos principais foi de 67,0%. A análise de função discriminante confirmou a presença de dimorfismo sexual (p = 0,01). Foi observado que as fêmeas possuem a região posterior da cabeça mais longa e larga, e a mandíbula mais curta e estreita. Enquanto a região posterior da cabeça dos machos é ligeiramente mais curta e estreita, e a mandíbula mais longa e larga. As características macroscópicas e histológicas das gônadas foram semelhantes às encontradas em outras espécies de crocodilianos. A análise macroscópica demonstrou-se suficiente para identificar o sexo de filhotes de M. niger. Em crocodilianos adultos, o dimorfismo sexual pode estar presente na região do crânio relacionado evolutivamente ao reconhecimento visual do gênero. Entretanto, a seleção sexual não seria tão relevante para os jovens quanto para os indivíduos sexualmente maduros. A variação da forma tanto no crânio quanto na mandíbula encontrada em filhotes de M. niger, sugere que machos e fêmeas possivelmente passaram por diferentes processos ontogênicos. A falta de trabalhos envolvendo o estudo de dimorfismo sexual por meio da técnica de morfometria geométrica em filhotes de outras populações de M. niger e/ou de outras espécies de crocodilianos, dificulta a comparação direta. No entanto, fica claro a importância do estudo de dimorfismo sexual em crias de crocodilianos para estimativa da proporção sexual, principalmente se aplicada em populações naturais. Os modelos morfométricos geométricos podem ajudar a desenvolver representações gráficas do dimorfismo sexual da cabeça nos crocodilianos, o que torna estes resultados importantes para programas de conservação em condições naturais, pois representa uma alternativa não-letal às técnicas utilizadas para identificação sexual em M. niger. / The shape and size of the body are characteristics that differ between adult males and females of crocodilians; however, there is no report about sexual dimorphism for Melanosuchus niger hatchling. The present study had as objective to analyze the existence of sexual dimorphism in of M. niger hatchling based on morphological data. The specimens analyzed in this study came from an artificial incubation experimente. The eggs were collected at Lake Tracajá on Mamirauá Sustainable Development Reserve. The gonads were analyzed with macroscopic parameters (shape, texture, color and presence / absence of Müller duct) to verify if there was sexual dimorphism. The sexual identification of the hatchling was confirmed by the histological analysis of Gonad-Adrenal-Mesonefro (GAM) complex according to routine procedures. For the analysis of the variation of the form the quantified morphology of the epidermal plates of the hatchling' head was used from 13 landmarks submitted to a geometric morphometry analysis. For this, the heads of the specimens were photographed in dorsal view and the TPSUtil, TPSDig2 and MorphoJ software were used for analysis. Histological analysis served to confirm the animal´s sex of this study. There were identified, 38 females and 12 males. In the testes it was possible to observe the presence of the tunica albuginea associated with a little differentiated marrow, where the presence of seminiferous tubules was not observed, only the presence of vacuolated cells. Associated with the mesonephro we observed the presence of the remaining Müller duct. In the ovaries, the presence of an evident germinative epithelium, formed by simple cuboid epithelial tissue was observed. In the medullary region the presence of ovarian follicles and marrow gaps were observed. The Müller Duct was connected to the mesonephro by the mesosalpinge. It was observed that the macroscopic characteristics of the gonads differ between the sexes. They showed elliptical, smoothly, yellow testes. The ovary presents granular structure with light beige coloration and associated with the presence of Müller's Duct. Principal component analysis (PCA) showed variation in the shape of epidermal scales of M. niger hatchling, indicating the presence of sexual dimorphism. The Principal Component 1 (PC1) explained 52.6% of the shape variation, as the Principal Component 2 (PC2) explained for 14.4%, and the overall variation explained by these two main axes was 67.0%. The analysis of discriminant function confirmed the presence of sexual dimorphism (p = 0.01). It was observed that the females have the posterior region of the head longer and wider, and the jaw shorter and narrower. While the posterior region of the males head is slightly shorter and narrower, and the jaw longer and wider. The macroscopic and histological characteristics of the gonads were similar to those found in other species of crocodilians. Macroscopic analysis was sufficient to identify the sex of M. niger hatchling. In adult crocodilians, sexual dimorphism may be present in the region of the skull related evolutionarily to visual recognition of the genus. However, sexual selection would not be as relevant to young people as to sexually mature individuals. The variation of the shape in both the skull and mandible found in M. niger hatchling suggests that males and females may have undergone different ontogenic processes. The lack of work involving the study of sexual dimorphism using a geometric morphometry technique in hatchling of other populations of M. niger and/or other species of crocodilians makes difficult direct comparison. However, it is clear the importance of the study of sexual dimorphism in gilts of crocodilians to estimate the sexual proportion, especially if applied in natural populations. Geometric morphometric models can help to develop graphic representations of sexual dimorphism of the head in crocodilians, which makes these results important for conservation programs under natural conditions, since it represents a non-lethal alternative to the techniques used for sexual identification in M. niger.

The embryogenic calli were grown on MS medium containing NaCl with concentrations from 50 to 300 mM. After 2 weeks of culture, salinity tolerance threshold was identified at 150 mM NaCl. Higher concentrations of NaCl stimulated a significant reduction in the calli survival rate and the highest rate was 78.67% at 50 mM. After subculturing callus to the embryo culture medium containing NaCl, the growth and embryogenesis were not affected at the concentrations of 50 – 100 mM. Especially, at 50 mM NaCl the embryogenesis rate reached 83.33%. In contrast, 150 mM NaCl inhibited the somatic embryogenesis. After 4 weeks, culturing somatic embryos on medium MS with addition of 0.07 mg/l spermidin at 50 – 100 mM NaCl, the embryogenesis was considered good and embryos developed through several stages: globular, heart, torpedo and cotyledonary. However, at 150 mM NaCl the globular stage appeared in the culture process. The process of morphohistology and using dye carmine – iod and acridine orange observed the structure of generative callus and embryos at several stages. / Mô sẹo có khả năng phát sinh phôi được nuôi cấy trong môi trường có chứa muối NaCl với nồng độ thay đổi từ 50 – 300 mM. Sau 2 tuần nuôi cấy, chúng tôi xác định được ngưỡng chịu mặn của mô sẹo có khả năng sinh phôi cây Cọc rào là 150 mM. Nồng độ muối NaCl càng cao thì tỷ lệ sống của mô sẹo giảm dần và đạt giá trị cao nhất là 78,67% tại nồng độ 50 mM NaCl. Khi chuyển mô sẹo sang môi trường phát sinh phôi có chứa muối NaCl với nồng độ thay đổi, chúng tôi thấy ở nồng độ muối NaCl 50 – 100 mM không ảnh hưởng đến khả năng sinh trưởng và phát sinh phôi, đặc biệt là tại nồng độ 50 mM NaCl giúp kích thích sự hình thành phôi từ mô sẹo với tỷ lệ hình thành phôi đạt 83,33%. Ngược lại, nồng độ từ 150 mM NaCl gây ức chế quá trình hình thành phôi soma từ mô sẹo. Tiếp tục khảo sát ảnh hưởng của muối đến khả năng phát triển và nảy mầm của phôi soma. Ghi nhận kết quả sau 4 tuần nuôi cấy phôi soma trong môi trường MS có bổ sung 0.07 mg/l spermidin, tại nồng độ 50 – 100 mM NaCl khả năng hình thành phôi tốt và phôi phát triển qua các giai đoạn phôi hình cầu, hình tim, hình thủy lôi và hình lá mầm. Đặc biệt ở nồng độ 50 mM số lượng phôi lá mầm đạt giá trị cao với 13,33 phôi. Nồng độ muối NaCl 150 mM chỉ xuất hiện phôi hình cầu trong suốt thời gian nuôi cấy. Quá trình giải phẫu hình thái phôi và sử dụng thuốc nhuộm 2 màu carmin – iod và acridine orange đã cho thấy rõ hơn về cấu trúc mô sẹo có khả năng sinh phôi và phôi hình thái.

The embryogenic calli were grown on MS medium containing NaCl with concentrations from 50 to 300 mM. After 2 weeks of culture, salinity tolerance threshold was identified at 150 mM NaCl. Higher concentrations of NaCl stimulated a significant reduction in the calli survival rate and the highest rate was 78.67% at 50 mM. After subculturing callus to the embryo culture medium containing NaCl, the growth and embryogenesis were not affected at the concentrations of 50 – 100 mM. Especially, at 50 mM NaCl the embryogenesis rate reached 83.33%. In contrast, 150 mM NaCl inhibited the somatic embryogenesis. After 4 weeks, culturing somatic embryos on medium MS with addition of 0.07 mg/l spermidin at 50 – 100 mM NaCl, the embryogenesis was considered good and embryos developed through several stages: globular, heart, torpedo and cotyledonary. However, at 150 mM NaCl the globular stage appeared in the culture process. The process of morphohistology and using dye carmine – iod and acridine orange observed the structure of generative callus and embryos at several stages. / Mô sẹo có khả năng phát sinh phôi được nuôi cấy trong môi trường có chứa muối NaCl với nồng độ thay đổi từ 50 – 300 mM. Sau 2 tuần nuôi cấy, chúng tôi xác định được ngưỡng chịu mặn của mô sẹo có khả năng sinh phôi cây Cọc rào là 150 mM. Nồng độ muối NaCl càng cao thì tỷ lệ sống của mô sẹo giảm dần và đạt giá trị cao nhất là 78,67% tại nồng độ 50 mM NaCl. Khi chuyển mô sẹo sang môi trường phát sinh phôi có chứa muối NaCl với nồng độ thay đổi, chúng tôi thấy ở nồng độ muối NaCl 50 – 100 mM không ảnh hưởng đến khả năng sinh trưởng và phát sinh phôi, đặc biệt là tại nồng độ 50 mM NaCl giúp kích thích sự hình thành phôi từ mô sẹo với tỷ lệ hình thành phôi đạt 83,33%. Ngược lại, nồng độ từ 150 mM NaCl gây ức chế quá trình hình thành phôi soma từ mô sẹo. Tiếp tục khảo sát ảnh hưởng của muối đến khả năng phát triển và nảy mầm của phôi soma. Ghi nhận kết quả sau 4 tuần nuôi cấy phôi soma trong môi trường MS có bổ sung 0.07 mg/l spermidin, tại nồng độ 50 – 100 mM NaCl khả năng hình thành phôi tốt và phôi phát triển qua các giai đoạn phôi hình cầu, hình tim, hình thủy lôi và hình lá mầm. Đặc biệt ở nồng độ 50 mM số lượng phôi lá mầm đạt giá trị cao với 13,33 phôi. Nồng độ muối NaCl 150 mM chỉ xuất hiện phôi hình cầu trong suốt thời gian nuôi cấy. Quá trình giải phẫu hình thái phôi và sử dụng thuốc nhuộm 2 màu carmin – iod và acridine orange đã cho thấy rõ hơn về cấu trúc mô sẹo có khả năng sinh phôi và phôi hình thái.