Dans les neurones, la stabilité des microtubules est induite par leur association avec deux protéines associées aux micotubules, les protéines E- et N-STOP (Early and adult neuronal Stable Tubule Only Polypeptide). L'invalidation du gène stop chez la souris entraîne des défauts de la transmission synaptique associée à une réduction du nombre de vésicules synaptiques. <br />Les neurones matures contiennent également une protéine apparentée à la protéine N-STOP, la protéine SL21 (STOP like protein of 21 kDa) qui possède deux zones homologues aux protéines STOPs : un domaine homologue au domaine de liaison et de stabilisation des microtubules et une région de 35 acides aminés située à l'extrémité amino-terminale. Cette protéine se localise à la fois au niveau de l'appareil de Golgi et des microtubules.<br />La première partie de ce travail est consacrée à la caractérisation fonctionnelle du domaine amino-terminal. Il contient 3 résidus cystéines en position 5, 10 et 11 qui peuvent être palmitoylée (modification permettant l'association des protéines aux membranes). Nous avons montré que les cystéines 5 et 11 de SL21 sont palmitoylables mais que seule la cystéine 5 est suffisante et nécessaire pour localiser SL21 au niveau de l'appareil de Golgi. Nous avons également mis en évidence que la protéine STOP, en plus d'être localisée aux microtubules, s'associe également au Golgi par l'intermédiaire de son domaine amino-terminal homologue à SL21 et qu'elle est aussi palmitoylable.<br />Dans la deuxième partie de ce travail, pour mieux comprendre la fonction de SL21, nous nous sommes intéressées aux partenaires de SL21. Un criblage ciblé en Double-Hybride, utilisant comme protéines cibles des protéines connues comme étant des partenaires de STOP, a été réalisé au laboratoire. Trois partenaires potentiels ont été mis en évidence : la protéine Tctex1, une des chaînes légère du moteur moléculaire dynéine. Nous avons confirmé l'interaction de ces protéines avec SL21 par co-immunoprécipitation après surexpression dans les cellules et aussi, à partir d'un extrait de cerveau pour l'interaction de SL21 et de STOP. Nous avons également déterminé leur site d'interaction au niveau de SL21. La protéine Tctex1 interagit avec SL21 au niveau de son module de liaison aux microtubules, le site de multimérisation de SL21 se localise au niveau du domaine amino-terminal, pouvant impliquer la palmitoylation de ces protéines. <br />L'ensemble de ces résultats permet d'envisager un rôle des protéines STOPs au niveau de la régulation de la relation microtubule-membrane des vésicules synaptique au sein de la synapse

L’Integrase du VIH est une ADN recombinase catalysant deux réactions qui permettent l'intégration de l'ADN viral dans l'ADN hôte. L’intégrase du VIH comprend 3 domaines : N-terminal impliqué dans la réaction de « 3' processing » et le transfert de brin, le domaine catalytique contenant le site actif et le domaine C-terminal liant l'ADN non-spécifiquement (CTD). Des recherches récentes mettent en évidence l'importance du CTD dans la liaison avec d'autres protéines virales comme la transcriptase inverse. Le but de la thèse était de comprendre les rôles et l'importance du domaine C-terminal de l’intégrase dans deux contextes : l'intégration dans la chromatine et la coévolution, avec l'objectif de comprendre le rôle de la multimerisation dans la fonction de l’intégrase. Globalement, les résultats de mon projet indiquent que l'IN-CTD joue un rôle important, en contribuant à la formation de multimères d'ordre supérieur importants pour la fonction de l’IN. / HIV Integrase is a DNA recombinase that catalyzes two endonucleolytic reactions that allow the viral DNA integration into host DNA for replication and subsequent viral protein production. HIV Integrase consists of 3 structural and functional domains: The N-terminal zinc domain involved in 3’ processing and strand transfer, the catalytic core domain which contains the active site, and the C-terminal domain that binds DNA non- specifically. Recent research highlights the importance of the CTD in binding with other viral proteins such as Reverse Transcriptase. The aim of the thesis was to understand the roles and importance of the C-terminal domain of HIV-1 Integrase in two contexts: chromatin integration, and co-evolution, with the overall purpose of understanding the role of multimerization in IN function. Overall, results from my project indicate that the IN-CTD plays an important role, by contributing to the formation of higher order multimers that are important for IN functionality.