Memoria para optar por el título de Químico Farmacéutico / La murtilla o murta (Ugni molinae Turcz., Myrtaceae) es nativa del centro y sur de Chile y en Argentina. Se cultiva por sus frutos, de agradable sabor y aroma, la infusión de las hojas es usada en medicina tradicional para suavizar el cutis reseco y aumentar la elasticidad y frente a inflamaciones y dolor. En este trabajo se realizó un estudio comparativo entre los extractos provenientes de diferentes ecotipos de Ugni molinae para determinar su contenido en fenoles y la actividad antioxidante. Los extractos fueron obtenidos de cada ecotipo agotando en forma secuencial las hojas con solventes de polaridad creciente, se evaluaron los extractos con una mayor concentración en fenoles, mediante el ensayo de Folin-Ciocalteu, resultando el ecotipo de Queule el que presentó mayor contenido en su extracto etanólico (EET) (462,4 ± 0,2 mg ác. gálico/g es). Posteriormente se evaluó la actividad antioxidante en los EET, se realizó el ensayo de xantino oxidasa, en este caso fue uno de los ecotipos de Porma (E3) el que presentó mayor potencia frente a la enzima con una CE50 1,9 ± 0,01 ppm, el segundo ensayo realizado fue el de atrapamiento del SO, en éste el ecotipo de Mehuin (E4) el que presentó una mayor capacidad de atrapar el SO con una CE50 0,50 ± 0,01 ppm, el último ensayo realizado fue el de cinética de atrapamiento del radical DPPH, en este caso fue el ecotipo de Cauquenes el que presentó una mayor potencia seguido de una alta eficiencia antioxidante. Las diferencias observadas entre los distintos ecotipos, en relación a la actividad antioxidante, se puede suponer que se deban al conjunto de taninos y flavonoides presentes en sus EET. Estos resultados permiten establecer que las variaciones en la ubicación geográfica de los ecotipos afecta su actividad antioxidante, y abre la puerta a otros estudios químicos y farmacológicos más detallados de la especie que permitan establecer su composición química en polifenoles, para poder potenciar a los extractos de murtilla como fuente de antioxidantes en busca de futuros fitofármacos. / The murtilla or murta (Ugni molinae Turcz., Myrtaceae) is native of the center and south of Chile and Argentina. It is harvest for its fruits of pleasant flavor and scent, the infusion of the murtilla leaves it is used in traditional medicine to soften dry skin and to give more elasticity, besides it is used in front of inflammation and pain. On this work a comparative study was made between extracts from different ecotypes of the Ugni molinae to determine their content in phenols and the antioxidant activity. The extracts gotten from each ecotype exhausting in sequential way the leaves of hexane, dichloromethane, ethyl acetate and ethanol, the extracts evaluated we found a great concentration of phenols, therefore the Folin-Ciocalteu test was made, being that Queule ecotype presented a greater content of total phenols (462,4 ± 0,2 mg gallic acid/g dried extract). Later the antioxidant activity was evaluated in the ethanol extracts (EET), in first place the xanthine oxidase test was made, in this case one of the ecotypes from Porma (E3) presented a greater potential in front of the enzyme with a CE50 1,9 ± 0,01 ppm, the second test was the catching of the SO, in this test was the Mehuin ecotype (E4) the one that presented a greater capacity to catch the SO with a CE50 0,50 ± 0,01 ppm, the last test was the kinetic catching of the radical DPPH, in this case was the Cauquene ecotype the one that had a greater potential followed by a high antixiodant efficiency. The differences observed in the different ecotypes, in relation to the antioxidant activity it can be presume that the set of tannins and flavonoids presented in the EET. These results allow establishing what variations in the location of the ecotypes affect its antioxidant activity, and open the door to more deeply chemical and pharmacological studies of the species that allows a chemical composition of polyphenols to be able maximize the murtilla extracts as a source of antioxidants in the search of future herbal medicines. / FONDECYT

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Las enfermedades cardiovasculares se caracterizan por una desregulación del proceso inflamatorio, el que se perpetúa por activación del factor transcripcional NF-κB y sobreproducción de mediadores proinflamatorios como TNF-α, IL-1β, y prostaglandinas, entre otros. Los fibroblastos cardiacos (FC) son un tipo celular crucial en la mantención estructural y funcional del tejido cardiaco ya que actúan como “células centinelas”, censando el ambiente proinflamatorio, y produciendo matriz extracelular (MEC) para reparar el daño tisular después de una injuria al corazón. El rol de los FC se ha estudiado en sepsis y es relevante en patologías asociadas a fibrosis e inflamación. Ugni molinae Turcz., Myrtaceae, es un arbusto nativo del centro y sur de Chile y de zonas aledañas de Argentina. Sus hojas se han utilizado en la medicina tradicional como antiinflamatorio y analgésica de las vías urinarias. Sus extractos foliares, como los de acetato de etilo y etanólico, tienen efectos farmacológicos comprobados tales como actividad analgésica y antiinflamatoria in vivo, y por otro lado capacidad antioxidante y actividad antibacteriana sobre microorganismos de interés clínico, entre otros. Estas propiedades son atribuidas a la presencia de triterpenos pentacíclicos y compuestos fenólicos. La gran variedad genotípica que caracteriza a esta especie es responsable de los diferentes perfiles químicos de los extractos foliares de murtilla. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de extractos de hoja de dos genotipos distintos de murtilla, EET22-1 (extracto etanólico del genotipo 22-1) y EAE23-2 (extracto de acetato de etilo del genotipo 23-2), sobre la viabilidad celular, y mediadores pro inflamatorios regulados por NFκB en FC. Los EET22-1 y EAE23-2 se prepararon a partir de hojas secas y molidas por extracciones sucesivas con solventes de polaridad creciente como hexano, diclorometano acetato de etilo y etanol de dos genotipos elegidos por su mayor capacidad antiinflamatoria in vivo y su capacidad antioxidante. El cultivo primario fue de FC de rata neonata, mantenido en medio DMEM/F-12 con FBS 2%. Las células se estimularon con LPS 1μg/mL por 24 horas en ausencia y presencia de extracto (0,1-1-10 y 100 μg/mL). Se determinaron a) viabilidad celular por MTT, b) niveles proteicos de p65, IL-1β, COX-2 y VCAM-1 por Western blot, c) actividad de MMP-9 por zimografía y d) concentración de nitrito por reacción de Griess. Ambos extractos mantuvieron viabilidad celular hasta los 10 μg/mL, sin embargo esta disminuyó significativamente con 100 μg/mL de EAE23-2, y 500 μg/mL de EET22-1, en relación al control sin extracto; esta diferencia se atribuye a las diferencias de composición química entre ambos extractos. No se observó una disminución significativa para los grupos pre y post tratado, respecto al control LPS, en ninguno de los parámetros evaluados por Western blot a excepción del grupo pre tratado con la mayor concentración de EET22-1 para VCAM-1. Se observó un aumento en la actividad de MMP-9 en la mayoría de las condiciones. No se pudieron validar los resultados obtenidos para la cuantificación de nitrito a las 24 horas. Los dos extractos mantuvieron la viabilidad celular a concentraciones bajas y medias, siendo EET22-1 menos citotóxico a altas concentraciones. Ninguno de los extractos pudo disminuir significativamente los mediadores evaluados en este modelo celular, a las 24 horas, aunque los extractos solos no demostraron aumentar los estímulos inflamatorios a concentraciones bajas y medias. Se observó una tendencia al aumento en la actividad de MMP-9 en la mayoría de las condiciones estudiadas, lo que podría apuntar a una posible actividad antifibrótica de los extractos; son necesarias más pruebas para apoyar esta idea / Cardiovascular deseases are characterized by a desregulated inflammatory process, wich is kept on by the activation of transcriptional factor NF-κB and overproduction of pro-inflammatory mediators like TNF-α, IL-1β, IL-6 and prostaglandins, among others. Cardiac fibroblasts (CF) are a crucial cellular type in the structural and functional maintenance of the cardiac tissue, by acting like “sentinel cells”, censoring the pro-inflammatory environment and producing extracellular matrix (ECM) for the repair of tissue damage after cardiac injury. The CF role has been studied in sepsis, and its relevant in pathologies associated with fibrosis and inflammation. Ugni molinae Turcz., Myrtaceae, is a native bush from the centric and southern areas of Chile and adjacent areas from Argentina. Its leaves have been used in traditional medicine as anti-inflammatory and analgesic of the urinary tract. Leaves extracts, like the ethanolyc extract and the ethyl acetate extract, have proven pharmacological effects, like in vivo analgesic and anti-inflammatory activity, antioxidant capacity and antibacterial activity on microorganism of clinical interest, among others. These properties are attributed to the presence of pentacyclic triterpenoids and phenolic compounds. The great genotypic variety which characterizes this species is responsible for the different chemical profiles of the leaves extracts of murtilla. This studies aim was to evaluate the effects of the leaves extract of two different genotypes of murtilla, EET22-1 (ethanolic extract of genotype 22-1) and EAE23-2 (ethyl acetate extract of genotype 23-2), on the cellular viability and pro-inflammatory mediators regulated by NFκB in CF. EET22-1 and EAE23-2 were prepared from the dry and minced leaves by successive extractions with growing polarity solvents like hexane, dichloromethane, ethyl acetate and ethanol from the genotypes selected for their in vivo anti-inflammatory capacity and antioxidant capacity. The primary culture from CF of neonatal rat was maintained with DMEM/F-12 medium with FBS 2%. The cells were stimulated with LPS 1μg/mL for 24 hours in absence or presence of the extracts (0,1-1-10 y 100 μg/mL). Determinations were made for a) cellular viability by MTT assay, b) protein levels of p65, IL-1β, COX-2 and VCAM-1 by Western blot, c) MMP-9 activity by zymography and d) nitrite concentration by Griess reaction. Both extracts maintained cellular viability till 10 μg/mL, nevertheless it decreased significantly at 100 μg/mL EAE23-2, and 500 μg/mL EET22-1, related to the untreated control; this difference was attributed to the differences in chemical composition between the extracts. It was not observed a significant decrease for the pre and post treated groups, compared with the LPS control, in any of the Western blot evaluated parameters, except for VCAM-1’s pretreated group with the larger concentration of EET22-1. MMP-9 showed an increased activity in most conditions, while the nitrite assays couldn’t be validated at 24 hours. The extracts maintained cellular viability at low and medium concentration, with EET22-1 being less cytotoxic at higher concentrations. The extracts couldn’t decrease significantly the evaluated mediators, at 24 hours, but the extracts without LPS did not increase the inflammatory stimulus at low and medium concentrations. It was observed an upward trend in the MMP-9 activity in most of the studied conditions, which could point to a possible anti fibrotic activity of the extracts; more test are needed to support this idea / Fondecyt; Fondap

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento hasta enero de 2018 / Ugni molinae Turcz., conocida tradicionalmente como murtilla, es una especie autóctona que crece en forma silvestre y abundante en las regiones del sur de Chile. A sus hojas la medicina folclórica le ha atribuido varias propiedades medicinales; sus infusiones son utilizadas por sus propiedades astringentes, aromáticas, estimulantes, analgésicas y antiinflamatorias, así como también para aliviar las dolencias de las vías urinarias, entre otros usos. Estudios químicos y farmacológicos realizados en el Laboratorio de Productos Naturales de la Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas, U. de Chile; confirmaron la presencia de compuestos triterpénicos en las hojas de murtilla, tales como los ácidos betulínico, ursólico, oleanólico, alfitólico, corosólico, madecásico, maslínico y asiático, además de compuestos polifenólicos como ácido gálico, quercetina, miricetina, canferol, epicatequina y algunos de sus derivados glicosilados. Se le atribuyen a ambos grupos de compuestos los efectos inhibidores de la glicógeno fosforilasa a (GPa), e inhibidores de la proteína tirosina fosfatasa 1B (PTP1B). El objetivo de este estudio fue realizar un estudio comparativo de las propiedades inhibitorias de la GPa y la PTP1B de extractos de acetato de etilo (EAEs) y etanólico (EETs) de las hojas de diez diferentes genotipos de U. molinae, cultivados y recolectados en las mismas condiciones. Para esto se realizaron los ensayos de inhibición de GPa y PTP1B, los resultados se analizaron por espectrofotometría y se compararon por análisis de varianza de una vía ANOVA y test de Tuckey, considerando que los resultados tuvieron diferencias estadísticamente significativas para p < 0,05. Los resultados indicaron que existen diferencias estadísticamente significativas entre las concentraciones inhibitorias 50 (CI50) entre los diferentes genotipos de los extractos evaluados en el ensayo de inhibición de GPa y que existe diferencias estadísticamente significativas en la capacidad inhibitoria a las concentraciones evaluadas entre los diferentes genotipos de los extractos evaluados en el ensayo de inhibición de PTP1B. Esto confirma que la diferencia genética si influencia las propiedades farmacológicas de la especie / Ugni molinae Turcz., traditionally known as ‘murtilla’, is a native Chilean species which grows wild and plentiful in the south of the country. The folk medicine has attributed medicinal properties to the infusion of the murtilla leaves, using it for its astringent, aromatic, stimulating, analgesic and anti-inflammatory properties; as well as relieving ailments of the urinary tract, among other uses. Chemical and pharmacological studies in the Natural Products Laboratory of the Faculty of Chemical and Pharmaceutical Sciences, Universidad de Chile; confirmed the presence of triterpene compounds in murtilla leaves, such as betulinic, ursolic, oleanolic, alphitolic, corosolic, madecassic, maslinic and asiatic acids, as well as polyphenolic compounds like gallic acid, quercetin, myricetin, kaempferol, epicatechin and some of their glycosylated derivatives. Both groups of compounds have inhibitory effects on glycogen phosphorylase a (GPa), and also they are inhibitors of protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B). The aim of this study is to conduct a comparative study of inhibitory properties of the leaves of ten different U. molinae genotypes, by ethyl acetate (EAEs) and ethanol (ETEs) extracts, on PTP1B and GPa. In order to do it, they were performed inhibition assays of GPa and PTP1B, the results were analyzed by spectrophotometry and compared by analysis of variance ANOVA and Tuckey test, considering that the results have statistically significant differences at p <0.05. The results indicated that there were significant differences between the inhibitory concentration 50 (IC50) between different genotypes of the extracts tested in the inhibition assay of GPa, and that there is statistically significant difference in the inhibitory capacity at the concentrations evaluated between the different genotypes extracts evaluated for inhibition of PTP1B. This confirms that the genetic difference of this species influences the pharmacological properties of it / Fondecyt

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento hasta enero de 2020 / Ugni molinae Turcz., Myrtaceae conocida normalmente como murta o murtilla es un arbusto nativo siempre-verde del centro-sur y sur de Chile. La medicina folclórica le atribuye muchas propiedades y entre sus usos destaca como tratamiento para la diabetes al consumir la infusión de sus hojas y ramas. Se han demostrado la presencia de ácidos triterpénicos pentacíclicos y polifenoles en los extractos de murtilla con potente actividad inhibitoria de α-glucosidasa. Su inhibición permite la disminución del peak postprandial de glucosa al retardar y disminuir la absorción de monosacáridos. El objetivo de este estudio fue comparar la actividad inhibitoria de α-glucosidasa de extractos etanólicos (EETs) y acetato de etilo (EAEs) de hojas de 10 genotipos de U. molinae cultivadas en las mismas condiciones edafoclimaticas y manejo agronómico y determinar su mecanismo de inhibición. El estudio se llevó a cabo mediante el método espectrofotométrico de inhibición de α-glucosidasa utilizando pNPG como sustrato, descrito previamente por Kim et al. (2001) con las modificaciones correspondientes. Los resultados sugieren que los extractos más potentes corresponden a los EET 23-2 y EAE 27-1 observándose diferencias significativas en un 70% y un 60% de los genotipos respectivamente con valores de CI50 de 1,12  0,07 y 8,20  0,20 g/mL. Sin embargo todos los extractos fueron más potentes que acarbosa, fármaco de referencia (CI50 = 251,0  34,0 g/mL). Además el genotipo 23-2 para ambos extractos presento un comportamiento de inhibidor acompetitivo y el genotipo 27-1, de inhibidor no competitivo mixto, evaluados por la gráfica de Lineweaver- Burk y los cambios en sus constantes cinéticas. Se concluye que los genotipos difieren en potencia y tipo de inhibición debido al factor genético. En general los genotipos 23-2 y 27-1 que no presentan diferencias con los genotipos 19-1 y 14-4 poseen buenas proyecciones in vivo para el potencial tratamiento de DMT2, dada sus actividades antioxidantes e inhibidoras de enzimas claves en la DMT2 in vitro / Ugni molinae Turcz., Myrtaceae generally known as murta or murtilla is an evergreen shrub native of south-central and southern Chile. Folk medicine attributes many properties and among its uses include as a treatment for diabetes by consuming the infusion of its leaves and branches. It has demonstrated the presence of pentacyclic triterpenic acids and polyphenols in murtilla extracts with potent inhibitory activity of α-glucosidase. Its inhibition allows decreasing the postprandial glucose peak by to decreasing the absorption of monosaccharides. The aim of this study was to compare the inhibitory activity of α-glucosidase from etanolic (ETEs) and ethyl acetate (EAEs) leaves extracts of 10 U. molinae genotypes grown in the same soil and climatic conditions and agronomic management and determine its mechanism of inhibition. The study was performed by the spectrophotometric method of inhibiting α-glucosidase using pNPG as substrate, previously described by Kim et al. (2001) with appropriate modifications. The results suggest that ETE 23-2 and EAE 27-1 are more potent with significant differences about 70% and 60% of the genotypes respectively with IC50 values of 1.12  0.07 and 8.20  0.20 g/mL. However all extracts were more potent than acarbose, reference drug (IC50 = 251.0  34.0 g/mL). Besides for both extracts the 23-2 genotype present uncompetitive inhibitor behavior and genotype 27-1, mixed noncompetitive inhibitor, evaluated by the Lineweaver-Burk and changes in their kinetic constants. It is concluded that genotypes differ in power and inhibition type due to genetic factor. In general 23-2 and 27-1 genotypes not show differences with 19-1 and 14-4 genotypes possess good in vivo projections for the potential treatment of T2DM, due to its in vitro antioxidant and inhibiting activities of key enzymes in T2DM

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Ugni molinae, Myrtaceae, es un arbusto silvestre que crece en el sur de Chile, especialmente en la cordillera de la Costa y parte de la precordillera andina. La planta produce frutos globosos y pequeños, de agradable sabor y aroma, y las infusiones de sus hojas han sido utilizadas por la medicina folclórica para el tratamiento de distintos tipos de dolor e inflamación. Las propiedades de la murtilla se deben, en parte, a la presencia de diferentes compuestos fenólicos en sus hojas. Debido a que estos compuestos pueden variar por diversos factores, como el genotipo, en este estudio se realizó un análisis comparativo respecto a la capacidad antioxidante (ensayo FRAP), el contenido fenólico total (CFT) (ensayo de Folin-Ciocalteu) y el contenido de flavonoides (ensayo colorimétrico con AlCl3) de extractos etanólicos seriados (EETs) de hojas de 10 genotipos de murtilla (8-2, 14-4, 19-1, 19-1ha, 22-1, 23-2, 27-1, 31-1 y ZF-18), los cuales fueron cultivados bajos las mismas condiciones. De acuerdo a los resultados obtenidos, los EETs de los 10 genotipos presentaron diferencias significativas entre sí (p<0,05), siendo el EET ZF-18 el que obtuvo el mayor CFT, (260,6 ± 3,7 mg EAG/g ES) y el genotipo 31-1 el que obtuvo la mayor cantidad de flavonoides (53,5 ± 0,8 mg quercetina/g ES). En relación a la actividad antioxidante, los EETs de los genotipos ZF-18 y 27-1 fueron los que obtuvieron los mayores valores FRAP en todos los distintos tiempos de medición, con un máximo de 5,40 ± 0,12 y 4,93 ± 0,05 mmol Fe2+/g ES a los 60 minutos, respectivamente. La información de esta memoria permitió aportar a los estudios realizados con hojas murtilla en el laboratorio de Productos Naturales de la Universidad de Chile, principalmente en relación a la influencia del genotipo sobre su composición fenólica y actividad antioxidante / Ugni molinae is a wild shrub that grows in southern Chile, predominantly on the andean foothills. The infusion of its leaves have been used by folk medicine for the treatment of different kinds of pain and inflammation, and its properties are due in part to the presence of different phenolic compounds on its leaves. Because of the variation due to numerous factors like the genotype, a comparative study has been made with regards to the antioxidant capacity (FRAP assay), the total phenolics (CFT) (Folin-Ciocalteu assay) and the flavonoid content (colorimetric AlCl3 assay) of serialized ethanolic extracts (EETs) of leaves of 10 different genotypes of murtilla (8-2, 14-4, 19-1, 19-1ha, 19-2, 22-1, 23-2, 27-1, 31-1 and ZF-18), grown under the same conditions. Significant differences were found (p<0.05) between the EETs of the 10 genotypes, being the ZF-18 EET the one that got the greater CFT, (260.6 ± 3.7 mg GAE/g dm) and the 31-1 the one that got the greater quantity of flavonoids (53.5 ± 0.8 mg quercetin/g dm). In relation to the antioxidant activity, the EETs of the ZF-18 and 27-1 genotypes were the ones that obtained the greater FRAP values at the various time measurements, with a maximum of 5.40 ± 0.12 and 4.93 ± 0.05 mmol Fe2+/g dm, respectively. The information on this work allowed us to contribute to the studies already carried out on murtilla leaves by the Natural Products Laboratory of the Universidad de Chile, primarily in relation to the influences of the genotype over its phenolic composition and antioxidant activity / Fondecyt

Doctor en Ciencias Farmacéuticas / En esta tesis se observó que los extractos seriados de acetato de etilo (EAE) y etanol (EET) de las hojas de Ugni molinae Turcz. (murtilla) son fuente de los ácidos, asiático, alfitólico, corosólico, betulínico, oleanólico, ursólico, madecásico y maslínico, presentes en diferentes concentraciones. Siendo estos dos últimos triterpenoides identificados por primera vez en esta especie. Se obtuvo desde el EET una fracción enriquecida en triterpenoides (SAE), la cual concentró alrededor de 3 veces la cantidad de los ácidos madecásico, asiático, corosólico y maslínico. SAE (1 mg/oreja) demostró tener efecto anti-inflamatorio tópico significativo de un 43,3 ± 4,2% en el modelo de edema de oreja de ratón inducido por TPA. Este efecto fue atribuible en parte a la presencia del ácido madecásico (DE50 0,11 μmol/oreja). SAE (1 y 10 μg/mL) y los ácidos madecásico (1 y 10 μM), corosólico (1 μM) y alfitólico (10 μM) redujeron significativamente la cantidad de IL-6 liberada desde adipocitos maduros expuestos a TNF-α. Tanto EAE como SAE redujeron significativamente el nivel de especies reactivas de oxígeno intracelulares (EROic) inducidas por TNF-α en macrófagos y células β pancreáticas, debiéndose este efecto tanto a los triterpenoides como a los compuestos fenólicos presentes. Los ácidos madecásico, asiático, corosólico, maslínico, alfitólico, ursólico y oleanólico (1 y 10 μM) fueron capaces de disminuir el nivel de EROic inducidas por TNF-α tanto en macrófagos como en células β pancreáticas, siendo el efecto más potente en estas últimas células. Tanto SAE como EAE (10 μg/mL) inhiben el proceso de diferenciación de adipocitos debido en gran parte a sus triterpenoides. Éstos, a una concentración de 10 μM, mostraron un importante efecto inhibitorio. EET, EAE y SAE (60 μg/mL) inhiben la glicógeno fosforilasa a, observándose actividades inhibitorias de 45,9 ± 4,3, 92,2 ± 1,1 y 91,6 ± 1,2%, respectivamente. Tanto triterpenoides como flavonoides estarían involucrados en este efecto. / This study showed that ethyl acetate and ethanol serial extracts (EAE and EET, repectively) from the leaves of Ugni molinae Turcz. (murtilla) are source of asiatic, alphitolic, corosolic, betulinic, oleanolic, ursolic, madecassic and maslinic acids at different concentrations. The two latter triterpenoids were identified for the first time in this species. It was obtained from EET a triterpenoid-rich fraction (SAE), which concentrated about 3 times the amount of madecassic, asiatic, corosolic and maslinic acids. SAE (1 mg/ear) showed a significant topical anti-inflammatory effect of 43.3 ± 4.2% in the TPA-induced mouse ear edema. This effect is due in part to the presence of madecassic acid (ED50 0,11 μmol/ear). SAE (1 y 10 μg/mL) and madecassic (1 y 10 μM), corosolic (1 μM) and alphitolic (10 μM) acids significantly reduced the amount of IL-6 released from TNF-α-exposed mature adipocytes. Both EAE and SAE significantly reduced the level of TNF-α-induced intracellular reactive oxygen species (icROS) in macrophages and pancreatic β cells owing this effect to the pentacyclic triterpenes and phenolic compounds occurring in them. Madecassic, asiatic, corosolic, maslinic, alphitolic, ursolic and oleanolic acids (1 and 10 μM) attenuated the TNF-α-induced icROS level, both in macrophages and in pancreatic β cells, being the effect more potent in the latter. Both SAE and EAE (10 μg/mL) inhibited the adipocyte differentiation process in large part due to their triterpenoids. These, at a concentration of 10 μM, showed significant inhibitory effect. EET, EAE and SAE (60 μg/mL) inhibited glycogen phosphorylase a, observing inhibitory activities of 45.9 ± 4.3, 92.2 ± 1.1 and 91.6 ± 1.2%, respectively. Both triterpenoids and flavonoids were involved in this effect / FONDECYT

Memoria para optar al Título de Química Farmacéutica / Murtilla, Ugni molinae Turcz, es un arbusto autóctono que crece en forma silvestre y abundante desde la VII hasta la X región, conocida principalmente por sus frutos comestibles. La medicina popular le atribuye diversas propiedades tales como aromática, astringente, estimulante, alivia dolencias de la vía urinaria, entre otras. Sus hojas son utilizadas por la industria dermocosmética como regeneradora de la piel y neutralizadora del estrés oxidativo. Estudios previos realizados en nuestro laboratorio demostraron que las hojas de esta especie son una rica fuente de triterpenoides pentacíclicos derivados de los núcleos ursano, oleanano y lupano, a los cuales tanto en la literatura como estudios realizados en el laboratorio han establecido que poseen propiedades analgésicas, antiinflamatorias, antioxidantes e hipoglicemiantes. Siendo, esto último de relevancia, pues darían cuenta de propiedades antidiabéticas en las hojas de esta planta El objetivo de este trabajo fue aislar e identificar principios activos desde hojas de murtilla y ensayar actividad inhibitoria de diferentes extractos sobre la enzima glicógeno fosforilasa. En el presente trabajo, se utilizaron las hojas de esta especie, las cuales fueron secadas y trituradas para preparar distintos extractos por maceración hasta total agotamiento con solventes de polaridad creciente, obteniéndose los extractos de hexano (HEX), diclorometano (EDCM), acetato de etilo (EAE) y etanol (EET). Este último fue purificado mediante dos técnicas: extracción líquido-líquido y extracción sólido-líquido (Soxhlet) para así obtener una fracción rica en sapogeninas triterpénicas, cuyos productos se denominaron F-AcEt y SAE. Estas fracciones fueron repurificadas mediante sucesivas columnas cromatográficas de sílica gel y Sephadex® LH-20; y finalmente analizadas mediante placas cromatográficas preparativas para aislar una nueva genina denominada U7 y una mezcla de X y U7. U7 fue aislada e identificada como ácido madecásico (ácido 2α, 3β, 6β, 23 tetrahidroxi-urs-12(13)-eno-28-oico). En tanto que X aún no ha sido completamente identificada. La caracterización de los compuestos se realizó mediante espectroscopia de masa y espectroscopia de resonancia magnética nuclear unidimensional. El ensayo de inhibición de glicógeno fosforilasa a (GPa) fue realizado midiendo colorimétricamente a 660 nm la liberación del ión fosfato como producto de la reacción enzimática en dirección de la síntesis de glicógeno a partir de glucosa-1-fosfato. Las muestras a evaluar fueron disueltas en DMSO a una concentración de 60 μg/mL. Los resultados demostraron que un extracto estandarizado de Centella asiatica y sólo los extractos EAE, EET y sub-extracto SAE poseen actividad, obteniéndose los siguientes resultados de % inhibición frente a GPa ± SD: 53,8 ± 4,3; 45,9 ± 4,3; 92,2 ± 1,1 y 91,6 ± 1,2 respectivamente. La actividad de los extractos evaluados podría ser atribuida a los triterpenoides pentacíclicos presentes en estos extractos bioactivos. En síntesis se contribuyó a ampliar el conocimiento de la composición química de esta especie autóctona y se logró evaluar su efecto sobre GPa, otorgando grandes perspectivas en los estudios químicos-farmacológicos para esta especie nativa. / Murtilla, Ugni molinae Turcz is a native shrub that grows wild and abundant from VII to X region and it is known for its edible fruits. Folk medicine attributes to it many properties such as aromatic, astringent, stimulant, relieves ailments of the urinary tract, among others. Its leaves are used by dermocosmetics industry as regeneration of the skin and neutralizing oxidative stress. Previous studies in our laboratory showed that the leaves of this species are a rich source of pentacyclic triterpenoids derived from the ursane, oleanane and lupane skeletons, to which both the literature and our studies have established that have properties analgesic, inflammatory, antioxidant and hypoglycemic. Being the three latter of relevance since it would be linked antidiabetic properties in the leaves of this plant The aim of this study was to isolate and identify active ingredients from leaves of murtilla and evaluate their inhibitory activity of different extracts on the glycogen phosphorylase enzyme. Dry and powdered leaves were used to prepare different extracts by maceration until total exhaustion with solvents of increasing polarity obtaining the hexane (HEX), dichloromethane (EDCM), ethyl acetate (EAE) and ethanol (EET) extracts. The latter was purified by two techniques: liquid-liquid extraction and solid-liquid extraction (Soxhlet) to obtain a fraction rich in triterpene sapogenins, whose products were called F-AcEt and SAE. These fractions were repurified by successive silica gel and Sephadex LH-20 chromatographic columns, and finally by preparative chromatographic plates, to isolate a new genin called U7 and a mixture of X and U7. U7 was isolated and identified as madecassic acid (2α, 3β, 6β, 23 tetrahydroxy-urs-12(13)-ene-28-oic acid). While X has not been completely identified. The characterization of the compounds was performed by HPLC-ESI-MSn and 1H- and 13C-NMR . The inhibition assay of glycogen phosphorylase a (GPa) was determined colorimetrically at 660 nm by measuring the release of phosphate ion as a product of the enzymatic reaction toward the synthesis of glycogen from glucose-1-phosphate. The samples were dissolved in DMSO assessing a final concentration of 60 μg/mL. The results showed that a standardized extract of Centella asiatica and only EAE, EET extracts and SAE sub-extract possess activity with a inhibitory effect against GPa ± SD of: 53.8 ± 4.3; 45.9 ± 4.3; 92.2 ± 1.1 and 91.6 ± 1.2 % respectively. The activity of the evaluated extracts could be attributed to the bioactive pentacyclic triterpenoids present in these extracts. Briefly, this study allowed to increase the knowledge of the chemical composition of Ugni molinae leaves and assessing their effect on GPa, releasing great prospects in the chemical and pharmacological studies of this native species / Fondecyt

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Maqui (Aristotelia chilensis), murtilla (Ugni molinae) y arándano (Vaccinium corymbosum) son berries originarios de Chile, Sudamérica y Norteamérica, respectivamente. Han sido utilizados en alimentos funcionales y fitofármacos por su reconocido poder antioxidante, además de tener propiedades antiinflamatorias y antibacterianas. Para medir la actividad antioxidante de extractos vegetales, principalmente se utilizan compuestos sintéticos. Estos compuestos son xenobióticos para la celula animal, y por lo tanto sus potenciales redox no son comparables con los de los antioxidantes biológicos. Es por esto que en este trabajo se estudió la capacidad antioxidante de estos berries utilizando microsomas hepáticos de rata como sistema biológico y como sistema prooxidante, Fe3+/ascorbato. Inicialmente, se midió la cantidad de polifenoles de los tres extractos para ser usada como parámetro comparativo entre ellos. Los tres extractos previnieron la lipoperoxidación de los microsomas, y revirtieron y previnieron la oxidación de los tioles microsómicos con distinta potencia, todas reacciones inducidas por el sistema pro oxidante Fe3+/ascorbato. Todos los extractos además, fueron capaces de quelar el ion Cu2+. El extracto de maqui mostró la mayor actividad antioxidante, y el extractoto de arándano, la menor. La calidad y cantidad de los antioxidantes presentes en los diferentes extractos podría explicar esta diferencia. Cabe destacar que extractos polivalentes como los ensayados ejercen su poder antioxidante por diversos mecanismos actuando de manera sinérgica. Esta característica representa una gran ventaja al formular fitofármacos orientados al tratamiento de patologías asociadas a estrés oxidativo / Maqui (Aristotelia chilensis), murtilla (Ugni molinae) y Arándano (Vaccinium corymbosum) are berries from Chile, Southamerica and Northamerica, respectively. They have been used in functional foods and herbal medicine because of their recognized antioxidant power and anti-inflammatory and antibacterial properties. Antioxidant activities of herbal extracts are determined using principally synthetic compounds. These compounds are xenobiotic for the animal cell, thus theirs redox potentials are not comparable with those of biological antioxidants. This is the reason why the antioxidant capacity from these berries was studied. Rat liver microsomes were used as a biological system and Fe3+/ascorbate, as prooxidant system. Initially, the amount of polyphenols in the three extracts was measured in order to be used as a comparative parameter among them. Our request involved that the three extracts prevented microsomal lipoperoxidation and reverted and prevented the oxidations of microsomal thiols with different potency, all reactions induced by Fe3+/ascorbate). They were also able to chelate ion Cu+2. Maqui extract showed the highest antioxidant capacity and the lowest corresponding to the arandano extract. The quality and quantity of the antioxidants present in each one of the three extracts could explain this difference. These polyvalent extracts should exert its antioxidant power by diverse mechanisms acting in a synergic way. This characteristic represent a great benefit for therapies related with pathologies specially associated to oxidative stress

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / La murtilla es un arbusto autóctono que crece en el centro y sur de Chile. Se caracteriza por producir frutos globosos y pequeños con agradable aroma y sabor, atributo que los ha transformado en una fuente de comercio y exportación. Sus hojas han sido utilizadas por la medicina tradicional por sus propiedades antiinflamatorias y analgésicas, actividades que han sido confirmadas por investigaciones realizadas en nuestro laboratorio. Asimismo, estudios han determinado en los extractos de sus hojas, actividades antioxidante y antimicrobiana, asociadas a la presencia de compuestos fenólicos. Entre los compuestos fenólicos presentes en murtilla, los taninos, derivados de ácido gálico, ácido elágico y catequina, generaron interés por su variedad de propiedades que presentan, entre las que destacan antiinflamatorias, antioxidantes, antivirales, antimicrobianas, entre otras. Además de ser metabolitos secundarios cuya cuantificación en diez genotipos de murtilla no se había determinado en estudios previos en nuestro laboratorio. Existen varios factores que pueden determinar la composición química presente en la murtilla, entre los que se encuentra el genotipo. Debido a esta influencia, se determinó en forma comparativa el contenido de taninos de extractos etanólicos de hojas de diez genotipos de Ugni molinae Turcz, cultivadas bajo las mismas condiciones edafoclimáticas y manejo agronómico. Por otra parte, por sus propiedades antiinflamatorias in vivo, determinadas en estudios previos en murtilla. Se evaluó si los extractos tenían además efecto sobre la disminución de la infiltración celular a diferentes dosis. Se seleccionaron y evaluaron dos extractos: uno de acetato de etilo (genotipo 19-1) y otro etanólico (genotipo 31-1). Los resultados obtenidos mostraron diferencias significativas (p < 0,05), respecto al contenido de taninos entre los diez genotipos estudiados, el genotipo ZF-18 es el que presentó mayor cantidad con 201,0 ± 1,6 EAT (mg/g ES). En el ensayo de disminución del infiltrado celular, el mayor efecto se obtuvo en el extracto etanólico 31-1, a una dosis de 100 mg/kg con un 38,7%. Los resultados obtenidos en esta investigación aportaron información relevante respecto a la influencia del genotipo en relación al contenido de taninos. Así como también a que los extractos a diferentes dosis, se encuentran influyendo en la disminución de las células que llegan a la zona de inflamación / Murtilla is a native shrub that grows in central and southern Chile. It is characterized by produce small and globose fruits with pleasant aroma and flavor, attribute that has become a source of trade and export. Its leaves have been used by traditional medicine for its anti-inflammatory and analgesic properties, activities that have been confirmed by investigations in our laboratory. Also, studies have determined their antioxidant and antimicrobial activity, which have been associated with the presence of phenolic compounds. Among the phenolic compounds present in murtilla, tannins, derivatives of gallic acid, ellagic acid and catechin, generated interest for its variety of properties presented, among which we highlight anti-inflammatory, antioxidant, antiviral, and antimicrobial, among others. Besides being secondary metabolites which quantification in ten genotypes of murtilla there was been determined in previous studies in our laboratory. Several factors can determine the chemical composition present in the murtilla, including the genotype. Based on this, the tannin content was determined comparatively between the ethanolic extracts of Ugni molinae Turcz leaves from ten genotypes, grown under the same soil and climate conditions and agronomic management. Moreover, for its anti-inflammatory properties in vivo as determined in previous studies in murtilla. It was assessed whether extracts also had influence on decreasing cell infiltration at different doses. Selecting and evaluating two extracts: one of ethyl acetate (19-1 genotype) and another ethanol (31-1 genotype). The results showed significant differences (p < 0.05), compared to tannin content among the ten genotypes studied, genotype ZF-18 is the highest estimated amount to 201.0 ± 1.6 EAT (mg /g DE). In the assay decreased cellular infiltrate, the greatest effect was obtained in ethanolic extract 31-1, at a dose of 100 mg/kg with 38.7%. The results obtained in this research provided relevant information regarding the influence of genotype in relation to the content of tannins. As well as extracts at different doses, are influencing the decrease of cells that reach the site of inflammation / FONDECYT N°1130155

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Ugni molinae Turcz. de nombre común murtilla, es una especie endémica de la zona comprendida entre la VII y la X Región de Chile, donde crece especialmente en la Cordillera de la Costa y en la Precordillera, en terrenos de pobre nutrición, poco aptos para el cultivo de otras especies. De su planta se aprovecha el fruto, el cual es comestible. Las hojas de murtilla fueron usadas por los pueblos primigenios para curar heridas y mejorar la piel deteriorada. En los estudios que se realizaron sobre las hojas de esta planta, se demostró que estas propiedades farmacológicas se deben a la presencia de triterpenos y de flavonoides. Entre los triterpenos figura el ácido asiático, el ácido corosólico, y el ácido alfitólico. Las acciones farmacológicas demostradas abarcan efectos analgésicos, antiinflamatorios, antimicrobianos y cicatrizantes. Se evaluaron el ácido alfitólico y el ácido corosólico en pruebas microbiológicas, en donde se comprobó la actividad inhibitoria en el crecimiento de Escherichia coli y Bacillus subtilis por el primero, e inhibición de Klebsiella pneumoniae por el segundo. Basándose en estos postulados demostrados, se desarrollaron varias formulaciones dermatológicas en base a un extracto acetato de etilo, estandarizado químicamente en ácido asiático y ácido corosólico, de las cuales se eligieron dos formulaciones que tienen buenas propiedades de estabilidad físicas. Estas formulaciones se ensayaron invivo en un estudio de inflamación aguda en orejas de ratón, dando resultados satisfactorios. Estas mismas formulaciones se ensayaron en piel de conejo, en donde se comprobó que las formulaciones dermatológicas no son irritantes para la piel