Orientador: Regina Helena Garcia Martins / Banca: Eulália Sakano / Banca: Vilma Terezinha Anselmo-Lima / Banca: Norimar Hernandez Dias / Banca: Noeme Rocha de Souza / Banca: Regina Helena Garcia Martins / Resumo: O câncer de cabeça e pescoço corresponde a 5% de todas as neoplasias malignas do organismo, sendo os sítios mais prevalentes a cavidade oral, faringe e laringe. O principal fator de risco é o tabagismo e o carcinoma espinocelular é o tipo histológico mais frequente. Marcadores de células tumorais como o p53 e Ki-67 têm sido estudados em tumores de cabeça e pescoço pela sua imunoexpressão positiva para as células neoplásicas e em proliferação. Estudos experimentais possibilitam avaliar os efeitos nocivos do tabaco sobre as vias aéreas, sendo este o objetivo deste estudo. OBJETIVOS: Estudar, em ratos, os efeitos da exposição aguda à fumaça de cigarro sobre as mucosas da língua, faringe e laringe, por meio de análise histológica, morfométrica e imunohistoquímica da expressão das proteínas p53 e Ki-67. MATERIAL E MÉTODO: Ratos Wistar foram subdivididos em dois grupos de 20 animais cada: grupo controle (GC), ração e água ad libitum e grupo tabaco (GT) expostos à inalação de fumaça de 40 cigarro/dia por 60 dias. Os animais foram eutanaziados e realizado biópsias da língua, faringe e laringe para os estudos histopatológico, histomorfométrico e imunohistoquímico das proteínas p53 e do ki-67. RESULTADO: As análises de microscopia de luz da língua dos animais do grupo tabaco (GT) revelaram algumas alterações mais marcantes nesse grupo em cada sítio, sendo que na língua, ganharam destaque a hiperplasia epitelial (GT-90%), hiperplasia de células da camada basal (GT-95%) e displasia epitelial de grau leve a moderado (GT- 85%); na faringe, destacaram-se a hiperplasia de células da camada basal... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: INTRODUCTION: The head and neck cancer represents 5% of all malignant neoplasm of the body, with the sites most prevalent oral cavity, pharynx and larynx. The main risk factor is smoking and squamous cell carcinoma is the most frequent histological type. Tumor cell markers such as p53 and ki-67 have been studied in head and neck tumors by their positive immunostaing for proliferating and neoplastic cells. Experimental studies to assess the possible harmful effects of smoking on the airways which are the objective of this study. OBJECTIVES: To study the effects of acute exposure to cigarette smoke on the mucosa of the tongue, pharynx and larynx in rats; using histological, morphometric and immunohistochemical expression of p53 and ki- 67. MATERIALS AND METHODS: Wistar rats were divided into two groups of 20 animals each control group (CG), food and water ad libitum and tobacco group (GT) exposed to inhalation of smoke from 40 cigarettes/day for 60 days. The animals were euthanized and biopsies of the tongue; pharynx and larynx were performed for histological studies, histomorphometric and immunohistochemical study of p53 and ki- 67. RESULTS: The light of the tongue microscopy analysis showed in GT group: epithelial hyperplasia (GT-90%), hyperplasia of the basal cell layer (GT-95%) and dysplasia of mild to moderate (GT-85%); in pharynx, highlighted the hyperplasia of the basal cell layer (GT-85%), dysplasia (GT-25%) and vascular congestion (GT-95%); predominated in the larynx cell hyperplasia of the basal layer (GT-70%), epithelial hyperplasia (GT-55%), congestion (GT-100%) and inflammatory infiltration of polymorphonuclear neutrophils (GT-25%).The morphometric study identified high measures of the keratin layer in group... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Paula Rahal / Banca: Ana Elizabete Silva / Banca: Erika Cristina Pavarino Bertelli / Banca: Erico Tosoni Costa / Banca: Raphael Bessa Parmigiani / Resumo: O carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço (HNSCC) é uma doença heterogênea que afeta o epitélio da cavidade oral, laringe e faringe. A maioria dos pacientes é diagnosticada em estágios avançados da doença e ainda não existe nenhum marcador sensível e específico para o comportamento agressivo deste tumor. Portanto, uma detecção precoce e biomarcadores de prognóstico são altamente necessárias para uma administração mais racional da doença. A hipermetilação de ilhas CpGs é um dos mecanismos epigenéticos mais importantes que levam a um silenciamento gênico em tumores e tem sido extensivamente utilizados para a identificação de biomarcadores. Neste estudo foram combinados as análises de Rapid Substractive Hybridization (RaSH) e microarray de uma maneira hierárquica para selecionar genes que, supostamente, são reativados pelo agente desmetilante 5'Aza'2'deoxicitidina (5Aza'dC) em linhagens celulares derivados de carcinoma de cabeça e pescoço (FaDu, UM' SCC'14A, UM'SCC'17A e UM'SCC'38). Esta análise combinada identificou 78 genes dos quais 35 foram reativados em, pelo menos, 2 linhagens celulares e apresentavam ilha CpG nas suas regiões 5'. A reativação de três destes 35 genes (CRABP2, MX1 e SLC15A3) foi confirmada por PCR em tempo real (Fold change ≥ 3). O seqüenciamento de bissulfito de sódio das suas ilhas CpGs revelou que eles estão, de fato, diferencialmente metilados em linhagens celulares derivadas de carcinoma de cabeça e pescoço. Foram detectadas uma maior freqüência de hipermetilação dos genes CRABP2 (58.1% para a região 1) e MX1 (46.3%) em amostras primárias de câncer de cabeça e pescoço quando comparados a linfócitos de indivíduos saudáveis utilizando o PCR de metilação específica (MSP). Finalmente a ausência da proteína CRABP2 foi associada com... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is a heterogeneous disease affecting the epithelium of the oral cavity, pharynx and larynx. Most patients are diagnosed at late stages of the disease and no sensitive and specific predictors of aggressive behavior have been identified yet. Therefore, early detection and prognostic biomarkers are highly desirable for a more rational management of the disease. Hypermethylation of CpG islands is one of the most important epigenetic mechanisms that leads to gene silencing in tumors and has been extensively used for the identification of biomarkers. In this study, we combined Rapid Subtractive Hybridization (RaSH) and microarray analysis in a hierarchical manner to select genes that are putatively reactivated by the demethylating agent 5'aza'2'deoxycytidine (5Aza'dC) in HNSCC cell lines (FaDu, UM'SCC'14A, UMSCC'17A, UM'SCC'38A). This combined analysis identified 78 genes of which 35 were reactivated in at least 2 cell lines and harbored a CpG island at their 5' region. Reactivation of three out of these 35 genes (CRABP2, MX1 and SLC15A3) was confirmed by qRT'PCR (fold change ≥ 3). Bisulfite sequencing of their CpG islands revealed that they are indeed differentially methylated in the HNSCC cell lines. Using Methylation Specific PCR (MSP), we detected a higher frequency of CRABP2 (58.1% for region 1) and MX1 (46.3%) hypermethylation in primary HNSCC, when compared to lymphocytes from healthy individuals. Finally, absence of the CRABP2 protein was associated with decreased disease'free survival rates, supporting a potential use of CRABP2 expression as a prognostic biomarker for HNSCC patients / Doutor