Orientador: Julieta Rodini Engracia de Moraes / Banca: Ana Maria Ferreira Roselino / Banca: Angela Cleusa de Fatima Banzatto de Carvalho / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Banca: Gilson Pereira de Oliveira / Resumo: A leishmaniose é uma enfermidade provocada por protozoários do gênero Leishmania, que pode produzir manifestações cutâneas, mucocutâneas ou viscerais. Os objetivos deste ensaio foram os de identificar a espécie Leishmania (Leishmania) chagasi, utilizando o método PCR-RFLP em amostras de tecido de cães com leishmaniose visceral; seqüenciar o fragmento amplificado de DNA das amostras de linfonodos de diferentes animais, em busca de homologia e polimorfismos; comparar os métodos de imunoistoquímica e de PCR dos rins, na identificação da Leishmania e comparar as técnicas sorológicas em relação à PCR como auxílio diagnóstico da leishmaniose. Para tanto, foram utilizadas amostras de 48 cães com leishmaniose, diagnosticados por meio de testes IFI, ELISA e por PCR. Realizou-se PCR com amostras de linfonodo poplíteo, baço e rins, utilizando 'primers' específicos para o gênero Leishmania. A partir de amostras amplificadas, o DNA foi submetido à digestão enzimática (técnica PCR-RFLP) com as enzimas Hae III, Bsr I e Rsa I. Para o seqüenciamento de DNA, produtos de PCR foram amplificados com 'primer sense', precipitados e submetidos ao seqüenciamento automático. Com fragmentos histológicos renais, realizou-se a técnica imunoistoquímica utilizando anticorpo policlonal anti-Leishmania produzido em coelho. O método PCR-RFLP permitiu identificar a espécie Leishmania (Leishmania) chagasi em todas as amostras de DNA dos diferentes tecidos. No seqüenciamento de DNA, os fragmentos amplificados mostraram-se pertencentes às espécies causadoras de leishmaniose visceral, porém não foi possível diferenciá-las. A técnica de imunoistoquímica mostrou presença de formas amastigotas íntegras em meio ao infiltrado inflamatório intersticial em dois (4%) dos 48 animais avaliados, enquanto a PCR confirmou Leishmania sp em 77% dos cães. Conclui-se que a técnica... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Leishmaniasis is a disease caused by organisms belonging to the genus Leishmania. Clinical forms of leishmaniasis are found as being cutaneous, mucocutaneous or visceral. The objectives of the present study were to identify the Leishmania (Leishmania) chagasi species in tissue specimen from dogs presenting visceral disease diagnosed by PCR-RFLP assay; to determine the fragment sequence (120bp) from lymph node samples from different animals searching for homologies and polymorphism; and to compare immunohistochemistry method to PCR assay with renal tissue and Leishmania local identification. Forty eight samples from dogs clinically diagnosed positive to leishmaniasis by IFAT, ELISA and PCR assays were used in this study. The PCR were performed with samples of popliteo lymph node, spleen and kidneys, and specific oligonucleotides to genus Leishmania. PCR products were digested with enzymes Hae III, Bsr I and Rsa I. The nucleotide sequences were determined automatically. For immunohistochemical purposes the sections of kidneys and anti-Leishmania polyclonal antibody were used. PCR-RFLP assay allowed us to identify the Leishmania (Leishmania) chagasi specie in all DNA samples from different tissues samples. DNA sequencing revealed products amplified belonging to specie responsible to cause visceral leishmaniasis, but it was not possible to distinguish the species. The immunohistochemical study revealed the presence of amastigotes organisms on intersticial inflammatory infiltrate from two dogs (4%), while the PCR assay detected the Leishmania sp in 37 dogs (77%). Based on the PCR-RFLP results, we concluded that it characterized as being Leishmania (Leishmania) chagasi species, etiologic agents of visceral leishmaniasis, in this group of animals; DNA sequence presented homology of 55 bp among all Leishmania spp studied. Additionally, the PCR performed... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Alexandre Lima de Andrade / Banca: Paola Castro Moraes / Banca: Maria Gisela Laranjeira / Resumo: O objetivo deste trabalho foi o de avaliar a cicatrização óssea de fraturas experimentais do radio de cães, tratadas ou não com o PRP autógeno, por meio de estudos radiográfico, densitométrico e histológico; bem como avaliar a expressão dos fatores de crescimento do PRP. Foram utilizados 21 cães inicialmente agrupados de acordo com o tempo de colheita de biopsia: aos sete dias (n=10) ou 60 dias (n=11) que foram alocados aleatoriamente em dois grupos experimentais: o grupo controle (G-controle, n=11) e o grupo PRP (G-PRP, n=10). Todos os animais foram submetidos à osteotomia e osteossíntese (fixador esquelético externo) do rádio direito, gerando-se um "gap" de 2,0mm, que foi preenchido ou não com PRP. Os estudos radiográficos e densitométricos foram realizados no pós-operatório imediato e até 60 dias de pós-operatório. As avaliações histológicas e imunoistoquímicas foram realizadas aos sete e 60 dias. Os dados encontrados foram tratados estatisticamente (p<0,05). Houve diferença significativa nas avaliações radiográficas e densitométricas entre os grupos. A avaliação histológica evidenciou uma cicatrização óssea mais avançada aos 60 dias no G-PRP e união óssea tardia no G-controle. Houve imunomarcação intensa do PDGF-B e TGF-β no G-PRP aos sete e 60 dias de pós-operatório. Conclui-se, que o PRP pode ser utilizado como terapia adjuvante, pois promoveu melhor cicatrização óssea em fraturas experimentais ("gap" de 2,0mm) do radio de cães tratadas com fixador esquelético externo. Ainda houve maior expressão do PDGF-B e TGF-β nos períodos, precoce e tardio, dos animais tratados com PRP / Abstract: The present article aimed to assess bone healing of experimental radial fractures, treated or not with autologous PRP, by means of radiographic, densitometric and histological studies and evaluate the expression of growth factors in PRP. Were used 21 dogs initially grouped according to the time of biopsy collection: seven days (n = 10) or 60 days (n = 11) were randomly assigned to two groups: the control group (G-control, n = 11) and the PRP group (G-PRP, n = 10). All animals underwent osteotomy and fixation (external skeletal fixation) of the right radius, generating a gap of 2.0 mm, which was filled or not with PRP. Radiographic and densitometry studies were performed in the immediate postoperative period and to 60 days after the surgery. The histological and immunohistochemical evaluations were performed at seven and 60 days. The data were treated statistically (p <0.05). There were significant differences in densitometric and radiographic evaluations between the groups. Histological evaluation showed a more advanced bone healing at 60 days in G-PRP and bone union late in the G-control. There was intense expression of PDGF-B and TGF-β in G-PRP from seven to 60 days postoperatively. It is concluded that the PRP can be used as adjuvant therapy, because it provided better bone healing in experimental fractures (gap of 2.0 mm) radius of dogs treated with external skeletal fixation. Although there was a higher expression of PDGF-B and TGF-β in periods, early and late, the animals treated with PRP / Mestre

Orientador: Luiz Cesar de Moraes / Banca: João Luiz de Miranda / Banca: Luiz Cesar de Moraes / Banca: Miguel Angel Castilho Salgado / Banca: Yasmin Rodarte Carvalho / Banca: Marlene Fenyo Soeiro de Matos Pereira / Resumo: Pacientes portadores de câncer na região de cabeça e pescoço quando submetidos à radioterapia podem apresentar vários tipos de manifestações clínicas, dentre elas a diminuição dos níveis salivares do fator de crescimento epidérmico (EGF). O EGF é uma pequena proteína (53 aminoácidos) que estimula a proliferação de células dos mamíferos, sendo encontrada em vários órgãos em desenvolvimento. Pode também exercer um papel fisiológico na erupção dentária ao interagir com outras moléculas como o fator de crescimento transformante β (TGF-β), a interleucina 1 (IL-1) e do fator de estimulação de colônia 1 (CSF-1), aumentando a reabsorção óssea e estimulando a quimiotaxia de células mononucleares. O objetivo deste trabalho foi verificar, por meio de reações de imuno-histoquímica, se a expressão do fator de crescimento epidérmico (EGF) pode ser alterada na odontogênese do primeiro molar superior de camundongos Mus musculus, após exposição de fêmeas prenhes a radioterapia, na dose de 3 Gray (Gy) ao décimo dia de gestação. Foram avaliados os germes dentários dos embriões aos 14, 16 e 18 dias de desenvolvimento pré-natal. As análises morfológica microscópica óptica e histomorfométrica demonstraram que o número de células epiteliais periféricas do órgão do esmalte imunopositivas para o EGF foi significativamente menor no grupo 3 Gy em relação ao grupo controle nos períodos de 14o (P<0,0001), 16o (P<0,0001<0,05) e 18o (P<0,0008) dias pré-natais. Processo FAPESP no 2008/54534-8. / Abstract: Malignant neoplasm orofacial patients when receiving radiation therapy can present several types of radiation injuries and clinical manifestations, such as decrease of the salivary epidermal growth factor (EGF) levels. EGF is a small protein (53 amino acids) that stimulates the proliferation of cells of the mammals, being found in several organs in development. EGF can exercise a physiological role in the dental eruption through the interaction with other molecules such as transforming growth factor beta (TGF-β), interleukin-1 (IL-1) and colony-stimulating factor-1 (CSF-1), which increases the bone reabsorption and stimulating the chemotaxis for mononuclear cells. The objective of this work was to verify through technique of immunohistochemistry, changes in the expression of the EGF in the odontogenesis of the first upper molar in Mus musculus mice embryos to the 14th, 16th and 18th days of intrauterine life. Pregnant mice was irradiated on the 10th gestacional day with a 3 Gray (Gy) dose. The microscopical mophological and histomorphometrical analysis showed a significant decrease in the number of EGF-positive dental epithelium cells in the 3 Gy group when compared with control group in 14th (P<0,0001), 16th (P<0,0001<0,05) and 18th (P<0,0008) intrauterine day periods. Supported by FAPESP no 2008/54534-8. / Doutor

Orientador: Flávia de Rezende Eugênio / Banca: Renée Laufer Amorin / Banca: Maria Cecília Rui Luvizotto / Resumo: Ahiperplasiaprostática benigna(HPB) é a afecção mais comum da próstata canina, porém, a comparação dos diferentes métodos diagnósticos como o exame de palpação retal, citologia, histologia e imunoistoquímica é pouco estudada nesta espécie, diferentemente do que ocorre no homem. Este trabalho teve por objetivo estudar, em vinte cães idosos, as alterações cito e histológicas com emprego de imunomarcadores, na glândula prostática. Em todas as glândulas observou-se HPB cística, associada ou não à hiperplasia glandular ou estromal. A imunomarcação com citoqueratina (CK) AE1/AE3 foi relevante em ácinos com epitélio achatado ou com proliferação acentuada. A Vimentina (VIM) V9 teve expressão moderada em áreas com hiperplasia estromal acentuada. O toque retal e o lavado prostático mostraram ser métodos de auxílio no diagnóstico das prostatopatias, sendo indispensável o uso da histopatologia para um diagnóstico definitivo. O emprego de imunomarcadores teciduais prostáticos infere que próstatas com HPB demonstram alterações metabólicas que respondem à imunomarcação em células hiperplásicas. / Abstract: Benign Prostatic Hyperplasia (BPH) is the most common affection of the canine prostate, however, the comparison of different diagnostic methods for BPH through, digital rectal examination, cytology, histology and immunohistochemistry has a few studies in this specie, unlike man. The purpose of this study was understood, in twenty old dogs, cytology, histology alterations using immunomarkers in the prostate gland. All the glands showed the presence of cystic BPH, associated or not with glandular or stromal hyperplasia. The immunomarking with AE1/AE3 cytokeratine was relevant in alveoli with flat epytelium or with a strong proliferation. V9 Vimentine showed to be moderate in areas with a deep stromal hyperplasia. Rectal palpation and the prostatic washing product compose auxiliary diagnostic methods for prostatic diseases, being undismissable the use of histopathology for a conclusive diagnosis. Prostatic tissue immunomarkers employment to conclude that the prostate with HPB demonstrate metabolic changes which react with immunomarking in hyperplasic cells. / Mestre

Resumo: O tumor odontogênico adenomatóide (TOA) é um tumor benigno composto de epitélio odontogênico com uma variedade de padrões arquiteturais histológicos, embebido em um estroma de tecido conjuntivo maduro e caracterizado por um crescimento lento, porém progressivo. O tumor odontogênico epitelial calcificante (TOEC) é definido como uma neoplasia odontogênica epitelial localmente invasiva, caracterizada pela presença de material amilóide que pode se tornar calcificado. Ambos recentemente reclassificados pela Organização Mundial da Saúde como tumores de epitélio odontogênico, com estroma fibroso maduro e sem ectomesênquima odontogênico. Com o objetivo de contribuir para o estabelecimento de tratamentos e prognósticos mais precisos, através de um melhor entendimento do comportamento biológico destes tumores, este estudo se propôs aavaliar o potencial proliferativo dos dois tumores que por vezes apresentam aspectos histológicos coincidentes, utilizando a técnica histoquímica do AgNOR e a imunohistoquímica de evidenciação de PCNA, P53 e Ki-67. Foram utilizados 5 espécimes de cada tumor. A análise comparativa dos resultados quantitativos/ qualitativos da histoquímica de evidenciação das NORs e dos resultados imunohistoquímicos para os três anticorpos estudados confirmam o comportamento patológico neoplásico benigno do tumor odontogênico adenomatóide e do tumor odontogênico epitelial calcificante. Foi observada distribuição positiva do PCNA nas células epiteliais das áreas sólidas e adenomatóides do TOA e nas áreas sólidas de células epiteliais poliédricas do TOEC, o que permite sugerir estes sítios como os responsáveis pelo crescimento dos respectivos tumores. / Abstract: The adenomatoid odontogenic tumor (OAT) is a benign tumor composed of odontogenic epithelium in a variety of histoarquitectural patterns, embedded in a mature connective tissue stroma and characterized by slow but progressive growth. The calcifying epithelial odontogenic tumor (CEOT) is defined as an epithelial odontogenic neoplasia locally invasive, characterized by the presence of amiloyd material that may become calcified. Both were recently reclassified by World Health Organization as tumors of odontogenic epithelium, with mature fibrous stroma without odontogenic ectomesenchyme. With the aim of contributing to the achievement of more precise treatments and prognosis, based on a better understanding of the biological behavior of these tumors, this study proposed evaluation of the proliferative potential of both tumors that sometimes present similar histological patterns, using AgNOR histochemistry and imunohistochemical expression of PCNA, P 53 and Ki- 67. There were analyzed 5 specimens of each tumor. Comparative analysis of quantitative/qualitative results of the NORs staining and the histochemical expression results of the antibodies studied confirm the benign neoplastic pathological behavior of the AOT and CEOT and the positive expression of PCNA distributed among epithelial cells of solid nodules and adenomatoid structures of AOT and among the polyhedral epithelial CEOT cells allowed suggest these sites as the responsible ones for respective tumoral growth. / Orientador: Marcelo Macedo Crivelini / Coorientador: Ana Maria Pires Soubhia / Banca: Alvimar Lima de Castro / Banca: Luis Antonio de Assis Taveira / Banca: Mireile São Geraldo dos Santos Souza / Banca: Symonne Pimentel Castro de Oliveira Lima Parizotto / Doutor

Resumo: Anticorpos monoclonais (AcMm) são imunoglobulinas produzidas por engenharia celular através da fusão de células tumorais com linfócitos B provenientes de organismos previamente imunizados contra o antígeno de interesse. As células recém criadas recebem a denominação de hibridomas, crescem indefinidamente em cultura por agregar características de imortalidade das células tumorais. A tecnologia de monoclonais compreende etapas seriadas, incluindo imunização, fusão, screening, clonagem, caracterização de especificidade dentre outras. O CD45 é um marcador expresso na superfície de todos os leucócitos humanos: linfócitos, eosinófilos, monócitos, basófilos e neutrófilos sendo, o maior componente da membrana de linfócitos, o que aumenta a probabilidade de obtenção de AcMm com este perfil em protocolos de imunização com linfócitos. Este marcador é amplamente utilizado em diagnóstico por citometria de fluxo, no acompanhamento de pacientes HIV+, na classificação de leucemias e linfomas, quantificação de células CD34+ para transplantes de medula óssea e, também em imunohistoqu ímica auxiliando na subtipagem das neoplasias, principalmente linfomas (Hodgkin, não Hodgkin e outras categorias) e leucemias de células B e T. Assim, este trabalho teve por objetivo a caracterização de anticorpo monoclonal anti-CD45 desenvolvido in house e validação deste em aplicações diagnósticas envolvendo citometria de fluxo e imunohistoqu ímica, comparando-o com anticorpos monoclonais comerciais, visando minimização dos custos dessas técnicas. Foram utilizadas 50 amostras de sangue excedente de doadores para o grupo controle e 48 amostras de sangue de pacientes HIV+ para validação do AcMm em citometria de fluxo e analisados 114 fragmentos em lâmina de Tissue Microarray - TMA provenientes de 38 amostras de amígdalas para validação do AcMm em imunohistoqu ímica... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Monoclonal antibodies (mAb) are immunoglobulins produced by cell engineering through fusion of tumor cells and B lymphocytes from organisms previously immunized against the antigen of interest, generating thus hybridomas that indefinitely grow in culture since they aggregate immortality characteristics of tumor cells capable of secreting antibodies. The production of such antibodies consists of sequential steps, including immunization, fusion, screening, cloning, and specificity characterization. CD45 is a marker expressed in the surface of all human leukocytes: lymphocytes, eosinophils, monocytes, basophils, and neutrophils. Besides, CD45 is the major component of lymphocyte membranes, which increases the probability of obtaining mAb presenting such profile in immunization procedures using lymphocytes. This marker has been widely used in diagnosis through flow cytometry, besides monitoring of HIV+ patients, classification of leukemia and lymphomas, quantification of CD34+ cells for bone marrow transplantation, and also in immunohistochemistry, helping in subtyping of neoplasms, mainly lymphomas (Hodgkin’s, non-Hodgkin and other categories) and B- and T-cell leukemia. Thus, this work aimed to characterize the in-house-developed anti-CD45 monoclonal antibody besides its validation in diagnostic applications involving flow cytometry and immunohistochemistry through comparison with commercial monoclonal antibodies in order to reduce the costs of such techniques. Fifty samples of extra blood from donors were used in the control group, and 48 blood samples from HIV+ patients were used for mAb validation in flow cytometry. For mAb immunohistochemical validation, 114 fragments from 38 amygdala samples were analyzed in a Tissue Microarray - TMA slide. In flow cytometry, the commercial anti-CD45 and the likely in-house-obtained anti-CD45 (LINB5 clone) did not significantly differ concerning cell... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Elenice Deffune / Coorientador: Marjorie de Assis Golim / Banca: Mirthes Uieda / Banca: Maria Aparecida Custódio Domingues / Mestre

Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Maricy Apparicio Ferreira / Banca: Marcela Marcondes Pinto Rodrigues / Resumo: O estudo dos tumores mamários em cadelas revela-se como um excelente modelo para a investigação das neoplasias mamárias em mulheres e tanto no homem quanto nos animais a resposta imune pode interferir no desenvolvimento de neoplasias. Este trabalho teve como objetivo avaliar a eficácia e estimulação do sistema imune celular em tumores mamários de fêmeas caninas por meio da expressão de CD4, CD8, CD4+CD25+ (Foxp3), CD28, CD152 e CD56 (NK). A avaliação da expressão desses marcadores foi avaliada por imunoistoquimica, utilizando-se o método estreptoavidina-biotina-peroxidase. Para a realização desse estudo foram coletadas 20 amostras de tumores mamários de fêmeas caninas e essas divididas de acordo com a classificação histopatológica em 2 grupos: 10 carcinomas simples e 10 carcinomas complexos. Em relação aos resultados não se observou diferenças quanto à quantificação das células imunomarcadas quando comparadas segundo o tipo tumoral. No caso dos carcinomas simples evidenciou-se diferença entre a quantificação das células imunomarcadas (P< 0,05) pelo anticorpo CD28 (p=0,03) e Foxp3 (p=0,01) sendo menores que todas as demais marcações. Já para os carcinomas complexos houve diferença entre a quantificação das células imunomarcadas (P= 0,05) pelo anticorpo CD-152 que apresentou valor maior que as demais marcações com exceção do CD8. Os marcadores CD28, CD56 e Foxp3 foram menores que o CD8 (p=0,01) sendo o Foxp3 menor que todos os outros marcadores. No presente estudo observou-se que existe um controle negativo do sistema imune em ambos os casos, porém esse controle negativo foi mais evidente no carcinoma complexo / Abstract: The mammary tumor study in female dogs is revealed as an excellent model for the investigation of breast tumors in humans. On both species, the immune system can interfere on neoplasia progression. The aim of this study was to evaluate the immunolocalization and quantification of CD4, CD8, CD4+CD25+ (Foxp3), CD28, CD152 and NK in tumour lymphocyte infiltration, to evaluate the efficacy of stimulation and immune system defense in canine mammary carcinoma. The expression of these markers using immunohistochemistry was made by streptoavidin-biotin peroxidase method. The tissues were collected from twenty mammary carcinomas, subdivided in ten simple carcinomas and ten complex carcinomas of twenty female dogs. This study identified no significant differences on quantification of positive cellular staining in simple carcinoma compared with complex carcinoma. The samples of simple carcinoma resulted significant differences on positive staining between the antibodies CD28 (p=0,03) and Foxp3 (p=0,01) and these markers revealed less quantitative staining compared with the others markers (CD4, CD8, CD152 and NK). The samples of complex carcinoma resulted significant differences on cellular staining quantification by the antibody CD152 (p<0,05) compared with the others markers (CD4, Foxp3, CD28, and NK) with exception when compared with CD8. The immune quantification of positive cellular staining about the markers CD28, CD56 and Foxp3 were smaller than CD8 (p=0,01), and the Foxp3 was smallest than those others markers. It was concluded that exist a negative control of immune system to complex and simple mammary carcinoma, but, this negative control was more significant in female dogs with complex mammary carcinoma / Mestre

Orientador: Marcelo Macedo Crivelini / Resumo: As leucoplasias são lesões orais que podem apresentar vários aspectos clínicos e histológicos e são associadas a malignidade geralmente quando apresentam alterações displásicas. Contudo, essas transformações podem ocorrer em lesões sem displasia que apresentam aspecto clínico inocente. Por esse motivo nossa proposta foi estudar a expressão imuno-histoquímica do p53 e PCNA em leucoplasias sem displasias, buscando correlacionar os resultados apenas com o grau de queratinização epitelial. Para isso foram utilizados as leucoplasias Grau I, II e III de Grinspan, num total de 24 lesões, todas localizadas em mucosa jugal. A maior parte das leucoplasias, em seus diferentes graus de queratinização, apresentou expressão de p53 e PCNA. A marcação do p53 restringiu-se às camadas basal e parabasal, enquanto a do PCNA ocorreu em praticamente todas as camadas epiteliais. O padrão de expressão desses marcadores foi histologicamente e estatisticamente semelhante entre as lesões com esta variação de queratinização. Ficou evidente que os epitélios não displásicos das leucoplasias possuem sinais sub-microscópicos de alterações direcionadas à transformação maligna e o grau de queratinização não se correlacionou ao maior risco desse acontecimento. / Abstract: Leukoplakias are oral lesions that may have many clinical and histologic aspects and they are usually associated with malignancy when dysplastic alterations are shown. However, these transformations may occur in non dysplastic lesions that show harmless clinical aspect. For this reason, our proposal was to study the p53 and PCNA immunohistochemical expression in no dysplastic leukoplakias, trying to correlate the results with the epitelial keratinization degree only. For this, 24 leykoplakias were used, lesions with degree I, II and III of Grinspan, all located in buccal mucosa. Most of the leukoplakias showed p53 and PCNA expression in their different keratinization degrees. The p53 marking were confined at basal and parabasal layer, while the PCNA marking occurred in practically all epithelia layers. The expression pattern of these markers were histologically and estatistically similar between the lesions with this keratinization variation. It was evident that non dysplastic epithelium of leukoplakias have no visible signs of the alterations at the microscope which leads to malignant transformation, and that the keratinization degree did not correlate to greater risk of this event. / Mestre

Orientador: João Carlos Pinheiro Ferreira / Abstract: Thirty Nelore cows were submitted to estrus synchronization using a single administration of lecirelina, at 25 mg dosage and seven days later, D+ Cloprostenol at, 0.15 mg being both administered intra-muscularly. The first 16 cows ovulating were selected and daily evaluation was performed by rectal palpation and ultrasound of the female reproductive tract followed by blood sampling. Endometrial samples were collected by biopsy at days 0, 5, 9, 13 and 19 of the estrous cycle to detect the presence of estrogen and progesterone receptors by immunohistochemistry. The cows were distributed in 3 groups: control (without endometrial sampling, n=8), D0 (sampling initiated at the day of ovulation, n=4) and D13 (sampling initiated at day 13 of the estrous cycle, n=4). The mean inter-estrus interval was 23.80 l 2.70. The progesterone plasma mean concentrations ranged from 0.06 ng/mL to 4.53 ng/mL, decreasing throughout the cycle and reaching the lowest value close to ovulation. The pattern was characterized by increasing values during the luteal phase. The estradiol 17-b mean concentrations ranged from 6.22 pg/mL to 14.10 pg/mL and these values did not change throughout the estrous cycle. The results obtained by the rectal palpation revealed that the uterine tone and thickness were changing throughout the estrous cycle, being elevated during the period close to ovulation, and they were decreased during the progesterone phase. The ultrasound demonstrates that the amount of fluid content on the cranial vaginal compartment and in the uterine horn lumen was modified throughout the cycle. The largest amount of fluid was observed during the closest period to estrus and small fluid accumulation was observed during the progesterone phase. However, cows that were submitted to endometrial sampling presented more fluid during the progesterone phase... / Mestre

Resumo: A deficiência de estrógeno e de cálcio na dieta são condições que potencialmente causam alterações no osso alveolar e como consequência podem agravar a doença periodontal. O objetivo deste estudo foi avaliar a influência da deficiência estrogênica, associada ou não à dieta deficiente em cálcio, sobre a perda óssea, a atividade de osteoclastos e os marcadores teciduais de remodelação óssea, na doença periodontal induzida em ratas. Foram utilizadas 96 ratas, aos 90 dias de idade, das quais 64 foram submetidas à ovariectomia e 32 à falsa-ovariectomia (Sham). Das 64 ratas ovariectomizadas, 32 receberam dieta comercial padrão (OVZ) e as outras receberam dieta deficiente em cálcio (OVZ'). Em todas as ratas, 60 dias após a cirurgia, foi induzida doença periodontal por meio da colocação de ligadura ao redor do primeiro molar inferior esquerdo. Com 3, 7, 14 e 30 dias após a inserção das ligaduras, efetuou-se a eutanásia. As hemi-mandíbulas esquerdas foram desmineralizadas e processadas para a obtenção de cortes microscópicos. Os cortes corados por H.E. foram analisados qualitativamente e quantitativamente por histomorfometria, utilizando-se planimetria por contagem de pontos, com o auxilio do programa Image J. Foi realizada reação enzimoistoquímica para marcação da fosfatase ácida tartarato resistente (TRAP) e reação imunoistoquímica para marcação do receptor ativador de NF-kappa B (RANK), de seu ligante (RANKL) e de osteoprotegerina (OPG). Os dados obtidos foram analisados estatisticamente por meio do teste de Mann-Whitney. Os resultados mostraram que o grupo Sham apresentou maior quantidade de matriz óssea e menor quantidade de marcação de células TRAP+ comparado com o grupo OVZ. Entretanto, o grupo OVZ apresentou menor quantidade de matriz óssea e marcação similar de células TRAP+ comparado ao grupo OVZ'. Em relação aos marcadores... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Estrogen and dietary calcium deficiencies are conditions that potentially lead to alveolar bone alterations and might consequently worsen periodontal disease. The aims of the present study were to evaluate estrogen deficiency associated or not to dietary calcium deficiency over bone loss and to evaluate the activity of osteoclasts and bone remodeling tissue markers on induced periodontal disease in rats. Ninety six rats aging 90 days were used in the present study, being 64 submitted to ovariectomy and 32 to sham-ovariectomy (Sham). Thirty-two rats from the ovariectomized group received standard diet (OVZ), while the rest received calcium deficient diet (OVZ'). Periodontal disease was induced 60 days after the surgery in all rats by placing a ligature surrounding the first mandibular left molar. Euthanasia was performed 3, 7, 14 and 30 days after ligature placement. Left hemi-mandibles were demineralized and processed for obtaining the microscopic slices. HE stained slices were qualitatively and quantitatively analyzed by histomorphometry using a point-counting planimetry, and the Image J software. Tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) was marked by enzyme histochemistry, while factor NF-Kappa B receptor activator (RANK), its ligand (RANKL) and osteoprotegerin (OPG) were marked by immunohistochemistry. Obtained data were submitted to statistical analysis by Mann-Whitney test. The results revealed that Sham group presented greater bone matrix quantity and lower TRAP+ cell in comparison to OVZ group. However, OVZ group presented lower bone matrix quantity and similar TRAP+ cells as OVZ' group. Regarding bone remodeling markers, Sham group presented the greatest marking index for OPG and RANKL, being the RANK quantity similar to OVZ group. The OVZ' group presented higher marking indices for RANK and similar levels of OPG and RANKL in comparison to OVZ. It was concluded that... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Yasmin Rodarte Carvalho / Coorientador: Luana Marotta Reis de Vasconcellos / Banca: Jean Nunes dos Santos / Banca: Renata Falchete do Prado / Banca: Luiz Eduardo Blumer Rosa / Banca: Maria Aparecida Neves Jardini / Doutor