Mestrado em Oncologia Molecular / Master Degree Course in Molecular Oncology / O cancro da mama é a causa mais frequente de morte por cancro nas mulheres do mundo inteiro. O objectivo principal deste estudo consistiu na determinação dos níveis de DNA circulante e a avaliação do seu papel na discriminação entre pacientes com cancro e indivíduos saudáveis, e determinação dos níveis de DNA circulante em plasma de pacientes tratados cirurgicamente, através do método quantitativo de PCR (Polymerase Chain Reaction) em tempo real. O protocolo standard para a quantificação do DNA livre circulante em plasma foi efectuado em amostras de 175 pacientes com cancro da mama e 80 indivíduos controlo saudáveis. A quantificação foi realizada através da amplificação do gene hTERT (telomerase reverse transcriptase gene) por PCR em tempo real. Foram encontrados níveis mais elevados de DNA circulante livre nos pacientes com cancro, comparando com os indivíduos controlo (105.2 vs 77.06 ng/ml, p<0.001 ). Foram também observadas diferenças estatisticamente significativas nos níveis de DNA circulante em pacientes antes e após cirurgia (105.2 vs 59.0 ng/ml, p=0.001). A presença de concentrações elevadas de DNA livre em plasma pode constituir um forte factor de risco para presença de cancro da mama, conferindo um risco aumentado para o desenvolvimento da doença (OR, 12.32; 95% CI, 2.09 52.28; p<0.001). Níveis elevados de DNA circulante livre em plasma estão também correlacionados com um decréscimo na sobrevivência global dos pacientes. Não foi, contudo, encontrada nenhuma associação entre os parâmetros clínico-patológicos e as concentrações de DNA circulante livre. Em conclusão, o DNA circulante livre em plasma encontra-se significativamente aumentado em pacientes com cancro da mama, estando associado a um aumento do risco para desenvolver cancro da mama e a um decréscimo no tempo sobrevivência dos pacientes. Deste modo, a quantificação do DNA circulante em plasma através do PCR em tempo real poderá vir a ser uma opção com potencial de aplicabilidade clínica, para a detecção precoce do cancro da mama, complementando outros métodos já existentes na monitorização da doença. / Breast cancer is the leading cause of cancer death in women worldwide. The purpose of our study was to determine whether the amounts of circulating DNA could discriminate between breast cancer patients and healthy individuals by using real-time PCR based DNA quantification methodology and determine the kinetics of circulating plasma DNA in surgically treated patients. Our standard protocol for quantification of cell free plasma DNA involved 175 consecutive patients with breast cancer and 80 healthy controls. The quantification was perfomed by real-time PCR amplification of the human telomerase reverse transcriptase gene (hTERT). We found increased levels of circulating DNA in breast cancer patients compared to control individuals (105.2 vs 77.06 ng/ml, p<0.001). We also found statistically significant differences in circulating DNA amounts in patients before and after breast surgery (105.2 vs 59.0 ng/ml, p=0.001). Increased plasma cell free DNA concentration was a strong risk factor for the presence of breast cancer, conferring an increased risk for the development of this disease (OR, 12.32; 95% CI, 2.09 52.28; p<0.001). High levels of plasma DNA were also correlated with a decrease in patients overall survival. There were no association between clinicopathological parameters and concentrations of cell free circulating DNA. In conclusion, cell-free DNA is significantly increased in plasma of breast cancer patients, which is associated with an increased risk for the presence of this disease and decrease of patient s survival. Therefore, quantification of circulating DNA by real-time PCR may be a good and simple tool for early detection of breast cancer with potential to clinical applicability together with other current methods used for monitoring the disease.

Mestrado em Medicina e Oncologia Molecular / Master Degree Course in Molecular and Oncology Medicine

Mestrado em Medicina e Oncologia Molecular / Master Degree Course in Molecular and Oncology Medicine

Mestrado em Medicina e Oncologia Molecular / Master Degree Course in Molecular and Oncology Medicine / Introdução: A activação do sistema dos peptídeos natriuréticos (PN s) desempenha um papel importante nos mecanismos de adaptação renal à expansão de volume. Apesar de estar descrito um aumento da actividade do sistema dos PN s nas situações de redução da massa renal como a uninefrectomia e a insuficiência renal crónica (IRC), o papel deste sistema na progressão da doença renal e no aumento da pressão arterial permanece ainda por esclarecer. O objectivo do presente trabalho foi o de avaliar a modulação renal do sistema dos PN s em modelos experimentais de uninefrectomia e de insuficiência renal crónica. Material e Métodos: Ratos wistar machos (n=66) foram submetidos a uninefrectomia (Unx) ou nefrectomia de ( nx). Duas, 10 e 26 semanas após a cirurgia procedeu-se à avaliação da hemodinâmica cardíaca, dos níveis plasmáticos de BNP, da resposta natriurética à expansão de volume e da expressão renal do receptor efector (RPNA) e do receptor de clearance (RPN-C) dos PN s. Resultados: Os animais Unx e nx apresentaram ao longo do estudo um aumento progressivo da pressão arterial sistólica e diastólica e um aumento sustentado dos níveis plasmáticos de BNP. Verificou-se uma diminuição precoce e sustentada na expressão do RPN-A na medula renal dos animais nx enquanto que os níveis de ARNm do RPN-C aumentaram no córtex renal às 10 e 26 semanas após a cirurgia. Nos animais Unx os níveis de ARNm do RPN-A na medula renal apresentaram-se diminuídos às 10 semanas, mas aumentaram de forma marcada às 26 semanas após a cirurgia. No córtex renal dos animais Unx observou-se também um aumento da expressão do RPN-A às 26 semanas. Conclusões: No rim remanescente dos animais Unx e nx verifica-se uma modulação dependente do tempo do RPN-A e do RPN-C, que é distinta no córtex e na medula renal. A alteração da expressão renal dos receptores dos PN s depende do grau de ablação da massa renal e ocorre independentemente da activação sistémica do sistema dos PN s. Estes resultados poderão contribuir para o esclarecimento do papel desempenhado pelo sistema dos PN s nos mecanismos de adaptação à perda de massa renal.

El ácido 2-hidroxioleico (2OHOA) es un fármaco antitumoral diseñado para regular la estructura y composición de los lípidos de membrana y la función de importantes proteínas de membrana. El objetivo principal de este trabajo fue estudiar cómo el 2OHOA modula la composición lipídica y la estructura de membrana en las células tumorales. Se observó que el 2OHOA indujo profundas alteraciones en el contenido de fosfolípidos, aumentando el contenido de esfingomielina y disminuyendo el contenido de fosfatidiletanolamina y fosfatidilcolina. Este efecto fue específico contra las células cancerosas, ya que el tratamiento no afectó la composición lipídica de las células no tumorales MRC-5 de fibroblastos humanos. El aumento de SM se debió a una activación rápida y específica de las SM sintasas. Como consecuencia de la activación sostenida de la SMS, todo el metabolismo de los esfingolípidos se vio afectado. Finalmente, se evaluó el impacto de todos estos cambios sobre las propiedades biofísicas de membrana mediante espectroscopia de fluorescencia / 2-Hydroxyoleic acid (2OHOA) is a potent antitumor drug that was designed to regulate membrane lipid composition and structure and the function of important membrane proteins. The main goal of this work was to study how 2OHOA modulates the membrane lipid composition and structure of tumor cells. 2OHOA induced dramatic alterations in phospholipid content, increasing sphingomyelin mass, and decreasing phosphatidyl-ethanolamine and phosphatidylcholine. This effect was specific against cancer cells as it did not affect non-tumor MRC-5 cells. The increased SM mass was due to a rapid and highly specific activation of SM synthases. As a consequence of the sustained activation of SMS, the whole sphingolipid metabolism was affected. Then, the impact of all these changes on membrane biophysical properties was evaluated by fluorescence spectroscopy