Le lupus érythémateux disséminé est une maladie autoimmune systémique déclenchée par une combinaison de facteurs génétiques, hormonaux et environnementaux. Il se caractérise notamment par la présence d’autoanticorps dirigés principalement contre des éléments nucléaires. Les traitements proposés aux patients sont essentiellement palliatifs et non curatifs et engendrent de nombreux effets secondaires indésirables. Des nouvelles stratégies thérapeutiques plus spécifiques sont basées sur l’utilisation de peptides dérivés d’autoantigènes. Le peptide P140, découvert au laboratoire, est un candidat prometteur dans ce domaine. Il correspond à la séquence 131-151 de la protéine splicéosomale U1-70K et est chimiquement phosphorylé sur le résidu sérine 140. Son administration à des souris lupiques MRL/lpr diminue la sévérité des symptômes sans effet immunosuppresseur. Il est actuellement évalué chez l’homme dans un essai clinique de phase III. Le mécanisme d’action du peptide P140 commence à être bien connu chez la souris lupique. Récemment, mon équipe à montré que le peptide P140 affecte directement ou indirectement deux formes d’autophagie, la macroautophagie et l’autophagie médiée par les chaperonnes (CMA). De plus, il réduit l’expression des molécules du CMH-II ce qui conduirait à une baisse de la présentation antigénique et à une diminution de l’activation des LT autoréactifs. Finalement, une baisse de la production des autoanticorps, notamment des anticorps reconnaissant l’ADN double brin est observée suite à l’injection du peptide aux souris. L’objectif de mon projet de thèse a été de consolider ces résultats et également d’étudier le mode d’action du peptide chez l’homme puisque ceci n’avait pas encore été fait. Nous avons démontré que comme chez la souris, le peptide P140 réduit l’expression des molécules du CMH-II à la surface des LB de patients lupiques. De plus, nous avons montré que plus le score d’activité de la maladie est élevé, plus l’effet du peptide sur l’expression du CMH-II est important. En revanche, bien que nous ayons confirmé la dérégulation de la macroautophagie dans les LT CD8+ de patients, le peptide P140 ne semble pas affecter ce processus cellulaire. Nous étudions actuellement l’effet du peptide sur la CMA. Enfin, nous avons montré que chez la souris MRL/lpr et chez l’homme, le peptide P140 réduit le nombre de plasmablastes. Cette altération de la différenciation des LB conduit à une baisse de la production des IgM et des IgG, ce qui explique son effet bénéfique sur la maladie lupique. / Systemic lupus erythematosus (SLE) is a systemic autoimmune disease triggered by genetic, hormonal and environmental factors. It is mainly characterized by the presence of autoantibodies directed against nuclear elements. Most of current treatments proposed to patients are palliative and not curative and lead to numerous side effects. New therapeutical strategies are based on the use of peptides derivated from autoantigens. The P140 peptide discovered in our laboratory is a promising candidate. It corresponds to the 131-151 sequence of the U1-70K spliceosomal protein and is phosphorylated on ser140 residue. Its administration to MRL/lpr lupus-prone mice reduces symptom severity without immunosuppressive effect. It is currently evaluated in phase III of clinical trial. The mechanism of action of P140 peptide has been mostly elucidated in lupus mice. Recently, my team has shown that P140 peptide affects direclty or indireclty macroautophagy and chaperone-mediated autophagy (CMA), two major forms of autophagy. Furthermore, it reduces the expression of MHC class II molecules, which leads to the decrease of antigenic peptide presentation and activation of autoreactive T cells. Finally, a reduction of autoantibodies levels against double stranded DNA is shown after P140 injection in mice. The aim of my thesis project was to consolidate these data and to study the mode of action of P140 in humans since this was not done until now. We have shown that like in lupus-prone mice, P140 peptide reduces expression of MHC-II molecules on the surface of B cells from SLE patients. Furthermore, we have demonstrated that higher the disease activity score was, higher the effect of P140 peptide was. Unfortunately, although we confirmed the dysregulation of macroautophagy in CD8+ T cells from SLE patients, P140 peptide does not seem to affect this cellular process. We are currently studying the effect of the peptide on CMA. Finally, we have shown that in both MRL/lpr mice and humans, P140 peptide reduces the number of plasmabasts. This alteration of B cell differentiation lead to the decrease of IgM and IgG production, thus explaining the P140’ benefical effect on the course of lupus disease.

Le lupus érythémateux disséminé est une maladie autoimmune systémique provoquant des lésions tissulaires graves. Notre laboratoire a découvert un peptide phosphorylé, appelé P140, présentant des propriétés thérapeutiques pour le traitement du lupus. Le mode d’action du peptide P140 dans le traitement du lupus repose sur son interaction avec la protéine de choc thermique HSPA8/HSC70 et l’objectif de mon projet de thèse a été de consolider et compléter ce mécanisme. Nous avons démontré qu’après internalisation par endocytose dépendante des clathrines, le peptide P140 se localise rapidement au sein du lysosome des lymphocytes B. Dans cet organelle, il réduit l’import de substrat cytosolique par autophagie dépendante des chaperonnes en ciblant et réduisant l’activité de HSPA8 intralysosomale. Nous avons également entrepris une analyse comparative du répertoire des lymphocytes T et B des souris lupiques par rapport aux souris saines. Nos résultats révèlent un changement dans la fréquence de certains réarrangements du TCR entre les souris lupiques et les souris saines et un effet bénéfique du peptide P140 sur certains réarrangements associés au lupus. / Systemic lupus erythematosus is a multi-organ autoimmune disease provoking tissue damages. Our laboratory has discovered a phosphorylated peptide, named P140, with therapeutic activities in lupus. The mode of action used by P140 peptide relies on its interaction with the heat shock protein HSPA8/HSC70. The aim of my thesis project was to consolidate and complete this HSPA8-dependent mechanism. We have demonstrated that, upon internalization by clathrin-mediated endocytosis, P140 peptide homes rapidly into B cell lysosome. In this organelle, the peptide reduces chaperone-mediated autophagy by interacting and inhibiting intralysosomal HSPA8 activity. We also performed a comparative analysis of T cell and B cell repertoire on lupic mice compared to healthy mice Our results show a modification in the frequency of certain TCR rearrangements between lupus-prone mice and healthy mice and a beneficial effect of P140 peptide on certain lupus-associated rearrangements.