A presente tese teve como objetivo realizar a descrição dos microrganismos que já foram isolados ou detectados em infecções endodônticas de dentes decíduos em pacientes infantis por meio de uma revisão sistemática, além de avaliar a composição bacteriana e a presença de genes de resistência a antibióticos em amostras de saliva (S), biofilme supragengival (SB), dentina (D) e câmara pulpar (RC) de dentes decíduos com infecções endodônticas. No Capítulo 1, realizou-se revisão sistemática em bancos de dados eletrônicos, tendo sido incluídos estudos clínicos que avaliaram presença de microrganismos em dentes decíduos com infecções endodônticas, por meio de análise microbiológica com cultivo ou de métodos moleculares. Foi realizada análise descritiva dos dados. A análise identificou 44 títulos, sendo revisados, na íntegra, 17 artigos. Foram selecionados 8 estudos clínicos, de acordo com os critérios de inclusão determinados. Por meio de busca manual, foram selecionados 2 artigos adicionais, totalizando 11 artigos excluídos desta revisão. Nos oito estudos clínicos incluídos na revisão sistemática, a identificação dos microrganismos envolvidos nas infecções endodônticas foi realizada por meio de várias técnicas como: cultura microbiológica, hibridização DNA-DNA, PCR e suas variações, clonagem, sequenciamento e pirossequenciamento, confirmando a diversidade de microrganismos envolvidos nas infecções endodônticas de dentes decíduos. A análise dos dados sugere que as infecções endodônticas em dentes decíduos são causadas por múltiplas combinações de espécies de micro-organismos, confirmando a sua natureza polibacteriana. No Capítulo 2, amostras de S, SB, D e RC foram coletadas de pacientes infantis com infecções endodônticas. O perfil das comunidades microbianas foram obtidos por meio da análise da região espaçadora intergênica relacionada aos genes 16S e 23S rRNA (PCR-RISA). Determinaram-se e índices de riqueza, dominância, índice de Shannon, índice de Chao-1 (alfa-diversidade) e análise multivariada de conglomerados (método UPGMA e índice de Similaridade de Bray-Curtis) e análise de coordenadas principais (PCoA) (beta-diversidade). Há um baixo grau de agrupamento entre as amostras de S, BS, D e RC, obtidas de um mesmo participante. Se presentes, os agrupamentos acontecem para sítios contíguos, mas com baixo percentual de similaridade. Amostras de um mesmo ecossistema obtidas de diferentes participantes abrigam comunidades bacterianas distintas, com baixa similaridade. Não parece haver uma relação entre a presença de um sinal/sintoma clínico e acréscimo no perfil de similaridade das comunidades bacterianas em RC. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os índices de alfa-diversidade (riqueza, dominância, Shannon e Chao-1) entre S, SB, D e RC. O uso prévio de antibióticos não modificou os resultados de alfa diversidade ou de beta diversidade obtidos. No Capítulo 3, verificou-se a distribuição dos genes de resistência bacteriana aos principais grupos de antibióticos em S, SB, D, e RC dentes decíduos em pacientes infantis com infecções endodônticas e também de amostras de saliva dos responsáveis (R) por meio de PCR para os genes cfxA/cfxA2, blaTEM, blaZ, ampC, mecA, mefA, ermB, ermC, tetQ, tetM, tetW, linB, lsaB. Realizou-se análise estatística descritiva e análise multivariada de conglomerados (método UPGMA e índice de Similaridade de Bray-Curtis). Dos pacientes selecionados, 3/8 utilizaram antibiótico previamente à coleta. Nenhum gene de resistência foi observado em todos os ecossistemas de um mesmo participante. Os genes mais frequentemente detectados foram os genes de resistência à tetraciclina tetQ e tetW. Não foram detectados nas amostras os genes ampC, mecA, lnuB e lsaB. A presença simultânea de um gene em dois nichos ocorre em ecossistemas contíguos. Não se observa um comportamento uniforme quanto ao perfil de agrupamento de diferentes amostras de um mesmo participante, e nem entre as amostras de saliva do participante infantil (S) e seu responsável (R). Há múltiplos perfis de distribuição de genes de resistência a agentes antimicrobianos em amostras de ecossistemas bucais contíguos em um mesmo paciente portador de infecção endodôntica. A análise conjunta dos dados permite concluir que cada um dos ecossistemas da cavidade bucal de crianças portadoras de infecções endodônticas avaliado apresenta espécies bacterianas e fatores de virulência distribuídos de forma única e distintas, a partir de uma perspectiva de análise de diversidade. / This thesis aimed assessing information on the bacteria that were isolated/detected in teeth with endodontic infections from infant patients through a sistematic review of the literature. Furthermore, the bacterial composition and the presence of resistance genes to antimicrobial agents was determined in saliva (S), in supragengival biofilm (SB), in dentine (D) and in pulp cavity (RC) samples. In the Chapter 1, a sistematic review was conducted in electronic databasis. Clinical studies that evaluated the presence of microorganims in primary teeth with endodontic infections through culture and molecular methods were included. Fourty-four titles were selected and 17 articles were fully revised. Eight clinical studies were selected for data extraction. Two articles were included following the hand search. According to the data analysis, microbial identification was performed by culture, DNA-DNA hybridization, PCR, cloning and sequencing and next-generation sequencing methods. A high diversity in the microbial components identificated/detected was reported. Endodontic infections in primary teeth are polymicrobial, with a multi-species consortia. In the Chapter 2, the S, SB, D and RC samples were collected from infanti patients with endodontic infections. The ribossomal intergenic spacer analysis (PCR-RISA) for the 16S-23S rRNA genes interspacer region was employed to determine the bacterial fingerprint for each sample. Metrics for alfa and beta diversity were employed, such as richness, dominance, Shannon Index, Chao-1 Index, cluster analysis (UPGMA, Bray-Curtis Index) and principal coordenate analysis (PCoA). There was a low grouping profile for shared samples of S, BS, D and RC from the same participant. When detected, clustering behavior was observed for contiguous sites, with low percentual of similarity between them. Samples from the same site but from different subjects harboured distinct bacterial communities, with low similarity. No clinical sign/symptom was detected as a grouping factor for RC sample from different subjects. No statistical difference was detected for the alfa-diversity indexes among S, SB, D and RC. The previous exposition to antimicrobial agentes has no effect over the alfa- and beta-diversity indexes. In the Chapter 3, the distribution of bacterial genes for antimicrobial resistance in S, SB, D and RC was determined in samples from children with endodontic infections and their relatives (R) by PCR. The presence of the genes cfxA/cfxA2, blaTEM, blaZ, ampC, mecA, mefA, ermB, ermC, tetQ, tetM, tetW, linB, and lsaB was detecte in the samples. Descriptive statistical analysis and multivariate anlysis (cluster analyisis, UPGMA and Bray-Curtis similarity index) were carried out. Three out of 8 patients had antimicrobial agents previously to the apointment. No resistance gene was shared by all envirnments in the same participant. The most frequently detected genes were tetQ and tetW. The genes ampC, mecA, lnuB, and lsaB were not detected in any the samples. The same gene was detected only in two contiguous niches. Clustering analysis revealed no grouping pattern among the samples, despite they were or not from the same participant or his/her relative. Multiple profiles of resistance genes distribution were detected in the oral cavity samples from infant participants. The oral cavity in children with endodontic infection is a complex environment that harbours unique bacterial communities profiles and a distinct distribution of resitance genes to antimicrobial agents, considering an ecological perspective.

A presente tese teve como objetivo realizar a descrição dos microrganismos que já foram isolados ou detectados em infecções endodônticas de dentes decíduos em pacientes infantis por meio de uma revisão sistemática, além de avaliar a composição bacteriana e a presença de genes de resistência a antibióticos em amostras de saliva (S), biofilme supragengival (SB), dentina (D) e câmara pulpar (RC) de dentes decíduos com infecções endodônticas. No Capítulo 1, realizou-se revisão sistemática em bancos de dados eletrônicos, tendo sido incluídos estudos clínicos que avaliaram presença de microrganismos em dentes decíduos com infecções endodônticas, por meio de análise microbiológica com cultivo ou de métodos moleculares. Foi realizada análise descritiva dos dados. A análise identificou 44 títulos, sendo revisados, na íntegra, 17 artigos. Foram selecionados 8 estudos clínicos, de acordo com os critérios de inclusão determinados. Por meio de busca manual, foram selecionados 2 artigos adicionais, totalizando 11 artigos excluídos desta revisão. Nos oito estudos clínicos incluídos na revisão sistemática, a identificação dos microrganismos envolvidos nas infecções endodônticas foi realizada por meio de várias técnicas como: cultura microbiológica, hibridização DNA-DNA, PCR e suas variações, clonagem, sequenciamento e pirossequenciamento, confirmando a diversidade de microrganismos envolvidos nas infecções endodônticas de dentes decíduos. A análise dos dados sugere que as infecções endodônticas em dentes decíduos são causadas por múltiplas combinações de espécies de micro-organismos, confirmando a sua natureza polibacteriana. No Capítulo 2, amostras de S, SB, D e RC foram coletadas de pacientes infantis com infecções endodônticas. O perfil das comunidades microbianas foram obtidos por meio da análise da região espaçadora intergênica relacionada aos genes 16S e 23S rRNA (PCR-RISA). Determinaram-se e índices de riqueza, dominância, índice de Shannon, índice de Chao-1 (alfa-diversidade) e análise multivariada de conglomerados (método UPGMA e índice de Similaridade de Bray-Curtis) e análise de coordenadas principais (PCoA) (beta-diversidade). Há um baixo grau de agrupamento entre as amostras de S, BS, D e RC, obtidas de um mesmo participante. Se presentes, os agrupamentos acontecem para sítios contíguos, mas com baixo percentual de similaridade. Amostras de um mesmo ecossistema obtidas de diferentes participantes abrigam comunidades bacterianas distintas, com baixa similaridade. Não parece haver uma relação entre a presença de um sinal/sintoma clínico e acréscimo no perfil de similaridade das comunidades bacterianas em RC. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os índices de alfa-diversidade (riqueza, dominância, Shannon e Chao-1) entre S, SB, D e RC. O uso prévio de antibióticos não modificou os resultados de alfa diversidade ou de beta diversidade obtidos. No Capítulo 3, verificou-se a distribuição dos genes de resistência bacteriana aos principais grupos de antibióticos em S, SB, D, e RC dentes decíduos em pacientes infantis com infecções endodônticas e também de amostras de saliva dos responsáveis (R) por meio de PCR para os genes cfxA/cfxA2, blaTEM, blaZ, ampC, mecA, mefA, ermB, ermC, tetQ, tetM, tetW, linB, lsaB. Realizou-se análise estatística descritiva e análise multivariada de conglomerados (método UPGMA e índice de Similaridade de Bray-Curtis). Dos pacientes selecionados, 3/8 utilizaram antibiótico previamente à coleta. Nenhum gene de resistência foi observado em todos os ecossistemas de um mesmo participante. Os genes mais frequentemente detectados foram os genes de resistência à tetraciclina tetQ e tetW. Não foram detectados nas amostras os genes ampC, mecA, lnuB e lsaB. A presença simultânea de um gene em dois nichos ocorre em ecossistemas contíguos. Não se observa um comportamento uniforme quanto ao perfil de agrupamento de diferentes amostras de um mesmo participante, e nem entre as amostras de saliva do participante infantil (S) e seu responsável (R). Há múltiplos perfis de distribuição de genes de resistência a agentes antimicrobianos em amostras de ecossistemas bucais contíguos em um mesmo paciente portador de infecção endodôntica. A análise conjunta dos dados permite concluir que cada um dos ecossistemas da cavidade bucal de crianças portadoras de infecções endodônticas avaliado apresenta espécies bacterianas e fatores de virulência distribuídos de forma única e distintas, a partir de uma perspectiva de análise de diversidade. / This thesis aimed assessing information on the bacteria that were isolated/detected in teeth with endodontic infections from infant patients through a sistematic review of the literature. Furthermore, the bacterial composition and the presence of resistance genes to antimicrobial agents was determined in saliva (S), in supragengival biofilm (SB), in dentine (D) and in pulp cavity (RC) samples. In the Chapter 1, a sistematic review was conducted in electronic databasis. Clinical studies that evaluated the presence of microorganims in primary teeth with endodontic infections through culture and molecular methods were included. Fourty-four titles were selected and 17 articles were fully revised. Eight clinical studies were selected for data extraction. Two articles were included following the hand search. According to the data analysis, microbial identification was performed by culture, DNA-DNA hybridization, PCR, cloning and sequencing and next-generation sequencing methods. A high diversity in the microbial components identificated/detected was reported. Endodontic infections in primary teeth are polymicrobial, with a multi-species consortia. In the Chapter 2, the S, SB, D and RC samples were collected from infanti patients with endodontic infections. The ribossomal intergenic spacer analysis (PCR-RISA) for the 16S-23S rRNA genes interspacer region was employed to determine the bacterial fingerprint for each sample. Metrics for alfa and beta diversity were employed, such as richness, dominance, Shannon Index, Chao-1 Index, cluster analysis (UPGMA, Bray-Curtis Index) and principal coordenate analysis (PCoA). There was a low grouping profile for shared samples of S, BS, D and RC from the same participant. When detected, clustering behavior was observed for contiguous sites, with low percentual of similarity between them. Samples from the same site but from different subjects harboured distinct bacterial communities, with low similarity. No clinical sign/symptom was detected as a grouping factor for RC sample from different subjects. No statistical difference was detected for the alfa-diversity indexes among S, SB, D and RC. The previous exposition to antimicrobial agentes has no effect over the alfa- and beta-diversity indexes. In the Chapter 3, the distribution of bacterial genes for antimicrobial resistance in S, SB, D and RC was determined in samples from children with endodontic infections and their relatives (R) by PCR. The presence of the genes cfxA/cfxA2, blaTEM, blaZ, ampC, mecA, mefA, ermB, ermC, tetQ, tetM, tetW, linB, and lsaB was detecte in the samples. Descriptive statistical analysis and multivariate anlysis (cluster analyisis, UPGMA and Bray-Curtis similarity index) were carried out. Three out of 8 patients had antimicrobial agents previously to the apointment. No resistance gene was shared by all envirnments in the same participant. The most frequently detected genes were tetQ and tetW. The genes ampC, mecA, lnuB, and lsaB were not detected in any the samples. The same gene was detected only in two contiguous niches. Clustering analysis revealed no grouping pattern among the samples, despite they were or not from the same participant or his/her relative. Multiple profiles of resistance genes distribution were detected in the oral cavity samples from infant participants. The oral cavity in children with endodontic infection is a complex environment that harbours unique bacterial communities profiles and a distinct distribution of resitance genes to antimicrobial agents, considering an ecological perspective.

Orientador: Regina Maria Puppin-Rontani / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campina, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-12T09:08:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pascon_FernandaMiori_D.pdf: 20418378 bytes, checksum: 123cef34dc5e16d51cd9c6553ae586c5 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A utilização de substâncias químicas auxiliares, durante o tratamento endodôntico, pode alterar a composição química e as propriedades físicas da estrutura dentinária corono-radicular. Além disso, pode interferir no processo de união do material restaurador às estruturas dentinárias da câmara pulpar. Dessa maneira, pesquisas devem ser realizadas possibilitando a indicação de uma substância, que apresente o mínimo efeito nas propriedades mecânicas dentinárias, enquanto exerce o efeito de debridamento desejado. No intuito de facilitar a apresentação desta Tese, a mesma foi dividida em três capítulos, como descrito nas proposições seguintes. Capítulo 1: revisar sistematicamente a literatura a respeito dos efeitos da solução de hipoclorito de sódio nas propriedades mecânicas da dentina do canal radicular quando a mesma é utilizada durante o tratamento endodôntico. Capítulo 2: verificar os efeitos de diferentes substâncias químicas auxiliares (soro fisiológico, hipoclorito de sódio, clorexidina gel, peróxido de uréia - Endo-PTC® e EDTA) na microdureza (realizada por meio do teste de microdureza Vickers) e morfologia (realizada por meio de análise em Microscopia Eletrônica de Varredura) da dentina da câmara pulpar de dentes anteriores decíduos e permanentes. Capítulo 3: avaliar o efeito de substâncias químicas auxiliares (soro fisiológico, hipoclorito de sódio, clorexidina gel, peróxido de uréia - Endo-PTC® e EDTA) na rugosidade superficial da dentina da câmara pulpar de dentes decíduos e permanentes. Baseando-se na revisão de literatura pôde-se concluir que há forte evidência de que o hipoclorito de sódio altera as propriedades mecânicas da dentina radicular, quando o mesmo é utilizado como solução irrigadora durante o tratamento endodôntico. O uso de substâncias químicas auxiliares diminuiu os valores de microdureza dentinária Vickers tanto para dentes decíduos quanto para os permanentes. Observaram-se resultados não conclusivos com o uso do EDTA 17% na dentina da câmara pulpar dos dentes decíduos e permanentes uma vez que a microdureza superficial não pôde ser mensurada. A solução de hipoclorito de sódio 1% e 5,25% produziu os menores valores de microdureza Vickers para dentes decíduos e permanentes, comparados à clorexidina gel 2% e grupo controle (soro fisiológico). Alterações morfológicas foram observadas quando a dentina da câmara pulpar foi irrigada com solução de hipoclorito de sódio 1% ou 5,25% associados ao EDTA 17%, EDTA 17% utilizado isoladamente e clorexidina gel 2% associada ou não ao EDTA 17%. Em relação à rugosidade superficial pôde-se concluir que a irrigação da dentina da câmara pulpar aumentou a rugosidade superficial dos dentes permanentes e decíduos tratados com hipoclorito de sódio 1% e 5,25% associados ao EDTA 17%. / Abstract: Irrigation solutions, endodontic auxiliary chemical substance, and chelating agents used on root canal treatment might yield changes in the chemical composition and physical properties of dentin surface, and affect its interaction with materials used for coronal sealing. Thus, studies are required to select a suitable chemical agent, which has minimal effects on the mechanical properties of the tooth whilst achieving the desired debridement effect. In order to facilitate the accomplishment of this Thesis, it was divided into three chapters, as described on the following descriptions. Chapter 1: to present a systematic review on the effect of sodium hypochlorite on the mechanical properties of root canal dentin, considering its use as an irrigation solution. Chapter 2: to verify the effects of endodontic irrigants, auxiliaries chemicals substances and chelating agent on the microhardness (Vickers Hardness test) and morphology (Scanning Electron Microscopy) of the pulp chamber dentin in primary and permanent teeth. Chapter 3: to evaluate the effect of endodontic irrigants, auxiliaries chemicals substances and chelating agent on the roughness of the pulp chamber dentin of primary and permanent teeth. Based on literature review it could be concluded that there is strong evidence showing that sodium hypochlorite alters the mechanical properties of root canal dentin, when used as an endodontic irrigant. The use of irrigation solutions decreased the Vickers Hardness Number values for both permanent and primary teeth. Inconclusive results were observed when 17% EDTA was used, since it could not be measured. Sodium hypochlorite provides lower Vickers Hardness Number for primary and permanent teeth, compared with 2% chlorhexidine and control group (saline solution). Morphological alterations were observed when pulp chamber irrigation was performed by 1% or 5.25% sodium hypochlorite associated with 17% EDTA, 17% EDTA, and 2% chlorhexidine gel associated or no with 17% EDTA. Regarding surface roughness, it was concluded that pulp chamber irrigation with 1% and 5.25% sodium hypochlorite associated with 17% EDTA increases pulp chamber roughness of primary and permanent teeth. / Doutorado / Odontopediatria / Doutor em Odontologia

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-05-02T15:12:15Z No. of bitstreams: 1 samirasalomaolemos.pdf: 1943593 bytes, checksum: 1564e6f7ffba63a822e146b8ccdafa02 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-06-03T12:59:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 samirasalomaolemos.pdf: 1943593 bytes, checksum: 1564e6f7ffba63a822e146b8ccdafa02 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-03T12:59:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 samirasalomaolemos.pdf: 1943593 bytes, checksum: 1564e6f7ffba63a822e146b8ccdafa02 (MD5) Previous issue date: 2014-08-29 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Diferentes métodos de identificação têm mostrado que a comunidade microbiana em infecções endodônticas apresenta uma grande diversidade. No entanto, o conhecimento dos perfis microbianos de infecções endodônticas em dentes decíduos ainda é limitado. Portanto, este estudo teve como objetivos avaliar qualitativa e quantitativamente a presença de micro-organismos orais em amostras de canais radiculares dentes decíduos com necrose pulpar, e verificar a correlação entre eles e sua associação com sinais e sintomas clínicos e radiográficos. Um total de 31 crianças, de quatro a dez anos (idade média = 6,29 ± 1,27 anos), foi incluído neste estudo. A presença de 12 patógenos selecionados (Actinobacillus actinomycetemcomitans, Campylobacter rectus, Enterococcus faecalis, Fusobacterium nucleatum, Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Streptococcus, Streptococcus mutans, Streptococcus sobrinus, Tannerella forsythia e Treponema denticola) em 31 canais radiculares de 31 dentes com necrose pulpar foi avaliada por meio da técnica de hibridização in situ fluorescente (FISH), que identificou e quantificou os micro-organismos. Medidas descritivas foram usadas para descrever os dados relativos à densidade (cél/mL X 108) obtida para cada micro-organismo testado. O teste de correlação de Pearson avaliou a correlação entre os micro-organismos identificados e o teste t de Student verificou a associação entre os sinais e sintomas clínicos e radiográficos e os micro-organismos detectados. Adotou-se um nível de significância de 5% (p < 0,05). Todos os patógenos testados foram identificados em todas as amostras. O somatório das densidades médias totais de todas as espécies bacterianas testadas e do gênero Streptococcus representou 80,57% da comunidade microbiana total. Os resultados do teste t de Student demonstraram que houve uma diferença significante (p = 0,02) entre no número médio das densidades observadas na espécie T. denticola no grupo com presença de dor e o grupo com ausência de dor. Também foram observadas diferenças significantes no número médio das densidades da espécie P. nigrescens e presença de edema e P. nigrescens e ausência de edema; assim como para o gênero Streptococcus e presença de edema e Streptococcus e ausência de edema (p = 0,04; p = 0,04, respectivamente). A técnica de FISH confirmou a característica polimicrobiana da infecção endodôntica em dentes decíduos com a presença de bactérias anaeróbicas obrigatórias e anaeróbicas facultativas e do gênero estreptococos. / Different microbial identification methods have shown that the microbial community in endodontic infections presents a great diversity. However, the knowledge of the microbial profiles of endodontic infections in primary teeth is still limited. Therefore, the aim of this study was to evaluate, qualitative and quantitatively, the presence of oral microorganisms in samples from root canals primary teeth, to assess the correlations among them, and to determine their association with clinical and radiographic signs and symptoms. A total of 31 children, 4 to 10 years old (mean age = 6.29 ± 1.27 years old), was involved in this study. The presence of 12 selected pathogens (Actinobacillus actinomycetemcomitans, Campylobacter rectus, Enterococcus faecalis, Fusobacterium nucleatum, Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Prevotella nigrescens, Streptococcus, Streptococcus mutans, Streptococcus sobrinus, Tannerella forsythia, and Treponema denticola) in 31 infected root canals from 31 primary teeth with pulp necrosis was studied by using the fluorescent in situ hybridization (FISH) technique which identified and quantified the microorganisms. Descriptive measures were used to present the data related to the density (cel/mL X 108) for each microorganism tested. The Pearson correlation test assessed the correlation among the microorganisms identified and the Student t test assessed the association between the clinical and radiographic signs and symptoms and the pathogens detected. The significance level was set at 5% (p < 0.05). All the tested pathogens were detected in all samples. The total sum of the mean densities of all the bacteria species and Streptococcus genus represented 80.57% of the entire microbial community. The results of Student's t test showed that there was a significant difference (p = 0.02) between the average number of densities observed in the species T. denticola in the group with pain and the group with no pain. Significant differences were also observed in the average number densities of the species P. nigrescens and presence of edema and P. nigrescens and no edema; and for Streptococcus and genus Streptococcus and edema and no edema (p = 0.04, p = 0.04, respectively). The FISH technique confirmed the polymicrobial characteristic of the endodontic infection in primary teeth with the presence of obligate and facultative anaerobic bacteria and of Streptococcus genus.

Orientador: Milton Carlos kuga / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a eficiência do etanol a 95 % (Rinse-N-Dry [RD]) ou da solução de formamida (Endosolv R [ER]), associados com a microabrasão com micropartículas de vidro (Concepsis Scrub [Cs]), na limpeza da dentina impregnada com o cimento à base de resina epóxi (AH Plus) e seus efeitos sobre a interface adesiva. Quarenta espécimes de dentina foram impregnadas com o cimento endodôntico (AH Plus). Em seguida foram limpos com os seguintes protocolos (n = 10): G1(E), somente RD; G2(ER), somente ER; G3(E + Cs), RD e Cs; G4(ER + Cs), ER e Cs. No G5 (controle) nenhum tratamento foi realizado. Os espécimes foram analisados em SEM, para avaliar a presença de resíduos (500x) e contagem de túbulos de dentinários abertos (1000x). Outros 50 espécimes foram preparados esubmetidos a similares procedimentos e protocolos de limpeza. Após 7 dias, tubos contendo resina composta foram fixados na dentina com um sistema adesivo "condiciona-e-lava" (Scotchbond Multi-porpose; 3M ESPE; 3M; St. Paul; MN, USA) e submetidos ao teste de microcisalhamento. G2 e G4 demonstraram maior persistência de resíduos e menor incidência de túbulos dentinários abertos que G1 e G3(P<0.05) e não houve diferença entre G1 e G3 ou G2 e G4 (P>0.05). A resistência de união do sistema adesivo foi similar entre todos os grupos (P>0.05). A microabrasão imediata interferiu negativamente na ação dos protocolos de limpeza, porém todos mantiveram resíduos sobre a superfície dentinária. Entretanto, após 7 dias... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the cleaning protocol of dentin impregnated with epoxy resin-based sealer (AH Plus) and the effects on the adhesive interface using 95% ethanol (Rinse-N-Dry [RD]) or formamide solution (Endosolv R [ER]) associated with microabrasion with glass microparticles (Concepsis Scrub [Cs]) . Forty dentin specimens were impregnated with endodontic sealer (AH Plus). Specimens were cleansed according to the following protocols (n = 10): G1 (E), only RD; G2 (ER), only ER; G3 (E + Cs), RD and Cs; G4 (ER + Cs), ER and Cs. No treatment was performed in G5 (control). The specimens were subjected to SEM in order to evaluate the residues persistence (500x) and open dentinal tubules counting (2000x). Another 50 specimens were prepared, subjected to similar procedures and cleaning protocols.7 days later, composite-resin-made specimens were performed on dentin using etch-and-rinse adhesive system, then submitted to micro-shear test. G2 and G4 showed higher residues persistence and lower incidence of open dentinal tubules than G1 and G3 (P <0.05). No difference was found between G1 and G3 or G2 and G4 (P> 0.05). Adhesive system bond strength was similar in all groups (P> 0.05). Microabrasion negatively affected the cleaning protocols action, all groups presented residues on the dentin surface. However, 7 days later the protocols did not affect the bond strength of etch-and-rinse adhesive system to dentin previously impregnated with epoxy resin-based sealer. / Doutor

A presente tese teve como objetivo realizar a descrição dos microrganismos que já foram isolados ou detectados em infecções endodônticas de dentes decíduos em pacientes infantis por meio de uma revisão sistemática, além de avaliar a composição bacteriana e a presença de genes de resistência a antibióticos em amostras de saliva (S), biofilme supragengival (SB), dentina (D) e câmara pulpar (RC) de dentes decíduos com infecções endodônticas. No Capítulo 1, realizou-se revisão sistemática em bancos de dados eletrônicos, tendo sido incluídos estudos clínicos que avaliaram presença de microrganismos em dentes decíduos com infecções endodônticas, por meio de análise microbiológica com cultivo ou de métodos moleculares. Foi realizada análise descritiva dos dados. A análise identificou 44 títulos, sendo revisados, na íntegra, 17 artigos. Foram selecionados 8 estudos clínicos, de acordo com os critérios de inclusão determinados. Por meio de busca manual, foram selecionados 2 artigos adicionais, totalizando 11 artigos excluídos desta revisão. Nos oito estudos clínicos incluídos na revisão sistemática, a identificação dos microrganismos envolvidos nas infecções endodônticas foi realizada por meio de várias técnicas como: cultura microbiológica, hibridização DNA-DNA, PCR e suas variações, clonagem, sequenciamento e pirossequenciamento, confirmando a diversidade de microrganismos envolvidos nas infecções endodônticas de dentes decíduos. A análise dos dados sugere que as infecções endodônticas em dentes decíduos são causadas por múltiplas combinações de espécies de micro-organismos, confirmando a sua natureza polibacteriana. No Capítulo 2, amostras de S, SB, D e RC foram coletadas de pacientes infantis com infecções endodônticas. O perfil das comunidades microbianas foram obtidos por meio da análise da região espaçadora intergênica relacionada aos genes 16S e 23S rRNA (PCR-RISA). Determinaram-se e índices de riqueza, dominância, índice de Shannon, índice de Chao-1 (alfa-diversidade) e análise multivariada de conglomerados (método UPGMA e índice de Similaridade de Bray-Curtis) e análise de coordenadas principais (PCoA) (beta-diversidade). Há um baixo grau de agrupamento entre as amostras de S, BS, D e RC, obtidas de um mesmo participante. Se presentes, os agrupamentos acontecem para sítios contíguos, mas com baixo percentual de similaridade. Amostras de um mesmo ecossistema obtidas de diferentes participantes abrigam comunidades bacterianas distintas, com baixa similaridade. Não parece haver uma relação entre a presença de um sinal/sintoma clínico e acréscimo no perfil de similaridade das comunidades bacterianas em RC. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os índices de alfa-diversidade (riqueza, dominância, Shannon e Chao-1) entre S, SB, D e RC. O uso prévio de antibióticos não modificou os resultados de alfa diversidade ou de beta diversidade obtidos. No Capítulo 3, verificou-se a distribuição dos genes de resistência bacteriana aos principais grupos de antibióticos em S, SB, D, e RC dentes decíduos em pacientes infantis com infecções endodônticas e também de amostras de saliva dos responsáveis (R) por meio de PCR para os genes cfxA/cfxA2, blaTEM, blaZ, ampC, mecA, mefA, ermB, ermC, tetQ, tetM, tetW, linB, lsaB. Realizou-se análise estatística descritiva e análise multivariada de conglomerados (método UPGMA e índice de Similaridade de Bray-Curtis). Dos pacientes selecionados, 3/8 utilizaram antibiótico previamente à coleta. Nenhum gene de resistência foi observado em todos os ecossistemas de um mesmo participante. Os genes mais frequentemente detectados foram os genes de resistência à tetraciclina tetQ e tetW. Não foram detectados nas amostras os genes ampC, mecA, lnuB e lsaB. A presença simultânea de um gene em dois nichos ocorre em ecossistemas contíguos. Não se observa um comportamento uniforme quanto ao perfil de agrupamento de diferentes amostras de um mesmo participante, e nem entre as amostras de saliva do participante infantil (S) e seu responsável (R). Há múltiplos perfis de distribuição de genes de resistência a agentes antimicrobianos em amostras de ecossistemas bucais contíguos em um mesmo paciente portador de infecção endodôntica. A análise conjunta dos dados permite concluir que cada um dos ecossistemas da cavidade bucal de crianças portadoras de infecções endodônticas avaliado apresenta espécies bacterianas e fatores de virulência distribuídos de forma única e distintas, a partir de uma perspectiva de análise de diversidade. / This thesis aimed assessing information on the bacteria that were isolated/detected in teeth with endodontic infections from infant patients through a sistematic review of the literature. Furthermore, the bacterial composition and the presence of resistance genes to antimicrobial agents was determined in saliva (S), in supragengival biofilm (SB), in dentine (D) and in pulp cavity (RC) samples. In the Chapter 1, a sistematic review was conducted in electronic databasis. Clinical studies that evaluated the presence of microorganims in primary teeth with endodontic infections through culture and molecular methods were included. Fourty-four titles were selected and 17 articles were fully revised. Eight clinical studies were selected for data extraction. Two articles were included following the hand search. According to the data analysis, microbial identification was performed by culture, DNA-DNA hybridization, PCR, cloning and sequencing and next-generation sequencing methods. A high diversity in the microbial components identificated/detected was reported. Endodontic infections in primary teeth are polymicrobial, with a multi-species consortia. In the Chapter 2, the S, SB, D and RC samples were collected from infanti patients with endodontic infections. The ribossomal intergenic spacer analysis (PCR-RISA) for the 16S-23S rRNA genes interspacer region was employed to determine the bacterial fingerprint for each sample. Metrics for alfa and beta diversity were employed, such as richness, dominance, Shannon Index, Chao-1 Index, cluster analysis (UPGMA, Bray-Curtis Index) and principal coordenate analysis (PCoA). There was a low grouping profile for shared samples of S, BS, D and RC from the same participant. When detected, clustering behavior was observed for contiguous sites, with low percentual of similarity between them. Samples from the same site but from different subjects harboured distinct bacterial communities, with low similarity. No clinical sign/symptom was detected as a grouping factor for RC sample from different subjects. No statistical difference was detected for the alfa-diversity indexes among S, SB, D and RC. The previous exposition to antimicrobial agentes has no effect over the alfa- and beta-diversity indexes. In the Chapter 3, the distribution of bacterial genes for antimicrobial resistance in S, SB, D and RC was determined in samples from children with endodontic infections and their relatives (R) by PCR. The presence of the genes cfxA/cfxA2, blaTEM, blaZ, ampC, mecA, mefA, ermB, ermC, tetQ, tetM, tetW, linB, and lsaB was detecte in the samples. Descriptive statistical analysis and multivariate anlysis (cluster analyisis, UPGMA and Bray-Curtis similarity index) were carried out. Three out of 8 patients had antimicrobial agents previously to the apointment. No resistance gene was shared by all envirnments in the same participant. The most frequently detected genes were tetQ and tetW. The genes ampC, mecA, lnuB, and lsaB were not detected in any the samples. The same gene was detected only in two contiguous niches. Clustering analysis revealed no grouping pattern among the samples, despite they were or not from the same participant or his/her relative. Multiple profiles of resistance genes distribution were detected in the oral cavity samples from infant participants. The oral cavity in children with endodontic infection is a complex environment that harbours unique bacterial communities profiles and a distinct distribution of resitance genes to antimicrobial agents, considering an ecological perspective.

Indiana University-Purdue University Indianapolis (IUPUI) / Introduction: One of the main objectives of endodontic therapy is to reduce microbes and remove inflamed pulpal tissue within the root canal system (RCS). This is accomplished through chemomechanical debridement of the RCS using hand and rotary instrumentation along with an antimicrobial irrigant. Today, the most commonly used irrigant is sodium hypochlorite (NaOCl), often at concentrations toxic to human cells. The use of ozone as an endodontic irrigant is a novel technique that has been proven to be antimicrobial against several microorganisms. However, independent research is lacking on ozone’s efficacy against an established endodontic biofilm. If ozone’s efficacy against biofilms is confirmed, the use of toxic and potentially dangerous sodium hypochlorite could be replaced in some clinical situations (i.e., regeneration, immature teeth, resorption) with a safer and effective alternative. Objective: The aim of the current study was to evaluate the anti-biofilm activity of different concentrations of ozonated water compared to various concentrations of NaOCl against an established endodontic biofilm of Enterococcus faecalis in root canal treated teeth in vitro. Materials and Methods: The crowns of similarly sized, maxillary anterior teeth were removed, and the roots cut to a standard length (12 mm). All root canals were instrumented to a standard size. Specimens were sterilized and then inoculated with E. faecalis, which were allowed to grow for two weeks to form an established biofilm. There were six treatment groups: 1) 6% NaOCl; 2) 1.5% NaOCl; 3) 16µg/mL ozonated water; 4) 25µg/mL ozonated water; 5) 50µg/mL ozonated water, and 6) saline. Following treatment, samples were collected, plated, and incubated for two days. The number of CFU/mL were determined, and samples visualized using confocal imaging. The effect of treatment group on bacterial counts was made using one-way ANOVA followed by pair-wise comparisons. Null Hypothesis: Endodontically treated teeth irrigated with ozonated water will not demonstrate a statistically significant decrease in the E. faecalis biofilm compared to those treated with sodium hypochlorite Results: CFUs were converted to log10 and compared using Fisher’s Exact tests or one-way ANOVA followed by pair-wise tests. In all observations utilizing NaOCl irrigation, no colonies formed following treatment. The two NaOCl groups, with 0 CFU/mL, were significantly different than the other four groups (p=0.009). Saline showed a trend towards higher CFU/mL than 50 µg/ml O3 (p=0.068). None of the other comparisons approached statistical significance (p=0.453 25 µg/ml O3, p=0.606 16 µg/ml O3, p=0.999 25 µg/ml O3 vs 50 µg/ml O3, p=0.990 16 µg/ml O3 vs 50 µg/ml O3, p=1.000 16 µg/ml O3 vs 25 µg/ml O3). Confocal imaging helped illustrate effects of irrigation and confirm CFU findings. Conclusion: The results of this study failed to reject the null hypothesis. There was a statistically significant difference in the E. faecalis biofilm remaining in the groups treated with ozonated water compared to those treated with NaOCl. However, there was a trend towards higher CFU/mL in the saline group compared to the 50µg/mL ozonated water group. According to this finding, future studies should evaluate the effects of higher concentrations of ozonated water against an established E. faecalis biofilm. In addition, other follow-up studies might include ozonated water’s effect on human cells, such as the stem cells of the apical papilla that are so critical to the success of regenerative endodontic procedures. Due to university and laboratory closures caused by the COVID-19 pandemic, this project was stopped short and an insufficient sample size did not allow for proper statistical power. Additional occasions should be run upon the university’s re-opening to allow for proper statistical power.

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:22:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Miguel Munoz Perez.pdf: 2838722 bytes, checksum: 47bde0e445ce247501fdda653ceefbb2 (MD5) Previous issue date: 2010-02-25 / The aim of this study was to evaluate with the finite element method (MEF), the stress distribution under simulated functional loading in different cavity preparations using the pulp chamber of an endodontically-treated second mandible left molar to observe the stability and retention of the Endocrown. Computer tomography data of the tooth was obtained to generate a 3D volumetric model. In this 3D digital tooth, different cavity preparations without (Wo) and with (W) cusp coverage were modeled and edited, as well as a restoration and luting layer. All cavity preparations with cusp coverage had a mesio-occlusal-distal extension. To obtain the Poisson ratio and the elastic modulus of the restorative material used in the MEF, ceramic specimens were subjected to flexural tests. The following groups were obtained according to the cavity preparation: intact tooth (control) [IT]; occlusal-distal extension [WoOD], mesioocclusal- distal extension [WoMOD]; with buccal cusp coverage [WB], with lingual cusps coverage [WL]; with coverage of all cusps [WT]; and remnant of 2 mm above of the cement-enamel junction [Rm]. All groups were subjected to a 200 N loading in the Ansys Workbench v12 software and the stress distribution was analyzed by Rankine principal stresses criteria. "None" experimental group simulated stress distribution as the "IT". "WoOD" showed lowest stress levels at the internal angles. Stress levels were higher at internal angles for "W" and "WoMOD". No difference was observed between the other groups when compared to "Wo" and "W" with "MOD" extension. Within the limits of this in vitro study, it was concluded that the presence of a proximal wall was an important biomechanical factor for the remaining dental tissue and that the cusps coverage did not show any advantages for the stress distribution when compared to the more conservative cavity preparations. / O objetivo deste trabalho foi analisar pelo método de elementos finitos (MEF) a distribuição de tensões em diferentes preparos cavitários que utilizaram a câmara pulpar disponível de um dente molar desvitalizado para a estabilidade e retenção de restauração “Endocrown”, submetida à simulação de forças oclusais funcionais. A tomografia computadorizada de uma mandíbula foi digitalmente reconstruída resultando num modelo 3D. Deste modelo foi extraída apenas a parte correspondente ao dente 37. Neste dente digital 3D, diferentes preparos cavitários sem e com envolvimento das cúspides foram modelados e editados, bem como uma restauração e camada de cimento. Todos os modelos com envolvimento das cúspides tiveram uma extensão mesio-ocluso-distal (MOD). Para a obtenção do coeficiente de Poisson e módulo de elasticidade do material restaurador utilizados no MEF, uma cerâmica foi submetida a teste de resistência à flexão. Foram obtidos os seguintes grupos: DH, dente hígido (controle); dois grupos sem envolvimento das cúspides, SeOD (extensão ocluso-distal) e SeMOD (extensão mésio-ocluso-distal); três grupos com envolvimento das cúspides, CeV (envolvimento das cúspides vestibulares), CeL (envolvimento das cúspides linguais) e CeT (envolvimento de todas as cúspides); e RM, remanescente de 2 mm acima do limite esmalte–cimento (LEC). Todos os grupos foram submetidos à simulação de uma carga de 200 N, no software Ansys Workbench v12, avaliando a distribuição de tensões principais de Rankine geradas nos preparos. As simulações demonstraram que os melhores resultados foram obtidos no grupo SeOD. Os resultados dos outros grupos apresentaram leve diferença, sendo muito próximos os resultados obtidos entre preparos cavitários sem e com envolvimento de cúspides, de extensão MOD. Com base nos resultados obtidos, pôde-se concluir que a presença de uma parede proximal é importante fator para beneficiar a biomecânica do remanescente dental, e que o envolvimento cuspídeo não forneceu um melhor prognóstico da situação quando comparando a preparos cavitários mais conservadores.

Indiana University-Purdue University Indianapolis (IUPUI) / Accurate determination of working length during endodontic therapy is a crucial step in achieving a predictable outcome. This is determined by the use of electronic apex locators, tactile perception, and knowledge of average tooth lengths and/or dental radiography whether digital or conventional is utilized. It is the aim of this study to determine if there is a difference between Schick digital radiography and Kodak Insight conventional film in accurately determining working lengths when modifying exposure time and source-film/sensor distance. Twelve teeth with size 15 K-flex files at varying known lengths from the anatomical apex were mounted in a resin-plaster mix to simulate bone density. Each tooth was radiographed while varying the source-film/sensor distance and exposure 122 time. Four dental professionals examined the images and films independently. Ten images and 10 films were selected at random and re-examined to determine each examiner?s repeatability. The error in working length was calculated as the observed value minus the known working length for each tooth type. A mixed-effects, full-factorial analysis of variance (ANOVA) model was used to model the error in working length. Included in the ANOVA model were fixed effects for type of image, distance, exposure time, and all two-way and three-way interactions. The repeatability of each examiner for each film type was assessed by estimating the intra-class correlation coefficient (ICC). The repeatability of each examiner on digital film was good with ICCs ranging from 0.67 to 1.0. Repeatability on the conventional film was poor with ICCs varying from -0.29 to 0.55.We found there was an overall difference between the conventional and digital films (p < 0.001). After adjusting for the effects of distance and exposure time, the error in the working length from the digital image was 0.1 mm shorter (95% CI: 0.06, 0.14) than the error in the working length from the film image. There was no difference among distances (p = 0.999) nor exposure time (p = 0.158) for film or images. Based on the results of our study we conclude that although there is a statistically significant difference, there is no clinically significant difference between digital radiography and conventional film when exposure time and source-film/sensor distance are adjusted.