Orientador: Daisy Maria Fávero Salvadori / Banca: Maria Inês de Moura Campos Pardini / Banca: Ana Lúcia dos Anjos Ferreira / Banca: Maria Angela Tardelli / Banca: Gilka Jorge Figaro Gattás / Resumo: Não disponível. / Abstract: Not available. / Doutor

O carcinoma escamoso basalóide (CEB), uma variante agressiva distinta do carcinoma espinocelular (CEC), apresenta predileção para a região de cabeça e pescoço, especialmente base de língua. Um total de 17 CEBs localizados exclusivamente em boca, diagnosticados e tratados no período de 1970 a 2000 no Departamento de Cirurgia de Cabeça e Pescoço e Otorrinolaringologia do Hospital do Câncer AC Camargo, foram comparados a 26 CECs pouco diferenciados (CEC/PD) e a 28 CECs bem a moderadamente diferenciados (CEC/BD com estadiamento e localização equivalentes. Foram avaliadas algumas características clínicas como gênero, idade, raça, tabagismo, etilismo, localização do tumor primário, classificação pelo sistema TNM, tratamento, ocorrência de recidiva tumoral, metástases em linfonodos regionais, a distância e de segundo tumor primário. Além disso, outros aspectos biológicos como a expressão de PCNA e das moléculas de adesão celular E-caderina e β-catenina também foram comparativamente analisados. As probabilidades de sobrevida global e livre de doença foram calculadas pelo método de Kaplan-Meier e a influência das variáveis clínicas e microscópicas no prognóstico avaliada pelo modelo de regressão de Cox. Não se observou diferença estatisticamente significativa na expressão do PCNA entre os três grupos estudados. Para os grupos CEC/PD e CEB, a redução ou ausência da expressão de E-caderina foi observada em mais de 80,0% dos carcinomas sendo estatisticamente significativa quando comparada ao CEC/BD (p=0,019). A forte expressão tumoral da β-catenina foi visualizada, respectivamente, em 26,9% e em 20,8% dos CEC/BDs e CEC/PDs e em 41,2% dos CEBs. Os marcadores imuno-histoquímicos PCNA, E-caderina e β-catenina não constituíram fatores de prognóstico para os pacientes com CEB, CEC/PD e CEC/BD, sendo as probabilidades de sobrevida global e livre de doença acumuladas em 5 e 10 anos semelhantes para os três grupos avaliados. A presença de metástase em linfonodo regional (N+) foi fator de prognóstico independente para os pacientes com CEB, CEC/PD e CEC/BD. Portanto, baseado nestes resultados, podemos concluir que o comportamento clínico e biológico do carcinoma escamoso basalóide e dos carcinomas espinocelulares bem, moderadamente e pouco diferenciados localizados na boca são semelhantes, não sendo influenciados pelo grau de diferenciação celular e/ou pela variante microscópica quando estas neoplasias apresentam estadiamentos clínicos avançados. / Basaloid squamous carcinoma (BSC), a distinct aggressive variant of squamous cell carcinoma (SCC), presents preference for head and neck region, specially base of tongue. Seventeen cases of BSC localized exclusively in mouth, diagnosed and treated from 1970 to 2000 at Department of Head and Neck Surgery and Otorhinolaryngology of Cancer Hospital AC Camargo, were compared to 26 cases of poorly differentiated SCC (PDSCC) and 28 cases of well to moderately differentiated SCC (W/MSCC) matched by stage and tumor site. It was evaluated some characteristics like gender, race, tobacco, alcohol abuse, localization of primary tumor, stage by TNM system, treatment, occurrence of local and cervical recurrence, regional lymph node and distant metastasis and second primary tumors. In addition, others biological features such as PCNA, E-cadherin and β-catenin expression in BSC, PDSCC and W/MSCC were evaluated in relation to their clinicopathological features and prognostic values using Kaplan-Meier method and Cox regression models. No statistically significant differences were found among all three groups in regard to clinical features and immunohistochemical reactivity for PCNA. For groups PDSCC and BSC, reduction or absence of E-cadherin staining was observed in more than 80.0% of carcinomas and it was statistically significant when compared to W/MSCC (p=0.019). A strong expression of β-catenin was observed, respectively, in 26.9% and 20.8% of W/MSCC and PDSCC, and in 41.2% of BSC. The 5-year and 10-year overall and disease-free survival rates demonstrated no significant differences among BSCC, PDSCC and W/MSCC groups and the PCNA, Ecadherin and β-catenin also showed no prognostic value. Metastasis in regional lymph node (N+) was an independent prognosis factor for the oral BSC, PDSCC and W/MSCC patients. These results suggest that the clinical and biological behaviour of BSC, PDSCC and W/MSCC of the oral cavity are similar when matched by clinical stage and tumor site. The histological grade in squamous cell carcinoma or the microscopic tumor variant (BSC or SCC) is not a determinant parameter to predict the prognoses when these tumors present advanced clinical stage.

Os bisfosfonatos constituem reconhecidamente potentes inibidores da reabsorção óssea. O presente estudo objetivou testar a hipótese de que a incorporação dos bisfosfonatos à dentina e ao cemento, durante a odontogênese e a rizogênese, aumentaria a resistência às reabsorções dentárias. Administrou-se o alendronato na dosagem de 1mgP/Kg, duas vezes por semana, por via oral, em 89 ratos da linhagem Wistar (Rattus norvegicus, albinus), divididos em quatro grupos submetidos à movimentação dentária induzida por 0, 3, 5 e 7 dias, previamente à morte dos animais. O aparelho ortodôntico consistiu em uma mola fechada ancorada aos incisivos superiores, movimentando mesialmente o primeiro molar superior esquerdo. Submeteram-se cada um dos grupos a diferentes protocolos de medicação antes da instalação do dispositivo ortodôntico, que assim constituíram-se: Grupo Controle, não recebeu o bisfosfonato; Grupo Experimental, submetido à medicação com alendronato desde a concepção e fase intrauterina até o final do experimento, aos três meses de vida; Grupo Ensaio 1, submetido ao alendronato desde a concepção e fase intrauterina até o segundo mês de vida, quando se interrompeu a medicação, um mês previamente à data da morte dos animais deste grupo e Grupo Ensaio 2, submetido ao alendronato no quarto mês de vida, já na idade adulta, por um período de três meses e meio. Realizou-se a análise microscópica por meio de cortes longitudinais dos molares destes murinos, sendo que na região cervical da raiz mesial observa-se os fenômenos produzidos por uma força suave ou moderada e na região cervical da raiz distal, os fenômenos produzidos por força intensa. Esta análise microscópica utilizando escores, os resultados dos testes estatísticos Quiquadrado, Kruskal-Wallis, Dunn e índice Kappa nos permitiram as seguintes constatações: a) os níveis de reabsorções radiculares apresentaram-se significantemente reduzidos; b) não se observaram influências destes medicamentos no tecido ósseo, nos fenômenos celulares, teciduais ou no ligamento periodontal durante o movimento ortodôntico. Deste modo pudemos concluir que: 1. quando da administração dos bisfosfonatos, do tipo alendronato, desde o início da odontogênese, ou mais especificamente durante a rizogênese, a incorporação deste medicamento à dentina e ao cemento pode aumentar a resistência radicular às reabsorções radiculares associadas a movimentação dentária induzida e, por extensão, às promovidas pelos traumatismos dentários; 2. a medicação prolongada e supervisionada com bisfosfonatos, do tipo alendronato, não altera a movimentação dentária induzida, mesmo quando da sua incorporação no tecido ósseo, pois não modifica as propriedades mecânicas do osso. / Bisphosphonates are a class of drugs acknowledged for their ability to prevent bone resorption. The presented study tested the following hypothesis: Could bisphosphonates prevent root resorption once incorporated into dentin or cementum? 89 Wistar rats (Rattus norvegicus, albinus) with and without bisphosphonate medication, alendronate, at a dosage of 1mgP/Kg twice-weekly, were submitted to induced tooth movement for 0, 3, 5 and 7 days. The orthodontic appliance consisted of a coil spring moving the fist left molar foreword supported by the incisor. The rats were divided into 4 groups and submitted to different protocols of medication. The Control Group received no medication whatsoever; Experimental Group 1 was submitted to alendronate intake since intrauterine life until the end of the experiment; Experimental Group 2 received alendronate during intrauterine life until the 60th day of life. A month after medication interruption the molars were moved prior to rats sacrifice. Experimental Group 3, consisted of a group of adult rats alendronate treated after the third month of life until the seventh, when dental movement took place. Microscopic and statistical analysis revealed that animals submitted to alendronate therapy presented significantly reduced amounts of root resorption. There was no further influence of alendronato on bone structure during induced tooth movement. These results allow us to conclude that the use of bisphosphonates, alendronate, to be more specific, may increase the resistance to root resorption during induced tooth movement or even due to traumatisms.

O presente estudo procura avaliar as possíveis patologias que se manifestam como hiperecogenicidade dos vasos talâmicos (HEVT) à ultra-sonografia cerebral (USC) e observar a freqüência com que ocorrem. A amostra foi constituída de 206 recém-nascidos (RNs) prematuros nascidos no Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA) no período de julho de 1998 a maio de 1999. Todos os RNs realizaram a USC na primeira semana de vida. Foram incluídos no estudo aqueles prematuros que necessitaram de internação hospitalar e que tiveram o termo de consentimento informado assinado por um dos responsáveis. Foram excluídos aqueles cuja USC evidenciava sangramento cerebral e/ou malformações congênitas associadas e os que evoluíram para óbito antes da realização do exame. A USC levou à identificação de 65 RNs prematuros com HEVT e 141 RNs prematuros sem HEVT. A forma de apresentação do tipo pélvica ao nascimento, a maior idade gestacional, o maior peso do RN ao nascimento e a classificação grande para a idade gestacional foram fatores de risco para a ocorrência de HEVT. A presença de hipertensão materna durante o período de gestação tendeu a ser fator de proteção para HEVT. Os RNs que apresentaram crises convulsivas durante o período de internação hospitalar tiveram risco 3,2 vezes maior de ter HEVT quando comparados com os RNs que não apresentaram crises convulsivas. / The aim of this study is to evaluate the possible pathologies that show up as hyperechogenicity of thalamic vessels (HETV) in brain ultrasonogram (BUS) as well as observe the frequency in which they happen. The sample was made up of 206 pre-term newborn babies at Hospital de Clíncas de Porto Alegre (HCPA) from July 1998 until May 1999. All of the newborn children were submitted to BUS in the first week of life. Pre-term children who needed hospital admission and had a term of informed consent signed up by their next of kin were included in this study. Pre-term newborn children with BUS evidencing intracranial hemorrhage and/or associated congenital malformation and those pre-term children who had evolved to demise before examination execution were excluded from this study. Through BUS it was possible to identify 65 pre-term newborn children with HETV and 141 pre-term newborn children without HETV. The pelvic birth presentation, the longer the gestational period, the fatter the newborn was at birth and the big for gestational age classification were risk factors for HEVT to take place. On the other hand, mother’s hypertension situation during the gestational period tended to be of protection from HEVT. The newborn babies that presented convulsive crises during hospitalization had a risk of having HEVT 3,2 times higher when compared to the ones that did not go through any convulsive crises.

Na última década, o uso de sistemas microventilados (sistema VMA) em biotérios possibilitou alojar animais com melhor qualidade sanitária devido ao maior controle ambiental fornecido por esses sistemas. Contudo, ainda é necessário uma melhor avaliação desses sistemas, principalmente no que tange às respostas dos animais. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a integridade do epitélio do trato respiratório superior (septo nasal e traquéia) de ratos mantidos em sistema VMA. Cem ratos, da linhagem Wistar-Hannover, heterogênicos, machos, de padrão sanitário convencional, foram mantidos durante 6 meses em dois distintos sistemas de ventilação: ventilação para conforto (grupo VGD, controle) e sistema VMA com intervalos de troca de cama variando de 3, 5, 7 e 9 dias (grupos IT3, IT5, IT7 e IT9, respectivamente). Após a eutanásia dos animais, fragmentos de septo nasal e traquéia foram coletados, processados com rotina de técnica histológica e corados com combinação de ácido periódico de Shiff e azul alciano (PAS-AB) e hematoxilina-eosina (HE). Os parâmetros morfométricos avaliados em septo nasal foram: 1) área de epitélio por unidade de superfície de membrana basal (EP/MB), 2) área de cílios por unidade de superfície de membrana basal (CI/MB), 3) número de núcleos por unidade de superfície de membrana basal (NN/MB), 4) área de muco ácido por unidade de superfície de membrana basal (MAc/MB), 5) área de muco ácido por área de epitélio (MAc/EP) e 6) número de núcleos por área de epitélio (NN/EP). Para NN/MB, o grupo VGD apresentou diferença estatística com os grupos IT3, IT5 e IT9. Para NN/EP, o grupo VGD teve diferença estatística com os todos grupos mantidos em VMA (IT3, IT5, IT7 e IT9). Em AE/MB observou-se diferença significativa do grupo VGD com os grupos IT7 e IT9. Para CI/MB notou-se diferença significativa entre os grupos IT3 e IT7. Embora não foi demonstrada diferença significativa entre os demais grupos, os dados sugerem que o grupo IT3 apresenta proporcionalmente maior área de cílios em relação aos demais grupos. Em MAc/MB e MAc/EP observou-se diferença significativa entre os grupos VGD e IT7. Na avaliação qualitativa da traquéia por escores, predominou a lesão inflamatória crônica, com intenso infiltrado de mononucleares (predominando neutrófilos). A presença e intensidade dessas lesões variaram de acordo com o sistema de ventilação sendo que somente no grupo VGD é que foram encontradas lesões severas (grau III). Com base nos resultados obtidos, os animais mantidos no sistema VMA, independente do intervalo de trocas de cama a que foram submetidos, apresentaram menor intensidade de lesões no septo nasal e na traquéia do que os animais mantidos em VGD. A maior integridade epitelial pode ser relacionado com a qualidade das condições ambientais fornecida aos animais alojados no sistema VMA, confirmando ser este o sistema mais adequado para a manutenção de ratos em experimentação.

Tese de mestrado integrado. Engenharia Civil (especialização em Construções). Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2009

Tese de mestrado integrado. Engenharia Civil (especialização em Construções). Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2008

Tese de mestrado. Construção de Edifícios. 2006. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto

The recent discovery that intestinal adenomas are built on a stem cell hierarchy has raised great interest in understanding the signals that maintain tumor stem cells. We unveiled the existence of a transcriptional circuit dedicated to prevent the expansion of adenoma stem cells during the onset of CRC. This circuit was found to be controlled by the transcription factor GATA6, which directly activated the expression of the WNT pathway component LGR5 and repressed BMP levels in adenomas. As a result of this mechanism, two cell compartments were established in adenomas: a BMP positive zone that comprises differentiated tumor cells and a BMP negative niche that hosts adenoma stem cells. Genetic deletion of Gata6 elevated BMP levels in tumors, which in turn inhibited adenoma stem cell self-renewal and intestinal tumorigenesis. These findings represent a key contribution to understand the mechanisms that regulate the tumor stem cell hierarchy and reveal for first time the existence of a niche that protects AdSCs from BMP signals. In subsequent studies, we further explore the role of GATA factors in EMT both in Drosophila and mammalian models. During the formation of the Drosophila endoderm relatively static epithelial cells have to convert to highly migratory cells to form a large part of the intestinal tract. We showed that the Drosophila GATA factor Srp is necessary to induce EMT, which resulted in relocalization of E-cadherin protein without altering its expression. Mammalian GATA4 and GATA6 also induced an EMT when ectopically expressed in culture. GATA factor Srp and GATA6 both transcriptionally inhibited Crumbs orthologues, delocalized E-cadherin and activated mesenchymal genes. This work has uncovered a novel evolutionarily conserved alternative route to EMT that is Snail independent. This discovery could have important clinical implications in pathogenesis, namely in cancer progression. Further studies aimed to characterize WNT signaling during CRC progression. WNT signaling is required for the maintenance of colorectal cancer stem cells (CRC-SCs) but paradoxically low levels of WNT genes associate with a higher risk of disease relapse. We identified a core expression program driven by beta-catenin/TCF in CRC-SCs, which was shown to be a strict indicator of the dependency on WNT signaling for growth. We showed that during disease progression, a subset of WNT genes is downregulated as a consequence of tumor hypoxia. This response characterized a group of patients displaying very high risk of cancer recurrence after therapy. Hypoxia-induced genes were prominently expressed at invasion fronts coinciding with lower expression of the WNT program. Therefore, hypoxia refines the WNT program in CRC-SCs during the acquisition of a malignant phenotype. This finding has important implications in CRC progression, as it explains how some CRC-SC genes (like EPHB2) are shut down during the progression of the disease and directly challenges recent high impact work in the field that points to methylation as the mechanism responsible for the refinement of WNT signaling. Moreover it identifies hypoxia as a culprit in this invasive cell phenotype. These findings may have important clinical implications in treatment of CRC. / El reciente descubrimiento de que los adenomas intestinales mantienen una jerarquía similar a la del epitelio intestinal normal, ha despertado gran interés por entender las señales que especifican y mantienen a las células madre tumorales. En este trabajo, damos a conocer la existencia de un circuito transcripcional dedicado a prevenir la expansión de células madre de adenoma durante el inicio del cáncer colorectal (CCR). Este circuito está controlado por el factor de transcripción GATA6, el cual activa directamente el componente de la vía de señalización WNT LGR5, y reprime los niveles de BMP en adenomas. Como resultado de este mecanismo, se establecen dos compartimentos celulares en los adenomas: una zona BMP positiva que contiene células tumorales diferenciadas y un nicho BMP negativo que aloja células madre de adenoma. La deleción genética de Gata6 eleva los niveles de BMP en tumores, lo que a su vez inhibe la auto-renovación de células madre de adenoma y la tumorigénesis intestinal. Estos hallazgos representan una contribución fundamental para comprender los mecanismos que regulan la jerarquía de las células madre tumorales y revelan por primera vez la existencia de un nicho que protege a las células madre de adenoma de señales BMP. En estudios posteriores, continuamos explorando el rol de los factores GATA en la transición epitelio-mesénquima tanto en modelos de Drosophila como de mamífero. Durante el desarrollo del endodermo en Drosophila, células epiteliales relativamente estáticas se convierten en células migratorias para formar una gran parte del tracto intestinal a través del proceso de transición epitelio-mesénquima. Hemos demostrado que el factor GATA -en Drosophila denominado Srp- es necesario para inducir una transición epitelio-mesénquima que da lugar a la relocalización de la proteína E-cadherina sin alterar su expresión. Los factores GATA4 y GATA6 de mamífero también inducen transición epitelio-mesénquima cuando son expresados de forma ectópica en cultivos celulares. Tanto el factor GATA Srp como GATA6 inhiben la transcripción de ortólogos de Crumbs, deslocalizan la E-cadherina y activan genes mesenquimales. Nuestro trabajo ha dado a conocer una nueva ruta alternativa para la transición epitelio-mesénquima que se encuentra conservada evolutivamente y que es independiente de Snail. Este descubrimiento podría tener importantes implicaciones clínicas en patogenia, y más específicamente en la progresión del cáncer. Un tercer aspecto del trabajo presentado se centra en la caracterización de la vía de señalización WNT durante la progresión del CCR. La señalización WNT es necesaria para el mantenimiento de las células madre de cáncer colorectal (CM-CCR), aunque paradójicamente, bajos niveles de genes WNT se asocian con un mayor riesgo de recaída de la enfermedad. Hemos identificado un programa básico de expresión impulsado por beta-catenina/TCF en CM-CCR, que se ha demostrado ser un indicador estricto de la dependencia de señalización WNT para el crecimiento. Hemos demostrado que durante la progresión de la enfermedad, se suprime la expresión de un subconjunto de genes WNT como consecuencia de hipoxia tumoral. Esta respuesta caracteriza a un grupo de pacientes con un muy alto riesgo de reincidencia del cáncer después de la terapia. Los genes inducidos por hipoxia se expresan de manera prominente en frentes de invasión coincidiendo con una menor actividad de la vía del programa WNT. Por lo tanto, la hipoxia refina el programa WNT en CM-CCR durante la adquisición de un fenotipo maligno. Este hallazgo tiene implicaciones importantes para la progresión del CCR, porque explica cómo algunos genes de CM-CCR (como receptores EPHB2) se apagan durante la progresión de la enfermedad y directamente desafía trabajos de alto impacto recientemente reportados en el área, que apuestan por la metilación como mecanismo responsable del refinamiento del programa WNT. Por otra parte, identifica a la hipoxia como un culpable de este fenotipo de células invasivas. Estos hallazgos podrían tener importantes implicaciones clínicas en el tratamiento del cáncer colorectal.

Scientific rationale for study The literature about lasers in the field of periodontology is contradictory. The present study aimed at evaluating benefits of Er, Cr: YSGG laser irradiation following deep scaling compared to scaling alone in a randomized controlled clinical trial based on an appropriate sample size. Principal Findings The present study demonstrated that laser irradiation combined with conventional Sc/RP did not improve the clinical outcomes regarding probing pocket depth reduction and attachment level gain compared to Sc/RP alone. Practical implications Taken into account that lasers are expensive devices and no superior results can be expected by using them, their recommendation for clinical application is still questionable. / Justificació de l´estudi La literatura sobre l´ús de làser en el camp de la periodòncia és contradictori. Aquest estudi té com objectiu evaluar els beneficits de la irradiació amb làser d´Er,Cr:YSGG després de realitzar un raspat de les arrels comparat amb el raspat sense aplicar làser en un estudi clínic randomitzat amb un tamany mostral adequat. Resultats principals Aquest estudi ha demostrat que la irradiació de láser Er,Cr:YSGG combinada amb el tractament convencional de raspat I allisat radicular no millora les variables clíniques en la disminució de la profunditat de bossa i del augment del nivell d´inserció clínica. Implicacions pràctiques Tenint en compte que els aparells de làsers son costosos i que els resultats obtinguts no son superiors al tractament convencional, la recomanació d´aplicació clínica és a data d´avui encara qüestionable.