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Efeito da administração aguda de iodo sobre a expressão do gene da pendrina: Estudo in vivo e in vitro / Effect of acute administration od iodide in pendrin gene expression: study in vivo and in vitroSilveira, Jamile Calil 16 April 2010 (has links)
Pendrina é um transportador de ânions inserido na membrana apical de células foliculares. Estudos subseqüentes demonstraram que a proteína pode mediar o efluxo apical do iodeto nos tirócitos. Sendo o iodo fundamental para a síntese de hormônios tiroidianos foi objetivo deste estudo avaliar o efeito da administração aguda de iodo na expressão do mRNA da proteína pendrina, em curtos períodos de tempo (30min à 24h).Ratos Wistar foram divididos em: controle e iodo, que receberam injeção de salina ou NaI, sendo decapitados após 30, 1 e 24h dessa administração.O RNA da tiróide foi extraído para a análise da expressão do mRNA da Pendrina por Real Time PCR e Northern Blot. Para o estudo in vitro utilizou-se a linhagem celular de tiróide de rato PCCl3, que foi tratada ou não com 10-3M de NaI. As células permaneceram sob tratamento por 30´, 1 e 24h, quando então o RNA foi extraído para análise da expressão por Real Time PCR.Houve aumento significativo do mRNA da Pendrina em todos os grupos, indicando que mecanismos foram desencadeados visando o efluxo do iodeto da célula. / Pendrin is a chloride/iodide exchange located at the apical membrane of thyrocytes. Mutations in its gene lead to a defect in iodide organification. This suggested that pendrin could function as an apical iodide transporter in this cells. Since iodine is essential for thyroid hormone synthesis, this study attempted to investigate that possibility by evaluating whether the acute iodide administration, from 30min up to 24h, could regulate the Pendrin mRNA expression. Rats received NaI or saline, and were sacrificed 30´, 1 and 24h later.Thyroid total RNA was extracted and Pendrin mRNA content was evaluated by Northern Blotting and Real-Time PCR. For in vitro study,PCCl3 rat thyroid cells were cultured and treated or no with 103M NaI. After 30´, 1 and 24h, the cells were harvested and total RNA was extracted. The mRNA content was evaluated by Real-Time PCR. The mRNA increased in all groups of study, indicating that excess of iodide leads to an activation of Pendrin gene transcription and as consequence increased efflux of this element.
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Efeito da administração aguda de iodo na expressão gênica e atividade do promotor da pendrina: estudos em ratos e em células PCCI3. / Effect of acute administration of iodine on pendrin gene expression and the activity of pendrin promoter: studies in rats and PCCl3 cells.Silveira, Jamile Calil 22 April 2014 (has links)
Pendrina é um transportador de iodo na tiróide, codificada pelo gene PDS.Sabendo-se que o iodo é fundamental para a síntese de T3 e T4 foi objetivo avaliar o efeito do iodo na expressão gênica, atividade e promotor da pendrina. Foram utilizados ratos Wistar, que receberam injeção de salina ou 2mg de NaI. Após 30, 1, 24 e 48h as tiróides foram removidas para análise do mRNA e proteína, por PCR em Tempo Real e Western Blot. Ainda, utilizou-se celulas PCCl3, que foram tratadas ou não com 10-3M de NaI. Após 30, 1, 24 e 48h o RNA/proteína foram isolados.Determinou-se o efluxo pela medição do125I presente no meio de cultura. Para analisar a atividade do promotor, ele foi inserido no vetor pGL3-básico.Nossos resultados mostram que houve aumento do mRNA da pendrina em resposta ao iodo em todos os tempos estudados, porém não houve aumento da atividade promotora.A expressão da proteína pendrina, bem como taxa do efluxo de iodeto, aumentou nos tempos mais longos de tratamento.Esses dados apontam um importante papel de pendrina para o fenômeno de autoregulação da tiróide. / Pendrin is an iodide transporter in thyroid, encoded by the PDS gene. Since iodide is essential for the synthesis of T3 and T4, this study aimed to evaluate the iodine effect on pendrin gene expression and on the activity of its promoter. Male rats received an injection of saline or 2mg of NaI. After 30, 1, 24 and 48h the thyroids were removed for mRNA and protein analysis by Real Time PCR and Western Blot. Moreover, PCCl3 cells were treated or not with 10-3M NaI. After 30, 1, 24 and 48h the RNA/protein were isolated. The efflux was determined by measure of 125I in the culture medium. For the promoter analysis, it was inserted in pGL3-basic plasmid. The results indicated that the pendrin mRNA amount increased after iodide treatment. However, the promoter activity was unchanged. The protein expression and iodide efflux increased only after 24h of treatment. These data suggest an important role of pendrin for the autoregulation of the thyroid.
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Efeito da administração aguda de iodo na expressão gênica e atividade do promotor da pendrina: estudos em ratos e em células PCCI3. / Effect of acute administration of iodine on pendrin gene expression and the activity of pendrin promoter: studies in rats and PCCl3 cells.Jamile Calil Silveira 22 April 2014 (has links)
Pendrina é um transportador de iodo na tiróide, codificada pelo gene PDS.Sabendo-se que o iodo é fundamental para a síntese de T3 e T4 foi objetivo avaliar o efeito do iodo na expressão gênica, atividade e promotor da pendrina. Foram utilizados ratos Wistar, que receberam injeção de salina ou 2mg de NaI. Após 30, 1, 24 e 48h as tiróides foram removidas para análise do mRNA e proteína, por PCR em Tempo Real e Western Blot. Ainda, utilizou-se celulas PCCl3, que foram tratadas ou não com 10-3M de NaI. Após 30, 1, 24 e 48h o RNA/proteína foram isolados.Determinou-se o efluxo pela medição do125I presente no meio de cultura. Para analisar a atividade do promotor, ele foi inserido no vetor pGL3-básico.Nossos resultados mostram que houve aumento do mRNA da pendrina em resposta ao iodo em todos os tempos estudados, porém não houve aumento da atividade promotora.A expressão da proteína pendrina, bem como taxa do efluxo de iodeto, aumentou nos tempos mais longos de tratamento.Esses dados apontam um importante papel de pendrina para o fenômeno de autoregulação da tiróide. / Pendrin is an iodide transporter in thyroid, encoded by the PDS gene. Since iodide is essential for the synthesis of T3 and T4, this study aimed to evaluate the iodine effect on pendrin gene expression and on the activity of its promoter. Male rats received an injection of saline or 2mg of NaI. After 30, 1, 24 and 48h the thyroids were removed for mRNA and protein analysis by Real Time PCR and Western Blot. Moreover, PCCl3 cells were treated or not with 10-3M NaI. After 30, 1, 24 and 48h the RNA/protein were isolated. The efflux was determined by measure of 125I in the culture medium. For the promoter analysis, it was inserted in pGL3-basic plasmid. The results indicated that the pendrin mRNA amount increased after iodide treatment. However, the promoter activity was unchanged. The protein expression and iodide efflux increased only after 24h of treatment. These data suggest an important role of pendrin for the autoregulation of the thyroid.
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Efeito da administração aguda de iodo sobre a expressão do gene da pendrina: Estudo in vivo e in vitro / Effect of acute administration od iodide in pendrin gene expression: study in vivo and in vitroJamile Calil Silveira 16 April 2010 (has links)
Pendrina é um transportador de ânions inserido na membrana apical de células foliculares. Estudos subseqüentes demonstraram que a proteína pode mediar o efluxo apical do iodeto nos tirócitos. Sendo o iodo fundamental para a síntese de hormônios tiroidianos foi objetivo deste estudo avaliar o efeito da administração aguda de iodo na expressão do mRNA da proteína pendrina, em curtos períodos de tempo (30min à 24h).Ratos Wistar foram divididos em: controle e iodo, que receberam injeção de salina ou NaI, sendo decapitados após 30, 1 e 24h dessa administração.O RNA da tiróide foi extraído para a análise da expressão do mRNA da Pendrina por Real Time PCR e Northern Blot. Para o estudo in vitro utilizou-se a linhagem celular de tiróide de rato PCCl3, que foi tratada ou não com 10-3M de NaI. As células permaneceram sob tratamento por 30´, 1 e 24h, quando então o RNA foi extraído para análise da expressão por Real Time PCR.Houve aumento significativo do mRNA da Pendrina em todos os grupos, indicando que mecanismos foram desencadeados visando o efluxo do iodeto da célula. / Pendrin is a chloride/iodide exchange located at the apical membrane of thyrocytes. Mutations in its gene lead to a defect in iodide organification. This suggested that pendrin could function as an apical iodide transporter in this cells. Since iodine is essential for thyroid hormone synthesis, this study attempted to investigate that possibility by evaluating whether the acute iodide administration, from 30min up to 24h, could regulate the Pendrin mRNA expression. Rats received NaI or saline, and were sacrificed 30´, 1 and 24h later.Thyroid total RNA was extracted and Pendrin mRNA content was evaluated by Northern Blotting and Real-Time PCR. For in vitro study,PCCl3 rat thyroid cells were cultured and treated or no with 103M NaI. After 30´, 1 and 24h, the cells were harvested and total RNA was extracted. The mRNA content was evaluated by Real-Time PCR. The mRNA increased in all groups of study, indicating that excess of iodide leads to an activation of Pendrin gene transcription and as consequence increased efflux of this element.
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