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Identification phenotypic, genotypic virulence factors and characterization in isolated environmental Aeromonas spp / IdentificaÃÃo fenotÃpica, genotÃpica e caracterizaÃÃo de fatores de virulÃncia em isolados ambientais de Aeromonas sppCamila MagalhÃes Silva 28 November 2014 (has links)
This study aimed to identify through polyphasic approach (phenotypic and genotypic methods) strains of Aeromonas spp. isolated from surface water and sediment from three different points of the Coco River, Cearà following the salinity gradient of the water. Sampling was conducted between October 2011 and March 2012 each collection consisted of six samples. Aeromonas strains were isolated according to the technique described in the literature Gelatin Phosphate Salt Agar (agar plus GSP 20 μg/mL ampicillin). The physico-chemical parameters (salinity, pH and temperature) of water were on a track that favored not only survival, but also the multiplication of micro-organisms in both sites. Among this sample was isolated 140 strains suspected of Aeromonas and (36.4%) 51 strains were confirmed like Aeromonas spp., wich will be identifiyed until species for fenotipic and genotipic tests. In parallel to the insulation work was done a survey of alternative culture media, where we assessed the efficiency of culture media with different compositions in the characterization of colonies of multiple species of Aeromonas. While the antimicrobial susceptibility profile of Aeromonas strains were resistant 100% penicillin (PEN) and cephalothin (CFL) and 100% antimicrobial susceptibility Amikacin (AMI) and imipenem (IMP) among the nine antimicrobials tested and generally A. caviae was the species that showed resistance to antimicrobials. Among the 27 strains tested (45.8%) were multidrug-resistant by making a multiple resistence antibiotic (MRA) > 2. Five factors of different virulence and all strains were tested had at least one of the five virulence factors tested so that different combinations of virulence factors were found in isolates from the same sample. The results of genetic analysis using primers Aero16S-F and Aero16S-F showed that all isolates identified by conventional microbiological tests were confirmed by PCR and 65.6% of the species identified by conventional biochemical tests were confirmed by Box-PCR method. / Este trabalho teve como objetivo principal identificar atravÃs de abordagem polifÃsica (tÃcnicas fenotÃpicas e genotÃpicas) de cepas de Aeromonas spp. isoladas de Ãgua de superfÃcie e sedimento de trÃs pontos distintos do Rio CocÃ, Fortaleza, Cearà seguindo o gradiente de salinidade da Ãgua. Foram realizadas coletas no perÃodo de outubro de 2011 a marÃo de 2012, sendo cada coleta composta por seis amostras. As cepas de Aeromonas foram isoladas de acordo com a tÃcnica descrita na literatura em Ãgar Gelatina Fosfato Sal (Ãgar GSP acrescido de 20 μg/mL de ampicilina). Os parÃmetros fÃsico-quÃmicos (salinidade, pH e temperatura) da Ãgua estavam em uma faixa que favorecia nÃo sà a sobrevivÃncia, mas tambÃm a multiplicaÃÃo dos micro-organismos em dois pontos de coleta. Foram isoladas 140 cepas suspeitas de Aeromonas, 36 (25,7%) foram identificadas atà espÃcie sendo elas: A. caviae, A. media, A. eucrenophila e A. veronii, sendo A. caviae a espÃcie que apareceu com maior frequÃncia. Em paralelo ao trabalho de isolamento foi feita uma pesquisa com dois meios de cultivo alternativos, Ãgar UNISC e Ãgar Amido Ampicilina (AAA), nos quais foi avaliada a eficiÃncia dos meios de cultura com diferentes composiÃÃes, na caracterizaÃÃo de colÃnias de vÃrias espÃcies de Aeromonas. O perfil de suscetibilidade antimicrobiana das cepas de Aeromonas apresentou resistÃncia de 100% a Penicilina (PEN) e Cefalotina (CFL) e 100% de sensibilidade aos antimicrobianos Amicacina (AMI) e Imipenem (IMP) entre os nove antimicrobianos testados e de forma geral A. caviae (38,9%) foi a espÃcie que mais apresentou resistÃncia. Dentre as cepas avaliadas 27 (45,8%) foram multirresistentes por apresentarem um MAR > 2. Foram testados cinco fatores de virulÃncia diferentes e todas as cepas apresentaram pelo menos um desses fatores, de forma que diferentes combinaÃÃes desses fatores foram observadas em isolados provenientes da mesma amostra. Os resultados da anÃlise genÃtica utilizando os iniciadores Aero16S-F e Aero16S-R mostraram que todos os isolados identificados atravÃs de testes clÃssicos de microbiologia foram confirmados por meio da tÃcnica de PCR e 65,6% das espÃcies identificadas por testes bioquÃmicos convencionais foram confirmadas pelo mÃtodo de Box-PCR.
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